专利名称：一种复方槲皮素纳米乳抗衰老保健品的制作方法
技术领域：
本发明属于医药领域，涉及一种抗衰老保健品槲皮素的新剂型，特别涉及一种复方槲皮素纳米乳抗衰老保健品。
背景技术：
槲皮素(Quercetin)，又名栎精，槲皮黄素，溶于冰醋酸，碱性水溶液呈黄色，几乎不溶于水，乙醇溶液味很苦。 槲皮素能显著抑制促癌剂的作用、抑制离体恶性细胞的生长、抑制艾氏腹水癌细胞DNA、RNA和蛋白质合成。槲皮素有抑制血小板聚集和5-羟色胺(5-HT)的释放作用。槲皮素对ADP、凝血酶和血小板活化因子(PAF)诱导的血小板聚集均有明显抑制作用，其中对PAF的抑制作用最强，槲皮素也能明显抑制凝血酶诱导的兔血小板3H-5-HT释放。研究结果显示，受照大鼠肝脏中过氧化物质MDA含量显著增加，科研人员认为其可能是自由基对膜脂质的脂肪酸成分造成损伤而引起的。而摄入槲皮素可提高肝脏抗氧化物质的含量和抗氧化酶类的活性，加速过氧化氢的分解，减轻炎性细胞的浸润，有助于抗氧化和保护肝细胞。同时，槲皮素可显著增强照射组大鼠淋巴细胞的增殖率，并显著增加免疫辅助细胞、免疫杀伤细胞的百分率。这表明槲皮素确实对受照大鼠机体的氧化应激反应有缓解作用。槲皮素抗氧化、抗衰老效果好，但由于本身脂溶性的缺陷，致使槲皮素的作用无法充分被发挥利用，使得槲皮素无法得到充分利用。
发明内容
针对现有技术中存在的缺陷与不足，本发明的目的在于提供一种分布均匀，稳定性好，渗透性高、溶解度好、生物利用度高的复方槲皮素纳米乳抗衰老保健品。实现上述发明目的的技术方案是一种复方槲皮素纳米乳抗衰老保健品，其特征在于该药的粒径介于67. I 92. 4nm之间，平均粒径为78. 4nm，其原料及其质量百分比为
槲皮素1% 15%
表面活性剂15 % 40%
助表面活性剂I % 15%
油5% 25%
芹菜水提物I % 15%
蘑菇水提物I % 15%
其余成分为蒸馏水，上述原料的质量百分比之和为100%。本发明所选的芹菜，属伞形科植物。有水芹、旱芹两种，功能相近，药用以旱芹为佳。旱芹香气较浓，又名“香芹"，亦称"药芹"。芹菜是高纤维食物，它经肠内消化作用产生一种木质素或肠内脂的物质，这类物质是一种抗氧化剂，对预防高血压、动脉硬化等都十分有益，并有辅助治疗作用。性味归经性凉，味甘辛，无毒；入肺、胃、肝经。功效主治清热除烦，平肝，利水消肿，凉血止血。主治高血压，头痛，头晕，暴热烦渴，黄疸，水肿，小便热涩不利，妇女月经不调，赤白带下.瘰疬.痄腮等病症。功效1.平肝降压芹菜含酸性的降压成分，对兔、犬静脉注射有明显降压作用；血管灌流，可使血管扩张；用主动脉弓灌流法，它能对抗烟碱、山梗茶碱引起的升压反应，并可引起降压。临床对于原发性、妊娠性及更年期高血压均有效。2.镇静安神从芹菜子中分离出的一种碱性成分，对动物有镇静作用，对人体能起安定作用；芹菜甘或芹菜素口服能对抗可卡因引起的小鼠兴奋，有利于安定情绪，消除烦躁。3.利尿消肿芹菜含有利尿有效成分，消除体内水钠潴留，利尿消肿。临床上以芹菜水煎有效率达85.7%，可治疗乳糜尿。4.防癌抗癌芹菜是高纤维食物，它经肠内消化作用产生一种木质素或肠内脂的物质，这类物质是一种抗氧化剂，高浓度时可抑制肠内细菌产生的致癌物质。它还可以加快粪便在肠内的运转时间，减少致癌物与结肠粘膜的接触达到预防结肠癌的目的。5.养血补虚芹菜含铁量较高，能补充妇女经血的损失，食之能避免皮肤苍白、干燥、面色无华，而且可使目光有神，头发黑亮。6.清热解毒秋季气候干燥，人们往往感到口干舌燥气喘心烦，身体不适，常吃些芹菜有助于清热解毒，去病强身。肝火过旺，皮肤粗糙及经常失眠、头疼的人可适当多吃些。本发明所选的蘑菇(mushiOoms)，真菌门蘑菇科，蘑菇富含18种氨基酸、多种维生素和丰富的钙、铁等矿物质，无机质、维生素、蛋白质、植物纤维素等丰富的营养成分，热量低。药理1.抗菌作用蘑菇的培养液(28 30°C培养22天)能抑制金黄色葡萄球菌、伤寒杆菌及大肠杆菌，此培养液对豚鼠无毒，人口服250毫升亦无副作用。同属植物AgaricusnebularisBatsch.的压榨汁尚能抑制分支杆菌及结核杆菌。2.提高机体免疫力蘑菇的有效成分可增强T淋巴细胞功能，从而提高机体抵御各种疾病的免疫功能。3.镇痛，镇静巴西某研究所从蘑菇中提取到一种物质Act - 2，具镇痛、镇静功效，其镇痛效果可代替吗啡。4.止咳化痰蘑菇提取液用于动物实验，发现其有明显的镇咳、稀化痰液的作用。
5.抗癌日本研究人员在蘑菇有效成分中分析出一种分子量为288的超强力抗癌物质，能抑制癌细胞的生长，其作用比绿茶中的抗癌物质强1000倍。蘑菇中还含有一种毒蛋白，能有效地阻止癌细胞的蛋白合成。6.通便排毒蘑菇中所含的人体很难消化的粗纤维、半粗纤维和木质素，可保持肠内水分，并吸收余下的胆固醇、糖分，将其排出体外，对预防便秘、肠癌、动脉硬化。糖尿病等都十分有利。本发明选用的表面活性剂为聚氧乙烯40氢化蓖麻油、蓖麻油聚氧乙烯醚40、吐温80或泊洛沙姆188中的任意一种或与span80的混合物，这些表面活性剂对人体低毒、安全、无刺激。本发明选用的油是的油是大豆油、菜籽油、肉豆蘧酸异丙酯、乙酸乙酯、油酸乙酯 或油酸中的任意一种或几种的混合物，安全、无毒。本发明选用的助表面活性剂为无水乙醇、1，2-丙二醇、聚乙二醇400或丙三醇中的任意一种或几种的混合物。
本发明的复方槲皮素纳米乳通过口服给药，极大的提高了药物的溶解度，减少药物在体内的首过效应，促进药物的胃肠道吸收。槲皮素在水中极难溶解，使药物的转运及吸收变得困难，纳米乳基质为槲皮素提供了良好的溶解环境，并且通过复方芹菜水提物及蘑菇水提物，使得本复方纳米乳的抗氧化、抗衰老效果更佳显著及持久。口服时可经淋巴吸收，克服首过效应和分子通过胃肠道时的屏障。本发明的复方槲皮素纳米乳与现有技术相比，具有以下优点
I.本发明的槲皮素抗衰老纳米乳的药物粒径在67. I 92. 4nm之间，平均粒径为78. 4nm，是将槲皮素溶于油相中，加入表面活性剂和助表面活性剂)，用蒸馏水滴定到均匀、透明的纳米乳体系。形成的复方槲皮素纳米乳含槲皮素达5. 8%以上。2.本发明的槲皮素抗高血压纳米乳分布均匀，体系透明、稳定性好，有较低的表面张力，油包水型纳米乳具有良好的流动性。 3.本发明的槲皮素抗高血压纳米乳给药后迅速被网状内皮细胞吞噬，使药物迅速起效，并维持恒定的血药浓度及药理效应，提高药物的生物利用度，减少药物的用量和使用次数。4.本复方纳米乳通过加入芹菜水提物及蘑菇水提物，使得本复方纳米乳的抗衰老效果更佳显著及持久。5.本发明的槲皮素抗高血压纳米乳制备方法简单，药效稳定，生耗能低。6.本发明制成纳米后可制成口服液直接服用、也可经胶囊包封或经冻干粉技术等处理。试验例I本发明复方槲皮素纳米乳抗衰老保健品粒径大小分析。
图I为本发明复方槲皮素纳米乳电镜照片。图2为本发明复方槲皮素纳米乳粒径分析曲线图。
具体实施例方式发明人给出具体制备方法实施例及使用药效试验来进一步说明本发明药物的效
果O试验例I本发明复方槲皮素纳米乳抗衰老保健品稳定性分析
本发明经透射电子显微镜检测(图1)，液滴呈类球形，分散性好，无粘连。经马尔文粒度分析仪检测(图2)其直径分布在67. I 92. 4nm之间，平均粒径为78. 4nm。通过以下离心试验、光稳定性试验、温度稳定性试验等观察本发明复方槲皮素纳米乳抗衰老保健品的稳定性，观察本发明是否有分层、浑浊或晶体析出等不稳定现象。I.高速离心试验
取适量制备好的本发明复方槲皮素纳米乳抗衰老保健品于离心管中，以10 000r/min的转速离心15 min，离心试验后，本发明复方槲皮素纳米乳抗衰老保健品依然保持离心前的澄清透明，未见分层、浑浊或晶体析出等不稳定现象。2.光稳定性试验
将适量制备好的复方槲皮素纳米乳抗衰老保健品装入透明好的无色、透明小玻璃瓶、中，密封，放置于正常光照条件下10d，分别于ld、2d、4d、6d、8d、10d取样观察。结果表明复方槲皮素纳米乳抗衰老保健品每份样品均保持澄清透明，未见分层、浑浊或晶体析出等不稳定现象3.温度稳定性试验
将适量制备好的复方槲皮素纳米乳抗衰老保健品装入透明好的无色、透明玻璃瓶中，密封，放置于4°C、室温(25°C)和40°C三中温度条件下留样考察各30d，每隔5d取样观察。结果表明，复方槲皮素纳米乳抗衰老保健品在此三种温度条件下均保持澄清透明，未见分层、浑浊或晶体析出等不稳定现象。4.长期稳定性试验
将3批纳米乳密封于棕色玻璃瓶内，置于(25±2)°C、相对湿度(60±5)%条件下12个月，分别于0、3、6、9和12个月时取样，考察纳米乳的性状及含量变化，并参考文献统计分析方法，计算复方槲皮素纳米乳抗衰老保健品的有效期。试验结果表明在长期试验条件下，复方槲皮素纳米乳抗衰老保健品的外观一直保持澄明、均一，未见分层、色变、絮凝和破乳等现象；体系中的槲皮素含量随时间延长而逐渐降低，其含量一时间变化曲线提供的线性回归方程，计算出复方槲皮素纳米乳抗衰老保健品的有效期为31. 22个月。试验例2毒性试验及结论
本发明产品严格按照按《食品安全性毒理学评价程序和方法》进行了急性毒性试验，遗传毒性试验，包括Ames试验、小鼠骨髓微核试验、小鼠精子畸形试验、小鼠辜丸染色体畸变试验以及小鼠30d喂养试验，试验结果如下。本品对小鼠急性毒性实验结论给药后连续观察一周，60只小鼠无明显不良反应及死亡。本品对小鼠灌胃的耐受量为180g/kg，相当于临床用量的1800倍。根据急性毒性分设标准，本品属无毒物质。本发明产品的Ames试验、小鼠精子畸形试验和睾丸染色体畸变试验等遗传毒性试验的结果均为阴性。大鼠30d喂养本发明产品的结果表明在试验期内各实验组动物生长发育良好，体重、摄食量、血常规、血生化、脏器系数等指标均在正常范围内，病理组织学检查亦未见异常，说明本品无毒性作用。本品长期毒性实验结论不同剂量的本药品在连续灌胃给药三个月未见大鼠不良反应，各项检查指标均在正常范围内，病理检查其主要脏器及靶器官均未见该药引起的中毒性病理改变。试验例3药效研究项目及结论
I.雌性小鼠生殖器官试验结果表明①注射D-半乳糖的小鼠与正常组相比，其卵巢和子宫SOD、GSH-Px和总蛋白含量以及血清雌二醇含量显著下降，MDA含量显著升高(P〈0.01)。②服用本品后，小鼠卵巢和子宫SOD、GSH-Px和总蛋白含量分别升高(P〈0. 01，P<0. 05), MDA含量显著下降(P〈0. 01)。③服用本品后，小鼠血清雌二醇含量提升，分别为(6.68 ± O. 66)和(6. 66 ± O. 56)，与衰老组相比有显著性差异(P〈0. 05)。2.乳腺上皮细胞体外培养试验结果表明①与正常组相比，本品能缩短乳腺上皮细胞群体倍增时间(p〈0. 05)，提升细胞分裂指数(P〈0. 05)，具有显著性差异；②单纯使用玉米幼芽提取物不能诱导乳腺上皮细胞合成酪蛋白血清饥饿培养能够降低细胞增殖活性，20 mg/L浓度和40 mg/L浓度玉米幼芽提取物能够有效延缓乳腺上皮细胞增殖活性的降低(P〈0. 05)，具有显著的保护效应(P〈0. 05)。④血清饥饿培养能够诱导乳腺上皮细胞凋亡，凋亡的细胞表达bcl-2基因；本品能够诱导细胞高表达bcl-2基因，经分析，平均光密度分别为(O. 3777 ± O. 0111)和(O. 4163 ± O. 0134)，和饥饿组相比有显著性差异(P〈0. 05，P〈0.01)。⑤与饥饿组相比，本品能够显著提升乳腺上皮细胞总蛋白含量(P〈0. 05) ;10 mg/L浓度与饥饿组相比，无显著性差异。
3.氧化所导致的心肌缺血保护
(I)Iso诱发的家兔心肌缺血损伤保护试验本品可减轻Iso诱发的家兔心肌缺血损伤。实验结果显示，本品可减轻Iso引起的家兔心率加快、J点升高程度，改善心肌组织损伤；显著或极显著降低血清中的AST、LDH、CK活性(P〈0.01或P〈0. 05);显著或极显著提高血清中NO含量(P〈0. 01或Ρ〈0· 05)、心肌组织和血清中SOD和GSH-pX活性(P〈0. 01或P〈0. 05)，显著或极显著降低心肌组织和血清中MDA含量(P〈0. 01或P〈0. 05)。(2)Pit诱发的家兔心肌缺血损伤保护试验预先给家兔灌胃本品作为保护，连续2周后，耳缘静脉注射Pit (2.0 U.kg—1，用生理盐水稀释为3ml，20s匀速注射)，诱发家兔心肌缺血。结果显示，本品可抑制Pit所致家兔心率减缓、S-T段抬高、T波高耸；显著或极显著降低血清中的AST、LDH、CK活性(P〈0. 01或P〈0. 05);显著或极显著提高心肌组织中SOD和GSH-PX活性(P〈0. OI或P〈0. 05 )，显著或极显著降低MDA含量(Ρ〈0· OI或Ρ〈0· 05 )。(3)本品可减轻Iso诱发的体外培养新生大鼠心肌细胞缺血损伤
体外培养乳鼠心肌细胞，加入Iso模拟心肌缺血状态30min后，加入本品。结果显示，本品可改善缺血状态下的心肌细胞形态，提高细胞存活率和细胞密度；显著或极显著降低细胞培养液中 AST、LDH、CIU@^(P〈0. 01 或P〈0. 05);极显著提高SOD和GSH-pX活性(P〈0. 01)，显著降低MDA含量(P〈0. 05);促进BC1-2表达，抑制NF- κ B表达。综合上述实验结果，本品对氧化所致的心肌缺血损伤有保护作用。4.本品对衰老小鼠心肌自由基代谢和超微结构的影响以D-半乳糖诱导的亚急性衰老模型，研究本品对衰老小鼠心肌抗氧化酶活性、自由基含量和脂质过氧化产物含量的影响，并从形态学上对EMP的抗氧化损伤作用进行了考察。结果显示(1)本药品保护组的各项指标与衰老模型组间均呈极显著差异(SOD 87. 241 ±3. 849 U/mg, +18. 8%，P〈0. 01 ；CAT :47·313±2· 195 U/mg，+36. 4%，Ρ〈0· 01 ；GSH-Px :28. 038± I. 583 U/mg,+37. 6%,Ρ<0. 01 ；MDA 11. 300±1· 529 nmol/mg，-34. 7%, Ρ〈0· 01 ；Ν0 6. 438±0· 637 μ mol/L, -47. 1%,Ρ〈0. 01) ;(2)ΗΕ染色观察，模型组心肌纤维排列紊乱，扭曲断裂增多，纤维间空隙增大；电镜观察，模型组心肌Z线变宽、模糊，肌原纤维断裂、溶解、凝集，线粒体肿胀、空泡化、嵴消失；20 mg/kg EMP保护组的以上病变得到了明显的改善。以上结果说明，20 mg/kg EMP具有增强衰老小鼠心肌抗氧化酶活性，改善心肌自由基代谢，保护心肌细胞超微结构免受自由基氧化损伤的作用。5.本品对果蝇的抗衰老作用以果蝇为实验对象研究EMP对其繁殖力、抗热应激能力、吃食量、水分含量和寿命的影响，并基于D-半乳糖诱导的果蝇衰老模型考察EMP对衰老果蝇体内SOD活性和MDA含量的作用。结果表明(I)与空白对照组比较，40 mg/kg的药物组能明显提高果蝇繁殖力、抗热应激能力(雌蝇75. 250 ±4. 031 %，+33. 78 %，P〈0. 01 ；雄蝇63· 750±3· 500 %, +19. 72 %, P〈O. 01)、吃食量(雌蝇0· 043±0· 003 g, +22. 86%，Ρ〈0· 05 ；雄蝇0. 048±0. 002 g, +23. 08 %，Ρ〈0· 05)、水分含量(雌蝇0. 065±0. 004g, +14. 04 %，Ρ〈0· 05 ；雄蝇0. 059±0. 002 g, +20. 41 %，Ρ〈0· 01)、平均寿命(雌蝇66. 23±13. 37 d,+10. 79 %，Ρ〈0· 01 ;雄蝇63· 96± 12. 66 d,+15. 64 %，Ρ〈0· 05)和最高寿命寿命(雌蝇80. 67±2· 08 d, +14. 15 %，Ρ〈0· 01 ;雄蝇75. 67±1· 53 d, +10. 74 %，Ρ〈0· 05)；
(2)与模型组相比，药物保护组的SOD活性显著升高(雌蝇40 d，P〈0. 01 ;雄蝇30 d、40 d，卩〈0.05)，]\0^含量明显下降(雌蝇30 d、40 d，P〈0. 01 ;雄蝇30 d、40 d，P〈0. 01)。以上结果显示，本品能提高果蝇的繁殖力、抗热应激能力、吃食量、水分含量和寿命，升高衰老果蝇体内的SOD活性，降低MDA含量，对抗D-半乳糖引起的氧化损伤。6.本品能极显著升高衰老小鼠睾丸组织SOD活性、GSH-PX活性及NO含量、血清T水平、附睾精子数和精子活率(p〈0. 01)，极显著降低MDA含量(P〈0. 01)。药物组小鼠睾丸生 精细胞数目增多、排列有序，管腔内精子数目增多。生精细胞细胞器数目增多，线粒体形态完整，细胞核清晰。Leydig细胞数目增多，细胞核清晰、颗粒状分布。并可能极显著提高原代培养大鼠睾丸Leydig细胞睾酮合成和分泌的能力(P〈0. 01 )，保持细胞结构完整性。综上所述，本发明制剂对于发扬人体活力延缓人体的各种生理功能衰退有显著效果，无毒副作用，适于各年龄段、特别是中老年人服用。实施例I
精确称取EL40 28g，乙酸乙酯9g，槲皮素5.8g，PEG200 4g在室温(25°C )条件下磁力搅拌器搅拌均匀，然后向其中缓慢滴入已溶解芹菜提取物及蘑菇提取物的蒸馏水。随着蒸馏水量的增加，体系黏稠度增大，当蒸馏水量使得体系由油包水变为水包油型纳米乳时，体系粘稠度从最粘稠的状态变稀，此时产生的是无色透明的复方槲皮素纳米乳，加入的芹菜水提物5. 2g，蘑菇水提物4. 7g，蒸馏水43. 3 g。此比例即为槲皮素抗高血压纳米乳的最优配比。以下实施例步骤同实施例I :
实施例2
槲皮素6g，吐温80 24g，肉豆蘧酸异丙酯12g，乙醇12g，芹菜水提物4g，蘑菇水提物4g,蒸懼水46g。实施例3
槲皮素4g，RH40 28g，油酸10g，PEG400 3g，芹菜水提物5g，蘑菇水提物7g，蒸馏水
43g。实施例4
槲皮素4. 7g，EL40氢化蓖麻油21g，油酸乙酯7g，丙三醇3g，芹菜水提物3. 5g，蘑菇水提物6. 5g,蒸懼水54. 3g。实施例5
槲皮素8g，泊洛沙姆188 25g，肉豆蘧酸异丙酯10g，PEG200 12g，芹菜水提物6g，蘑菇水提物3g，蒸馏水36g。实施例6
槲皮素7. lg，RH40 22g，大豆油10g，聚乙二醇600 17g，芹菜水提物2g，蘑菇水提物4g，蒸懼水37. 9g。实施例7槲皮素lg，吐温80 15g，肉豆蘧酸异丙酯5g，乙醇15g，芹菜水提物15g，蘑菇水提物15g,蒸懼水34g。实施例8
槲皮素3g，RH40 15g，油酸8g，PEG400 12g，芹菜水提物12g，蘑菇水提物12g，蒸馏水
38g0实施例9
槲皮素5g,EL40 20g,油酸乙酯I Ig,丙三醇9g,}^菜水提物9g,蘑燕水提物9g,蒸懼水
37g。
实施例10
槲皮素7g，泊洛沙姆188 25g，肉豆蘧酸异丙酯14g，PEG200 7g，芹菜水提物7g，蘑菇水提物7g，蒸馏水33g。实施例11
槲皮素9g,RH40 30g,大豆油17g,聚乙二醇600 5g,疗菜水提物5g,蘑燕水提物5g,蒸馏水39g。实施例12
槲皮素12g，吐温80 35g，肉豆蘧酸异丙酯21g，乙醇3g，芹菜水提物3g，蘑菇水提物3g,蒸懼水23g。实施例13
槲皮素15g，RH40 40g，油酸25g，PEG400 lg，芹菜水提物lg，蘑菇水提物lg，蒸馏水
27g。
权利要求
1.一种复方槲皮素纳米乳抗衰老保健品，其特征在于，其原料及其质量百分比为 槲皮素1% 15% 表面活性剂15 % 40% 助表面活性剂I % 15%油5% 25% 芹菜水提物I % 15% 蘑菇水提物I % 15% 其余成分为蒸馏水，上述原料的质量百分比之和为100% ； 所述的表面活性剂为聚氧乙烯40氢化蓖麻油、蓖麻油聚氧乙烯醚40、吐温80或泊洛沙姆188中的任意一种或与span80的混合物； 所述的油是大豆油、菜籽油、肉豆蘧酸异丙酯、乙酸乙酯、油酸乙酯或油酸等脂类中的任意一种或几种的混合物； 所述的助表面活性剂为无水乙醇、1，2-丙二醇、聚乙二醇400或丙三醇中的任意一种或几种的混合物。
2.根据权利要求I所述的复方槲皮素纳米乳抗衰老保健品，其特征在于该药的粒径介于67. I 92. 4nm之间。
全文摘要
本发明公开了一种复方槲皮素纳米乳抗衰老保健品，其原料及其质量百分比为槲皮素1％～15％，表面活性剂15％～40％，助表面活性剂1％～15％，油5％～25％，芹菜水提物1％～15％，蘑菇水提物1％～15％，其余成分为蒸馏水，上述原料的质量百分比之和为100％。本纳米乳乳滴颗粒小、分布均匀、粘度小、流动性好。本发明以具有高效抗衰老功效的脂溶性天然产物槲皮素为主要组分，辅以芹菜水提物及蘑菇水提物，具有保持肌肤水分、调节睡眠、延缓衰老、调节免疫功能的作用，对高血压、高血脂、高血糖、心脏病等疾病有一定的保健作用。
文档编号A61K9/107GK102631385SQ20121014274
公开日2012年8月15日 申请日期2012年5月10日 优先权日2012年5月10日
发明者孙江宏, 欧阳五庆, 郝明杰 申请人:西北农林科技大学