专利名称：少棘蜈蚣多肽毒素kappa-SLPTX-Ssm4a及其基因和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种少棘蜈蚣多肽毒素kappa-SLPTX-Ssm4a及其基因和应用，属于生物医学技术领域。
背景技术：
钾通道是细胞膜上的一种重要的跨膜蛋白，具有非常重要的生理意义。钾通道广泛的分布于骨骼肌、神经、心脏、血管、腺体等细胞。是目前发现种类最多，作用最为复杂的一种离子通道。钾离子种类繁多分布也十分广泛，其中钾离子通道亚型Kvl. 3主要分布于T细胞的表面，是效应T细胞持续活化的关键。T细胞是由胸腺内的淋巴干细胞分化而成，是淋巴细胞中数量最多，功能最复杂的一类细胞。T细胞是淋巴细胞的主要组分，它具有多种生物学功能，如直接杀伤靶细胞，辅助 或抑制B细胞产生抗体，对特异性抗原和促有丝分裂原的应答反应以及产生细胞因子，抵御身体中疾病感染以及肿瘤形成。银屑病俗称“牛皮癣”是一种与T细胞密切相关的自身免疫性疾病，改善自身免疫力是治疗银屑病的一种重要方法。Kvl. 3作为T细胞持续性活化的一个重要因素，在T细胞的生理功能上扮演重要作用，目前已经证实Kvl. 3与许多疾病密切相关，Kvl. 3也已经成为药物开发的热门靶点。Kvl. 3介导的自身免疫疾病例如类风湿性关节炎、银屑病、肝炎、多发性硬化、肥胖症、移植排斥和炎症性神经病密切相关。Kvl. 3的抑制剂中类黄酮可以用来治疗红斑狼疮、相关风湿疾病；Shk毒素类似物用于预防肥胖和II型糖尿病。蜈蚣是一种传统中药，性温，味辛，有毒。具有息风镇痉、攻毒散结、通络止痛之功能。蜈蚣毒腺中含有丰富的多肽成分，目前已经证实了这些多肽成分多为神经毒素。多肽能够选择性的抑制钠通道，钾通道或是钙离子通道，因此蜈蚣毒液中的成分具有广泛的应用前途，如开发成为镇痛药物、及治疗自身免疫疾病药物。
发明内容
本发明的目的在于提供一种少棘蜈蚁多肽毒素kappa-SLPTX_Ssm4a及其基因和应用。本发明提供的少棘蜈蚣多肽毒素kappa-SLPTX_Ssm4a，是从少棘蜈蚣粗毒中通过分子筛和反向高效液相色谱分离纯化得到，其氨基酸序列(SEQ ID N0:1)为TDDESSNKCAKTKRRENVCRVCGNRSGNDEYYSECCESDYRYERCLDLLR N,该多肽包括51个氨基酸残基分子量为6042. 57Da，等电点为5. 3，分子内含有三对二硫键其配对方式为1_5，2-4, 3_6。少棘蜈蚣多肽毒素kappa-SLPTX-Ssm4a的基因克隆包括少棘蜈蚣毒腺总RNA提取，mRNA纯化，mRNA反转录及cDNA文库构建，设计引物，利用PCR方法筛选少棘蜈蚣钙离子通道激活剂多肽基因。扩增引物长度为17个核苷酸，其序列为5 ’ -GCGAAAAATGGAAATCT-3 ’，PCR另一扩增引物为CL0NTECH公司SMART TM cDNA Library Construction Kit 中的 3’ PCR Primer 引物，其序列为 5 'ATTCTACAGGCCGAGGCGGCCGACATG 3 '。所获阳性单克隆进行基因核苷酸序列测定。基因测序结果表明编码少棘蜈蚣钙离子通道激活剂的基因(SEQ ID N0:2)由563个核苷酸组成，自5’端至3’端序列基因序列包括了信号肽、前体肽和成熟肽，其中下划线部分为成熟肽。
权利要求
1.少棘蜈蚣多肽毒素kappa-SLPTX-Ssm4a，其特征在于由SEQID NO:1所示的氨基酸序列组成。
2.编码少棘蜈蚣多肽毒素kappa-SLPTX-Ssm4a的基因，其特征在于由SEQID NO:1所示的核苷酸序列组成。
3.权利要求1所示的多肽毒素kappa-SLPTX-Ssm4a是一种T细胞上钾通道Kvl.3的专一性抑制剂，在制备自身性免疫疾病药物中的应用。
4.权利要求3中的自身性免疫疾病包括类风湿性关节炎、银屑病、肝炎、多发性硬化、肥胖症、移植排斥以及炎症性神经病。
全文摘要
本发明涉及一种少棘蜈蚣多肽毒素kappa-SLPTX-Ssm4a及其基因和应用，属于生物医学技术领域。少棘蜈蚣多肽毒素kappa-SLPTX-Ssm4a，由SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列组成。编码少棘蜈蚣多肽毒素kappa-SLPTX-Ssm4a的基因，由SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列组成。少棘蜈蚣多肽毒素kappa-SLPTX-Ssm4a选择性的抑制T细胞上的钾离子通道亚型Kv1.3，是一种专一性的钾通道抑制剂。少棘蜈蚣多肽毒素kappa-SLPTX-Ssm4a在制备治疗或是预防与T细胞相关的自身性免疫疾病的药物中的应用。
文档编号A61P17/06GK102993289SQ201210509418
公开日2013年3月27日 申请日期2012年12月4日 优先权日2012年12月4日
发明者赖刃, 容明强, 杨仕隆, 肖瑶, 康迪 申请人:中国科学院昆明动物研究所