专利名称：一种治疗禽流感和传染性支气管炎的卵黄抗体及其制作方法
技术领域：
本发明涉及的一种治疗禽流感和传染性支气管炎的卵黄抗体及其制作方法属于动保行业兽用生物制品领域，属于抗体药物，所提供卵黄抗体用于诊断、检测、预防和治疗禽流感和传染性支气管炎。
背景技术：
禽流感是“禽流行性感冒”的简称，是由A型流感病毒引起的禽类烈性传染病，又称“真性鸡瘟”或“欧洲鸡瘟”，是一种人畜共患病，对人类健康存在极大威胁。临床主要表现为急性高致死性，产蛋量下降，轻度呼吸系统疾病等。禽流感是全世界范围内的禽类传染病，因对养禽业造成的毁灭性经济损失而被视为严重威胁家禽养殖业的头号传染病， 1 O Q多年来人类尚未发现有效的预防和治疗方法。从2003年12月开始，由H5W禽流感病毒引起的高致病性禽流感突袭亚洲，在不到2个月的时间内，席卷了韩国、日本、越南、泰国、柬埔寨、老挝、中国和印度尼西亚等8 个东亚和南亚国家。此次禽流感流行的规模之大、地理分布范围之广、破坏程度之深在人类养禽业历史上均是史无前例的。当前，禽流感在世界局部地区仍然活跃，疫情范围呈继续扩大之势。据不完全统计，从2003年到现在，仅亚洲各国死亡或淘汰的禽只总数大约，15亿只，全球已有超过1000人感染禽流感，因患禽流感死亡的人数已接近700人。发生禽流感时，往往伴发传染性支气管炎。两者互相影响，往往加重快速死亡。尽管当前已开发出多种治疗禽流感和传染性支气管炎的药物，诸如利巴韦林、金刚烷胺、病毒唑、碘苷、阿昔洛韦、更昔洛韦等，并制定出许多防控方案，取得一定成效，但是临床情况千差万别，往往导致本就捉襟见肘的防控方案更显得力不从心，而且化学药物因越来越多的副作用和食品安全隐患而由农业部宣布禁止使用。在生物药物领域，除去做疫苗免疫就是用抗体药物临时治疗。疫苗用的毒株虽然开始增多，但是与临床需求相比还是有很大差距。疫苗作为商品从科研到市场以及靶动物是一个很慢长的程序，因此，疫苗免疫如杯水车薪，临时救急的还要首推抗体药物。当前卵黄抗体提取纯化方法有乙二醇提取法、氯仿提取法、辛酸萃取法、盐析法等，这些方法收率低、杂蛋白多、产品活性低。
发明内容
本发明旨在提供一种治疗禽流感和传染性支气管炎的卵黄抗体及其制作方法。本发明所提供的卵黄抗体含有两类抗体，用于检测、预防和治疗禽流感和传染性支气管炎。其制作方法如下
1)、购买禽流感(H5+H9)二价灭活疫苗(H5N1 Re_5株+H9N2 Re_2株)、生理盐水存储于 2 8°C备用；鸡传染性支气管炎活疫苗(H120、H52、W93株)新城疫活疫苗(C30-86株)、鸡新城疫中等毒力活疫苗(I系)存储于_15°C以下备用；
2)、购买经检疫合格的SPF蛋鸡雏作隔离饲养；
3)、分别于21日龄、35日龄、70日龄、110日龄给全鸡群做禽流感(H5+H9)二价灭活疫苗(H5N1 Re-5株+H9N2 Re-2株)免疫，颈部皮下注射分别依次为2羽份、4羽份、8羽份、10 羽份；以后每4个月重复一次颈部皮下注射10羽份；
4)、在10日龄、30日龄、60日龄时，给鸡全群做传染性支气管炎活疫苗(H120株、W93 株)免疫，饮水途径，剂量皆分别依次为2羽份、4羽份、8羽份；
5)、在100日龄时给鸡全群做传染性支气管炎活疫苗(H52株、W93株)免疫，饮水途径， 剂量皆为10羽份；以后每隔3个月重复一次；
6)、自130 150日龄起每日检测鸡蛋，将禽流感HI试验抗体水平在1:1 以上、并且传染性支气管炎病毒中和试验抗体效价在1 :32以上的保存在4°C环境备用；
7)、在超净台上收集蛋黄，按3 5倍比例加入灭菌蒸馏水搅拌30分钟以上，配成均一的蛋黄液，转移至4°C环境冷藏、静置12小时，用过滤气泵回收上清液；
8)、将含卵黄抗体的蛋黄上清液依次通过0.45微米和0. 22微米的滤膜进行超滤浓缩， 收集介于两种滤膜之间的物质即为卵黄抗体的浓缩液；
9)、将卵黄抗体浓缩液做50 56°C减压干燥，制成卵黄抗体干粉，方便保存；
10)、将卵黄抗体干粉按照一定的剂量分装即可。本方法利用适当的免疫程序获得抗禽流感和传染性支气管炎两种病毒的高效价双联五价鸡蛋，利用蛋白质的亲水性特点，通过沉降法将卵黄抗体与脂类分离，且在浓缩过程中不破坏卵黄抗体的空间结构而出去杂蛋白，充分保护了卵黄抗体的生物活性和纯粹性，所制造的卵黄抗体纯度高、活性强；本发明所提供的卵黄抗体干粉，可在符合GMP要求的环境下与葡萄糖、乳糖等适宜辅料以适当比例可配制成粉剂、溶液剂、注射液、注射用粉剂等临床适用剂型，可用于诊断、预防和治疗禽流感两个血清型和传染性支气管炎三个血清型病毒的单独或者混合感染，可有效防控禽流感和传染性支气管炎。
具体实施例方式实施例
1)、购买禽流感(H5+H9)二价灭活疫苗(H5N1Re_5株+H9N2 Re_2株)、生理盐水存储于 2 8°C备用；鸡传染性支气管炎活疫苗(H120、H52、W93株)新城疫活疫苗(C30-86株)、鸡新城疫中等毒力活疫苗(I系)存储于_15°C以下备用；
2)、购买经检疫合格的SPF蛋鸡雏作隔离饲养；
3)、分别于21日龄、35日龄、70日龄、110日龄给全鸡群做禽流感(H5+H9)二价灭活疫苗(H5N1 Re-5株+H9N2 Re-2株)免疫，颈部皮下注射分别依次为2羽份、4羽份、8羽份、10 羽份；以后每4个月重复一次颈部皮下注射10羽份；
4)、在10日龄、30日龄、60日龄时，给鸡全群做传染性支气管炎活疫苗(H120株、W93 株)免疫，饮水途径，剂量皆分别依次为2羽份、4羽份、8羽份；
5)、在100日龄时给鸡全群做传染性支气管炎活疫苗(H52株、W93株)免疫，饮水途径， 剂量皆为10羽份；以后每隔3个月重复一次；
6)、自130 150日龄起每日检测鸡蛋，将禽流感HI试验抗体水平在1:1 以上、并且传染性支气管炎病毒中和试验抗体效价在1 :32以上的保存在4°C环境备用；
7)、在超净台上收集蛋黄，按3 5倍比例加入灭菌蒸馏水搅拌30分钟以上，配成均一的蛋黄液，转移至4°C环境冷藏、静置12小时，用过滤气泵回收上清液；
8)、将含卵黄抗体的蛋黄上清液依次通过0.45微米和0. 22微米的滤膜进行超滤浓缩， 收集介于两种滤膜之间的物质即为卵黄抗体的浓缩液；
9)、将卵黄抗体浓缩液做50 56°C减压干燥，制成卵黄抗体干粉，方便保存；
10)、将卵黄抗体干粉按照一定的剂量分装即可。以上实施例仅为了对本发明作进一步的说明，而本发明的范围不受所举实施例的局限。部分试验结果报告
一种治疗禽流感和传染性支气管炎的卵黄抗体的试验报告
选用临床诊断为温和性禽流感、传染性支气管炎的病鸡4000只，随机挑选40只最为空白对照，其余平均分为A、B两组。网上平养，保持干净，及时通风，做好记录。饲料参考NRC 肉鸡饲养标准，配制基础日粮，自由采食，自由饮水，统一管理。A组添加本卵黄抗体冻干粉制剂(由广东紫金正天药业有限公司、广东省中兽药工程技术研究开发中心联合制作)，按 1:100的比例兑水饮用；B组为黄芪多糖注射液(抗病毒I号注射液)(由河源市兽药工程技术研究开发中心提供)，按每50ml兑水Ikg自由饮用；C组为空白对照组。表1 A、B、C三组治疗对比试验结果
由表1可以看出，使用了此种含有抗禽流感和支气管炎两种抗体的卵黄抗体冻干粉制剂治疗的病鸡，病死率从第三天开始明显下降，采食量明显恢复，治疗用药四天基本结束， 且效果优于对照组，因此说明此种卵黄抗体可用于治疗禽流感和支气管炎病毒感染。
权利要求
1.一种治疗禽流感和传染性支气管炎的卵黄抗体其制作方法如下1)、购买禽流感(H5+H9)二价灭活疫苗(H5N1Re_5株+H9N2 Re_2株)、生理盐水存储于 2 8°C备用；鸡传染性支气管炎活疫苗(H120、H52、W93株)新城疫活疫苗(C30-86株)、鸡新城疫中等毒力活疫苗(I系)存储于_15°C以下备用；2)、购买经检疫合格的SPF蛋鸡雏作隔离饲养；3)、分别于21日龄、35日龄、70日龄、110日龄给全鸡群做禽流感(H5+H9)二价灭活疫苗(H5N1 Re-5株+H9N2 Re-2株)免疫，颈部皮下注射分别依次为2羽份、4羽份、8羽份、10 羽份；以后每4个月重复一次颈部皮下注射10羽份；4)、在10日龄、30日龄、60日龄时，给鸡全群做传染性支气管炎活疫苗(H120株、W93 株)免疫，饮水途径，剂量皆分别依次为2羽份、4羽份、8羽份；5)、在100日龄时给鸡全群做传染性支气管炎活疫苗(H52株、W93株)免疫，饮水途径， 剂量皆为10羽份；以后每隔3个月重复一次；6)、自130 150日龄起每日检测鸡蛋，将禽流感HI试验抗体水平在1:1 以上、并且传染性支气管炎病毒中和试验抗体效价在1 :32以上的保存在4°C环境备用；7)、在超净台上收集蛋黄，按3 5倍比例加入灭菌蒸馏水搅拌30分钟以上，配成均一的蛋黄液，转移至4°C环境冷藏、静置12小时，用过滤气泵回收上清液；8)、将含卵黄抗体的蛋黄上清液依次通过0.45微米和0. 22微米的滤膜进行超滤浓缩， 收集介于两种滤膜之间的物质即为卵黄抗体的浓缩液；9)、将卵黄抗体浓缩液做50 56°C减压干燥，制成卵黄抗体干粉，方便保存；10)、将卵黄抗体干粉按照一定的剂量分装即可。
2.根据权利要求1所述的一种治疗禽流感和传染性支气管炎的卵黄抗体，该抗体可制成粉剂、溶液剂、喷雾剂、注射液、注射用粉剂。
全文摘要
一种治疗禽流感和传染性支气管炎的卵黄抗体本发明属于动保行业兽用生物制品领域。本方法利用蛋白质的亲水性特点，通过沉降法将卵黄抗体与脂类分离，且在浓缩过程中不破坏卵黄抗体的空间结构而出去杂蛋白，充分保护了卵黄抗体的生物活性和纯粹性，所制造的卵黄抗体纯度高、活性强;本发明所提供的卵黄抗体干粉，可在符合GMP要求的环境下与葡萄糖、乳糖等适宜辅料以适当比例可配制成粉剂、溶液剂、注射液、注射用粉剂等临床适用剂型，可用于诊断、预防和治疗禽流感两个血清型和传染性支气管炎三个血清型病毒的单独或者混合感染，可有效防控禽流感和传染性支气管炎。
文档编号A61P31/16GK102558347SQ201210050300
公开日2012年7月11日 申请日期2012年3月1日 优先权日2012年3月1日
发明者万徐萍, 刘易通, 李振天, 王庆福, 纪雯婧 申请人:广东紫金正天药业有限公司