专利名称：一种抗肿瘤的植物提取组合物及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明属于生物制药技术领域，具体涉及一种抗肿瘤的植物提取组合物及其制备方法和应用。
背景技术：
肿瘤是危害人类健康最严重的一类常见病、多发病，最常见的治疗方法是手术、化疗和放疗，而化疗因毒副作用大，影响患者生活质量。近年来，中医药治疗肿瘤称为独特疗法，中医认为瘀血阻滞、痰湿凝聚、热毒内蕴、正气亏虚是导致肿瘤的病机，根据肿瘤的病因病机、发生发展规律，中药抗癌治疗主要有扶正固本、清热解毒、活血化瘀、软坚散结四个基本法则。中药治疗肿瘤的机制主要是对肿瘤细胞的直接抑制和杀灭作用、抑制肿瘤血管生成、抑制端粒酶活性、诱导细胞分化、调节细胞信号传导、抗微管作用、免疫增强作用、逆转 多药耐药作用等。中药应用历史悠久、价格低廉、药源广泛、疗效好、低毒性等优势，在肿瘤治疗中的前景也将越来越广。小百部为百合科天门冬属植物羊齿天门冬filicimus Buch. -Ham. exD. Don的块根，味甘、苦，性平，具有润肺止咳、杀虫止痒的功效，用于治疗肺痨久咳、痰中带血、疥癣瘙痒等症。现代药理研究表明，小百部具有较强的抗肿瘤活性，超过同属抗癌药用植物芦笋，是一种具有良好开发前景的天然药物。小百部的小百部苷甲、小百部苷B等6个皂苷类化合物对人肺腺癌A-549和乳腺癌MCF-7肿瘤细胞株均有不同程度的生长抑制活性。黄鹌菜又名野芥菜，为菊科黄鹌菜属植物黄鹌菜的全草，始载于《食物本草》，主要分布在我国、日本、朝鲜、蒙古及俄罗斯。味甘、微苦，性凉，具有清热解毒、利尿消肿、止痛的功效，用于治疗感冒、咽痛、乳腺炎、结膜炎、疮疖、尿路感染、白带、风湿性关节炎，是民间常用中草药，应用广泛。黄鹌菜中主要含有黄酮类化合物，近年来发现，黄鹌菜属植物的水提液和醇提液具有体外抗癌和抗病毒的效果，同时还具有清除羟基自由基和脂质自由基的作用。半枝莲为唇形科黄岑属植物半枝莲Scutellaria barbata D. Don (S. rivularisWall.的全草，又名狭叶韩信草、并头草、牙刷草等，最早见于《外科正宗》，味辛、苦，性寒，具有清热解毒、止血、消肿的功效，主治热毒痈肿，咽喉疼痛，肺痈肠痈，瘰疬，蛇毒咬伤，跌打损伤，各种出血，水肿，腹水及癌症。现代临床应用治疗癌症、肝炎、感染等。近年来的研究表明，半枝莲主要通过抗突变、抑制肿瘤细胞的增殖、诱导肿瘤细胞的凋亡、增强机体的免疫力、抗氧化以及截断肿瘤细胞的营养供给等而发挥抗肿瘤作用。半枝莲的主要生理活性物质为黄酮类化合物，半枝莲全草含多种黄酮，其中以木犀草素和芹菜素抗肿瘤活性最为明显，有广泛的应用前景。半枝莲水提液有增强癌症患者的免疫功能，与化疗同用有增效作用，并且可以防止因放疗引起的白细胞减少。黄苗是豆科植物蒙古黄I Astragalus membranaceus (Fisch. ) Bge. var.mongholicus (Bge. )Hsiao Astragalus membranaceus (Fisch. )Bge.的干燥根，具有补气升阳、益卫固表、利水消肿等功效，是扶正固本药，能提高化疗疗效，减轻毒副反应，促进机体对癌细胞的免疫作用，黄芪含有多种有效成分，如多糖、蛋白质、生物碱、氨基酸、苷类、黄酮类等。其中多糖的免疫活性尤为突出，黄芪多糖能促进巨噬细胞NO合成，并能显著增强小鼠腹腔巨噬细胞对黑色素瘤细胞的杀伤作用，可明显增强机体非特异性免疫功能，调节细胞免疫和体液免疫趋于正常。可见黄芪有明显的抗肿瘤作用，其机制可能是通过机体免疫功能实现的。目前，利用小百部提取物、黄鹌菜提取物、半枝莲提取物和黄芪提取物的中药组合物相互作用、配伍组方，制备用于抗肿瘤方面的药物，尚未见报道。
发明内容
为满足临床需要，扩大用药品种，更好地治疗癌症，提供一种抗肿瘤的植物提取组合物及其制备方法和应用。所述的一种抗肿瘤的植物提取组合物，其特征在于它由下列重量百分比的原料 药制成小百部提取物20-45%、黄鹌菜提取物15-35%、半枝莲提取物20-40%、黄芪提取物5-20%，所述的小百部提取物由下列方法制备得到取小百部粗粉，加0. 3-0. 5%淀粉酶或纤维素酶酶解2-3天，加6-10倍量55%乙醇温浸I天，过滤得提取液，浓缩所得浸膏加水分散，用水饱和正丁醇萃取3-4次，萃取液加丙酮沉淀，沉淀物干燥得小百部提取物；所述的黄鹌菜提取物由下列方法制备得到将黄鹌菜粉碎，加5-8倍量热水超声提取2-3次，每次提取1-2小时，合并提取液过AB-8大孔吸附树脂柱层析，用0-50%乙醇梯度洗脱，50%乙醇洗脱液加0. 3-0. 5%药用活性炭加热回流，趁热过滤，滤液浓缩，喷雾干燥得黄鹌菜提取物；所述的半枝莲提取物由下列方法制备得到将半枝莲药材粉碎，平均置于5个串联的提取装置中，加入15-20倍量75%食用乙醇作为提取溶媒采用连续逆流法提取2次，每次提取3小时，合并提取液，回收乙醇，离心取上清液在卷式膜分离设备中依次进行微滤、超滤，操作压力为0. 2MPa，所得透过液上DlOl大孔吸附树脂柱，先以水洗脱杂质，再用60%食用乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩、喷雾干燥得半枝莲提取物；所述的黄芪提取物由下列方法制备得到将黄芪粉末加5-10倍量水微波辅助提取2次，提取温度为50-55°C，过滤合并提取液，过HPD100大孔吸附树脂柱，收集下注液，先用水洗至无糖反应，再用60%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液浓缩至无醇，加等体积正丁醇萃取，萃取液浓缩、干燥得黄芪皂苷，将下注液和水洗液合并，浓缩，加乙醇沉淀，滤出沉淀，喷雾干燥得黄芪多糖，合并黄芪皂苷和黄芪多糖得黄芪提取物。所述的组合物，其中各原料药的用量为小百部提取物35%、黄鹌菜提取物20%、半枝莲提取物35%、黄芪提取物10%。所述的一种抗肿瘤的植物提取组合物的制备方法，其特征在于该药物组合物和药学上可接受的载体制备成任何一种常用的口服制剂，所述的口服制剂是胶囊剂、颗粒剂、口服液、丸剂或片剂。本发明植物提取组合物可采用现有制药领域中的常规方法生产，需要的时候可以添加各种药学上可接受的载体。所述的载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、黏合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂等。本发明根据中医药理论，主要通过清热解毒和增强人体自身的免疫能力从而达到抗肿瘤的效果，无毒副作用。其肿瘤抑制率为74. 26% (P < 0. 01)，抑制率与现有抗癌药物环磷酰胺相当，但毒性明显低于环磷酰胺。本发明采用的组方配伍合理，原料均来自天然植物，同时本发明提供的中药组合物的制备方法，可操作性强，尤其是根据各味中药有效成分化学性质涉及提取工艺，所得提取物有效成分含量高，具有药效高、临床用量少等优点，且工艺稳定，适合工业大生产。
具体实施例方式 以下通过实施例和实验例来进一步说明本发明。实施例I :
I、组方小百部提取物35kg、黄鹌菜提取物20kg、半枝莲提取物35kg、黄芪提取物IOkg02、制法
(1)小百部提取物取小百部粗粉，加0.5%淀粉酶酶解2天，加10倍量55%乙醇温浸I天，过滤得提取液，浓缩所得浸膏加水分散，用水饱和正丁醇萃取4次，萃取液加丙酮沉淀，沉淀物真空干燥得小百部提取物，备用；
(2)黄鹌菜提取物将黄鹌菜粉碎，加6倍量热水超声提取3次，每次提取I.5小时，合并提取液过AB-8大孔吸附树脂柱层析，用0-50%乙醇梯度洗脱，50%乙醇洗脱液加0. 5%药用活性炭加热回流，趁热过滤，滤液浓缩，喷雾干燥得黄鹌菜提取物，备用；
(3)半枝莲提取物将半枝莲药材粉碎，平均置于5个串联的提取装置中，加入15倍量75%食用乙醇作为提取溶媒采用连续逆流法提取2次，每次提取3小时，合并提取液，回收乙醇，离心取上清液在卷式膜分离设备中依次进行微滤、超滤，操作压力为0. 2MPa，所得透过液上DlOl大孔吸附树脂柱，先以水洗脱杂质，再用60%食用乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩、喷雾干燥得半枝莲提取物，备用；
(4)黄芪提取物将黄芪粉末加10倍量水微波辅助提取2次，提取温度为55°C，过滤合并提取液，过HPD100大孔吸附树脂柱，收集下注液，先用水洗至无糖反应，再用60%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液浓缩至无醇，加等体积正丁醇萃取，萃取液浓缩、干燥得黄芪皂苷，将下注液和水洗液合并，浓缩，加乙醇沉淀，滤出沉淀，喷雾干燥得黄芪多糖，合并黄芪皂苷和黄芪多糖得黄芪提取物，备用；
(5)合并步骤(I)得到的小百部提取物、步骤(2)得到的黄鹌菜提取物、步骤(3)得到的半枝莲提取物和步骤(4)得到的黄芪提取物，粉碎成细粉，加入硬脂酸镁，混合均匀，灌装胶囊。实施例2:
I、组方小百部提取物30kg、黄鹌菜提取物15kg、半枝莲提取物40kg、黄芪提取物15kg。2、制法
(1)小百部提取物取小百部粗粉，加0.5%纤维素酶酶解2天，加8倍量55%乙醇温浸I天，过滤得提取液，浓缩所得浸膏加水分散，用水饱和正丁醇萃取3次，萃取液加丙酮沉淀，沉淀物真空干燥得小百部提取物，备用；
(2)黄鹌菜提取物将黄鹌菜粉碎，加5倍量热水超声提取3次，每次提取I.0小时，合并提取液过AB-8大孔吸附树脂柱层析，用0-50%乙醇梯度洗脱，50%乙醇洗脱液加0. 3%药用活性炭加热回流，趁热过滤，滤液浓缩，喷雾干燥得黄鹌菜提取物，备用；
(3)半枝莲提取物将半枝莲药材粉碎，平均置于5个串联的提取装置中，加入18倍量75%食用乙醇作为提取溶媒采用连续逆流法提取2次，每次提取3小时，合并提取液，回收乙醇，离心取上清液在卷式膜分离设备中依次进行微滤、超滤，操作压力为0. 2MPa，所得透过液上DlOl大孔吸附树脂柱，先以水洗脱杂质，再用60%食用乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩、喷雾干燥得半枝莲提取物，备用；
(4)黄芪提取物将黄芪粉末加5倍量水微波辅助提取2次，提取温度为55°C，过滤合并提取液，过HPD100大孔吸附树脂柱，收集下注液，先用水洗至无糖反应，再用60%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液浓缩至无醇，加等体积正丁醇萃取，萃取液浓缩、干燥得黄芪皂苷，将下注液和水洗液合并，浓缩，加乙醇沉淀，滤出沉淀，喷雾干燥得黄芪多糖，合并黄芪皂苷和黄芪多糖得黄芪提取物，备用；
(5)合并步骤(I)得到的小百部提取物、步骤(2)得到的黄鹌菜提取物、步骤(3)得到 的半枝莲提取物和步骤(4)得到的黄芪提取物，粉碎成细粉，加入醇水溶解，过滤，按常规工艺灌装成口服液。实施例3:
I、组方小百部提取物45kg、黄鹌菜提取物25kg、半枝莲提取物25kg、黄芪提取物20kg。2、制法
(1)小百部提取物取小百部粗粉，加0.4%纤维素酶酶解3天，加6倍量55%乙醇温浸I天，过滤得提取液，浓缩所得浸膏加水分散，用水饱和正丁醇萃取4次，萃取液加丙酮沉淀，沉淀物真空干燥得小百部提取物，备用；
(2)黄鹌菜提取物将黄鹌菜粉碎，加8倍量热水超声提取2次，每次提取2.0小时，合并提取液过AB-8大孔吸附树脂柱层析，用0-50%乙醇梯度洗脱，50%乙醇洗脱液加0. 4%药用活性炭加热回流，趁热过滤，滤液浓缩，喷雾干燥得黄鹌菜提取物，备用；
(3)半枝莲提取物将半枝莲药材粉碎，平均置于5个串联的提取装置中，加入20倍量75%食用乙醇作为提取溶媒采用连续逆流法提取2次，每次提取3小时，合并提取液，回收乙醇，离心取上清液在卷式膜分离设备中依次进行微滤、超滤，操作压力为0. 2MPa，所得透过液上DlOl大孔吸附树脂柱，先以水洗脱杂质，再用60%食用乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩、喷雾干燥得半枝莲提取物，备用；
(4)黄芪提取物将黄芪粉末加8倍量水微波辅助提取2次，提取温度为55°C，过滤合并提取液，过HPD100大孔吸附树脂柱，收集下注液，先用水洗至无糖反应，再用60%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液浓缩至无醇，加等体积正丁醇萃取，萃取液浓缩、干燥得黄芪皂苷，将下注液和水洗液合并，浓缩，加乙醇沉淀，滤出沉淀，喷雾干燥得黄芪多糖，合并黄芪皂苷和黄芪多糖得黄芪提取物，备用；
(5)合并步骤(I)得到的小百部提取物、步骤(2)得到的黄鹌菜提取物、步骤(3)得到的半枝莲提取物和步骤(4)得到的黄芪提取物，粉碎成细粉，加入适量微晶纤维素、羧甲基淀粉钠，混合均匀，湿法制粒，干燥，加滑石粉、硬脂酸镁，按常规片剂制备工艺制成片剂。实施例4:
I、组方小百部提取物40kg、黄鹌菜提取物35kg、半枝莲提取物20kg、黄芪提取物5kg。
2、制法
(1)小百部提取物取小百部粗粉，加0.3%淀粉酶酶解3天，加8倍量55%乙醇温浸I天，过滤得提取液，浓缩所得浸膏加水分散，用水饱和正丁醇萃取3次，萃取液加丙酮沉淀，沉淀物真空干燥得小百部提取物，备用；
(2)黄鹌菜提取物将黄鹌菜粉碎，加7倍量热水超声提取2次，每次提取I.0小时，合并提取液过AB-8大孔吸附树脂柱层析，用0-50%乙醇梯度洗脱，50%乙醇洗脱液加0. 3%药用活性炭加热回流，趁热过滤，滤液浓缩，喷雾干燥得黄鹌菜提取物，备用；
(3)半枝莲提取物将半枝莲药材粉碎，平均置于5个串联的提取装置中，加入16倍量75%食用乙醇作为提取溶媒采用连续逆流法提取2次，每次提取3小时，合并提取液，回收乙醇，离心取上清液在卷式膜分离设备中依次进行微滤、超滤，操作压力为0. 2MPa，所得透过液上DlOl大孔吸附树脂柱，先以水洗脱杂质，再用60%食用乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩、喷雾干燥得半枝莲提取物，备用； (4)黄芪提取物将黄芪粉末加6倍量水微波辅助提取2次，提取温度为55°C，过滤合并提取液，过HPD100大孔吸附树脂柱，收集下注液，先用水洗至无糖反应，再用60%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液浓缩至无醇，加等体积正丁醇萃取，萃取液浓缩、干燥得黄芪皂苷，将下注液和水洗液合并，浓缩，加乙醇沉淀，滤出沉淀，喷雾干燥得黄芪多糖，合并黄芪皂苷和黄芪多糖得黄芪提取物，备用；
(5)合并步骤(I)得到的小百部提取物、步骤(2)得到的黄鹌菜提取物、步骤(3)得到的半枝莲提取物和步骤(4)得到的黄芪提取物，粉碎成细粉，加入适量微晶纤维素、羧甲基淀粉钠，混合均匀，湿法制粒，干燥，加硬脂酸镁，按常规颗粒剂制备工艺制成颗粒剂。实施例5
I、组方小百部提取物20kg、黄鹌菜提取物30kg、半枝莲提取物30kg、黄芪提取物20kg。2、植物提取组合物制剂的制备方法同实施例I。实施例6
I、组方小百部提取物40kg、黄鹌菜提取物25kg、半枝莲提取物25kg、黄芪提取物IOkg02、植物提取组合物制剂的制备方法同实施例I。实施例7 :本发明植物提取组合物急性毒性实验
1、材料
药物实施例I植物提取组合物，自制。动物昆明种小鼠12只，雌雄各半，体重20_30g、
2、方法
将小鼠随机分为3组，禁食12小时后分别灌胃给予0. 2g/ml本发明植物提取组合物胶囊制剂10、20、40ml/kg体重，给药剂量为2、4、8g/kg，连续观察2天，未见明显毒性反应。3、结论
本实验中未出现死亡，推测本发明植物提取组合物胶囊剂毒性较低，故进行最大耐受
量试验。实施例8 :本发明植物提取组合物最大耐受试验1、材料
药物实施例I植物提取组合物，自制。动物昆明种小鼠24只，雌雄各半，体重20_30g、
2、方法
取健康昆明种小鼠，禁食12小时，按10g/kg给药剂量和40ml/kg的给药体积灌胃给予本发明植物提取组合物胶囊制剂。灌胃后密切观察小鼠的毒性反应和死亡情况，4小时后，改为每天观察一次，连续观察14天。灌胃给予本发明植物提取组合物胶囊制剂后，4小时内未见异常变化，14天内，小鼠毛色、饮食、体重、行为活动都无异常变化。观察结束后，脱颈处死小鼠解剖，观察心、肝、肺、肾等组织，均未见异常变化。
3、结论小鼠灌胃给予本发明植物组合物胶囊制剂的最大耐受量为10g/kg，根据动物间等效剂量换算(即小鼠与人)，小鼠标准体重是20g，承认标准体重是60kg，换算结果得人临床用药剂量是0. 81mg/kg0实施例9 :本发明植物提取组合物抗肿瘤药效学研究一对S18tl实体瘤生长的影响
I材料与方法
I.I材料
药物实施例I植物提取组合物，自制；环磷酰胺，0. 2g/瓶，购自江苏恒瑞医药股份有限公司。动物昆明种小鼠，雌性，体重18±2g，由南京中医药大学提供。细胞株SarComa 180腹水型瘤株(S180)，由中国科学院上海药物研究所提供。2、方法
取50只小鼠，均皮下接种S18tl瘤液，次日随机分成5组，每组10只，分别为空白对照组、阳性对照组、本发明组合物低剂量组、本发明组合物中剂量组、本发明组合物高剂量组，称体重。腹腔注射给药，每次依次，连续10天，停药次日称体重，初四动物，剥离皮下瘤块，称瘤重，并计算抑瘤率。3、结果
本发明植物提取组合物对小鼠S18tl皮下荷瘤有明显的抑制作用，抑瘤率为68. 32-74. 26%,结果见表 I。抑瘤率(％) = (I-治疗组平均瘤重/空白对照组平均瘤重)X%
表I 本发明植物提取组合物对S18tl皮下荷瘤小鼠的抑瘤作用(n=10，X 土S) ____
组别I给药剂量(mg/kg)I瘤重(g)I抑瘤率(％)
空白对照组—_2. 02±0. 21—
阳性对照组30_0. 85±0. 1757.92
本发明组合物低剂量组1000_0. 64±0. 1468.32**
本发明组合物中剂量组20000. 58±0. 2371.29**
本发明组合物高剂量组|4000Id. 52±0. 25卜4. 26**
注与阳性对照组相比，*P < 0. 05，#P < 0. 01。
权利要求
1.一种抗肿瘤的植物提取组合物及其制备方法和应用，其特征在于它由下列重量百分比的原料药制成小百部提取物20-45%、黄鹌菜提取物15-35%、半枝莲提取物20_40%、黄芪提取物5-20%，所述的小百部提取物由下列方法制备得到取小百部粗粉，加O. 3-0. 5%淀粉酶或纤维素酶酶解2-3天，加6-10倍量55%乙醇温浸I天，过滤得提取液，浓缩所得浸膏加水分散，用水饱和正丁醇萃取3-4次，萃取液加丙酮沉淀，沉淀物干燥得小百部提取物；所述的黄鹌菜提取物由下列方法制备得到将黄鹌菜粉碎，加5-8倍量热水超声提取2-3次，每次提取1-2小时，合并提取液过AB-8大孔吸附树脂柱层析，用0-50%乙醇梯度洗脱，50%乙醇洗脱液加O. 3-0. 5%药用活性炭加热回流，趁热过滤，滤液浓缩，喷雾干燥得黄鹌菜提取物；所述的半枝莲提取物由下列方法制备得到将半枝莲药材粉碎，平均置于5个串联的提取装置中，加入15-20倍量75%食用乙醇作为提取溶媒采用连续逆流法提取2次，每次提取3小时，合并提取液，回收乙醇，离心取上清液在卷式膜分离设备中依次进行微滤、超滤，操作压力为O. 2MPa，所得透过液上DlOl大孔吸附树脂柱，先以水洗脱杂质，再用60%食用乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩、喷雾干燥得半枝莲提取物；所述的黄芪提取物由下列方法制备得到将黄芪粉末加5-10倍量水微波辅助提取2次，提取温度为50-55°C，过滤合并提取液，过HPD100大孔吸附树脂柱，收集下注液，先用水洗至无糖反应，再用60%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液浓缩至无醇，加等体积正丁醇萃取，萃取液浓缩、干燥得黄芪皂苷，将下注液和水洗液合并，浓缩，加乙醇沉淀，滤出沉淀，喷雾干燥得黄芪多糖，合并黄芪皂苷和黄芪多糖得黄芪提取物。
2.如权利要求I所述的组合物，其中各原料药的用量为小百部提取物35%、黄鹌菜提取物20%、半枝莲提取物35%、黄芪提取物10%。
3.如权利要求1、2所述的组合物，其特征是该药物组合物和药学上可接受的载体制备成任何一种常用的口服制剂，所述的口服制剂是胶囊剂、颗粒剂、口服液、丸剂或片剂。
全文摘要
本发明涉及一种抗肿瘤的植物提取组合物及其制备方法和应用，该植物提取物组合物由重量百分比20-45%小百部提取物、15-35%黄鹌菜提取物、20-40%半枝莲提取物和5-20%黄芪提取物制成。经药理实验表明，本发明提供的植物提取组合物具有的功能，主治。另外，本发明提供的植物提取物组合物制剂的制备方法，质量可控、有效成分含量高、适合工业化生产。
文档编号A61K36/8965GK102824526SQ20121037332
公开日2012年12月19日 申请日期2012年9月27日 优先权日2012年9月27日
发明者苏刘花 申请人:南京泽朗农业发展有限公司