蒿甲醚在制备治疗白血病的药物中的用途
【专利摘要】本发明涉及医药领域，公开了蒿甲醚在制备治疗白血病的药物中的用途。
【专利说明】蒿甲醚在制备治疗白血病的药物中的用途
【技术领域】
[0001]本发明涉及医药领域，特别涉及蒿甲醚在制备治疗白血病的药物中的用途。
【背景技术】
[0002]白血病是一类造血干细胞异常的恶性疾病。其克隆中的白血病细胞失去进一步分化成熟的能力而停滞在细胞发育的不同阶段，在骨髓和其他造血组织中白血病细胞大量增生积聚并浸润其他器官和组织，同时使正常造血受抑制，临床表现为贫血、出血、感染及各器官浸润症状。该病居年轻人恶性疾病中的首位，病因至今仍不完全清楚，病毒可能是主要的致病因子，但还有许多因素如放射、化学毒物或药物、遗传素质等可能是致病的辅因子。根据增生细胞类型，可分为粒细胞性、淋巴细胞性和单核细胞性三类。
[0003]近年研究表明，抗疟疾药物青蒿素及其衍生物具有显著的抗肿瘤作用，其药理学作用研究受到广泛关注。蒿甲醚为青蒿素的主要衍生物之一，抗疟疾作用优于青蒿素。近年来越来越多的实验证明:青蒿素类药物有更广泛的药理作用，尤其重要的是它不仅可以选择性抑制和/或杀灭多种肿瘤细胞，而且不良反应极少，甚至不产生耐药性。青蒿素类药物的抗肿瘤作用已经得到多方面的证实，其主要的作用机制有以下几个方面:
[0004]1、铁离子介导的细胞损伤:恶性肿瘤细胞中Fe含量要比正常细胞大得多，青蒿素类药物可以通过铁离子介导形成内过氧化桥，并产生活性氧离子(ROS)和以碳为核心的自由基，后者使细胞发生巨大的分子损伤和细胞死亡；
[0005]2、细胞周期阻滞:青蒿琥酯可以使Kaposi’s肉瘤细胞周期时间明显缩短，二氢青蒿素可以使人乳腺癌MCF-7细胞阻滞在G0+G1期；
[0006]3、诱导细胞凋亡: 青蒿琥酯可以诱导Kaposi’s肉瘤细胞发生凋亡，并呈现出剂量依赖性，而并不能诱导正常细胞发生凋亡。青蒿素可以诱导人红白血病K562细胞跨膜电位下降而发生凋亡；
[0007]4、抗血管生成作用:青蒿素类药物可以通过抑制VEGF和KDR / flk_l的表达从而阻止肿瘤新生血管的形成；
[0008]5、青蒿素类药物可以调节肿瘤相关基因的表达，从而实现抗肿瘤的活性；
[0009]6、其它，如青蒿琥酯还具有对抗多药耐药的能力；青蒿素可以抑制星形细胞瘤T67细胞中的核因子NF-K B的合成。不仅如此，蒿甲醚可以引起嗜铬细胞瘤(PC12)细胞的线粒体损伤，线粒体肿胀、嵴断裂、减少、消失，并抑制线粒体呼吸链复合酶I和IV的活性，从而导致细胞死亡。
【发明内容】
[0010]本发明的目的是提供蒿甲醚在制备治疗白血病的药物中的用途。
[0011 ] 作为优选，所述药物为蒿甲醚的注射液或冻干粉针剂。
[0012]本发明中所述蒿甲醚的注射液或冻干粉针剂由蒿甲醚和水溶性环糊精衍生物组成，蒿甲醚和水溶性环糊精衍生物重量比为1:30~70。所述的水溶性环糊精衍生物包括各种取代度的α环糊精衍生物、β环糊精衍生物、Y环糊精衍生物等中的一种或几种。其中所述的-β环糊精衍生物包括甲基-β -环糊精、羟丙基-β -环糊精、硫醚基-β -环糊精，磺丁基醚-β -环糊精中的一种或几种联用。
[0013]制备方法如下:采用0°C~10°C的低温粉碎机，对蒿甲醚进行粉碎。粉碎后蒿甲醚加入到50°C _90°C的水溶性环糊精衍生物水溶液中，搅拌，使溶解，继而按注射液常规工艺处理或再冻干后即得成品。
[0014]本发明蒿甲醚的注射液或冻干粉针剂的制备采用低温((Tc~10°C )微粉化粉碎技术，避免常规粉碎技术由于局部温度过高，导致蒿甲醚降解。把蒿甲醚分成不同的粒径组进行试验，结果显示相同温度下，随着粒径的增大，青蒿素类衍生物的溶解速度变慢。粒径大于315gm以上时，配药温度为70°C~90°C。所述的蒿甲醚微粉药物粒径在0.5 μ m_0 μ m范围内，最佳的粒径为1.0 μ m~10 μ m。配药时温度的增加对蒿甲醚溶解有利，最优的配药温度为5(TC~60°C，可以减少药物的分解、氧化等。
[0015]本申请发明人通过大量实验证实，蒿甲醚粉针剂高剂量100mg/kg每周给药5次，连续给药3周共15次，对K562裸鼠移植瘤模型有及其显著的生长抑制作用，给药3周后抑制率可以达到68%~80% (Ρ〈0.01);中剂量60mg/kg连续给药3周，分别给药15和21次，抑制率可达到31%和56% (P>0.05和P〈0.01);低剂量40mg/kg连续给药3周，给药15次未见明显抑制作用，给药21次，抑制率55% (P〈0.01)。且蒿甲醚的剂量为100mg/kg、60mg/kg和40mg/kg三个剂量,每周给药5天,休息两天,连续给药3周,共给药15次,未见动物因药物累积毒性发生死亡。
[0016]以上结果表明，蒿甲醚的注射液或冻干粉针剂在100mg/kg和60mg/kg两个剂量下对K562裸鼠移植瘤模型有明显的生长抑制作用，抑制率可以达到60-80% (Ρ〈0.01)。表明蒿甲醚对白血病有明显的治疗作用，抑制率接近环磷酰胺阳性对照组，是一种很有潜力的新的抗肿瘤药物。·【专利附图】
【附图说明】
[0017]图1为预试验给药后第4周各组荷瘤动物肿瘤大小；
[0018]图2为预试验给药后第4周各组动物肿瘤大小；
[0019]图3为正式试验一给药后第4周各组荷瘤动物肿瘤大小；
[0020]图4为正式试验一给药后第4周各组动物肿瘤大小；
[0021]图5为正式试验二给药后第4周各组荷瘤动物肿瘤大小；
[0022]图6为正式试验二给药后第4周各组动物肿瘤大小。
【具体实施方式】
[0023]本发明公开了蒿甲醚在制备治疗白血病的药物中的用途，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
【发明内容】
、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
[0024]为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合具体实施例对本发明作进一步的详细说明。
[0025]实施例:蒿甲醚对白血病的治疗作用
[0026]发明人观察了不同剂量蒿甲醚对K562裸鼠移植瘤的治疗作用。结果表明蒿甲醚100mg/kg与60mg/kg剂量给药15次,可以显著抑制荷瘤小鼠肿瘤生长；40mg/kg剂量给药21次，也对肿瘤生长产生明显的抑制作用。试验结果表明蒿甲醚可以抑制人白血病K562裸鼠移植瘤的生长，具有明显的抗肿瘤作用。
[0027]1.研究目的:在裸鼠体内建立K562裸鼠移植瘤模型，观察蒿甲醚在体内对裸鼠移植瘤模型的生长抑制作用。
[0028]2.试验材料:
[0029]2.1受试药物:蒿甲醚粉针剂，批号:20090903。制备方法:采用(TC~10°C的低温粉碎机，对蒿甲醚进行粉碎。粉碎后蒿甲醚加入到50°C -90°C的水溶性环糊精衍生物水溶液中，搅拌，使溶解，继而按注射液常规工艺处理或再冻干后即得成品；其中蒿甲醚和水溶性环糊精衍生物重量比为1: 30~70。
[0030]2.2 对照品:
[0031 ] 2.2.1阴性对照:以20%的赋形剂水溶液作为阴性对照。
[0032]2.2.2阳性对照:环磷酰胺(上海联华制药厂)，批号:10022321。
[0033]2.3溶媒:20%的赋形剂水溶液。
[0034]2.4K562细胞:原代K562细胞来源于红白血病患者骨髓，血液学研究所从国外引进，由病理细胞库保存、传代；RPMI1640培养液(含10%胎牛血清)培养。
[0035]2.5试验设备:
[0036]2.5.1细胞培养常规设备；
[0037]2.5.2铯源照射装置:加拿大N0RD10N公司；
[0038]2.5.3111级(SPF级)实验动物室。
[0039]2.6实验动物:Balb/c裸鼠，年龄4飞周龄，体重:17~20g，性别:雌雄各半。中国医学科学院实验动物研究所，实验动物质量合格证号=SCXK (京)2005-0013。
[0040]2.7环境条件及饲养管理:裸鼠实验在医科院血研所实验动物室SPF条件下进行。实验动物设施许可证号:SYXK (津)2009-0002。饲料:鼠用饲料经高压灭菌，由北京维通利华科技有限公司制造，执行标准:GB14924.2-2001 ;批号:20090110。饮水:灭菌反渗透纯化水。垫料:杉木和柏木混合小刨花过筛除粉尘，经高压灭菌`后使用。饲养:雌雄分笼饲养，每笼5只，据动物耗食情况投放饲料，自由饮水。笼具清洁后用高压灭菌进行消毒，每周2次更换笼具和垫料；实验室每周用过氧乙酸和新洁尔灭交替消毒2次。
[0041]3.试验方法
[0042]3.1 预试验:
[0043]3.1.1原代K562细胞皮下接种经3.0Gy全身照射后的Balb/c裸鼠，接种后4周左右，取生长的瘤块再次移植给正常裸鼠，反复2~3代，建立高致瘤性的K562细胞株。
[0044]3.1.2裸鼠经3.0Gy全身照射后，皮下接种K562细胞。接种I周后，将肉眼可见肿瘤生长的裸鼠分为以下4组，每组6只裸鼠。每周给药7次，连续给药3周，共给药21次。
[0045]模型对照组:腹腔注射20%的赋形剂溶液0.2ml/只。
[0046]高剂量组:腹腔注射蒿甲醚150mg/kg。[0047]中剂量组:腹腔注射蒿甲醚100mg/kg。
[0048]低剂量组:腹腔注射蒿甲醚50mg/kg。
[0049]3.2正式试验一
[0050]裸鼠经3.0Gy全身照射后，皮下接种K562细胞。接种I周后，将肉眼可见肿瘤生长的裸鼠分为以下5组，每组6只裸鼠。每周给药5次，连续给药3周，共给药15次。
[0051 ]模型对照组:腹腔注射20%的赋形剂溶液0.2ml/只。
[0052]阳性对照组:腹腔注射环磷酰胺10mg/kg。
[0053]高剂量组:腹腔注射蒿甲醚100mg/kg。
[0054]中剂量组:腹腔注射蒿甲醚60mg/kg。
[0055]低剂量组:腹腔注射蒿甲醚40mg/kg。
[0056]3.3正式试验二
[0057]裸鼠经3.0Gy全身照射后，皮下接种K562细胞。接种I周后，将肉眼可见肿瘤生长的裸鼠分为以下5组，每组6只裸鼠。
[0058]模型对照组:腹腔注射20%的赋形剂溶液0.2ml/只。每周给药7次，连续给药3周，共给药21次。
[0059]阳性对照组:腹腔注射环磷酰胺10mg/kg。每周给药7次,连续给药3周，共给药21次。
[0060]高剂量组:腹腔注射蒿甲醚100mg/kg。每周给药5次,连续给药3周，共给药15次。
[0061]中剂量组:腹腔注射蒿甲醚60mg/kg。每周给药7次,连续给药3周,共给药21次。
[0062]低剂量组:腹腔注射蒿甲醚40mg/kg。每周给药7次,连续给药3周,共给药21次。
[0063]4.试验结果
[0064]4.1预实验结果见表1-3及图1-2
[0065]表1给药后不同时 间各组动物肿瘤体积的动态观察(单位:_3)
[0066]
【权利要求】
1.蒿甲醚在制备治疗白血病的药物中的用途。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述药物为蒿甲醚的注射液或冻干粉针剂。
3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述蒿甲醚的注射液或冻干粉针剂由蒿甲醚和水溶性环糊精衍生物组成，蒿甲醚和水溶性环糊精衍生物重量比为1:30~70。
4.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述的水溶性环糊精衍生物包括各种取代度的α环糊精衍生物、β环糊精衍生物、Y环糊精衍生物等中的一种或几种。
5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于，其中所述β环糊精衍生物包括甲基-β -环糊精、羟丙基-β -环糊精、硫醚基-β -环糊精，磺丁基醚-β -环糊精中的一种或几种联用。
6.根据权利要求3-5任一项所述的用途，其特征在于，所述蒿甲醚的注射液或冻干粉针剂的制备方法为:采用0°c~10°C的低温粉碎机，对蒿甲醚进行粉碎。粉碎后蒿甲醚加入到50°C -90°c的水溶性环糊精衍生物水溶液中，搅拌，使溶解，继而按注射液常规工艺处理或再冻干后即得 成品。
【文档编号】A61K31/357GK103845322SQ201210499332
【公开日】2014年6月11日 申请日期:2012年11月29日 优先权日:2012年11月29日
【发明者】王敏, 赵钧铭, 田征, 陈云建, 刘一丹, 杨兆祥, 杨旭娟, 朱泽 申请人:昆明制药集团股份有限公司