专利名称：一种用于防治缺血再灌注损伤的组合物的制作方法
技术领域：
本发明属于医药技术领域，涉及一种用于防治缺血再灌注损伤的组合物。
背景技术：
近年来，随着休克治疗的进步以及动脉搭桥术、溶栓疗法、经皮腔内冠脉血管成形术、心脏外科体外循环、心肺脑复苏，断肢再植和器官移植等方法的建立和推广应用，使许多组织器官缺血后重新得到血液再灌注。多数情况下，缺血后再灌注可使组织器官功能得到恢复，损伤的结构得到修复，患者病情好转康复；但有时缺血后再灌注.不仅不能使组织、器官功能恢复，反而加重组织、器官的功能障碍和结构损伤。这种在缺血基础上恢复血流后组织损伤反而加重，甚至发生不可逆性损伤的现象称为缺血-再灌注损伤(ischemiareperfusion injury, IRI)。如何减轻或避免IRI已成为近年倍受关注的问题。通过建立实验模型，研究药物和缺血预处理干预来减轻或防止脏缺血再灌注损伤具有十分重要的临 床应用意义。促红细胞生成素(hemopoietin，EP0)是由肾脏和肝脏分泌的一种激素样物质，能够促进红细胞生成。近年来学者们发现EPO有抑制细胞凋亡、抑制炎症反应、诱导缺血耐受等功能，对各组织脏器(如脑、心脏、肾、肺、肠等)的缺血再灌注损伤均有保护作用。在缺血再灌注组织中，EPO与其受体结合通过丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、JAK2/NF k B和磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K/Akt)等细胞内路径发挥调节细胞凋亡的作用。硒(Selenium，Se)是人体必需的微量元素，它的生物学功能主要是作为谷胱甘肽过氧化酶、硫氧还蛋白还原酶、脱碘酶、硒蛋白P和W等酶或蛋白的活性中心或必要组成成份发挥其抗氧化功能。
发明内容
本发明解决的问题在于提供一种用于防治缺血再灌注损伤的组合物及其应用，该组合物对缺血再灌注损伤发挥良好的协同保护作用。本发明是通过以下技术方案来实现一种用于防治缺血再灌注损伤的组合物，将EPO与硒按照EPO :硒=1万IU 28. 5 7310. 6 iig的比例组合。进一步，EPO与硒按照EPO :硒=1万IU 456 U g的比例组合。所述的硒是以亚硒酸盐或硒代硫酸盐的形式与EPO进行组合。所述的亚硒酸盐为亚硒酸钠或亚硒酸氢钠，所述的硒代硫酸盐为硒代硫酸钠。所述的硒是以亚硒酸钠的形式与EPO进行组合，EPO与亚硒酸钠的组合比例为EPO :亚硒酸钠=1 万 IU IOOOu g0一种用于防治缺血再灌注损伤的注射液，在IOOmL注射液中包括3(Tl00万IU的EP0、3(Tl00mg的亚硒酸钠、0. 5 2g人血白蛋白、0. 2 0. 6g氯化钠和l(T50mmol/L枸橼酸盐缓冲液;PH为6. 0 7.0。
所述的防治缺血再灌注损伤的注射液，在IOOmL注射液中包括100万IU的ΕΡ0、IOOmg的亚硒酸钠、Ig人血白蛋白、O. 4g氯化钠、l(T50mmol/L枸橼酸盐缓冲液。一种防治缺血再灌注损伤的注射液的制备方法，包括以下步骤将30 100万IU的EPO用l(T50mmol/L枸橼酸盐缓冲液溶解，再加入3(Tl00mg亚硒酸钠，搅拌溶解，然后加入O. 5^2g人血白蛋白和O. 2^0. 6g氯化钠，充分搅拌混匀，调整体积至IOOmL,并调节pH至6. (Γ7. O,过滤除菌，最后灌封。所述的防治缺血再灌注损伤的组合物用于预防或治疗缺血再灌注损伤的药物的制备的应用。与现有技术相比，本发明具有以下有益的技术效果本发明提供的用于防治缺血再灌注损伤的组合物，是将EPO和硒进行组合，进行组合之后在术前进行注射，能够降低血浆中的BUN的水平，显示出改善肾缺血再灌注损伤 所致的肾功能，减轻肾小管损伤，并且可改善肾缺血再灌注损伤所致的肾功能和肾脏的病理学改变，说明二者合用对缺血再灌注损伤具有保护作用，为缺血再灌注损伤的防治开辟新的途径。本发明提供的用于防治缺血再灌注损伤的组合物，该复方组合可EPO和亚硒酸钠的降糖作用相互协同，EPO和亚硒酸钠的器官组织保护作用相互加强，对缺血再灌注损伤具有协同保护作用。其中EPO的保护作用更明显，是主药；亚硒酸钠是辅药，二者合用的疗效明显优于EPO或亚硒酸钠单用。
图I为EPO和亚硒酸钠对缺血再灌注所致大鼠血浆尿素氮(BUN)水平的影响。图2为EPO和亚硒酸钠对缺血再灌注所致大鼠肾脏皮质损伤的保护作用(HE染色，X400)。A，假手术组；B，缺血再灌注组；C，EPO组；D，亚硒酸钠组；E，EPO+亚硒酸钠小剂量组；F，EPO+亚硒酸钠中剂量组；G，EPO+亚硒酸钠大剂量组。
具体实施例方式本发明提供一种防治缺血再灌注损伤的药物组合物，是将EPO与硒进行复方组合，并进一步制成注射液，EPO的器官保护作用和硒的抗氧化作用是EPO和硒二者组方合理性的基础。该复方组合可改善肾缺血再灌注损伤所致的肾功能，EPO和亚硒酸钠的降糖作用相互协同，复方EPO硒注射液的肾功能保护作用强于二者单用。下面结合具体的实施例对本发明做进一步的详细说明，所述是对本发明的解释而不是限定。I、EPO与硒组合物的组合配比及其对缺血再灌注损伤的保护作用I. IEPO与硒的组合基础EPO因其促进红细胞生成作用，在临床上主要用于严重贫血。近年来学者们发现EPO还有非促红细胞生成作用，如抑制细胞凋亡、抑制炎症反应、诱导缺血耐受等功能，对各组织脏器(如脑、心脏、肾、肺、肠等)的缺血再灌注损伤均有保护作用。硒是人体必需的微量元素，其抗氧化功能使得硒可能成为缺血再灌注损伤联合用药的备选药。亚硒酸钠是用于硒缺乏症和日常补硒的药物。将EPO与硒进行复方组合，有可能会起到更好的缺血再灌注损伤防治的效果，其中EPO的器官保护作用和硒的抗氧化作用是EPO和硒二者组方合理性的基础。I. 2EP0与硒的组合对缺血再灌注损伤的保护的验证I. 2. I以肾的缺血再灌注作为具体的缺血再灌注模型，动物模型的复制如下健康雄性昆明种小鼠，体重18 22g，每组10只，由西安交通大学医学院实验动物中心提供。腹腔注射20%乌拉坦溶液进行麻醉，行腹部手术仰卧位固定，消毒。做腹部切口，暴露双侧肾脏，切除右侧肾脏，钝性分离左侧肾周组织，用无损伤动脉夹夹闭左侧肾蒂，造成左肾缺血。60min后，松开动脉夹实行再灌注(肉眼可见肾脏由暗红色变为鲜红，表明再灌注成功)。再灌注4h后经摘眼球取血处死。I. 2. 2EP0与硒的组合及处理的动物分组涉及到EPO与硒的组合，具体的EPO采用重组人红细胞生成素(rhEPO，recombinant human erythropoietin),而硒是以亚硒酸盐或硒代硫酸盐的形式与EPO进行 组合，通常亚硒酸盐为亚硒酸钠或亚硒酸氢钠，所述的硒代硫酸盐为硒代硫酸钠。所述的亚硒酸盐或硒代硫酸盐都是为了能够提供硒与EPO的组合，并没有其他实质的区别。具体的采用亚硒酸钠来进行组合，并进一步采用权重配比组方研究，确定EPO和亚硒酸钠的最佳配比比例。利用均匀设计表，选取EPO给药量与亚硒酸钠(硒78. 96 ;亚硒酸钠172. 94)给药量两个因素各设6个水平，选用U6 (64)均匀设计表进行试验(具体如表I所示)。给药方式术前3天腹腔注射，I次/d，连续3d，随后进行缺血再灌注手术处理。观测指标摘眼球取血，离心后取血浆，检测血浆尿素氮(BUN)水平。表I.均匀设计组方试验方案
组另IJEPO(IUAg)亚砸酸钠(μ g/kg)
EPO+Se 12550
EP0+Se (2)250400
EP0+Se ③50025
EP0+Se ④ ο200
EP0+Se 2000 Π
EP0+Se 4000IOO3) EPO和亚硒酸钠注射液的复方组合及其制备方法根据中国药典2010年版二部中重组人促红素注射液(CH0细胞)的处方以及表I中EPO与硒组合物的组方配比，设计复方EPO和亚硒酸钠注射液的复方组合及其制备方法。具体的设计如表2所示表2复方EPO和亚硒酸钠注射液的复方组合
权利要求
1.一种用于防治缺血再灌注损伤的组合物，其特征在于，是将EPO与硒按照EPO :硒=1万IU 28. 5 7310. 6 iig的比例组合。
2.如权利要求I所述的用于防治缺血再灌注损伤的组合物，其特征在干，EPO与硒按照EPO :硒=1万IU 400^500 u g的比例组合。
3.如权利要求I所述的防治缺血再灌注损伤的药物组合物，其特征在于，所述的硒是以亚硒酸盐或硒代硫酸盐的形式与EPO进行组合。
4.如权利要求3所述的防治缺血再灌注损伤的药物组合物，其特征在于，所述的亚硒酸盐为亚硒酸钠或亚硒酸氢钠，所述的硒代硫酸盐为硒代硫酸钠。
5.如权利要求I所述的防治缺血再灌注损伤的药物组合物，其特征在于，所述的硒是以亚硒酸钠的形式与EPO进行组合，EPO与亚硒酸钠的组合比例为EPO 亚硒酸钠=1万IU IOOOu go
6.一种用于防治缺血再灌注损伤的注射液，其特征在于，在IOOmL注射液中包括30^100万IU的EP0、3(Tl00mg的亚硒酸钠、0. 5 2g人血白蛋白、0. 2 0. 6g氯化钠、l(T50mmol/L枸櫞酸盐缓冲液;pH为6. 0 7. O。
7.如权利要求6所述的防治缺血再灌注损伤的注射液，其特征在于，在IOOmL注射液中包括100万IU的EPO、IOOmg的亚硒酸钠、Ig人血白蛋白、0. 4g氯化钠、l(T50mmol/L枸櫞酸盐缓冲液。
8.ー种防治缺血再灌注损伤的注射液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤将30^100万IU的EPO用l(T50mmOl/L枸櫞酸盐缓冲液溶解，再加入3(Tl00mg亚硒酸钠，搅拌溶解，然后加入0. 5^2g人血白蛋白和0. 2^0. 6g氯化钠，充分搅拌混匀，调整体积至IOOmL,并调节PH至6. (T7. 0，过滤除菌，最后灌封。
9.权利要求I所述的防治缺血再灌注损伤的组合物用于预防或治疗缺血再灌注损伤的药物的制备的应用。
全文摘要
本发明公开了一种用于防治缺血再灌注损伤的组合物，该组合物，是将促红细胞生成素(EPO)与硒按照EPO︰硒=1万IU︰28.5~7310.6μg的比例组合。EPO的器官保护作用和硒的抗氧化作用是EPO和硒二者组方合理性的基础。该复方组合对缺血再灌注损伤具有协同保护作用，体现在肾脏方面为降低血浆BUN水平，减轻肾小管损伤，改善肾脏病理性变化；其中EPO的作用更明显，是主药；亚硒酸钠作用较EPO小，是辅药；二者合用的疗效明显优于EPO或亚硒酸钠单用。
文档编号A61K38/18GK102755637SQ20121014261
公开日2012年10月31日 申请日期2012年5月9日 优先权日2012年5月9日
发明者侯兰, 刘璐, 刘超, 吴芳, 曾爱国, 王冰, 袁秉祥, 陈莉娜 申请人:西安交通大学