专利名称：蟾蜍蛆虫蛋白质在治疗宫颈癌药品中的应用的制作方法
技术领域：
本发明属于医药技术领域，涉及ー种药品生产エ艺，尤其是蟾蜍蛆虫蛋白质在制备治疗宫颈癌药品中的应用。
背景技术：
宫颈癌是女性常见的恶性肿瘤之一，是由人类乳头瘤病毒引起的疾病。 CN102362996A公开了ー种治疗宫颈癌的中草药药物，由慈菇、三棱、赤芍、夏枯草等4味中药组成。CN102178948A公开了治疗和/或预防宫颈癌的基因工程药物，其活性成分含有序列表的序列2所示蛋白质的编码基因的重组质粒甲和表述所述序列表的序列2所示蛋白质的重组腺病毒组成。CN102241758A公开了旋毛虫与宫颈癌相关抗原抗体制备方法及医用用途。该发明提供了旋毛虫与宫颈癌相关抗原抗体制备方法。CN101322766公开了ー种以白蚁为主要原料制成的治疗宫颈癌的喷剂，由白蚁、蛇床子、野菊花、黄柏、地肤子、苦參、白芷等原料配制而成。CN1365693公开了纳米宫颈癌制剂药物及其制备方法，是以纳米掌叶半夏醇提取物浸膏为原料按比例配制成中药饮片。原则上前述的几种中药制剂都可以用于治疗宫颈癌药品的制备，但是，由于前述的几个药方中药物繁多，每种中草药由于种植地域、气候、品种、采收时间、炮制及加工方法的差异，在エ业化生产中难于保证产品的一致性和质量控制。
发明内容
针对现有治疗宫颈癌药品存在的问题，本发明将蟾蜍蛆虫蛋白质与适宜的药剂辅料结合使用，提供一种蟾蜍蛆虫蛋白质在治疗宫颈癌药品中的新用途。本发明的治疗宫颈癌药品按照下述步骤制备
一、提取蟾蜍蛆虫蛋白质
(1)将IOOOg干燥蟾蜍蛆虫放入常温膨化装置，充入I IOkg氮气、O.I O. 5kg氨气，加压至O. 2 I. OMpa,时间10 30min，然后瞬间释放装置内气体，蟾蜍蛆虫被膨化粉碎；
(2)膨化粉碎物料加入到膨胀溶剂体系提取装置中，充入200 2000gニ氧化碳、100 500gこ醇和100 200g ニ甲基甲酰胺,加压至I 8Mpa,温度10 25°C,时间10 60min,然后释放压カ至常压，收集混合液；
(3)混合液用分离机以1500 5000r/min分离,收集液相；
(4)收集液相用膜孔径O.5 50 μ m微滤机过滤，得过滤液；
(5)将过滤液注入到saphacryls-lOOHR的凝胶过滤柱中在pH=3 12条件下过滤；
(6)滤液溶解于由氯仿-こ醇-甲醇-水按照4:3:3:2的体积比组成的溶剂体系中，泵入超声驻波液相制备色谱中，超声驻波功率O. 2 5. 0KW、频率500 1000kHz、流速50 500mL/min、紫外检测器波长280nm，分离纯化出蟾蜍蛆虫蛋白质；
(7)纯化蟾蜍蛆虫蛋白质用真空冷冻干燥机在真空度200 800Kpa、温度-50 30°C、时间6 24h的条件下,干燥至含水分5 8%的冻干蛋白质成品；
ニ、混合按照配比混合，加工成各种剂型的治疗宫颈癌药品。蟾蜍蛆虫蛋白质是从蟾蜍蛆虫中提取分离纯化的生物活性蛋白质，分子结构清晰，药用效价比较高，特异性强，毒性反应相对较弱，在体内不易产生蓄积，与体内受体的亲和性具有分子的认知性，而且几乎没有异化生物代谢毒性。本发明针对宫颈癌特殊症状而设计，提取纯化的一种蟾蜍蛆虫蛋白质含量达96. 5 98. 1%，再用此纯度的蟾蜍蛆虫蛋白质制备成各种剂型的药品，该药品成分明确，一 致性好,质量可控,对宫颈癌病症疗效好并且使用方便。
图I为膨胀溶剂体系提取装置的结构示意图。
具体实施例方式具体实施方式
一本实施方式按照下述方法制备治疗宫颈癌的药物
(1)将IOOOg干燥蟾蜍蛆虫放入常温膨化装置(ZL200520108339.X)，充入I IOkg氮气、O. I O. 5kg氨气，加压至O. 2 I. OMpa,时间10 30min,然后瞬间释放装置内气体，蟾蜍蛆虫被膨化粉碎；
(2)膨化粉碎物料加入到膨胀溶剂体系提取装置中，充入200 2000gニ氧化碳、100 500gこ醇和100 200g ニ甲基甲酰胺,加压至I 8Mpa,温度10 25°C,时间10 60min,然后释放压カ至常压，收集混合液；
(3)混合液用分离机以1500 5000r/min分离,收集液相；
(4)收集液相用膜孔径O.5 50 μ m微滤机过滤，得过滤液；
(5)将过滤液注入到saphacryls-lOOHR的凝胶过滤柱中在pH=3 12条件下过滤；
(6)滤液溶解于由氯仿-こ醇-甲醇-水按照4:3:3:2的体积比组成的溶剂体系中，泵入超声驻波液相制备色谱(ZL200920274485. 8)中，超声驻波功率O. 2 5. 0KW、频率500 1000kHz、流速50 500mL/min、紫外检测器波长280nm,分离纯化出蟾蜍蛆虫蛋白质；
(7)纯化蟾蜍蛆虫蛋白质用真空冷冻干燥机在真空度200 800Kpa、温度-50 30°C、时间6 24h的条件下,干燥至含水分5 8%的冻干蛋白质成品；
(8)取上述冻干蛋白质10 15g、卵磷脂0.I I. 5g、液体石腊20 50g,搅拌均勻，研匀成糊状，另取乌桕脂100 200g于水浴上加热至45 55°C熔化后冷却至35 38°C，倒入已研匀成糊状的蛋白质与卵磷脂及液体石蜡混合物中迅速研均匀，趁热浇注于栓剂模具中，冷凝到10 20°C，从栓剂模具中取出成型蟾蜍蛆虫蛋白质栓剂，包装成品。如图I所示，本实施方式中所述膨胀溶剂体系提取装置由球形膨胀溶剂体系提取 器I、原料罐2、固液分离器3、气固分离器4、成品罐5、外源ニ氧化碳瓶6、ニ氧化碳储罐7、ニ氧化碳循环压カ泵8和溶剂罐9组成，球形膨胀溶剂体系提取器I通过管线分别与原料罐2、固液分离器3、ニ氧化碳循环压カ泵8及溶剂罐9相连接，固液分离器3与气固分离器4相连接，气固分离器4通过管线分别与成品罐5及ニ氧化碳储罐7相连接，ニ氧化碳储罐7通过管线分别与外源ニ氧化碳瓶6及ニ氧化碳循环压カ泵8连接。
具体实施方式
ニ 本实施方式按照下述方法制备治疗宫颈癌的药物
(1)将IOOOg鲜蟾蜍蛆虫用打浆机在500 1000r/min打浆10 30min，成为浆状物；
(2)浆状物中加入含O.01 O. 5%碳酸钠水溶液5 20L，搅拌均匀，在常温下放置30 120min ；
(3)用离心机在1500 5000r/min条件下离心10 30min，收集液相；
(4)用膜孔径O.2 5. O μ m微滤机过滤上述液相，收集过滤液；
(5)将滤液注入到saphacryls-lOOHR凝胶过滤柱中在pH=3 12过滤得过滤液；
(6)过滤液溶解于由氯仿-こ醇-甲醇-水按照4::3:32的体积比组成的溶剂体系 中，泵入超声驻波液相制备色谱中，超声驻波功率O. 2 5. OKff,频率500 IOOOkHz，流量50 500mL/min,紫外检测器波长280nm,连续纯化分离蟾蜍蛆虫蛋白质；
(7)纯化蟾蜍蛆虫蛋白质用真空冷冻干燥机在真空度50 500Kpa，温度-30 30°C，时间6 24h条件下干燥至含水分5 8%成品；
(8)将IOOg卵磷脂和30 80g胆固醇混合后加入到500 IOOOmlこ醚中成I液，10 50g蟾蜍蛆虫蛋白质加入到3 10mmol/L磷酸盐缓冲溶液中搅拌溶解制成II液，将I液与II液混合后用超声波在功率0. I 0. 5KW，频率300 500KHz，常温下超声振荡10 30min,然后在旋转蒸发器中加热50 80°C,真空度100 500Kpa,转速30 120r/min蒸发至呈现凝胶状，取下蒸发烧瓶放在旋转振荡器上以30 200r/min振荡使凝胶转相后，再将蒸发烧瓶放入水浴中加热60 80°C，去净こ醚，再将物料放入超速离心机内在15000 50000r/min超速离心30 60min,分离除去未包覆的蟾蜍蛆虫蛋白质,沉淀物用I 2L去离子水洗涤2 3次，离心机在150 750r/min脱去水，即得蟾蜍蛆虫蛋白质脂质体,收集包装即得。宫颈癌癌疾病分期
O期癌局限于粘膜层，无淋巴结转移；
I期肿瘤局限于固有肌层以内，无淋巴结转移；
II期肿瘤侵润超过固有肌层，但无淋巴结转移；
III期淋巴结转移；
IV期远处转移(肝、肺等)或腹膜转移。治疗方法
患者需严格限制饮酒。按体重70kg计，每天肛门栓剂给药，每天3支，毎次I支，或脂质体局部注射，每天2剂，每剂250 300 μ g，2周ー个疗程。治疗结果分级标准
一、近期疗效(4周末与治疗前比较)
1、完全缓解病灶完全消失，无新的病灶出现；
2、部分缓解病灶缩小的治疗前的50%或更小，无新的病灶出现，多灶性病变时没有一个病灶增大；
3、稳定期①轻度缓解病灶缩小面积20%或增大面积25%，自觉症状改善，体力基本状况上升基本稳定病灶缩小不到25%或増大面积不超过25%以上，自觉症状改善，体力基本状况上升；4、扩展单个面积或多个病灶总面积比治疗前増大25%以上，或出现新的病变，临床症状加重，体力基本状况下降。ニ、中期治疗(5周 I年)
1、完全缓解，无瘤生存；
2、部分缓解①癌体回复到治疗前的面积50%以上或出现新的病灶癌体无增大或縮小，症状改善或消失体力基本状况上升；
3、转移及扩展病原灶扩大发展，出现新的转移灶，临床症状加重，体力状况下降。三、远期疗效(I年 5年)
1、无瘤生存；
2、带瘤生存；
3、死亡。治疗结果见表I 表I
权利要求
1.一种蟾蜍蛆虫蛋白质在治疗宫颈癌药品中的应用。
2.根据权利要求I所述的蟾蜍蛆虫蛋白质在治疗宫颈癌药品中的应用，其特征在于所述治疗宫颈癌药品是由蟾蜍蛆虫蛋白质10 15g、卵磷脂0. I I. 5g、液体石蜡20 50g、乌桕脂100 200g制成的栓剂。
3.根据权利要求I或2所述的蟾蜍蛆虫蛋白质在治疗宫颈癌药品中的应用，其特征在于所述蟾蜍蛆虫蛋白质按照下述方法获得 (1)将IOOOg干燥蟾蜍蛆虫放入常温膨化装置，充入I IOkg氮气、0.I 0. 5kg氨气，加压至0. 2 I. OMpa,时间10 30min，然后瞬间释放装置内气体，蟾蜍蛆虫被膨化粉碎； (2)膨化粉碎物料加入到膨胀溶剂体系提取装置中，充入200 2000gニ氧化碳、100 500gこ醇和100 200g ニ甲基甲酰胺,加压至I 8Mpa,温度10 25°C,时间10 60min,然后释放压カ至常压，收集混合液； (3)混合液用分离机以1500 5000r/min分离,收集液相； (4)收集液相用膜孔径0.5 50 y m微滤机过滤，得过滤液； (5)将过滤液注入到saphacryls-lOOHR的凝胶过滤柱中在pH=3 12条件下过滤； (6)滤液溶解于溶剂体系中，泵入超声驻波液相制备色谱中，超声驻波功率0.2 5. 0KW、频率500 1000kHz、流速50 500mL/min、紫外检测器波长280nm，分离纯化出蟾蜍蛆虫蛋白质； (7)纯化蟾蜍蛆虫蛋白质用真空冷冻干燥机在真空度200 800Kpa、温度-50 30°C、时间6 24h的条件下,干燥至含水分5 8%的冻干蛋白质成品。
4.根据权利要求3所述的蟾蜍蛆虫蛋白质在治疗宫颈癌药品中的应用，其特征在于所述溶剂体系由氯仿-こ醇-甲醇-水按照4:3:3:2的体积比组成。
5.根据权利要求I所述的蟾蜍蛆虫蛋白质在治疗宫颈癌药品中的应用，其特征在于所述治疗宫颈癌药品是由IOOg卵磷脂、30 80g胆固醇、10 50g蟾蜍蛆虫蛋白质制成的脂质体。
6.根据权利要求I或5所述的蟾蜍蛆虫蛋白质在治疗宫颈癌药品中的应用，其特征在于所述蟾蜍蛆虫蛋白质按照下述方法获得 (1)将IOOOg鲜蟾蜍蛆虫用打浆机在500 1000r/min打浆10 30min，成为浆状物； (2)浆状物中加入质量浓度为0.01 0. 5%碳酸钠水溶液5 20L，搅拌均匀，在常温下放置30 120min ； (3)用离心机在1500 5000r/min条件下离心10 30min,收集液相； (4)用膜孔径0.2 5. 0 ii m微滤机过滤上述液相，收集过滤液； (5)将滤液注入到saphacryls-lOOHR凝胶过滤柱中在pH=3 12过滤得过滤液； (6)过滤液溶解于溶剂体系中，泵入超声驻波液相制备色谱中，超声驻波功率0.2 5.OKff,频率500 1000kHz，流量50 500mL/min，紫外检测器波长280nm，连续纯化分离蟾蜍蛆虫蛋白质； (7)纯化蟾蜍蛆虫蛋白质用真空冷冻干燥机在真空度50 500Kpa，温度-30 30°C，时间6 24h条件下干燥至含水分5 8%成品。
7.根据权利要求6所述的蟾蜍蛆虫蛋白质在治疗宫颈癌药品中的应用，其特征在于所述溶剂体系由氯仿-こ醇-甲醇-水按照4::3:3 2的体积比组成。
8.根据权利要求I所述的蟾蜍蛆虫蛋白质在治疗宫颈癌药品中的应用，其特征在于所述治疗宫颈癌药品按照下述方法制备 一、提取蟾蜍蛆虫蛋白质 (1)将IOOOg干燥蟾蜍蛆虫放入常温膨化装置，充入I IOkg氮气、0.I 0. 5kg氨气，加压至0. 2 I. OMpa,时间10 30min，然后瞬间释放装置内气体，蟾蜍蛆虫被膨化粉碎； (2)膨化粉碎物料加入到膨胀溶剂体系提取装置中，充入200 2000gニ氧化碳、100 500gこ醇和100 200g ニ甲基甲酰胺,加压至I 8Mpa,温度10 25°C,时间10 60min,然后释放压カ至常压，收集混合液； (3)混合液用分离机以1500 5000r/min分离,收集液相； (4)收集液相用膜孔径0.5 50 y m微滤机过滤，得过滤液； (5)将过滤液注入到saphacryls-lOOHR的凝胶过滤柱中在pH=3 12条件下过滤； (6)滤液溶解于由氯仿-こ醇-甲醇-水按照4:3:3:2的体积比组成的溶剂体系中，泵入超声驻波液相制备色谱中，超声驻波功率0. 2 5. 0KW、频率500 1000kHz、流速50 500mL/min、紫外检测器波长280nm，分离纯化出蟾蜍蛆虫蛋白质； (7)纯化蟾蜍蛆虫蛋白质用真空冷冻干燥机在真空度200 800Kpa、温度-50 30°C、时间6 24h的条件下,干燥至含水分5 8%的冻干蛋白质成品； ニ、混合按照权利要求I所述配比混合，加工成各种剂型的治疗宫颈癌药品。
9.根据权利要求I所述的蟾蜍蛆虫蛋白质在治疗宫颈癌药品中的应用，其特征在于所述蟾蜍蛆虫蛋白质的提取方法为 (1)将IOOOg鲜蟾蜍蛆虫用打浆机在500 1000r/min打浆10 30min，成为浆状物； (2)浆状物中加入质量浓度为0.01 0. 5%碳酸钠水溶液5 20L，搅拌均匀，在常温下放置30 120min ； (3)用离心机在1500 5000r/min条件下离心10 30min,收集液相； (4)用膜孔径0.2 5. 0 ii m微滤机过滤上述液相，收集过滤液； (5)将滤液注入到saphacryls-lOOHR凝胶过滤柱中在pH=3 12过滤得过滤液； (6)过滤液溶解于由氯仿-こ醇-甲醇-水按照4::3:32的体积比组成的溶剂体系中，泵入超声驻波液相制备色谱中，超声驻波功率0. 2 5. 0KW，频率500 1000kHz，流量50 500mL/min,紫外检测器波长280nm,连续纯化分离蟾蜍蛆虫蛋白质； (7)纯化蟾蜍蛆虫蛋白质用真空冷冻干燥机在真空度50 500Kpa，温度-30 30°C，时间6 24h条件下干燥至含水分5 8%成品。
全文摘要
蟾蜍蛆虫蛋白质在治疗宫颈癌药品中的应用，属于医药技术领域。针对现有治疗宫颈癌药品存在的问题，本发明将蟾蜍蛆虫蛋白质与适宜的药剂辅料结合使用，提供一种蟾蜍蛆虫蛋白质在治疗宫颈癌药品中的新用途。本发明针对宫颈癌特殊症状而设计，提取纯化的一种蟾蜍蛆虫蛋白质含量达96.5～98.1%，再用此纯度的蟾蜍蛆虫蛋白质制备成各种剂型的药品，该药品成分明确，一致性好，质量可控，对宫颈癌病症疗效好并且使用方便。
文档编号A61K47/28GK102657849SQ20121017914
公开日2012年9月12日 申请日期2012年6月2日 优先权日2012年6月2日
发明者徐华民, 徐萌, 赵艳琨, 赵荣华 申请人:哈尔滨工业大学