用于预防以及／或者改善癌症引起的非可逆性的代谢紊乱的组合物的制作方法
【专利摘要】[问题]提供一种组合物，用于预防及其／或者改善癌症引起的非可逆性的代谢紊乱。[方案]本发明人潜心探讨。结果发现以乳清蛋白水解物、具备脂质代谢改善作用的卵磷脂、富含油酸的油脂、以及具备节约胰岛素效果的帕拉金糖为基本成分的组合物，能够预防以及／或者改善癌症引起的非可逆性的代谢紊乱。从而完成了本发明。具体地，发现在使用了移植了肿瘤细胞的大鼠in?vivo（体内）试验中，本发明的组合物，既不阻碍抗癌药物的作用，同时能够预防以及／或者改善肌肉含量降低等癌症引起的非可逆性的代谢紊乱的症状。
【专利说明】用于预防以及/或者改善癌症引起的非可逆性的代谢紊乱
的组合物
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种用于预防以及/或者改善癌症引起的非可逆性的代谢紊乱的组合物。
【背景技术】
[0002]癌症占日本人死亡原因的第一位，2006年度，因癌症死亡的人数约33万人。当今，每2-3人中就有I人，存在在一生中被诊断为癌症的风险(患病风险)，仅2002年就有约59万人的新增癌症患者。
[0003]多数癌症患者，容易引起营养不良，可以确定癌症患者中的60%_80%由于营养不良导致体重减轻。已知原因包括，由于癌症病变导致的口头摄取不良、精神神经上的变化、外科手术、化疗、放疗、不恰当的营养管理，非可逆性的代谢紊乱等(非专利文献I)。一旦陷入非可逆性的代谢紊乱的状态，随着癌症的发展，会导致代谢恶化。为此，即使摄取充分的热量，蛋白质等也会进一步衰退，产生骨骼肌肉及内脏中的蛋白质减少和浮肿等症状。其结果就是，体重减轻、控制不住的全身浮肿、腹水、胸水等(非专利文献2)。近年来，产生肿瘤的蛋白质分解诱导因子(PIF)，包围肿瘤组织的吞噬细胞及外周血单核细胞等分泌的各种炎症细胞，被认为是引起上述反应的主要原因。对于因癌症引起的体重减轻等症状，必须改善代谢，但是，以往的营养管理难以改善和维持体重。因此，近年来，因癌症引起的代谢紊乱、营养不良等状态的患者的营养 管理受到重视。
[0004]另外，给癌症患者服用抗癌药物，施以化疗和放疗，不但损害癌细胞，正常细胞也受到损害。特别是对于细胞生长周期快的细胞(消化器官黏膜等)的影响很大。由于消化器官黏膜的损伤、抗癌药物引起 的消化器官运动(肠蠕动)的异常和对化学接受体的刺激传达给大脑等原因，癌症患者会产生恶心、呕吐、食欲不振等副作用(非专利文献3)。癌症患者一旦陷入癌症引起的代谢紊乱、营养不良的状态，可能发生难以忍受这些副作用，不能按预定的方案完成治疗的情况。因此，为使治疗奏效，进行营养管理，维持营养状态受到重视。
[0005]作为癌症引起的非可逆性的代谢紊乱的改善方法，以往，已知(通常采用)的甾体类(甾族)抗炎药和孕酮等激素类药物，不能达到有意识的增加体重和防止肌肉含量降低的目的。并且，知道只是适应能量消耗而强制摄取热量的方法，不能改善癌症引起的非可逆性的代谢紊乱。
[0006]已知对于癌症患者的营养管理有效的流食和营养辅食，已知的包括:枝链氨基酸、辅酶Q-10、L-肉毒碱、柠檬酸以及含有锌的组合物(专利文献I)、酪蛋白)、乳清蛋白、TGF-β以及含有游离谷胺酰胺的组合物(专利文献2)、十二碳五烯酸以及含有植物化学的组合物(专利文献3)、包含占氨基酸总重量至少约10-35%的重量的亮氨酸的组合物(专利文献4)、含有乳蛋白、大豆蛋白和脂质的的组合物，其中乳蛋白/大豆蛋白的比例为1/2-1/4 (专利文献5)。
[0007]【现有技术文献】[0008]【专利文献】
[0009]【专利文献I】特开2010-83850号公报
[0010]【专利文献2】特开2007-508343号公报
[0011]【专利文献3】特开2010-534697号公报
[0012]【专利文献4】特开2006-503105号公报
[0013]【专利文献5】特开2001-288107号公报
[0014]【非专利文献】
[0015]【非专利文献I】浅桐公男等、〈癌症的代谢异常和营养障碍〉、NutritionCare>2(4)、pp350-353 (2009)
[0016]【非专利文献2】东口高志等、〈晚期末期癌症患者的营养管理〉、NutritionCare>2(4)、pp394-401(2009)
[0017]【非专利文献3】稻野利美等、〈癌症治疗的副作用和营养管理〉、NutritionCare、2⑷、
【发明内容】
[0018]本发明的目的是提供一种用于预防及其/或者改善癌症引起的非可逆性的代谢紊乱的组合物。
[0019]本发明人潜心探讨的结果`，发现以乳清蛋白水解物、具备脂质代谢改善作用的卵磷脂、富含油酸的油脂、以及具备节约胰岛素效果的帕拉金糖为基本成分的组合物能够预防以及/或者改善癌症引起的非可逆性的代谢紊乱，从而完成了本发明。
[0020]具体地，发现在使用了移植了肿瘤细胞的大鼠in vivo (体内)试验中，本发明的组合物，既不阻碍抗癌药物的作用，同时能够预防以及/或者改善体重减轻和肌肉含量降低等因癌症引起的非可逆性的代谢紊乱的症状。从上述结果可以看出，本发明的组合物，对癌症患者的营养管理及代谢管理是有效的。
[0021]SP，本发明包括:
[0022][I]用于预防以及/或者改善癌症引起的非可逆性的代谢紊乱的组合物，包括:作为蛋白质成分的乳蛋白的水解物及发酵乳蛋白；作为脂质成分的富含油酸的油脂及乳磷脂以及/或者大豆卵磷脂、以及作为碳水化合物成分的帕拉金糖；
[0023][2]根据[I]记载的用于预防以及/或者改善癌症引起的非可逆性的代谢紊乱的组合物，其中所述乳蛋白选自酪蛋白、乳蛋白浓缩物(MPC )、乳清蛋白浓缩物(WPC )、乳清蛋白分离物(WPI)、α-乳清蛋白、β-乳球蛋白以及乳铁蛋白组成的组中的蛋白；
[0024][3]根据[I]记载的用于预防以及/或者改善癌症引起的非可逆性的代谢紊乱的组合物，其中所述乳蛋白为，每100 m I的组合物中包含0.9-3.0 g的乳蛋白；
[0025][4]根据[I]记载的用于预防以及/或者改善癌症引起的非可逆性的代谢紊乱的组合物，其中所述发酵乳蛋白，源于发酵乳中乳清减少的组合物；
[0026][5]根据[I]记载的用于预防以及/或者改善癌症引起的非可逆性的代谢紊乱的组合物，其中所述发酵乳蛋白，源于新鲜干酪；
[0027][6]根据[5]记载的用于预防以及/或者改善癌症引起的非可逆性的代谢紊乱的组合物，其中所述新鲜干酪为夸克(Quark)；[0028][7]根据[I]记载的用于预防以及/或者改善癌症引起的非可逆性的代谢紊乱的组合物，其中所述发酵乳蛋白为，每100 m I的组合物中包含2-6 g的发酵乳蛋白；
[0029][8]根据[I]记载的用于预防以及/或者改善癌症引起的非可逆性的代谢紊乱的组合物，其中所述乳蛋白的水解物，可以将乳清蛋白分离物(WPI)通过源于地衣芽孢杆菌的碱性蛋白酶加水分解以及通过源于猪胰脏的胰蛋白酶加水分解而获得；
[0030][9]根据[8]记载的用于预防以及/或者改善癌症引起的非可逆性的代谢紊乱的组合物，其中所述乳蛋白的水解物为，通过分级分子量为10000的超滤膜进一步处理而获得的透过组分(滤过液、permeate)；
[0031][10]根据[I]记载的用于预防以及/或者改善癌症引起的非可逆性的代谢紊乱的组合物,其中所述的帕拉金糖为,每100 m I的组合物中包含4-15 g的帕拉金糖；
[0032][11]根据[I]记载的用于预防以及/或者改善癌症引起的非可逆性的代谢紊乱的组合物，其中所述的的脂质为，全部脂肪酸中包含30%以上的油酸的脂质；
[0033]本发明的组合物，能够预防以及/或者改善癌症引起的非可逆性的代谢紊乱。例如，能够预防以及/或者改善癌症患者的肌肉含量降低，提高癌症患者的QOL (生存质量)。另外，本发明的组合物由于可以安全地摄取，也适用于长期疗养中的营养管理。
【专利附图】
【附图说明】
[0034]图1显示试验例I中的试验期间的体重、肿瘤体积的推移及解剖时(Colon26细胞移植后的第21天)的肿瘤重量、脂肪量、肌 肉含量、空体量。
[0035]图2显示试验例I中的血液中的PGE2、IL_6浓度。
[0036]图3显示试验例I中的全部血液中的白血球数量、白血球组分。
[0037]图4显示解剖时(Colon26细胞移植后的第21天)的体重、肿瘤重量、除去肿瘤后的重量、脂肪量、肌肉含量(趾长伸肌)、空体量。
[0038]图5显示实施方式I中的血液中的PGE2、IL_6浓度。
[0039]图6显示实施方式I中的试验期间的体重、以及肿瘤体积的推移。
[0040]图7显示实施方式I中的全部血液中的白血球数量、白血球组分。其中，图中的WBC表示白血球、NEUT表示嗜中性白细胞、LYMPH表示淋巴细胞、MONO表示单核细胞。
【具体实施方式】
[0041]以下对本发明进行详细地说明。但是，本发明并不限于以下的优选实施方式，可以在本发明的范围内自由变化。
[0042]1.蛋白质、
[0043]1-1乳蛋白水解物
[0044]作为原料蛋白质，能够使用酪蛋白、乳清蛋白(乳清蛋白浓缩物(WPC)、乳清蛋白分离物(WPI)、α -乳清蛋白(α -La)、β -乳球蛋白(β -Lg))乳蛋白浓缩物(MPC、或称总乳蛋白=TMP)等。
[0045]以乳清蛋白的水解为例，通常，用于该蛋白水解的酶为胃蛋白酶、胰蛋白酶及胰凝乳蛋白酶，但是也有使用植物来源的木瓜蛋白酶、细菌和真菌来源的蛋白酶的研究报告(Food Technol., 48:68-71, 1994 ；Trends Food Sc1.Technol., 7:120-125, 1996 ；FoodProteins and Their Applications, pp.443-472, 1997)。将乳清蛋白水解后的酶活性波动很大。胃蛋白酶可以分解α-La及已变性的α-La、但不能分解未变性的(天然、native)的β-LgCNeth.Milk dairy J.，47:15-22，1993)。胰蛋白酶可以缓慢地水解α-La，但很难分解 β-Lg(Neth.Milk dairy J.，45:225-240，1991)。胰凝乳蛋白酶可以快速地分解 α-La，然而分解β-Lg缓慢。木瓜蛋白酶水解牛血清白蛋白(BSA)及β-Lg,但α-La显示抗性(Int.Dairy Journal6:13-31，1996a)。然而,在酸性pH值条件下,未结合Ca的α-La被木瓜蛋白酶完全分解(J.Dairy Sc1.，76:311-320，1993)。
[0046]通过控制乳蛋白的酶分解和修饰该蛋白，可以在较宽范围的pH值及处理条件下，改变该蛋白的功能性特征(Enzyme and Chemical Modification of proteins inFood proteins and their Applications，pp.393—423，1997，Marcel Dekkerj Inc., NewYork, 1997 ；Food Technol.，48:68-71，1994)。
[0047]肽链的水解，增加带电基团的数目及疏水性、减少分子量、以及改变分子的结构(J.Dairy Sc1., 76:311-320, 1993)。功能性特征的变化很大程度上依赖于水解程度。通常观察到的乳清蛋白的功能的最大变化是溶解性增加和粘度减小。水解程度高的情况下，通常，水解物即使被加热也不产生沉淀，在3.5-4.0的pH值的情况下，溶解性高。水解物具有比完整(intact)蛋白质低得多的粘度。这种差异在蛋白质浓度高的情况下尤其显著。其他的影响包括:凝胶特性的改变、热稳定性的提高、乳化及起泡能力的增强、乳化及泡沫的稳定性减低(Int.Dairy journal, 6:13-31, 1996a ；Dairy Chemistry4, pp.347-376，1989 ；J.Dairy Sc1.，79:782-790， 1996)。
[0048]已经知道多种源于乳蛋白的生理活性寡肽(吉川正明「牛乳的尖端性能」吉川正明等编著，P188-195,弘学出版，1998 ;大谷元「牛乳的尖端性能」吉川正明等编著，p97_99，弘学出版，1998 ；大谷兀、Milk Science47:183, 1998 ；Trends in Food Science andTechnology, 9:307-319，1998)。
`[0049]例如，可以观察到乳蛋白水解物，具有抑制LPS诱导的TNF-α及IL_6在体内产生的作用(W02004/047566公报)。关于对于源于乳蛋白的多肽的细胞因子产生的影响，有如下报告:源于牛乳酪蛋白的多肽，增加LPS诱导的TNF-α及IL_6在鼠骨髓巨噬细胞中的产生(J.Sc1.Food Agric.，81:300-304, 2000)，还有如下报告:通过LPS刺激而产生IL-6的多肽，存在于由益生菌乳酸菌发酵的发酵乳的上清中(Milchwissenschaft，57(2):66-70, 2002)。
[0050]除上述示例的文献外，还存在许多关于乳蛋白水解物的专利(已公布的专利申请和专利)。例如包括:分别水解酪蛋白和乳清蛋白，吸收去除疏水成分后，将两者按照既定比例混合的专利(日本专利第2，986，764号)；通过源自芽孢杆菌和放线菌的蛋白酶水解乳清蛋白后，去除酶和不可溶性的水解物的专利(日本专利第3，222，638号);有关多肽混合物的专利，其中，通过酶分解β_乳球蛋白而获得的枝链氨基酸/芳香族氨基酸的摩尔比为10重量％以上，芳香族氨基酸少于2.0重量％，混合物的平均分子量为几百到几千(日本专利第3，183，945号)；将乳请蛋白中的β -乳球蛋白选择性地进行酶分解的专利(日本专利第2，794，305号)；或者通过源自地衣芽孢杆菌和源自枯草芽孢杆菌的蛋白酶，采用非PH稳态法(non-pH-star)，将乳清蛋白水解到15-30%的水解度(DE)，获得超过截留分子量值10000的超滤膜的滤过液的专利(日本专利第3167723号)等。本发明的乳蛋白水解物包括除这些专利以外的专利和公布的专利申请。
[0051]乳清蛋白水解物的混合方法，可以按照下述(I)~(5)的步骤进行混合。
[0052](I)将干燥的包含约90%蛋白的乳清蛋白分离物(WP1、davisco公司)，溶于蒸馏水中，得到浓度为8% (w/v)的蛋白溶液；(2)在85°C的条件下，加热处理溶液2分钟，使蛋白质变性。加热后溶液的PH值为约7.5 ；(3)加入相对于底物(基质酶)的浓度为2.0%的碱性蛋白酶2.4L (酶、诺维信公司、novozymes)进行水解,在55°C的条件下,反应3小时；
(4)接着，加入相对于底物(基质酶)的浓度为3.0%的源自猪的胰蛋白酶PTN6.0S (诺维信日本、novozymes japan),在55°C的条件下,反应3小时,完全水解时间为6小时,反应完成时的pH值为约7.0 ; (5)将乳清蛋白的水解物离心处理(20，OOOXgUO分钟)后，通过分级分子量为10000的UF膜进行处理(密理博公司的离心超滤管、Millipore，Ultrafree-MO0
[0053]作为最佳化的五个参数，选择例如预热、酶和基质酶的比(E/S)、pH、水解温度和水解时间。
[0054]预热:65~90 °C
[0055]E/S:0.01 ~0.2
[0056]pH:2 ~10
[0057]水解温度:30~65 °C
[0058]水解时间:3小时至不足20小时
[0059]使用的酶包括下述来自诺和诺德(novo nordisk)公司的酶:
[0060]I)内切蛋白酶`
[0061]源自地衣芽孢杆菌的:碱性蛋白酶(Alcalase)
[0062]源自迟缓芽孢杆菌的:益瑞蛋白酶(Esperase)
[0063]源自枯草芽孢杆菌的:中性蛋白酶(Neutrase)
[0064]源自细菌的:复合蛋白酶(Protamex)
[0065]源自猪胰脏的:PTN (胰蛋白酶)
[0066]2)外切蛋白酶
[0067]源自米曲霉的:风味蛋白酶(Flavorzyme)
[0068]源自猪或牛内脏的:羧肽酶
[0069]除上述之外的酶，还能够举例:源自动物的胰酶、胃蛋白酶，源自植物的木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶，源自微生物(例如:乳酸菌、酵母、霉菌、放线菌)的内切蛋白酶和外切蛋白酶，以及它们的粗制纯化物和细菌匀浆物。另外，在联合用酶时，也经常使用源自地衣芽孢杆菌的碱性蛋白酶和源自猪胰脏的PTN (胰蛋白酶)的酶混合物。
[0070]本发明的蛋白质水解物包括:蛋白质的酶加水分解物本身，以及超滤膜进一步处理过的残余溶液或滤过液；以及具有同样活性的市场出售(商业)的乳蛋白的水解物。例如，发明的蛋白质水解物能够使用分级分子量为10000的超滤膜的残余溶液。
[0071]乳蛋白水解物的混合量，可以根据其他成分(发酵乳蛋白、含有油酸的油脂、乳磷月旨、大豆卵磷脂、帕拉金糖等)的含量、癌症患者的病况、症状、年龄、体重、用途等做适当调整。举例说，乳蛋白水解物的混合量为每IOOmL组合物0.9~3.0g,优选1.0~2.5g，更优选1.2~2.0g,但不限于此例。
[0072]1-2发酵乳蛋白[0073]本发明中，作为原料发酵乳蛋白的原料，可以使用酸奶、干酪(天然干酪、新鲜干酪)、干酪类食品、牛奶的乳酸菌以及/或者双歧杆菌发酵物等发酵乳。
[0074]酸奶的氨基酸值为100，其蛋白质的消化吸收能力通过发酵得以提高，营养价值高。本发明使用的发酵乳蛋白，可以举例为，去除酸奶中的水分(乳清)后的成分(例如，日本专利第3179555号)。
[0075]尽管新鲜干酪有许多种类，包括农家干酪、夸克、纤丝干酪(string)、纽沙尔特干酪(Neufchatel )、奶油干酪、马苏里拉干酪(mozzarella)、乳清干酪(ricotta)、马斯卡彭干酪(mascarpone)等,但夸克是最适合使用的原料。夸克的生产方法是公知的(例如，特开平 6228013)。
[0076]发酵乳蛋白的混合量，可以根据其他成分(乳蛋白水解物、含有油酸的油脂、乳磷月旨、大豆卵磷脂、帕拉金糖等)的含量、癌症患者的病况、症状、年龄、体重、用途等做适当调整。举例说，发酵乳蛋白的混合量可以为，换算成蛋白质，每IOOmL组合物2~6g，优选2.5~4.5g,但不限于此例。
[0077]2.脂质
[0078]2-1 磷脂
[0079]乳磷脂和源自大豆的卵磷脂或者源自蛋黄的卵磷脂，联合用于磷脂。乳磷脂也可单独使用。术语“卵磷脂”，在生化学、医学、药学等领域，仅被用于磷脂酰胆碱，然而在商业或者工业领域，卵磷脂是作为磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、磷脂酸及其他磷脂的混合物的统称来使用的。在食品添加物公定书第7版(1999)中，卵磷脂被定义为「从油籽或者动物原料中获得的物质，其主要成分是磷脂」。
[0080]乳磷脂
[0081]乳磷脂包括鞘磷脂(SM)、磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰丝氨酸(PS)、溶血磷脂酰胆碱(LPC)、只存在于乳脂球膜(MFGM))中。
[0082]如表1所述，乳磷脂的特征为，大量含有没有包含在大豆卵磷脂中的SM。将乳磷脂给予大鼠时，与将大豆卵磷脂给予大鼠相比，大鼠的脑和肝脏中的DHA含量增加，并且，已知乳磷脂与大豆卵磷脂或者蛋黄卵磷脂相比，在改善高血脂和脂肪肝方面更有效。另外，已知SM与胆固醇的代谢有关，例如，调节胆固醇合成中的HMG-CoA还原酶活性，调节胆固醇在肠道中的吸收等。因此，可以认为SM能够进一步提高PC和PE的脂质代谢的效果(佐佐木一、Milk Science51 (2):93-94, 2002)。
[0083]【表1】
【权利要求】
1.一种用于预防以及/或者改善癌症引起的非可逆性的代谢紊乱的组合物，包含:作为蛋白质成分的乳蛋白水解物和发酵乳蛋白、作为脂质成分的含有油酸的油脂及乳磷脂以及/或者大豆卵磷脂，作为碳水化合物的帕拉金糖。
2.根据权利要求1所述的用于预防以及/或者改善癌症引起的非可逆性的代谢紊乱的组合物，其中所述乳蛋白选自酪蛋白、乳蛋白浓缩物(MPC )、乳清蛋白浓缩物(WPC )、乳清蛋白分离物(WPI)、α-乳清蛋白、β-乳球蛋白以及乳铁蛋白组成的组中的蛋白。
3.根据权利要求1所述的用于预防以及/或者改善癌症引起的非可逆性的代谢紊乱的组合物,其中所述乳蛋白为,每100 m I的组合物中包含0.9-3.0 g。
4.根据权利要求1所述的用于预防以及/或者改善癌症引起的非可逆性的代谢紊乱的组合物，其中所述发酵乳蛋白，源自发酵乳中乳清减少的组合物。
5.根据权利要求1所述的用于预防以及/或者改善癌症引起的非可逆性的代谢紊乱的组合物，其中所述发酵乳蛋白，源自新鲜干酪。
6.根据权利要求5所述的用于预防以及/或者改善癌症引起的非可逆性的代谢紊乱的组合物，其中所述新鲜干酪为夸克。
7.根据权利要求1所述的用于预防以及/或者改善癌症引起的非可逆性的代谢紊乱的组合物，其中所述发酵乳蛋白为，每100 m I的组合物中包含2-6 g。
8.根据权利要求1所述的用于预防以及/或者改善癌症引起的非可逆性的代谢紊乱的组合物，其中所述乳蛋白的水解物，可以将乳清蛋白分离物(WPI)通过源自地衣芽孢杆菌的碱性蛋白酶加水分解以及通过源自猪胰脏的胰蛋白酶加水分解而获得。
9.根据权利要求8所述的用于预防以及/或者改善癌症引起的非可逆性的代谢紊乱的组合物，其中所述乳蛋白的水解物为`，通过分级分子量为10000的超滤膜进一步处理而获得的透过组分(滤过液)。
10.根据权利要求1所述的用于预防以及/或者改善癌症引起的非可逆性的代谢紊乱的组合物,其中所述帕拉金糖为,每100 m I的组合物中包含4-15 g。
11.根据权利要求1所述的用于预防以及/或者改善癌症引起的非可逆性的代谢紊乱的组合物，其中所述的脂质为，全部脂肪酸组合物中包含30%以上的油酸。
12.根据权利要求1所述的用于预防和/或改善癌症引起的非可逆性的代谢紊乱的组合物，其特征为不损害抗癌药物的作用。
13.根据权利要求1所述的用于预防和/或改善癌症引起的非可逆性的代谢紊乱的组合物，其特征为促进抗癌药物的代谢紊乱作用。
【文档编号】A61P3/00GK103561756SQ201280025937
【公开日】2014年2月5日 申请日期:2012年5月25日 优先权日:2011年5月27日
【发明者】中村健太郎, 佐佐木一, 高桥毅, 纪再思, 山地健人, 坪井洋, 笹山秋菜 申请人:株式会社明治