本发明属于医药技术领域，具体涉及端锚聚合酶抑制剂、或其药学上可接受的盐、酯、溶剂化物及其立体异构体，这些化合物的制备方法，含有这些化合物的药物制剂及药物组合物，以及这些化合物在制备治疗和/或预防癌症、阿尔兹海默症、骨质疏松症、皮肤病、心血管疾病、ii型糖尿病的药物中的应用。
背景技术：
众所周知，癌症已经成为威胁人类生命和健康最严重的疾病之一，全世界每年约有九百余万人罹患恶性肿瘤。因此，找到预防和治疗癌症的有效药物和方法，成为当今社会刻不容缓的任务。癌症是一种以丧失对细胞生长适当控制为特征的疾病。据报道，经典的wnt信号通路即β-catenin介导的wnt信号通路，与很多生物过程相关，例如细胞命运、细胞增殖、干细胞的维持等。wnt信号通路的异常激活可以导致多种癌症，因此该信号通路成为抗肿瘤治疗的热门通路。
β-catenin和axin蛋白是经典wnt信号通路的重要组成部分。β-catenin过多会导致wnt信号传导增加及相关核转录因子的活化，而axin过量会导致细胞内β-catenin降解并减少信号传导。因此，wnt信号的传导受到此两种蛋白的相对稳定性来控制。当细胞没有接受wnt信号刺激时，细胞质内大部分β-catenin都是以降解复合体的形式被蛋白酶体降解。而当wnt信号通路被异常激活后，β-catenin随之被降解复合体大量解放，细胞质中增加的自由β-catenin，最终进入细胞核与淋巴增强子结合因子1相互作用，调节下游基因的表达。这些下游基因与许多癌症有牵连。
β-catenin降解过程中形成的降解复合物主要由β-catenin、apc、axin、ck1、gsk3β组成。其中axin是一种支架蛋白，具有与其他蛋白作用的位点，能将β-catenin、apc、ck1、gsk3β结合在一起。ck1是一种酪氨酸激酶，能将β-catenin的ser45磷酸化，随后gsk3β将β-catenin的thr41、ser37、ser33磷酸化，磷酸化的β-catenin再结合到β-trcp蛋白上，受泛素的共价修饰，从而被蛋白酶体降解。apc蛋白的作用是增强降解复合体与β-catenin的亲和力。当wnt信号通路被激活后，活化的dvl蛋白会破坏降解复合体，使β-catenin大量释放，引起游离β-catenin积累。有文献报道，通过稳定细胞中axin蛋白，可以有效提高降解复合物的浓度，从促进β-catenin的降解。
端锚聚合酶tankyrases属于adp-核糖聚合酶(parp)蛋白家族，人类的tankyrase1(tnks1)和2(tnks2)也分别被称为parp-5a和parp-5b。端锚聚合酶能使axin蛋白发生聚adp核糖基化，为其后续进行泛素化及蛋白酶体降解进行标记，因此通过抑制端锚聚合酶的活性，可以使axin蛋白的浓度上升，从而导致β-catenin降解复合体的浓度升高，促进β-catenin的降解及wnt信号传导减少。有文献报道xav939和iwr-1-endo都属于小分子端锚聚合酶抑制剂，可以稳定axin蛋白水平并抑制wnt信号通路。因此，通过抑制端锚聚合酶的作用，对癌症治疗的研究具有重大的意义。此外，wnt信号通路除于癌症相关外，针对纠正wnt信号传导异常还可以应用到其他的疾病领域，例如阿尔兹海默症、骨质疏松症、皮肤病、心血管疾病、ii型糖尿病。尽管本文重点介绍的是wnt通路与癌症的关系，但此通路在其他疾病中同样具有潜在的应用价值。同时，对端锚聚合酶的抑制也可以对其他生物功能产生影响，例如染色体末端保护(端粒)、有丝分裂期间的纺锤体组装及脂肪细胞的葡萄糖转运。因此，可以预见端锚聚合酶抑制剂还可以用于治疗由此类抑制所介导的疾病。
目前还未有针对端锚聚合酶的小分子抑制剂进入临床研究，因此针对此靶点在癌症治疗领域的应用存在巨大的需求。为此，我们希望可以开发出新结构的高效低毒的针对端锚聚合酶靶点的抗肿瘤药物。本发明将提供一种新型结构的端锚聚合酶抑制剂，此结构的化合物对tnks1和tnks2具有较高的抑制作用，同时针对parp蛋白家族中的parp1和parp2具较好的选择性，表现出较好的抗肿瘤作用。
技术实现要素：
本发明以开发针对端锚聚合酶的小分子抑制剂为目标，发明了对治疗和/或预防端锚聚合酶介导的癌症及相关疾病具有良好效果的端锚聚合酶抑制剂。具体的技术方案为如下：
方案1、通式(ⅰ)所示的化合物、其药学上可接受的盐、酯、溶剂化物或其立体异构体：
其中，x1、z、l各自独立的选自ch、n原子，且z、l不能同时为ch；
x2选自nh；
y1、y2、y3选自键、crbrc、nrd、o、s、c(o)、c(o)crbrc、nrdc(o)、c(o)nrd、s(o)或s(o)2；
y4选自键、nrd、o、s、s(o)或s(o)2；
其中rb、rc分别独立地选自氢原子、羟基、氨基、羧基、硝基、氰基、卤素原子、c1-6烷基、c1-6烷氧基、卤代c1-6烷基、卤代c1-6烷氧基、c1-6烷基羰基、c1-6烷基氨基、二(c1-6烷基)氨基、c1-6烷基磺酰基、c1-6烷基酰氨基或c1-6烷基磺酰氨基；
rd选自氢原子、c1-6烷基、c1-6烷基羰基或c1-6烷基磺酰基；
r1、r2分别独立地选自氢原子、卤素原子、氰基、羟基、氨基、羧基、硝基、c1-6烷基、卤代c1-6烷基、c1-6烷氧基、卤代c1-6烷氧基、羟基c1-6烷基、氨基c1-6烷基、羧基c1-6烷基、c1-6烷基氨基、二(c1-6烷基)氨基、c1-6烷基羰基、c1-6烷基磺酰基、c1-6烷基磺酰氨基、c1-6烷基酰氨基或c1-6烷基c1-6烷氧基；
环a选自任选被取代基p1取代的6-14元芳基、5-12元杂芳基、5-14元环烷基或5-8元杂环基；
p1选自羟基、氨基、羧基、硝基、氰基、卤素原子、c1-6烷基、c1-6烷氧基、卤代c1-6烷基、卤代c1-6烷氧基、羟基c1-6烷基、氨基c1-6烷基、羧基c1-6烷基、c1-6烷基氨基、二(c1-6烷基)氨基、c1-6烷基羰基、c1-6烷氧基羰基、c1-6烷基磺酰基、c1-6烷基羰氧基、c1-6烷基酰氨基或c1-6烷基磺酰氨基；
n选自0、1、2、3、4、5。
方案2、根据方案1所述的化合物、其药学上可接受的盐、酯、溶剂化物或其立体异构体，
其中，x1、z、l各自独立的选自ch、n原子，且z、l不能同时为ch；
x2选自nh；
y1、y2选自crbrc、nrd、o、s、c(o)、c(o)crbrc、nrdc(o)、s(o)或s(o)2；
y3选自键、crbrc、nrd、o、s、c(o)、nrdc(o)、c(o)nrd、s(o)、s(o)2；
y4选自键、nrd、o、s、s(o)或s(o)2；
其中rb、rc分别独立地选自氢原子、羟基、氨基、羧基、硝基、氰基、卤素原子、c1-4烷基、c1-4烷氧基、卤代c1-4烷基、卤代c1-4烷氧基、c1-4烷基羰基、c1-4烷基氨基或二(c1-4烷基)氨基；
rd选自氢原子、c1-4烷基或c1-4烷基羰基；
r1、r2选自氢原子、卤素原子、氰基、羟基、氨基、羧基、硝基、c1-4烷基、卤代c1-4烷基、c1-4烷氧基、卤代c1-4烷氧基、羟基c1-4烷基、氨基c1-4烷基或羧基c1-4烷基；
环a选自任选被取代基p1取代的苯基、5-6元杂芳基、5-6元环烷基或5-6元至少含1个o原子的杂环基；
p1选自羟基、氨基、羧基、硝基、氰基、卤素原子、c1-4烷基、c1-4烷氧基、卤代c1-4烷基、卤代c1-4烷氧基、羟基c1-4烷基、氨基c1-4烷基、羧基c1-4烷基、c1-4烷基氨基、二(c1-4烷基)氨基、c1-4烷基羰基、c1-4烷氧基羰基、c1-4烷基磺酰基、c1-4烷基羰氧基、c1-4烷基酰氨基或c1-4烷基磺酰氨基；
n选自0、1、2、3。
方案3、根据方案2所述的化合物、其药学上可接受的盐、酯、溶剂化物或其立体异构体，
其中，x1选自n原子；
x2选自nh；
z、l各自独立的选自ch或n原子，且z、l不能同时为ch；
y1、y2选自crbrc、nrd、o、s、c(o)、s(o)、s(o)2；
y3选自键、crbrc、nrd、o、s、c(o)、nrdc(o)、c(o)nrd、s(o)、s(o)2；
y4选自键、nrd、o、s、s(o)或s(o)2；
环a选自任选被取代基p1取代的苯基、5-6元含氮杂芳基或6元至少含1个o原子的杂环基；
n选自0、1、2。
方案4、根据方案3所述的化合物、其药学上可接受的盐、酯、溶剂化物或其立体异构体，
其中，环a选自任选被取代基p1取代的苯基、5-6元含1-2个n原子的杂芳基或6元含1-2个o原子的杂环基。
方案5、根据方案4所述的化合物或其药学上可接受的盐、酯、溶剂化物或其立体异构体，
其中，x1选自n原子；
x2选自nh；
z、l各自独立的选自ch或n原子，且z、l不能同时为ch；
y1选自crbrc、nrd、o、s；
y2选自crbrc、c(o)；
y3选自键、crbrc、nrd、o、s、c(o)、nrdc(o)、c(o)nrd、s(o)、s(o)2；
y4选自键、nrd、o或s；
其中rb、rc分别独立地选自氢原子、羟基、氨基、羧基、硝基、氰基、氟原子、氯原子、溴原子、甲基、乙基、丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、三氟甲基、三氟乙基、三氟甲氧基、三氟乙氧基、甲酰基、乙酰基、甲基氨基、乙基氨基或二甲基氨基；
rd选自氢原子、甲基、乙基、丙基、甲酰基或乙酰基；
r1、r2选自氢原子、氟原子、氯原子、溴原子、氰基、羟基、氨基、羧基、硝基、甲基、乙基、丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、三氟甲基、三氟乙基、三氟甲氧基、三氟乙氧基、羟基甲基、氨基甲基或羧基甲基；
环a选自任选被取代基p1取代的苯基、5元含1-2个n原子的杂芳基或二氢吡喃基；
p1选自羟基、氨基、羧基、硝基、氰基、氟原子、氯原子、溴原子、甲基、乙基、丙基、甲氧基、乙氧基、三氟甲基、三氟甲氧基、甲基氨基、二甲氨基、甲酰基、甲氧基羰基、甲基磺酰基、甲基羰氧基、甲酰氨基、乙酰氨基、甲磺酰氨基或乙基磺酰氨基；
n选自0、1、2。
方案6、根据方案5所述的化合物或其药学上可接受的盐、酯、溶剂化物或其立体异构体，
其中，x1选自n原子；
x2选自nh；
z、l各自独立的选自ch或n原子，且z、l不能同时为ch；
y1选自ch2、o、s；
y2选自ch2、c(o)；
y3选自ch2、c(o)、nhc(o)；
y4选自键、nh；
r1、r2选自氢原子、氟原子、氯原子、溴原子、氰基、羟基、氨基、羧基、硝基、甲基、乙基、丙基、甲氧基、乙氧基、三氟甲基、三氟乙基或羟基甲基；
环a选自任选被取代基p1取代的苯基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、异噻唑基、噻二唑基、噁唑基、异噁唑基、1,2,3-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基、1,2,5-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基或二氢吡喃基；
p1选自羟基、氨基、羧基、硝基、氰基、氟原子、氯原子、溴原子、甲基、乙基、丙基、甲氧基、乙氧基或三氟甲基；
n选自0、1、2。
上述方案中的技术特征可以任意组合，所得到的技术方案均记载于本发明中。
本发明的部分化合物
发明详述
在本申请的说明书和权利要求书中，化合物都是依据化学结构式而命名的，如果表示同一化合物时化合物的命名与化学结构式不符，以化学结构式或化学反应式为准。
本发明所述的“卤素原子”包括氟原子、氯原子、溴原子和碘原子等。
本发明所述的“c1-6烷基”表示直链或支链的含有1-6个碳原子的烷基，包括例如“c1-4烷基”、“c1-3烷基”等，具体实例包括但不限于：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、2-甲基丙基、1-甲基丙基、1,1-二甲基乙基、正戊基、3-甲基丁基、2-甲基丁基、1-甲基丁基、1-乙基丙基、正己基、4-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、3,3-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、1,2-二甲基丙基等。
本发明所述的“c2-8烯基”是指含有至少一个双键的碳原子数为2-8的直链或支链或环状的烯基，包括例如“c2-6烯基”、“c2-4烯基”、“c2-3烯基”等，具体实例包括但不限于：乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、2-甲基-1-丙烯基、1-甲基-2-丙烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、2-甲基-1-丁烯基、3-甲基-1-丁烯基、2-甲基-3-丁烯基、1,1-二甲基-2-丙烯基、1-乙基-2-丙烯基、2-己烯基、3-己烯基、2-甲基-1-戊烯基、3-甲基-1-戊烯基、1-甲基-2-戊烯基、3-甲基-2-戊烯基、2-甲基-3-戊烯基、1-甲基-4-戊烯基、3-甲基-4-戊烯基、1,1-二甲基-3-丁烯基、1,2-二甲基-3-丁烯基、1,3-二甲基-2-丁烯基、2,2-二甲基-3-丁烯基、2,3-二甲基-2-丁烯基、2,3-二甲基-1-丁烯基、2-乙基-1-丁烯基、2-乙基-3-丁烯基等。
本发明所述的“c2-8炔基”是指含有三键的碳原子数为2-8的直链或支链的炔基，其中包括例如“c2-6炔基”、“c2-4炔基”、“c2-3炔基”等，具体实例包括但不限于：乙炔基、1-丙炔基、2-丁炔基、1-甲基-2-丙炔基、2-戊炔基、3-戊炔基、1-甲基-2-丁炔基、2-甲基-3-丁炔基、1,1-二甲基-2-丙炔基、1-乙基-2-丙炔基、2-己炔基、3-己炔基、1-甲基-2-戊炔基、1-甲基-3-戊炔基、2-甲基-3-戊炔基、1,1-二甲基-3-丁炔基、2-乙基-3-丁炔基、2-庚炔基、3-庚炔基等。
本发明所述的“c1-6烷氧基、c1-6烷基氨基、二(c1-6烷基)氨基、c1-6烷基羰基、c1-6烷氧基羰基、c1-6烷基酰氨基、c1-6烷基磺酰基、c1-6烷基磺酰氨基”是指以c1-6烷基-o-、c1-6烷基-nh-、(c1-6烷基)2-n-、c1-6烷基-c(o)-、c1-6烷基-o-c(o)-、c1-6烷基-c(o)-nh-、c1-6烷基-so2-、c1-6烷基-so2-nh-方式形成的基团，其中“c1-6烷基”的定义如前文所述。
本发明所述的“c1-4烷氧基、c1-4烷基氨基、二(c1-4烷基)氨基、c1-4烷基羰基、c1-4烷氧基羰基、c1-4烷基酰氨基、c1-4烷基磺酰基、c1-4烷基磺酰氨基”是指以c1-4烷基-o-、c1-4烷基-nh-、(c1-4烷基)2-n-、c1-4烷基-c(o)-、c1-4烷基-o-c(o)-、c1-4烷基-c(o)-nh-、c1-4烷基-so2-、c1-4烷基-so2-nh-方式形成的基团，其中“c1-4烷基”的定义如前文所述。
本发明所述的“卤代c1-6烷基、羟基c1-6烷基、氨基c1-6烷基、羧基c1-6烷基、卤代c1-6烷氧基”是指一至多个，例如1～4个、1～3个、1～2个卤素原子、羟基、氨基、羧基分别取代c1-6烷基、c1-6烷氧基中的氢原子所形成的基团。
本发明所述的“卤代c1-4烷基、羟基c1-4烷基、氨基c1-4烷基、羧基c1-4烷基、卤代c1-4烷氧基”是指一至多个，例如1～4个、1～3个、1～2个卤素原子、羟基、氨基、羧基分别取代c1-4烷基、c1-4烷氧基中的氢原子所形成的基团。
本发明所述的“5～14元环烷基”，是指5～14个碳原子的烷烃部分去除一个氢原子衍生的环状烷基，包括例如“5～12元环烷基”、“5～8元环烷基”、“5～6元环烷基”等。其实例包括但不限于：环丙烷基、环丁烷基、环戊烷基、环己烷基、环庚烷基、环辛烷基、甲基环丙烷基、二甲基环丙烷基、甲基环丁烷基、二甲基环丁烷基、甲基环戊烷基、二甲基环戊烷基、甲基环己烷基、二甲基环己烷基等。
本发明所述的“杂原子”是指n、o、c(o)、s、so和/或so2等，优选n、o、s，更优选n、o。
本发明所述的“5～8元杂环基”是指含有3～8个环原子、且含有至少一个(例如1、2、3、4或5个)杂原子的饱和或部分饱和的单环杂环化合物除去一个氢原子得到的基团，包括例如“5～6元杂环基”、“5～6元至少含1个o原子的杂环基”、“6元至少含1个o原子的杂环基”、“6元含1-2个o原子的杂环基”等。具体实例包括但不仅限于：氮杂环丙烷基、2h-氮杂环丙烷基、二氮杂环丙烷基、3h-二氮杂环丙烯基、氮杂环丁烷基、1,4-二氧杂环己烷基、1,3-二氧杂环己烷基、1,3-二氧杂环戊烷基、1,4-二氧杂环己二烯基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、二氢吡咯基、吡咯烷基、咪唑烷基、4,5-二氢咪唑基、吡唑烷基、4,5-二氢吡唑基、2,5-二氢噻吩基、四氢噻吩基、4,5-二氢噻唑基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、4,5-二氢噁唑基、4,5-二氢异噁唑基、2,3-二氢异噁唑基、2h-1,2-噁嗪基、6h-1,3-噁嗪基、4h-1,3-噻嗪基、6h-1,3-噻嗪基、2h-吡喃基、2h-吡喃-2-酮基、3,4-二氢-2h-吡喃基等。
本发明所述的“5～12元杂芳基”是指含有5～12个环原子(其中至少一个环原子为杂原子，例如氮原子、氧原子或硫原子)的具有芳香性的环状基团。包括例如“5-10元杂芳基”、“5-8元杂芳基”、“5-6元杂芳基”、“6-12元杂芳基”、“5-6元含氮杂芳基”、“5元含氮杂芳基”、“5-6元含1-2个n原子的杂芳基”、“5-6元含2个n原子的杂芳基”、“5元含1-2个n原子的杂芳基”、“5-6元至少含1个o原子的杂环基”、“6元至少含1个o原子的杂环基”、“6元含1-2个o原子的杂芳基”等。具体实例包括但不仅限于呋喃基、噻吩基、吡咯基、噻唑基、异噻唑基、噻二唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、咪唑基、吡唑基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、1,2,3-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基、1,2,5-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、吡啶基、2-吡啶酮基、4-吡啶酮基、嘧啶基、1,4-二氧杂环己二烯基、哒嗪基、吡嗪基、1,2,3-三嗪基、1,3,5-三嗪基、1,2,4,5-四嗪基、氮杂环庚三烯基、1,3-二氮杂环庚三烯基、氮杂环辛四烯基等。
本发明所述的“6～14元芳基”是指含有6～14个环碳原子的芳基，包括例如“6～8元芳基”、“6～7元芳基”其实例包括但不限于：苯基、萘基、环辛四烯基等。
本发明所述的“键”是指化学中的单键。
本发明所述的
本发明还提供了上述化合物的两个制备方法，但不仅限于以下方法，反应方程式如下：制备方法一：
步骤1中间体1的制备
将原料1和碱性溶剂(例如三乙胺)溶于有机溶剂(例如二氯甲烷)，降温(例如-25～-10℃)，加入原料2，保持低温反应，反应完毕，浓缩得中间体1。
步骤2中间体2的制备
通过购买或自己制备得中间体2。
步骤3中间体3的制备
将中间体1溶于适当溶剂(例如乙腈)中，加入中间体2和碱性物质(例如碳酸钾)，60-90℃反应(例如10-20小时)，反应完全，浓缩，经纯化(例如硅胶柱层析)得到中间体3。
步骤4中间体4的制备
将中间体3溶于适当溶剂(例如二氯甲烷)中，加入酸(例如三氟乙酸)，室温反应(例如2-6小时)，反应完全，浓缩，加入饱和碱性溶液(例如碳酸钠溶液)，用有机溶剂(例如乙酸乙酯)萃取，浓缩，得到中间体4。
步骤5通式(ⅰ)化合物的制备
将原料3和hatu、diea溶于适当溶剂(例如二氯甲烷)中，室温反应(例如1-20分钟)，加入中间体4继续反应(例如10-40分钟)，反应完毕，浓缩，经纯化(例如硅胶柱层析)得通式(ⅰ)化合物。
制备方法二：
步骤1中间体1的制备
将原料1和hatu、diea加入到有机溶剂(例如二氯甲烷)，15-35℃搅拌(例如3-10分钟)，加入原料3，反应(例如0.5-2h)，加入水，有机溶剂(例如二氯甲烷)，合并有机相，浓缩，经纯化(例如硅胶柱层析)得中间体1。
步骤2中间体2的制备
将中间体1溶于有机溶剂(例如二氯甲烷)，加入二氧六环溶液，室温反应(例如0.5-3h)，过滤，滤饼用有机溶剂(例如二氯甲烷)洗涤，得中间体2。
步骤3中间体3的制备
将中间体2加入到有机溶剂(例如二氯甲烷)中，降温(例如-10～0℃)，加入原料2，-10～0℃反应(例如0.5-2小时)，反应完全，浓缩，经纯化(例如硅胶柱层析)得到中间体3。
步骤4中间体4的制备
通过购买或自己制备得中间体4。
步骤5通式(ⅰ)化合物的制备
将中间体3、中间体4、碱性物质(例如碳酸钾)、碘化钠加入到有机溶剂(例如乙腈)中，60-90℃室温反应(例如10-20小时)，反应完毕，浓缩，经纯化(例如硅胶柱层析)得通式(ⅰ)化合物。
反应方程式中，r1、r2、x1、x2、y1、y2、y3、y4、z、l、n和a如前文所定义，x代表氟原子、氯原子、溴原子和碘原子，e代表氢原子、羟基。
本发明式(i)化合物的“立体异构体”是指当式(i)化合物存在不对称碳原子时，会产生对映异构体，当化合物存在碳碳双键或环状结构时，会产生顺反异构体，当化合物存在酮或肟时，会产生互变异构体，所有式(i)化合物的对映异构体、非对映异构体、消旋异构体、顺反异构体、互变异构体、几何异构体、差向异构体及其混合物，均包括在本发明范围中。
本发明的通式(i)所示的任一化合物合成得到的若是消旋体，所需要的对映体纯的化合物可以通过常规的手性拆分方法获得，所述手性拆分的方法包括但不限于：手性固定相的色谱法(像高压制备液相色谱、超临界流体色谱)、化学拆分、膜拆分、毛细管电泳拆分等。
本发明的通式(i)所示的任一化合物药学上可接受的盐是指由药学上可接受的、非毒性碱或酸制备的盐，包括有机酸盐、无机酸盐、有机碱盐、无机碱盐。有机酸盐包括甲酸、乙酸、三氟乙酸盐、苯磺酸、苯甲酸、对甲苯磺酸、樟脑磺酸、柠檬酸、甲磺酸、乙磺酸、丙磺酸、富马酸、葡糖酸、谷氨酸、羟乙磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、粘酸、双羟萘酸、泛酸、琥珀酸、酒石酸等的盐；无机酸盐包括氢溴酸、氢氯酸、硝酸、硫酸、磷酸等的盐；有机碱盐包括伯、仲和叔胺，被取代胺包括天然存在的取代胺、环胺和碱离子交换树脂，选自甜菜碱、咖啡因、胆碱、n,n’-二苄基乙二胺、二乙胺、2-二乙胺基乙醇、2-二甲胺基乙醇、乙醇胺、乙二胺、n-乙基-吗啉、n-乙基哌啶、葡甲胺、氨基葡萄糖、海巴明、异丙基胺、甲基葡糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨丁三醇等的盐。天然氨基酸盐如甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、正亮氨酸、酪氨酸、胱氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、脯氨酸、羟基脯氨酸、组氨酸、鸟氨酸、赖氨酸、精氨酸、丝氨酸等的盐；无机碱盐包括铵以及锂、钠、钾、钙、镁、锌、钡、铝、铁、酮、亚铁、锰、二价锰等的盐。
本发明式(i)化合物的“酯”是指，当式(i)化合物存在羧基时，可以与醇发生酯化反应而形成的酯，当式(i)化合物存在羟基时，可以与有机酸、无机酸、有机酸盐等发生酯化反应而形成的酯。酯在酸或者碱存在的条件下，可以发生水解反应生成相应的酸或醇。
通式(i)所示的化合物、其药学上可接受的盐、酯或其立体异构体可以是溶剂化物形式。若溶剂化物是水合物的情况下，水合作用可以在制备过程中完成或者可以利用原始无水产物的吸湿性逐渐进行。
本发明进一步要求保护包括上述的式(i)所示的任一化合物、其药学上可接受的盐、酯、溶剂化物或其立体异构体与一种或多种药用载体和/或稀释剂的药物组合物，可以制成药学上可接受的任一剂型。如片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、口服溶液剂、口服混悬剂、糖浆剂、注射液、注射用无菌粉末、注射用浓溶液、栓剂、吸入剂或喷雾剂等。
本发明所述的“载体”包括但不限于填充剂、稀释剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、润滑剂、表面活性剂、防腐剂、着色剂、矫味剂、芳香剂、泡腾剂、乳化剂、絮凝剂、反絮凝剂、抑菌剂、增溶剂。
本发明进一步要求保护包括上面所述的式(i)任一化合物、其药学上可接受的盐、酯、溶剂化物或其立体异构体与其它一种或多种抗肿瘤剂和/或免疫抑制剂的药物组合物。所述的抗肿瘤剂和/或免疫抑制剂为抗代谢物，包括但不限于卡培他滨、吉西他滨、培美曲塞二钠；为生长因子抑制剂，包括但不限于帕唑帕尼、伊马替尼、埃罗替尼、拉帕替尼、吉非替尼、凡德他尼；为抗体，包括但不限于赫赛汀、贝伐单抗；为有丝分裂抑制剂，选自紫杉醇、长春瑞滨、多西他赛、多柔比星；为抗肿瘤激素类，包括但不限于来曲唑、他莫西芬、氟维司群、氟他胺、曲普瑞林；为烷化剂类，包括但不限于环磷酰胺、氮芥、马法兰、瘤可宁、卡莫司汀；为金属铂类，包括但不限于卡铂、顺铂、奥沙利铂；为拓扑异构酶抑制剂，包括但不限于拓扑特肯喜树碱、拓扑替康、依立替康；为免疫抑制类，包括但不限于依维莫司、西罗莫司、特癌适；为嘌呤类似物，包括但不限于6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、硫唑嘌呤；为抗生素类，包括但不限于菌素d、柔红霉素、阿霉素、米托蒽醌、博来霉素、普卡霉素；为肾上腺皮质抑制剂类，包括但不限于氨鲁米特、地塞米松；为组蛋白去乙酰化酶抑制剂，包括但不限于伏立诺他。
本发明还提供了本发明式(i)所示的化合物、其药学上可接受的盐、酯、溶剂化物或其立体异构体在制备治疗和/或预防端锚聚合酶介导的癌症或相关疾病的药物中的应用，所述癌症相关的疾病包括但不限于脑癌，肺癌，非小细胞性肺癌，鳞状上皮细胞癌，膀胱癌，胃癌，卵巢癌，腹膜癌，胰腺癌，乳腺癌，头颈癌，子宫颈癌，子宫内膜癌，直肠癌，肝癌，肾癌，食管腺癌，食管鳞状细胞癌，实体瘤，前列腺癌，甲状腺癌，雌性生殖道癌，原位癌，淋巴瘤，神经纤维瘤，骨癌，皮肤癌，脑癌、结肠癌，睾丸癌，小细胞肺癌，胃肠道间质瘤，前列腺肿瘤，肥大细胞肿瘤，多发性骨髓瘤，黑色素瘤，胶质瘤，肉瘤，胶质母细胞瘤，星形细胞瘤，神经母细胞瘤，非霍奇金淋巴瘤，脑瘤，中枢神经系统肿瘤，神经胶质瘤，多形性胶质母细胞瘤，胶质肉瘤，组织细胞淋巴瘤；所述的相关疾病，包括但不限于阿尔兹海默症、骨质疏松症、皮肤病、心血管疾病、ii型糖尿病。
本发明化合物具有以下优点：
(1)本发明式(i)化合物、其药学上可接受的盐、酯、溶剂化物或其立体异构体具有优异的端锚聚合酶抑制活性，对tnks1/2具有较高的选择性；
(2)本发明式(i)化合物、其药学上可接受的盐、酯、溶剂化物或其立体异构体显示出良好的生物稳定性，作用更持久，生物利用度高；
(3)本发明化合物制备工艺简单，药品纯度高，质量稳定，易于进行大规模工业生产。
以下通过生物学活性实验进一步阐述本发明化合物有益效果，但不应将此理解为本发明化合物仅具有下列有益效果。
下述实验中的缩写所代表的含义如下：
adp：腺苷二磷酸；parp：多聚adp-核糖聚合酶
tnks：端锚聚合酶；dmso：二甲基亚砜
tween-20：吐温-20；fbs：胎牛血清
p/s：青-链霉素；cck-8：细胞增殖-毒性检测试剂盒
1×、5×其中的“×”：倍
实验例1本发明化合物的体外酶学活性实验
供试品：本发明化合物，其化学名称和制备方法见化合物的制备实施例。
(一)供试品的配制
供试品10mm储备液的配制：分别称取供试品适量(具体称样量请见下表)，加入适量dmso溶解，混匀，备用。
分别取10mm的储备液，用dmso稀释成浓度为1mm的溶液，作为母液。用dmso将上述母液10倍逐级稀释制成一系列浓度的溶液，然后分别用水稀释10倍，制成含10％dmso的溶液，浓度分别为：100μm、10μm、1μm、0.1μm。
(二)实验方法
1.配制ph7.4的1×pbs
2.配制pbst(1×pbs，含0.05％tween-20)
向烧杯中加入约200ml的1×pbs(ph7.4)，然后加入100μltween-20，混匀，即得pbst。
3激酶反应
3.1包被组氨酸至96孔板
用1×pbs稀释5×组氨酸混合液1:5，每孔加入50μl1×组氨酸，4℃过夜；每孔用200μlpbst洗3次，每次用干净的纸巾吸净；每孔加入150μl封闭液，室温孵育60-90min；每孔用200μlpbst洗3次，每次用干净的纸巾吸净。
3.2核糖基化反应
激酶在冰上融化，用前将激酶用1×parp分析缓冲液稀释至说明书建议浓度，一直置于冰上，稀释后不能重复利用；按说明书依次加入各反应液及化合物后室温孵育1h；移弃反应液，200μlpbst洗三次，每次用干净的纸巾吸净。
3.3检测
streptavidin-hrp用封闭液稀释50倍；每孔加入50μl稀释的streptavidin-hrp，室温孵育30min；每孔用200μlpbst洗三次，每次用干净的纸巾吸净；用前将hrp化学发光底物a和b各50μl冰上混匀，每孔加入100μl；
3.3.5酶标仪读数。
4.计算公式
抑制率％＝[1-(t-p)/(p-b)]*100％
其中p是指阳性对照孔的化学发光读数，b是指空白孔的化学发光读数。t是指待测化合物孔的化学发光读数。
(三)结果与结论：
表1.各个激酶酶学评价结果
由表1可见，本发明化合物对tnks1/2有较高的活性，其中化合物1、化合物4、化合物9、化合物10、化合物12的ic50在10nm以下，化合物2、化合物3、化合物5、化合物7、化合物8、化合物11、化合物13的ic50在100nm以下。同时检测本发明化合物对parp1/2的抑制作用，显示ic50均在1000nm左右。说明本发明化合物针对tnks1/2具有较高的选择性。
实验例2本发明化合物对sw480细胞中axin2的蛋白的影响
供试品：本发明化合物，其化学名称和制备方法见化合物的制备实施例。
(一)供试品的配制
称取化合物1重量为2.00mg，加入适量dmso溶解，混匀，得到化合物1的10mm储备液。
分别取10mm的储备液，用dmso将上述母液逐级稀释制成浓度为1mm，0.2mm的母液(×1000)，再分别用培养基稀释1000倍，然后加入到6孔板相应的孔中，得到化合物溶液最终浓度为：1μm，0.2μm。
(二)实验方法：
1.细胞培养：人结直肠癌细胞sw480，用leibovitz'sl-15培养基+10％fbs+1％p/s的完全培养基，在无co2、37℃条件的培养箱中，培养细胞至80％融合度。
2.接种细胞：细胞传两代左右选择生长状态良好的细胞，消化、接种500,000细胞于6孔板中，37℃培养箱中培养过夜。
3.化合物处理：第二天，取出培养板，加入化合物(终浓度为0.2μm、1μm)，刺激细胞以及0.5％dmso对照，再放入37℃培养箱中培养。
4.24小时以后，吸弃培养基，冰上预冷的pbs洗两次，尽量吸尽残余的pbs。
5.10×细胞裂解液用双蒸水稀释成1x细胞裂解液。1×细胞裂解液加入蛋白酶抑制剂(sigma,丝/苏氨酸磷酸酶抑制剂,酪氨酸磷酸酶抑制剂。200μl/孔，冰上静置5min，用细胞刮刮下细胞，在冰上静置5min中，将细胞裂解液移至1.5ml离心管中，14000rpm，4℃，10min。取上清液移至新的离心管中，即为细胞总蛋白。
6.以bca蛋白定量试剂盒进行蛋白定量，加入相应的5×上样缓冲液，煮沸10分钟，短暂离心。-20℃保存或直接进行蛋白电泳。
7.根据标准操作进行电泳、转膜，根据相应抗体的说明书进行一抗和二抗结合，以xrs凝胶成像系统扫膜。用imagej进行半定量分析。
(三)实验结果与结论：
表2.本发明化合物对axin2的蛋白量的影响
由表2可知，本发明化合物能够增加axin2的蛋白量。
具体实施方式
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下实施例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
实施例1n-(1-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-4-基)-3-((4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-2-基)硫代)丙酰胺(化合物1)的制备
(1)叔丁基4-(3-氯丙酰氨基)哌啶-1-甲酸酯的制备
将叔丁基4-氨基哌啶-1-甲酸酯(4.0g,20.0mmol)和三乙胺(2.0g,19.8mmol)溶于二氯甲烷(40ml)中，降至-20℃，然后快速加入3-氯丙酰氯(2.54g,20.0mmol)，保持-20℃反应30分钟。反应完毕后，减压蒸干溶剂得粗品8.0g。
(2)叔丁基4-(3-((4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-2-基)硫代)丙酰胺)哌啶-1-甲酸酯的制备
将叔丁基4-(3-氯丙酰氨基)哌啶-1-甲酸酯(8.0g，粗品)溶于乙腈(50ml)中，然后依次加入2-巯基喹唑啉-4(3h)-酮(4.0g，22.4mmol)、nai(4.0g，26.7mmol)、碳酸钾(4.54g，32.8mmol)。移至85℃反应16小时。lc-ms检测反应完毕，减压蒸干，残余物经硅胶柱层析(pe:ea＝1:1)得产物4.6g，两步产率：53.2％。
(3)3-((4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-2-基)硫代)-n-(哌啶-4-基)丙酰胺的制备
将叔丁基4-(3-((4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-2-基)硫代)丙酰胺)哌啶-1-甲酸酯(3.0g,6.9mmol)溶于二氯甲烷(20ml)中，然后加入三氟乙酸(8ml)。25℃反应2小时，反应完毕后，减压蒸干溶剂，向残余物加入饱和碳酸钠溶液(20ml)，然后用乙酸乙酯(20ml×3)萃取，合并有机层，浓缩得到产物2.5g(粗品)。
(4)n-(1-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-4-基)-3-((4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-2-基)硫代)丙酰胺的制备
将4-甲氧基苯甲酸(137mg,0.9mmol)和hatu(342mg,0.9mmol)，diea(234mg,1.8mmol)，溶于dcm(10ml)中，25℃下反应5分钟，然后加入3-((4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-2-基)硫代)-n-(哌啶-4-基)丙酰胺(0.30g,粗品)继续反应30分钟，反应完毕后，浓缩，残余物经硅胶柱层析(pe:ea＝1:1)得产物100mg，产率23.7％。
分子式：c24h26n4o4s分子量：466.56lc-ms(m/e)：467.2(m+h+)
1h-nmr(400mhz,meod)δ:8.12(dd,j＝1.2hz,j＝8.0hz,1h),7.73-7.77(m,1h),7.59(d,j＝8.0hz,1h),7.43(t,j＝7.2hz,1h),7.33-7.37(m,2h),6.99(dd,j＝2.0hz,j＝6.8hz,2h),4.55(s,1h),3.96(t,j＝4.0hz,1h),3.83(s,3h),3.53(t,j＝6.8hz,2h),3.15(s,2h),2.73(t,j＝6.8hz,2h),1.89(s,2h),1.42(s,2h).
实施例2n-(1-(4-甲氧基苄基)哌啶-4-基)-3-((4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-2-基)硫代)丙酰胺(化合物2)的制备
将3-((4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-2-基)硫代)-n-(哌啶-4-基)丙酰胺(300mg,粗品，制备方法见实施例1第(3)步)和对甲氧基苯甲醛(147mg,1.09mmol)溶于甲醇(10ml)中，25℃下搅拌0.5小时，然后移至0℃，缓慢加入nabh4(68mg,1.8mmol)，加入完毕，移至25℃反应3小时，完全反应后，浓缩，残余物经硅胶柱层析(pe:ea＝1:1)得产物150mg，两步产率39.8％。
分子式：c24h28n4o3s分子量：452.57lc-ms(m/e)：453.2(m+h+)
1h-nmr(400mhz,meod)δ:8.10(dd,j＝1.2hz,j＝8.0hz,1h),7.73-7.77(m,1h),7.57(d,j＝8.0hz,1h),7.36-7.45(m,3h),7.00(d,j＝8.8hz,2h),4.58(s,2h),4.14(s,2h),3.91(s,1h),3.82(s,3h),3.52(t,j＝6.8hz,2h),3.00(s,2h),2.73(t,j＝6.8hz,2h),2.06-2.09(m,2h),1.72(s,2h).
实施例3n-(1-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-4-基)-4-(4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-2-基)丁酰胺(化合物3)的制备
(1)5-((2-氰基苯基)氨基)-5-氧代戊酸的制备
将2-氨基苯甲腈(2.0g,16.9mmol)，二氢-2h-吡喃-2,6(3h)-二酮(2.0g,17.5mmol)，溶于甲苯(20ml)中，氮气保护下，升至90℃反应4小时，冷却至25℃，过滤，将滤饼干燥后得产物(3.0g,产率76.4％)。
(2)4-(4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-2-基)丁酸的制备
将5-((2-氰基苯基)氨基)-5-氧代戊酸(2.0g,8.6mmol)，碳酸钾(2.4g,17.4mmol)，过氧化脲(2.4g,26.1mmol)溶于丙酮：水＝1：1的混合溶液(100ml)中，升温至80℃反应12小时，反应完毕，用6m盐酸调节ph为4，析出的固体过滤后，用二氯甲烷(30ml)洗涤，干燥后得产物(1.2g,产率60％)。
(3)n-(1-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-4-基)-4-(4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-2-基)丁酰胺的制备
将4-(4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-2-基)丁酸(0.2g,0.9mmol)，(4-氨基哌啶-1-基)(4-甲氧基苯基)甲酮(0.2g,0.9mmol)，n,n-二异丙基乙胺(0.2g,1.5mmol)，溶于二氯甲烷(10ml)中，加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯(0.6g,1.6mmol),25℃下反应4小时，减压蒸除溶剂，加入乙酸乙酯(30ml)，水洗(20ml×2)，无水硫酸钠干燥后，经柱层析(二氯甲烷:甲醇＝10:1)得终产物(170mg，产率44％)。
分子式：c25h28n4o4分子量：448.52lc-ms(m/e)：449.3(m+h+)
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:12.14(s,1h),8.06(d,j＝7.2hz,1h,),7.74-7.81(m,2h),7.58(d,j＝8.0hz,1h),7.42-7.46(m,1h),7.31(d,j＝8.4hz,2h),6.97(d,j＝8.8hz,2h),3.78(s,5h),3.02(s,2h),2.57-2.60(m,2h),2.11-2.15(m,2h),1.93-1.98(m,2h),1.71-1.74(m,2h),1.22-1.28(m,2h).
实施例4n-(1-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-4-基)-3-((4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-2-基)氧基)丙酰胺(化合物4)的制备
(1)2-(3-羟基丙氧基)喹唑啉-4(3h)-酮的制备
将钠(256mg,11.1mmol)加入到1,3-丙二醇(15ml)中，搅拌2小时，加入2-氯喹唑啉-4(3h)-酮(1g,5.6mmol)，60℃反应16小时。反应完毕，浓缩，残余物经硅胶柱层析(pe:ea＝2:1)得产物500mg，产率：40.6％。
(2)3-((4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-2-基)氧基)丙酸的制备
将2-(3-羟基丙氧基)喹唑啉-4(3h)-酮(0.5g,2.3mmol)溶于丙酮(50ml)中，加入琼斯试剂(2.2ml,5.7mmol,2.6m)，25℃反应2小时。反应完毕，蒸干溶剂，加入50ml水，用乙酸乙酯(100ml)萃取，浓缩有机相，残余物经硅胶柱层析(pe:ea＝1:1)得产物400mg，产率：74.3％。
(3)n-(1-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-4-基)-3-((4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-2-基)氧基)丙酰胺的制备
将3-((4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-2-基)氧基)丙酸(100mg,0.43mmol)，(4-氨基哌啶-1-基)(4-甲氧基苯基)甲酮(100mg，0.43mmol)、hatu(244mg，0.64mmol)，diea(111mg，0.86mmol)依次加入到二氯甲烷(50ml)中，25℃反应16小时。反应完毕后，减压蒸干溶剂，残余物经硅胶柱层析(dcm：meoh＝30:1)得产物35mg，产率：18.1％。
分子式：c24h26n4o5分子量：450.5lc-ms(m/e)：451.2(m+h+)
1h-nmr(400mhz,meod)δ:8.09(d,j＝8.0hz,1h),7.70(t,j＝7.6hz,1h),7.50(d,j＝6.8hz,1h),7.32-7.37(m,3h),6.99(d,j＝8.4hz,2h),4.73(d,j＝6.4hz,2h),3.95-3.98(m,1h),3.84(s,3h),2.90-3.30(m,2h),2.70(t,j＝6.0hz,2h),1.90-1.93(m,2h),1.35-1.46(m,4h).
实施例52-((3-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)硫代)喹唑啉-4(3h)-酮(化合物5)的制备
(1)叔丁基4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌嗪-1-甲酸酯的制备
将叔丁基哌嗪-1-甲酸酯(0.5g,2.68mmol)，hatu(1.22g,3.2mmol)，dipea(0.69g,5.34mmol)依次加入到二氯甲烷(30ml)中，25℃搅拌5分钟，然后加入4-甲氧基苯甲酸(0.41g,2.69mmol)，继续25℃反应1小时。反应完毕后，加入水(30ml)，用二氯甲烷(30ml×3)萃取，合并有机层，减压蒸干，残余物经硅胶柱层析(pe:ea＝10:1)得产物0.7g，产率：81.4％。
(2)(4-甲氧基苯基)(哌嗪-1-基)甲酮盐酸盐的制备
将叔丁基4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌嗪-1-甲酸酯(0.5g,1.56mmol)溶于二氯甲烷(15ml)中，然后滴入hcl二氧六环溶液(2ml,2m,4mmol)，25℃反应1小时，析出白色固体，过滤，滤饼用二氯甲烷(5ml)洗涤，收集固体，得产物0.34g，产率：84.9％。
(3)3-氯-1-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌嗪-1-基)丙基-1-酮的制备
将(4-甲氧基苯基)(哌嗪-1-基)甲酮盐酸盐(0.34g,1.32mmol)，tea(268mg,2.65mmol)加入到二氯甲烷(30ml)中，降至-5℃，然后缓慢滴加3-氯丙酰氯(169mg,1.33mmol)。保持-5℃反应1小时，反应完毕后，减压浓缩得粗品600mg。
(4)2-((3-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)硫代)喹唑啉-4(3h)-酮的制备
将3-氯-1-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌嗪-1-基)丙基-1-酮(600mg,粗品)，2-巯基喹唑啉-4(3h)-酮(400mg,2.24mmol)、碳酸钾(620mg,4.49mmol)，nai(336mg,2.24mmol)依次加入到乙腈(30ml)中，加热至85℃反应16小时。反应完毕后，减压蒸干溶剂，残余物经硅胶柱层析(dcm:meoh＝40:1)得产物120mg，两步产率：20.1％。
分子式：c23h24n4o4s分子量：452.53lc-ms(m/z)：453.2(m+h+)
1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ:10.18(s,1h),8.21(d,j＝8.0hz,1h),7.71(t,j＝7.2hz,1h),7.54(d,j＝7.6hz,1h),7.26(s,3h),6.91(d,j＝7.6hz,2h),3.84(s,3h),3.57-3.59(m,10h),2.93(s,2h).
实施例62-((3-((1-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-4-基)氨基)丙基)硫代)喹唑啉-4(3h)-酮(化合物6)的制备
(1)4-甲氧基苯甲酰氯的制备
将4-甲氧基苯甲酸(1.52g,10mmol)溶于5ml的氯化亚砜中，70℃反应5小时。反应完毕，浓缩，加入二氯甲烷(10ml)，再次浓缩得产物1.61g,产率94.1％。
(2)1-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-4-酮的制备
将4-甲氧基苯甲酰氯(1.6g,9.4mmol)溶到二氯甲烷中(15ml)，冰浴，加入三乙胺(1.01g,10mmol)和4-哌啶酮(0.99g,10mmol)，升至室温(25℃)反应一小时，反应完毕，加入100ml的二氯甲烷，用100ml的水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，经柱色谱(pe:ea＝5:1)分离得产物1.81g，产率82.2％。
(3)叔丁基(3-((4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-2-基)硫基)丙基)氨基甲酸酯的制备
将2-巯基喹唑啉-4(3h)-酮(178mg,1mmol)、n-boc-3溴丙胺(238mg,1mmol)、碳酸钾(138mg,1.0mmol)溶于乙腈(5ml)中，70℃反应1小时。反应完毕，浓缩，柱色谱分离(pe:ea＝3:1)得到产物180mg，产率53.7％。
(4)2-((3-氨基丙基)硫基)喹唑啉-4(3h)-酮的制备
将叔丁基(3-((4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-2-基)硫基)丙基)氨基甲酸酯(180mg,0.54mmol)溶于二氯甲烷(1ml)和三氟乙酸(1ml)的混合溶液中，室温反应(27℃)1小时。反应完毕，减压脱除溶剂得到产物110mg，产率87％。
(5)2-((3-((1-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-4-基)氨基)丙基)硫代)喹唑啉-4(3h)-酮的制备
将2-((3-氨基丙基)硫基)喹唑啉-4(3h)-酮(110mg,0.47mmol)和1-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-4-酮(109mg,0.47mmol)溶于甲醇中(3ml)，室温(24℃)搅拌1小时。加入硼氢化钠(95mg,2.5mmol)，继续反应1小时，浓缩，反相色谱分离(h2o:ch3cn＝10:1～1:1)得产物(23mg,产率10.8％)。
分子式：c24h28n4o3s分子量：452.57lc-ms(m/e):453.2(m+h+)
1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ:8.14-8.15(m,1h),7.63-7.64(m,1h),7.49-7.50(m,1h),7.33-7.35(m,3h),6.87-6.88(m,2h),6.10-6.30(m,1h),3.81(s,3h),3.35-3.36(m,2h),2.85-3.15(m,5h),2.06-2.15(m,5h),1.60-1.80(m,3h).
实施例74-甲氧基-n-(1-(3-((4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-2-基)巯基)丙酰基)哌啶-4-基)苯甲酰胺(化合物7)的制备
(1)叔丁基4-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)哌啶-1-甲酸酯的制备
将叔丁基4-氧代哌啶-1-甲酸酯(3g,15.1mmol)和(2,4-二甲氧基苯基)甲胺(2.6g,15.6mmol)溶于二氯甲烷(50ml)中，加入乙酸(50μl)和nabh(oac)3(10g,47.2mmol)，25℃搅拌反应3小时。将反应液用水淬灭，加入乙酸乙酯(50ml×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，所得粗品用硅胶柱层析纯化(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)，即得产物(3.9g,收率73.6％)。
(2)叔丁基4-氨基哌啶-1-甲酸酯的制备
将叔丁基4-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)哌啶-1-甲酸酯(3.9g,11.1mmol)溶于甲醇(50ml)中，加入pd/c(0.5g)，25℃下氢气加压温搅拌反应16小时。将反应液过滤，滤液旋干，所得粗品用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷:甲醇＝20:1)，即得产物(1.8g,收率81％)。
(3)4-甲氧基苯甲酰氯的制备
将4-甲氧基苯甲酸(1.5g,9.86mmol)加至socl2(15ml)中，加入dmf(50μl)，加热至80℃搅拌反应3小时。将反应液浓缩，所得粗品直接用于下一步反应。
(4)叔丁基4-(4-甲氧基苯甲酰胺)哌啶-1-甲酸酯的制备
将叔丁基4-氨基哌啶-1-甲酸酯(1.8g,9mmol)溶于二氯甲烷(50ml)中，加入三乙胺(1.9g,18.8mmol)，冷却至0℃，加入上一步制备的4-甲氧基苯甲酰氯。加入完毕，25℃搅拌反应16小时。将反应液浓缩，所得粗品用硅胶柱层析纯化(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)即得产物(2.3g,产率76.7％)。
(5)4-甲氧基-n-(哌啶-4-基)苯甲酰胺的制备
将叔丁基4-(4-甲氧基苯甲酰胺)哌啶-1-甲酸酯(2.3g,6.88mmol)溶于cf3cooh(5ml)和ch2cl2(10ml)的混合溶剂中，25℃搅拌反应3小时。将反应液浓缩，所得粗品直接用于下一步反应。
(6)n-(1-(3-氯丙酰基)哌啶-4-基)-4-甲氧基苯甲酰胺的制备
将4-甲氧基-n-(哌啶-4-基)苯甲酰胺(1.5g,粗品)溶于二氯甲烷(20ml)中，加入三乙胺(3g,29.6mmol)，冰水浴冷却下，加入3-氯丙酰氯(0.9g,7.1mmol)，25℃搅拌反应6小时。将反应液浓缩，所得粗品用硅胶柱层析纯化(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)即得产物(0.3g,两步产率13.4％)。
(7)4-甲氧基-n-(1-(3-((4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-2-基)巯基)丙酰基)哌啶-4-基)苯甲酰胺的制备
将n-(1-(3-氯丙酰基)哌啶-4-基)-4-甲氧基苯甲酰胺(0.2g,0.62mmol)和2-巯基喹唑啉-4(3h)-酮(0.15g,0.84mmol)溶于乙腈(10ml)中，加热至80℃搅拌反应16小时。将反应液过滤，滤液浓缩，所得粗品用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷:甲醇＝20:1)，再用甲醇重结晶即得产物(52mg,产率17.9％)。
分子式：c24h26n4o4s分子量：466.56lc-ms(m/e):467.2(m+h+)
1h-nmr(400mhz,dmso)δ:12.56(brs,1h),8.19(d,j＝7.6hz,1h),8.01(d,j＝7.6hz,1h),7.82(d,j＝8.8hz,2h),7.72-7.75(m,1h),7.50(d,j＝8.0hz,1h),7.40(t,j＝7.6hz,1h),6.95(d,j＝8.8hz,2h),4.32-4.39(m,1h),3.88-4.08(m,2h),3.78(s,3h),3.30-3.38(m,2h),3.09-3.16(m,1h),2.80-2.85(m,2h),2.65-2.75(m,1h),1.78-1.86(m,2h),1.38-1.59(m,2h).
实施例8n-(1-(4-氰基苯甲酰基)哌啶-4-基)-3-((4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-2-基)硫基)丙酰胺(化合物8)的制备
(1)4-氰基苯甲酰氯的制备
0℃下，将4-氰基苯甲酸(2.0g,13.6mmol)溶于二氯甲烷(20ml)中，缓慢滴加草酰氯(3.5g,27.6mmol)，滴加完毕，升至25℃反应3小时，浓缩，得产物(2.1g,产率93.3％)。(2)叔丁基(1-(4-氰基苯甲酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸酯的制备
0℃下，将4-氰基苯甲酰氯(2.0g,12.1mmol)溶于四氢呋喃(20ml)中，加入三乙胺(2.5g,24.7mmol)，搅拌下，缓慢加入叔丁基哌啶-4-基氨基甲酸酯(2.5g,12.5mmol)，加入完毕，升至25℃，搅拌反应2小时。反应完毕，将反应液浓缩，经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)，得产物(3.4g,产率85.2％)。
(3)4-(4-氨基哌啶-1-羰基)苯甲腈的制备
将叔丁基(1-(4-氰基苯甲酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸酯(3.0g,9.1mmol)溶于二氯甲烷(30ml)，加入三氟乙酸(10ml)，25℃下反应4小时。减压除去溶剂，加入饱和碳酸氢钠溶液(100ml)搅拌1小时后，加入乙酸乙酯(100ml×2)萃取，有机相合并，无水硫酸钠干燥后，将滤液浓缩得产物(1.8g,产率85.7％)。
(4)3-氯-n-(1-(4-氰基苯甲酰基)哌啶-4-基)丙酰胺的制备
0℃下，4-(4-氨基哌啶-1-羰基)苯甲腈(1.0g,4.4mmol)，三乙胺(0.9g,8.9mmol)溶于20ml二氯甲烷中，缓慢滴加3-氯丙酰氯(0.6g,4.7mmol)，滴加完毕，升至25℃反应2小时。反应完毕将滤液浓缩，经柱层析(洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯＝5:1)得产物(1.0g,产率71.4％)。
(5)n-(1-(4-氰基苯甲酰基)哌啶-4-基)-3-((4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-2-基)硫基)丙酰胺的制备
将3-氯-n-(1-(4-氰基苯甲酰基)哌啶-4-基)丙酰胺(0.2g,0.6mmol)，2-巯基喹啉-4(3h)-酮(0.1g,0.6mmol)，溶于乙腈(10ml)中，加入碳酸钾(0.2g,1.4mmol)，升温至80℃反应8小时，过滤，将反应液浓缩，经柱层析(二氯甲烷：甲醇＝10:1)得终产物(60mg,产率21.7％)。
分子式：c24h23n5o3s分子量：461.5lc-ms(m/e)：462.2(m+h+)
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:12.48(s,1h),8.02(d,j＝7.6hz,1h),7.90-7.94(m,3h),7.72-7.77(m,1h),7.50-7.54(m,1h),7.38-7.42(m,1h),4.21-4.30(m,1h),3.84(d,j＝7.2hz,1h),3.38-3.40(m,3h),3.03-3.17(m,2h),2.57-2.59(m,2h),1.61-1.85(m,2h),1.21-1.39(m,2h).
实施例9n-(1-(4-氯苯甲酰基)哌啶-4-基)-3-((4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-2-基)硫基)丙酰胺(化合物9)的制备
(1)叔丁基(1-(4-氯苯甲酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸酯的制备
将叔丁基哌啶-4-基氨基甲酸酯(2.00g,10.0mmol)加入到四氢呋喃(100ml)中，加入三乙胺(2.00g,20.0mmol)和4-氯苯甲酰氯(1.80g,10.3mmol)，25℃下反应2小时，加入水(50ml)淬灭，用乙酸乙酯(150ml×2)萃取，合并有机相，真空浓缩得产物(3.15g,产率93.2％)。
(2)(4-氨基哌啶-1-基)(4-氯苯基)甲酮的制备
将叔丁基(1-(4-氯苯甲酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸酯(3.15g,9.3mmol)溶解于二氯甲烷(50ml)中，加入三氟乙酸(10ml)，25℃下反应2小时，反应液浓缩，加入乙酸乙酯(350ml)和饱和碳酸氢钠溶液(250ml)，分液，水相再用乙酸乙酯(150ml)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠水溶液(350ml)洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，得产物(2.04g,产率91.9％)。
(3)3-氯-n-(1-(4-氯苯甲酰基)哌啶-4-基)丙酰胺的制备
将(4-氨基哌啶-1-基)(4-氯苯基)甲酮(500mg,2.1mmol)加入到四氢呋喃(20ml)中，加入3-氯丙酰氯(267mg,2.1mmol)，25℃反应4小时。加入饱和碳酸氢钠溶液(50ml)和乙酸乙酯(150ml)，分液，有机相用饱和食盐水(100ml)洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，得产物(653mg,产率94.7％)。
(4)n-(1-(4-氯苯甲酰基)哌啶-4-基)-3-((4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-2-基)硫基)丙酰胺的制备
将3-氯-n-(1-(4-氯苯甲酰基)哌啶-4-基)丙酰胺(80mg,0.24mmol)，2-巯基喹唑啉-4(3h)-酮(43mg,0.24mmol)，碳酸钾(33mg,0.24mmol)和碘化钠(3mg,0.02mmol)加入到乙腈(15ml)中溶解，升温至85℃反应16小时。将反应液冷却，抽滤，滤饼用乙腈(10ml)洗，滤液真空浓缩，粗品经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝50:1)纯化得终产物(27mg,收率23.6％)。
分子式：c23h23cln4o3s分子量：470.97lc-ms(m/z)：471.2(m+h+)
1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ:9.65(s,1h),8.22(d,j＝8.0hz,1h),7.80-7.70(m,1h),7.62-7.53(m,1h),7.45-7.35(m,3h),7.34-7.28(m,2h),5.63(d,j＝7.6hz,1h),4.80-4.50(m,1h),4.20-4.00(m,1h),3.88-3.60(m,1h),3.60-3.52(m,2h),3.28-2.82(m,2h),2.76-2.70(m,2h),2.10-1.90(m,2h).
实施例10n-(1-(4-氟苯甲酰基)哌啶-4-基)-3-((4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-2-基)硫基)丙酰胺(化合物10)的制备
(1)叔丁基(1-(4-氟苯甲酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸酯的制备
将叔丁基哌啶-4-基氨基甲酸酯(2g,9.99mmol)溶于二氯甲烷(50ml)中，加入4-氟苯甲酸(1.4g,9.99mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯(4.94g,12.99mmol)和n,n-二异丙基乙胺(3.23g,24.99mmol)，25℃下反应3小时。tlc(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)检测反应完毕，反应液用水洗(50ml)，饱和食盐水洗(50ml)，有机相用无水硫酸钠干燥，真空浓缩得产物(3.1g,产率96.3％)。
(2)(4-氨基哌啶-1-基)(4-氟苯基)乙酮的制备
将叔丁基(1-(4-氟苯甲酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸酯(1g,3.1mmol)溶于二氯甲烷(25ml)中，加入三氟乙酸(10ml)，25℃搅拌2小时，tlc检测反应完毕(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)，真空浓缩得产物(602mg,产率87.2％)。
(3)3-溴-n-(1-(4-氟苯甲酰基)哌啶-4-基)丙酰胺的制备
将(4-氨基哌啶-1-基)(4-氟苯基)甲酮(500mg,2.25mmol)溶于二氯甲烷(20ml)中，加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯(1.29g,3.38mmol)、n,n-二异丙基乙胺(728mg,5.63mmol)和3-溴丙酸(413.1mg,2.7mmol)，25℃反应16小时。tlc检测反应完毕(石油醚:乙酸乙酯＝3:1)，真空浓缩，粗品经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)得产物(505mg,产率62.9％)。
(4)n-(1-(4-氟苯甲酰基)哌啶-4-基)-3-((4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-2-基)硫基)丙酰胺的制备
将3-溴-n-(1-(4-氟苯甲酰基)哌啶-4-基)丙酰胺(200.4mg,0.561mmol)溶于乙腈(10ml)，加入2-巯基喹唑啉-4(3h)-酮(100mg,0.561mmol)、碳酸钾(116.4mg,0.842mmol)和碘化钠(84mg,0.561mmol)，加热至85℃反应16小时。tlc检测反应完毕(二氯甲烷:甲醇＝20:1)，反应液冷却，真空浓缩，粗品经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝50:1)纯化得终产物(35mg,产率13.7％)。
分子式：c23h23fn4o3s分子量：454.52lc-ms(m/z)：455.2(m+h+)
1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ:12.51(s,1h),8.02(d,j＝8.0,1h),7.94(d,j＝7.2,1h),7.77-7.73(m,1h),7.52(d,j＝8.4,1h),7.44-7.39(m,3h),7.28-7.24(m,2h),4.45-4.25(m,1h),3.84-3.83(m,1h),3.65-3.45(m,1h),3.39-3.36(m,2h),3.30-2.92(m,2h),2.59-2.55(m,2h),1.85-1.60(m,2h),1.45-1.22(m,2h).
实施例11n-(1-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-4-基)-3-((7-氧代-6,7-二氢-1h-吡咯并[4,3-d]嘧啶-5-基)硫代)丙酰胺(化合物11)的制备
(1)对甲氧基苯甲酰氯的制备
将4-甲氧基苯甲酸(5g,32.9mmol)溶于二氯亚砜(50ml)中，80℃反应3小时。反应完毕，冷却至室温，将溶剂蒸干得到标题化合物的粗品，未经纯化直接进行下一步。
(2)叔丁基(1-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸酯的制备
将对甲氧基苯甲酰氯(上一步粗品,32.9mmol)溶于二氯甲烷(100ml)中，0℃下加入叔丁基哌啶-4-基氨基甲酸酯(6.6g,33.0mmol)和三乙胺(6.6g,65.3mmol)，室温25℃搅拌2小时。反应完毕，加入100ml水，分液，蒸干有机相，残渣经硅胶柱层析(pe:ea＝1:1)得标题产物10g，产率：90.9％。
(3)(4-氨基哌啶-1-基)(4-甲氧基苯基)甲酮的制备
将叔丁基(1-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸酯(10g,29.9mmol)溶于二氯甲烷(50ml)中，加入20ml三氟乙酸，室温20℃反应1小时。反应完毕，蒸干溶剂，加入50ml碳酸氢钠溶液，用二氯甲烷(100ml×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到标题产物5.9g，产率84.3％。
(4)3-氯-n-(1-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-4-基)丙酰胺的制备
将(4-氨基哌啶-1-基)(4-甲氧基苯基)甲酮(3.0g,12.8mmol)溶于二氯甲烷(100ml)中，0℃下加入3-氯丙酰氯(2.4g,18.9mmol)，20℃反应2小时。反应完毕，加入少量的水淬灭多余的3-氯丙酰氯，蒸干，残渣经硅胶柱层析(dcm:meoh＝30:1)得标题产物2.78g，产率：66.8％。
(5)4-硝基-1h-吡唑-3-甲酸甲酯的制备
将4-硝基-1h-吡唑-3-甲酸(20g,127.3mmol)溶于甲醇(200ml)中，加入二氯亚砜(22.7g，190.8mmol)，20℃反应16小时。反应完毕，浓缩，加入甲基叔丁基醚(200ml)，过滤，得标题产物20g，产率91.7％。
(6)4-硝基-1-(四氢-2h-吡喃-2-基)-1h-吡唑-3-甲酸甲酯的制备
将4-硝基-1h-吡唑-3-甲酸甲酯(5g,29.2mmol)，对甲苯磺酸(0.5g,2.9mmol)溶于二氯甲烷(40ml)中，0℃滴入3,4-二氢-2h-吡喃(3.7g,44.0mmol)。滴加完毕，20℃反应4小时，加入100ml二氯甲烷和100ml水，分液，有机相旋干，残余物经硅胶柱层析(pe:ea＝10:1)得标题产物5.3g，产率：71.1％。
(7)4-硝基-1-(四氢-2h-吡喃-2-基)-1h-吡唑-3-甲酸的制备
将4-硝基-1-(四氢-2h-吡喃-2-基)-1h-吡唑-3-甲酸甲酯(3g,11.8mmol)溶于四氢呋喃(50ml)中，加入水合氢氧化锂(2.5g,59.5mmol)的水溶液(10ml)。20℃反应16小时，反应完毕，蒸干溶剂，加入30ml水，用2n的盐酸溶液调节ph值到5，用乙酸乙酯(50mlx3)萃取。有机相蒸干得标题产物1.98g，产率：69.5％。
(8)4-硝基-1-(四氢-2h-吡喃-2-基)-1h-吡唑-3-甲酰胺的制备
将4-硝基-1-(四氢-2h-吡喃-2-基)-1h-吡唑-3-羧酸(1.98g,8.2mmol)溶于二氯甲烷(20ml)中，加入草酰氯(1.25g，9.9mmol)搅拌1小时，蒸干溶剂，然后加入20ml二氯甲烷溶解，加入氨水2ml，20℃反应2小时。蒸干溶剂，残余物经硅胶柱层析(pe:ea＝1:1)得标题产物1.1g，产率：55.8％。
(9)4-氨基-1-(四氢-2h-吡喃-2-基)-1h-吡唑-3-甲酰胺的制备
将4-硝基-1-(四氢-2h-吡喃-2-基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(1.1g,4.6mmol)溶于甲醇(50ml)中，加入钯碳(150mg)，氢气环境下20℃反应16小时。反应完毕，过滤，蒸干溶剂得标题产物900mg，产率：93.1％。
(10)5-巯基-1-(四氢-2h-吡喃-2-基)-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-醇的制备
将4-氨基-1-(四氢-2h-吡喃-2-基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(900mg,4.3mmol)溶于吡啶(30ml)中，加入硫代异氰酸苯酯(580mg,4.3mmol)120℃反应16小时。反应完毕，冷却至室温，蒸干溶剂，加入水(20ml)，用浓盐酸调ph至酸性，有大量白色固体析出，过滤，干燥滤饼得标题产物700mg，产率：64.8％。
(11)3-((7-羟基-1-(四氢-2h-吡喃-2-基)-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)硫代)-n-(1-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-4-基)丙酰胺的制备
将5-巯基-1-(四氢-2h-吡喃-2-基)-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-醇(100mg,0.4mmol)，3-氯-n-(1-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-4-基)丙酰胺(130mg,0.4mmol)、碳酸钾(110mg,0.8mmol)，nai(60mg,0.4mmol)依次加入到乙腈(30ml)中，加热至85℃反应16小时。反应完毕后，减压蒸干溶剂，残余物经硅胶柱层析(dcm:meoh＝40:1)得标题产物98mg，产率：45.4％。
(12)n-(1-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-4-基)-3-((7-氧代-6,7-二氢-1h-吡咯并[4,3-d]嘧啶-5-基)硫代)丙酰胺的制备
将3-((7-羟基-1-(四氢-2h-吡喃-2-基)-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)硫代)-n-(1-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-4-基)丙酰胺(98mg,0.18mmol)溶于甲醇(20ml)中，加入浓盐酸(10ml)，25℃反应16小时。反应完毕后，减压蒸干溶剂，残余物经硅胶柱层析(dcm:meoh＝20:1)得标题产物49mg，产率：59.3％。
分子式：c21h24n6o4s分子量：456.5lc-ms(m/z)：457.2(m+h+)
1h-nmr(400mhz,meod-d4)δ:7.85-8.10(m,1h),7.36(d,j＝8.8hz,2h),6.98(d,j＝8.8hz,2h),3.93-3.99(m,1h),3.83(s,3h),3.45-3.48(m,2h),3.13(brs,2h),2.69(t,j＝6.8hz,2h),1.89(s,2h),1.42(s,2h),1.29(brs.,2h).
实施例12n-(1-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-4-基)-3-((7-甲基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)硫代)丙酰胺(化合物12)的制备
(1)2,4-二氯-7-甲基-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶的制备
0℃下，将2,4-二氯-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶(5.0g,26.6mmol)溶于四氢呋喃(50ml)中，加入三乙胺(4.0g,39.5mmol)，滴加碘甲烷(4.2g,29.6mmol)，滴加完毕升温至25℃反应16小时。反应完毕，将反应液倒入水(100ml)中，将析出的固体过滤，烘干，得产物(5.0g,产率93％)。
(2)2-氯-7-甲基-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-醇的制备
将2,4-二氯-7-甲基-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶(5.0g,24.8mmol)溶于1,4-二氧六环(50ml)中，滴加2m氢氧化钾溶液(60ml)升温至110℃反应12小时。反应完毕，冷却至0℃，滴加浓盐酸(30ml)，调ph＝3，将析出的固体过滤，烘干，得产物(3.5g,产率77％)。
(3)叔丁基(1-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸酯的制备
0℃下，将4-甲氧基苯甲酸(3.0g,19.7mmol)溶于二氯甲烷(30ml)中，滴加草酰氯(5.0g,39.4mmol)，升至25℃搅拌反应2小时后，浓缩，将溶剂蒸干后加入四氢呋喃(30ml)，冷却至0℃，加入三乙胺(4.0g,39.5mmol)，哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯(4.0g,20.0mmol)，升至25℃反应2小时。反应完毕，加入水(50ml)和乙酸乙酯(50ml)。分层得有机相，水相用乙酸乙酯(50ml×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液浓缩得产物(6g)，未经纯化直接用于下一步。
(4)(4-氨基哌啶-1-基)(4-甲氧基苯基)甲酮的制备
将上一步产物叔丁基(1-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸酯(6g)溶于二氯甲烷(50ml)中，加入三氟乙酸(20ml)，反应3小时。反应完毕，减压浓缩，加入饱和碳酸氢钠饱和溶液(100ml)，乙酸乙酯萃取(50ml×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩得产物(3.1g,两步产率67.4％)。
(5)3-((4-羟基-7-甲基-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)硫基)丙酸甲酯的制备
氮气保护下，将向3-巯基丙酸甲酯(5ml)中加入金属钠(0.5g,21.7mmol)，25℃下搅拌反应30分钟后，加入2-氯-7-甲基-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-醇(1.5g,8.2mmol)，升温至60℃，搅拌反应3小时。反应完毕，向反应液中加入无水乙醇(10ml)，搅拌30分钟后，浓缩，经柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1)得产物(130mg,产率5.9％)。
(6)3-((4-羟基-7-甲基-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)硫基)丙酸的制备
将3-((4-羟基-7-甲基-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)硫基)丙酸甲酯(130mg,0.49mmol)，溶于四氢呋喃(3ml)中，加入2m的氢氧化钠溶液(3ml)，25℃下搅拌反应5小时后，滴加2m的盐酸溶液(4ml)调节ph＝5，乙酸乙酯萃取(15ml×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩得产物(91mg,产率73.4％)。
(7)n-(1-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-4-基)-3-((7-甲基-4-氧代-4,7-二氢-3h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)硫代)丙酰胺的制备
将3-((4-羟基-7-甲基-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)硫基)丙酸(90mg,0.36mmol)，(4-氨基哌啶-1-基)(4-甲氧基苯基)甲酮(85mg,36mmol)，n,n–二异丙基乙胺(93mg,0.72mmol)，溶于二氯甲烷(10ml)中，加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n，n，n'，n'-四甲基脲六氟磷酸酯(205mg,0.54mmol),25℃下反应4小时后，减压浓缩，加入乙酸乙酯(30ml)，水洗(20ml×2)，有机相经无水硫酸钠干燥后，经柱层析(二氯甲烷：甲醇＝10:1)得终产物(35mg,产率20.7％)。
分子式：c23h27n5o4s分子量：469.56lc-ms(m/z)：470.2(m+h+)
1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ:11.30,(s,1h),7.28-7.31(m,2h),6.88(d,j＝8.8hz,2h),6.71(d,j＝3.6hz,1h),6.59(d,j＝3.2hz,1h),6.25(d,j＝7.6hz,1h),3.97-4.06(m,1h),3.87(s,1h),3.74(s,3h),3.49-3.53(m,2h),2.95-3.07(m,2h),2.65-2.68(m,2h),1.89-1.92(m,2h),1.60-1.68(s,2h),1.26-1.30(m,2h).
实施例13n-(1-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-4-基)-3-((4-氧代-3,5,7,8-四氢-4h-吡喃并[4,3-d]嘧啶-2-基)硫基)丙酰胺(化合物13)的制备
(1)4-氧代四氢-2h-吡喃-3-甲酸甲酯的制备
将氢化钠(5g,125mmol)加入到干燥的四氢呋喃(150ml)中，加入四氢-4h-吡喃-4-酮(5g,50mmol)和碳酸二甲酯(10.5ml,11.2g,125mmol)，45℃反应16小时。反应完毕，过滤，浓缩滤液，加入水(50ml)，用2n的盐酸溶液调节ph值到7，用乙酸乙酯(100ml×3)萃取，合并有机相，有机相浓缩，残余物经硅胶柱层析(pe:ea＝50:1)得产物2.1g，产率：26.6％。
(2)2-巯基-3,5,7,8-四氢-4h-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4-酮的制备
将4-氧代四氢-2h-吡喃-3-甲酸甲酯(1g,6.3mmol)溶于乙腈(50ml)中，加入硫脲(722mg,9.5mmol)和dbu(1.15g,7.6mmol)，85℃反应2小时。反应完毕，冷却至室温，蒸干溶剂，加入20ml水，用浓盐酸调ph至酸性，析出固体，过滤，干燥滤饼得900mg，产率：77.6％。
(3)n-(1-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-4-基)-3-((4-氧代-3,5,7,8-四氢-4h-吡喃并[4,3-d]嘧啶-2-基)硫基)丙酰胺的制备
将2-巯基-3,5,7,8-四氢-4h-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4-酮(150mg,0.81mmol)、3-氯-n-(1-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-4-基)丙酰胺(264mg，0.81mmol)、碳酸钾(225mg，1.63mmol)，碘化钠(122mg,0.81mmol)依次加入到乙腈(50ml)中，加热至85℃反应72小时。反应完毕后，减压蒸干溶剂，残余物经硅胶柱层析(dcm:meoh＝30:1)得产物14mg，产率：3.7％。
分子式：c23h28n4o5s分子量：472.56lc-ms(m/z)：473.2(m+h+)
1h-nmr(400mhz,meod)δ:7.36(d,j＝8.8hz,2h),6.98(d,j＝8.4hz,2h),4.44(s,2h),3.90-3.95(m,3h),3.83(s,3h),3.41(s,2h),3.05(brs,2h),2.64(s,4h),1.89(brs,2h),1.29-1.42(m,4h)。