专利名称：一种三七总皂苷的纯化方法及其制剂的制作方法
技术领域：
本发明属于中药化学领域，特别是涉及一种三七总皂苷的纯化方法及其制剂。
背景技术：
三七为五加科植物三七Panax notoginseng (Burk. ) F. H. Chen的干燥根及根茎。其性温，味甘、微苦，入胃经。功能主治为化瘀止血，消肿定痛。用于咯血，吐血，便血，崩漏，夕卜伤出血，胸腹刺痛，跌扑肿痛。主产于云南文山、砚山、广南、马关及广西靖西、睦边、百色等地。三七中含有多种成分，其中，三七总皂苷为三七的主要活性成分，其主要分布于三七的根及根茎。药理研究结果表明，三七总皂苷具有抑制血小板聚集、预防心脑梗塞、缓解心绞痛、保护脑组织、改善脑血液循环、抗冠心病、增强免疫力、调节血糖和血脂等活性。现有三七总皂苷的生产纯化工艺，主要通过柱色谱法、溶剂萃取法。目前常用的柱色谱法有硅胶柱色谱、凝胶柱色谱以及大孔吸附树脂法。硅胶柱色谱与凝胶柱色谱法可纯化得到高纯度的皂苷成分，但其操作复杂，费用高，也不适合工艺化生产。大孔吸附树脂是目前工业化生产纯化三七总皂苷的普遍方法，但单一大孔树脂用于分离纯化总皂苷所得物含量不是很高，需要与其他树脂或色谱填料联合应用才能得到高纯度的三七总皂苷，已有联合应用较多的方法包括大孔吸附树脂-离子交换树脂(阴离子或阳阴离子串联)，大孔吸附树脂-离子交换树脂-氧化铝，大孔吸附树脂-氧化铝；前两者者因应用离子交换树月旨，每批次都需酸碱反复前处理和后处理，过程较复杂且耗时，需较高的劳动安全保护，后两者在用氧化铝精制时，需依次水洗、醇洗，工艺较繁琐。大孔吸附树脂-聚酰胺-活性炭联用技术可有效的除杂、脱色、富集总皂苷，工艺简单，过聚酰胺时，仅水洗一步操作，节省有机溶剂，易于实现工业化生产。
发明内容
本发明旨在提供一种制备更高效、更高纯度三七总皂苷的纯化方法，同时解决现有生产技术的不足和缺陷。本发明所述的纯化方法，突破常规的纯化三七总皂苷的方法，充分结合大孔树脂、 聚酰胺以及活性炭的不同纯化作用，从而得到更高纯度的三七总皂苷。本发明所述的大孔树脂包括HPD700、HPD400、AB-8、DM130、ADS-7型。本发明所述的聚酰胺的规格为14-30目、30-60目、80-100目或100目以上。本发明所述的三七总皂苷，包括三七三醇组皂苷和三七二醇组皂苷，三七三醇组皂苷中主要含有三七皂苷R1、人参皂苷以及人参皂苷Re ；三七二醇组皂苷中主要含有人参皂苷Rb1和人参皂苷Rd，其特征在于，三七三醇组皂苷与三七二醇组皂苷的重量比为 2. 5 3. 5 1，三七皂苷札、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1和人参皂苷Rd的总含量占三七总皂苷的含量> 95%。本发明旨在通过以下方案来实现
一种三七总皂苷的纯化方法，其特征在于以三七主根或根茎为原料，粉碎，过筛， 加8-12倍(V/W) 50-95%的乙醇低温减压回流提取1_3次，合并提取液，低温减压浓缩至乙醇尽，浓缩液加1倍的去离子水，置于冷藏室M小时，取出，过滤，滤液加入大孔树脂吸附， 先用去离子水洗脱，用molish反应和薄层色谱控制洗脱终点，弃去洗脱液，再用8-12倍的 50-95%乙醇洗脱，收集洗脱液，低温减压浓缩至0. 2g药材/ml，再加入聚酰胺树脂柱吸附， 用4-8倍的去离子水洗脱，收集洗脱液，低温减压浓缩，干燥，干品用40-60倍(V/W) 70-95% 的乙醇加热溶解，然后加入0. 05-2%的活性炭，于40°C保温0. 5小时，滤膜过滤，收集滤液， 低温减压浓缩，55°C真空干燥，即得三七总皂苷。所述的低温减压回流、低温减压浓缩的温度为40-60°C。本发明具有以下优点(1)所得产品纯度高，本发明首次采用了大孔树脂-聚酰胺-活性炭联用技术，具有很好的脱色、除杂、富集总皂苷作用，总皂苷的纯度可达到95%以上。(2)有机残留少，本发明摒弃了传统的溶剂萃取、硅胶柱色谱以及凝胶柱色谱法， 采用比较常用、价格便宜、能反复使用的大孔树脂和聚酰胺、活性炭，并将三者联合应用。大孔树脂选择性的吸附有效皂苷成分，同时不吸附糖等杂质，利用该特征可通过水洗去除糖等大极性杂质。聚酰胺的作用是选择性好、脱色除杂显著，研究表明，聚酰胺不吸附三七的活性皂苷成分，能够选择性吸附其中的其他有机酸、鞣质、色素杂质，利用该特征可进一步提高总
皂苷含量。活性炭主要用于进一步精制三七总皂苷，起到脱色、改善总皂苷外观的作用。(3)环保无污染，本发明制备过程中使用的有机溶剂可回收循环利用，不产生影响环境的废水。(4)能够实现大规模生产。本发明还提供包含所述三七总皂苷的药物制剂，其含有治疗有效量的三七总皂苷以及药学上可接受的载体。所述药物制剂的剂型可包括口服制剂，如片剂、胶囊等；注射制齐U，如粉针、水针等。本发明对三七总皂苷进行了纯化，更多的保留疗效确切的组分，所制备的三七总皂苷做成粉针后无需乙醇溶解，只需注射用水、生理盐水或葡萄糖注射液溶解即可，因此， 使用更方便，刺激性更小。
具体实施例方式下面结合具体实施例进一步说明本发明。制备实施例1 取干燥三七主根20. 0kg，用中草药粉碎机(购自天津市泰斯特仪器有限公司)粉碎，过3号筛，用12倍药材重量的浓度为60 %乙醇溶液55°C减压回流提取2次，每次2. 0 小时，合并提取液，回收乙醇至尽，浓缩液加1倍体积的纯化水，搅拌均勻，置于冷藏室M小时。取出冷藏液，过滤，滤液上HPD-700树脂(购自沧州宝恩吸附材料科技有限公司)吸附， 先用去离子水洗脱，用molish反应和薄层色谱控制洗脱终点，弃去洗脱液，再用12倍柱体积的70%乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，低温减压浓缩至0. 2g药材/ml，再加入到聚酰胺树脂(30-60目)吸附，用8倍去离子水洗脱，收集洗脱液，低温减压浓缩，干燥，干品用40倍(V/ W) 95%的乙醇加热溶解，然后加入0. 5%的活性炭，于40°C保温0. 5小时，滤膜过滤，收集滤液，低温减压浓缩，55°C真空干燥，即得三七总皂苷2118. 3g (三七总皂苷含量为97. 9%，人参三醇型皂苷与人参二醇型皂苷重量比为3. 2 1)。制备实施例2 取干燥三七主根20. 0kg，用中草药粉碎机(购自天津市泰斯特仪器有限公司)粉碎，过3号筛，用12倍药材重量的浓度为60 %乙醇溶液50°C减压回流提取2次，每次2. 0 小时，合并提取液，回收乙醇至尽，浓缩液加1倍体积的纯化水，搅拌均勻，置于冷藏室M小时。取出冷藏液，过滤，滤液上HPD-400树脂(购自沧州宝恩吸附材料科技有限公司)吸附， 先用去离子水洗脱，用molish反应和薄层色谱控制洗脱终点，弃去洗脱液，再用12倍柱体积的70%乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，低温减压浓缩至0. 2g药材/ml，再加入到聚酰胺树脂 (14-30目)吸附，用8倍去离子水洗脱，收集洗脱液，低温减压浓缩，干燥，干品用40倍(V/ W) 95%的乙醇加热溶解，然后加入0. 1 %的活性炭，于40°C保温0. 5小时，滤膜过滤，收集滤液，低温减压浓缩，55°C真空干燥，即得三七总皂苷2200. 3g (三七总皂苷含量为96. 8%，人参三醇型皂苷与人参二醇型皂苷重量比为3.0 1)。制备实施例3 取干燥三七主根20. 0kg，使用中草药粉碎机(购自天津市泰斯特仪器有限公司) 粉碎，过3号筛，用10倍药材重量的浓度为70%乙醇溶液55°C减压回流提取1次，每次3. 0 小时，合并提取液，回收乙醇至尽，浓缩液加1倍体积的纯化水，搅拌均勻，置于冷藏室M小时。取出冷藏液，过滤，滤液上AB-8树脂(购自沧州宝恩吸附材料科技有限公司)吸附， 先用去离子水洗脱，用molish反应和薄层色谱控制洗脱终点，弃去洗脱液，再用10倍柱体积的80%乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，低温减压浓缩至0. 2g药材/ml，再加入到聚酰胺树脂 (60-80目)吸附，用6倍去离子水洗脱，收集洗脱液，低温减压浓缩，干燥，干品用50倍(V/ W) 80%的乙醇加热溶解，然后加入0. 5%的活性炭，于40°C保温0. 5小时，滤膜过滤，收集滤液，低温减压浓缩，55°C真空干燥，即得三七总皂苷2128. 6g (三七总皂苷含量为96. 6%，人参三醇型皂苷与人参二醇型皂苷重量比为2. 8 1)。制备实施例4:取干燥三七主根20. 0kg，使用中草药粉碎机(购自天津市泰斯特仪器有限公司) 粉碎，过3号筛，用10倍药材重量的浓度为70%乙醇溶液60°C减压回流提取1次，每次3. 0 小时，合并提取液，回收乙醇至尽，浓缩液加1倍体积的纯化水，搅拌均勻，置于冷藏室M小时。取出冷藏液，过滤，滤液上DM130树脂(购自沧州宝恩吸附材料科技有限公司)吸附， 先用去离子水洗脱，用molish反应和薄层色谱控制洗脱终点，弃去洗脱液，再用10倍柱体积的85%乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，低温减压浓缩至0. 2g药材/ml，再加入到聚酰胺树脂 (14-30目)吸附，用6倍去离子水洗脱，收集洗脱液，低温减压浓缩，干燥，干品用50倍(V/ W) 80 %的乙醇加热溶解，然后加入1. 5%的活性炭，于40°C保温0. 5小时，滤膜过滤，收集滤液，低温减压浓缩，55°C真空干燥，即得三七总皂苷2234. 6g (三七总皂苷含量为95. 8%，人参三醇型皂苷与人参二醇型皂苷重量比为2. 5 1)。制备实施例5 取干燥三七主根20. 0kg，使用中草药粉碎机(购自天津市泰斯特仪器有限公司)粉碎，过3号筛，用8倍药材重量的浓度为80%乙醇溶液55°C减压回流提取3次，每次1. 0 小时，合并提取液，回收乙醇至尽，浓缩液加1倍体积的纯化水，搅拌均勻，置于冷藏室M小时。取出冷藏液，过滤，滤液上ADS-7树脂(购自沧州宝恩吸附材料科技有限公司)吸附， 先用去离子水洗脱，用molish反应和薄层色谱控制洗脱终点，弃去洗脱液，再用8倍柱体积的85%乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，低温减压浓缩至0. 2g药材/ml，再加入到聚酰胺树脂 (30-60目)吸附，用4倍去离子水洗脱，收集洗脱液，低温减压浓缩，干燥，干品用60倍(V/ W) 70%的乙醇加热溶解，然后加入0. 5%的活性炭，于40°C保温0. 5小时，滤膜过滤，收集滤液，低温减压浓缩，55°C真空干燥，即得三七总皂苷2114. 5g (三七总皂苷含量为98. 4%，人参三醇型皂苷与人参二醇型皂苷重量比为3. 5 1)。制备实施例6 取干燥三七主根20. 0kg，使用中草药粉碎机(购自天津市泰斯特仪器有限公司) 粉碎，过3号筛，用8倍药材重量的浓度为80%乙醇溶液55°C减压回流提取3次，每次1. 0 小时，合并提取液，回收乙醇至尽，浓缩液加1倍体积的纯化水，搅拌均勻，置于冷藏室M小时。取出冷藏液，过滤，滤液上HPD-700树脂(购自沧州宝恩吸附材料科技有限公司)吸附，先用去离子水洗脱，用molish反应和薄层色谱控制洗脱终点，弃去洗脱液，再用8倍柱体积的85%乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，低温减压浓缩至0. 2g药材/ml，再加入到聚酰胺树脂(100目以上)吸附，用4倍去离子水洗脱，收集洗脱液，低温减压浓缩，干燥，干品用 60倍(V/W) 70%的乙醇加热溶解，然后加入0. 5%的活性炭，于40°C保温0. 5小时，滤膜过滤，收集滤液，低温减压浓缩，55°C真空干燥，即得三七总皂苷2216. 7g (三七总皂苷含量为 97.2%，人参三醇型皂苷与人参二醇型皂苷重量比为3.1 1)。制备实施例7 三七总皂苷粉针
三七总皂苷IOOg
乳糖28g
注射用水加至2000ml
制成1000支取制备实施例1制得的三七总皂苷100g，乳糖^g，加适量注射用水加热溶解，力口入0. 3%针用活性炭(w/v)，于40°C保温0. 5小时，过滤，加注射用水补充至总体积2000ml， 调节pH至6. 0 7. 0，滤过、分装、冻干、轧盖、制成1000支，即得。规格为每支含三七总皂苷lOOmg。制备实施例8三七总皂苷粉针
三七总皂苷200g24§ 注射用水加至4000ml
制成1000支取制备实施例2制得的三七总皂苷200g，甘露醇Mg，加适量注射用水加热溶解，加入0. 3%针用活性炭(w/v)，于40°C保温0. 5小时，过滤，加注射用水补充至总体积 4000ml，调节pH至6.0 7.0，滤过、分装、冻干、轧盖、制成1000支，即得。规格为每支含三七总皂苷200mg。制备实施例9三七总皂苷粉针
权利要求
1.一种三七总皂苷的纯化方法，其特征在于，以三七主根或根茎为原料，粉碎，过筛，力口 8-12 (V/W)倍50-95%的乙醇低温减压回流提取1_3次，合并提取液，低温减压浓缩至乙醇尽，浓缩液加1倍的去离子水，置于冷藏室M小时，取出，过滤，滤液加入大孔树脂吸附，先用去离子水洗脱，用molish反应和薄层色谱控制洗脱终点，弃去洗脱液，再用50-95%乙醇洗脱，收集洗脱液，低温减压浓缩至0. 2g药材/ml，再加入聚酰胺树脂柱吸附，用4-8倍的去离子水洗脱，收集洗脱液，低温减压浓缩，干燥，干品用40-60倍(V/W) 70-95 %的乙醇加热溶解，然后加入0. 05-2%的活性炭，于40°C保温0. 5小时，滤膜过滤，收集滤液，低温减压浓缩，55°C真空干燥，即得三七总皂苷。
2.根据权利要求1所述方法制得的三七总皂苷，其特征在于，三七总皂苷的含量彡 95%。
3.根据权利要求1所述方法制得的三七总皂苷，其特征在于，三七总皂苷中人参三醇型皂苷与人参二醇型皂苷的重量比为2. 5-3. 5 1。
4.根据权利要求1所述的三七总皂苷的纯化方法，其特征在于，低温减压回流和低温减压浓缩的温度为40-60°C。
5.根据权利要求1所述三七总皂苷的纯化方法，其特征在于，大孔树脂为HPD700、 HPD400、AB-8、DM130 或 ADS-7 型。
6.根据权利要求1所述三七总皂苷的纯化方法，其特征在于，聚酰胺的规格为14-30 目、30-60目、80-100目或100目以上。
7.一种含有权利要求2或3所述三七总皂苷的药物制剂，其特征在于，剂型为粉针剂、 水针剂、片剂或胶囊。
8.根据权利要求7所述的药物制剂，其特征在于，剂型为粉针剂。
全文摘要
本发明涉及一种三七总皂苷的纯化方法及其制剂，旨在提供一种能制备出更高效、更高纯度三七总皂苷的纯化方法，同时解决现有生产技术的不足和缺陷。所述的纯化方法，突破常规的纯化三七总皂苷的方法，充分结合大孔树脂、聚酰胺以及活性炭的不同纯化作用，可有效的除杂、脱色、富集总皂苷，过聚酰胺时，仅水洗一步操作，工艺简单，节省有机溶剂，易于实现工业化生产。本发明还包括三七总皂苷的药物制剂，剂型为粉针剂、水针剂、片剂或胶囊。
文档编号A61P7/02GK102526147SQ20121007537
公开日2012年7月4日 申请日期2012年3月21日 优先权日2012年3月21日
发明者孙武兴, 李青原, 秦玉霞, 黄海 申请人:北京中海康医药科技发展有限公司