一种右旋硫辛酸或其氨丁三醇盐的杂质和制备方法以及它们的检测方法与流程

本发明涉及药物化学和分析领域，具体涉及一种右旋硫辛酸或其氨丁三醇盐的杂质化合物、其制备方法以及右旋硫辛酸或其氨丁三醇盐有关物质的分析检测方法。
背景技术：
：α-硫辛酸(α-lipoicacid，结构式如下)，化学名为1，2-二硫戊环-3-戊酸，英文名l,2-dithiolane-3-pentanoicacid，具有优异的抗氧化作用，被誉为万能抗氧化剂。硫辛酸在临床上应用广泛，可用于治疗肝功能障碍、亚急性坏死脑病、神经性疾病、放射性伤害症、砷镉汞等重金属中毒等疾病的治疗。随着α-硫辛酸的药理药效学的深入研究，发现硫辛酸的两个对映体显示出不同的生物活性，其中r体生物活性远高于s体，其在抗hiv病毒和抗肿瘤方面也有显著的疗效。但r-(+)-硫辛酸的热稳定性差，在有氧条件下易聚合，不溶于水等现象，这些都影响了它的储存和生物利用度。因此，通常将r-(+)-硫辛酸制成金属盐或有机碱的盐来增加它稳定性、提高其溶解度和生物利用度，以满足医药市场需要。右旋硫辛酸氨丁三醇为α-硫辛酸消旋体进行拆分后，与氨基丁三醇成盐所得的化合物，可用于制备注射剂。然而α-硫辛酸极易氧化产生杂质，严重影响产品使用的安全性，为了保障临床用药安全，对样品中的杂质严格限制尤其重要。目前，α-硫辛酸质量标准已被美国药典和欧洲药典收录，对有关物质检测的色谱条件一致，但仅涉及部分已知杂质。文献(oxidationofα-lipoicacid,j.org.chem.,vol.40,no.1,1975)公开了多种α-硫辛酸的氧化降解产物。cn105254612a也公开了硫辛酸的两种氧化杂质。但本发明人深入研究发现，仍有部分杂质属于未知杂质，尚未分离确证。技术实现要素：本发明的目的是提供新的右旋硫辛酸或其氨丁三醇盐的杂质化合物、其制备方法和用途， 以及右旋硫辛酸或其氨丁三醇盐有关物质的分析检测方法，为右旋硫辛酸或其氨丁三醇盐的原料及制剂的生产和质量研究提供了保障。本发明的一个方面是提供一种右旋硫辛酸或其氨丁三醇盐的新的杂质化合物。本发明的第二方面是提供一种制备上述式(i)杂质化合物的方法。本发明的第三方面是提供上述式(i)杂质化合物的用途。本发明的第四方面是提供一种右旋硫辛酸或其氨丁三醇盐有关物质的检测方法。为此，本发明提供以下技术方案：根据本发明的第一方面，提供一种右旋硫辛酸或其氨丁三醇盐的杂质化合物，其结构如式(i)所示，式(i)化合物化学名为(r)-5-(1,2-二硫戊烷-3-基)戊酸-2,2-二氧化物。所述杂质化合物可以作为杂质对照品使用，例如在右旋硫辛酸或其氨丁三醇原料或制剂的有关物质检查中作为杂质对照品。根据本发明的第二方面，提供一种制备上述式(i)化合物的方法，包括步骤：1)将右旋硫辛酸氨丁三醇用纯化水溶解，配制成0.01～1g/ml的水溶液，用光照射该水溶液，得到一次制备样品溶液；例如配制成0.06g/ml的水溶液，用4500lx±500lx强光照射水溶液15天；2)将上述样品溶液经过高效液相色谱(hplc)分离制备得到式(i)所示的杂质化合物，所述hplc制备采用二次制备法，其中：一次制备的条件是：固定相：十八烷基硅烷键合硅胶流动相：a：0.15％磷酸水溶液，b：乙腈检测波长：215nm流速：200ml/min柱温：室温洗脱方式：梯度洗脱收集保留时间约50-60min处的目标峰对应的物质。将一次制备收集的目标物质进行二次制备，二次制备的条件是：固定相：十八烷基硅烷键合硅胶流动相：a：0.1％的三氟乙酸水溶液，b：乙腈检测波长：215nm流速：200ml/min柱温：室温洗脱方式：梯度洗脱收集保留时间约31-33min处的目标峰对应的物质。根据本发明的第三方面，提供式(i)所示的化合物在右旋硫辛酸或其盐(例如氨丁三醇盐)及其制剂的有关物质的检查中作为杂质对照品的用途。所述制剂可以是注射剂或固体制剂，所述固体制剂可以是片剂或胶囊等。根据本发明的第四方面，提供一种右旋硫辛酸或其氨丁三醇盐的有关物质的检测方法，所述方法为hplc法，检测条件为：固定相：十八烷基硅烷键合硅胶流动相：a：0.02％磷酸溶液，b：0.02％磷酸溶液-乙腈(40：60)检测波长：215nm柱温：室温流速：1.0ml/min梯度洗脱：本发明提供了一种新的右旋硫辛酸或其氨丁三醇盐的杂质化合物及其制备方法，该杂质可以作为杂质对照品，用于右旋硫辛酸或其氨丁三醇盐及其制剂的质量研究。此外还提供了右旋硫辛酸或其氨丁三醇盐的有关物质的检测方法，可以有效分离检测右旋硫辛酸或其氨丁三醇盐及其多种氧化杂质、光照杂质等的含量，为右旋硫辛酸或其氨丁三醇盐及制剂的质量研究提供了更准确和适用的分析方法。附图说明图1：式(i)化合物的1h-nmr核磁共振谱图；图2：根据usp收录的方法进行的右旋硫辛酸氨丁三醇不同降解样品的分析检测图；图3：根据usp收录的方法进行的氧化降解产物的峰纯度检测图；图4：根据本发明方法进行的右旋硫辛酸氨丁三醇不同降解样品的分析检测图；图5：根据本发明方法进行的右旋硫辛酸氨丁三醇有关杂质的分析检测图。图6：根据本发明方法进行的式(i)杂质化合物的对照品定位分析检测图。具体实施方式以下实施例仅是举例说明的作用，以便技术人员更好地理解本发明的优点，而不以任何方式限制本发明所揭示的内容。所采用的仪器和试剂均为本领域普通市售产品。本发明hplc检测的柱温为室温，优选25-35℃。未特别说明的步骤均为本领域的常规操作，例如进样前先平衡柱子等。实施例1：(r)-5-(1,2-二硫戊烷-3-基)戊酸-2,2-二氧化物(式i化合物)的制备将60g右旋硫辛酸氨丁三醇溶解在1000ml纯化水中，配制成0.06g/ml的溶液，以4500lx±500lx强光照射水溶液15天，得到一次制备样品溶液。hplc一次制备的色谱条件：仪器：创新通恒制备液相lc6000，制备柱dac100，直径10cm固定相：十八烷基硅烷键合硅胶，1.5kg装料量，10μm流动相：a-0.15％磷酸水溶液，b-乙腈检测波长：215nm流速：200ml/min柱温：25℃进样量：200ml洗脱方式：梯度洗脱收集保留时间约50-60min处的目标峰对应的物质。该粗品纯化过程中，目标峰是在约53-54min处的较宽的峰，呈小包状，收集时可选择将50-60min段全部收集，再进行下一步纯化。将一次制备收集的目标物质浓缩至一半体积，进行二次制备，hplc二次制备的色谱条件：仪器：创新通恒制备液相lc6000，制备柱dac100，直径10cm固定相：十八烷基硅烷键合硅胶，1.5kg装料量，10μm流动相：a：0.1％的三氟乙酸水溶液，b：乙腈检测波长：215nm流速：200ml/min柱温：25℃进样量：200ml洗脱方式：梯度洗脱收集保留时间约32.1min处的目标峰对应的物质。将收集的目标物质浓缩后得到约136mg式(i)化合物。结构确证：1)质谱仪器：agilent6540bq-tof质谱仪，离子源：电喷雾，质量分析器：离子阱。测得供试品准分子的离子峰[m-h]-的m/z为237.01，是式(i)化合物(c8h16o4s2，mw＝238.32)减一质子得到，质谱数据与式(i)化合物的分子量一致。2)1h-nmr核磁共振谱仪器：brukerdrx500，溶剂dmso-d6，内标tms，温度303k。核磁共振氢谱测定数据如下：化学位移(ppm)质子数多重性归属12.0031s11位氧原子上的活泼氢3.621-2.8453m1位-ch2-上的质子，以及4位＝ch-上的质子2.299-1.9743m9位-ch2-上的质子，以及5位-ch2-上的其中一个质子1.7591m5位-ch2-上的其中一个质子1.615-1.0866m6,7,8位-ch2-上的质子通过分析氢谱，可以判断该化合物为(r)-5-(1,2-二硫戊烷-3-基)戊酸-2,2-二氧化物，即式(i)化合物。实施例2：根据usp收录的方法分离检测右旋硫辛酸氨丁三醇有关物质本实施例考察usp收录的方法对右旋硫辛酸氨丁三醇样品中主成份与有关物质的分离效果。右旋硫辛酸氨丁三醇的各样品的制备：样品1(未破坏)：取右旋硫辛酸氨丁三醇约15mg，精密称定，置10ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。样品2(氧化破坏)：取右旋硫辛酸氨丁三醇约15mg，精密称定，置10ml量瓶中，加3％过氧化氢溶液1ml溶解，立即用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。样品3(高温破坏)：取右旋硫辛酸氨丁三醇约15mg，精密称定，置10ml量瓶中，加水1ml溶解后，于100℃水浴中加热2.5h后，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。样品4(光照破坏)：取右旋硫辛酸氨丁三醇约15mg，精密称定，加水1ml溶解，置10ml量瓶中，于4500lx±500lx照度下，放置18.5h，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。样品5(酸破坏)：取右旋硫辛酸氨丁三醇约15mg，精密称定，置10ml量瓶中，加0.1mol/l盐酸溶液1ml，室温放置3.5h后，加入0.1mol/l氢氧化钠溶液1ml中和，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。样品6(碱破坏)：取右旋硫辛酸氨丁三醇约15mg，精密称定，置10ml量瓶中，加1mol/l氢氧化钠溶液1ml，室温放置4h后，加入1mol/l盐酸溶液1ml中和，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。检测方法：hplc法，取各样品溶液进样，注入液相色谱仪，记录色谱图。检测条件为：仪器：lc-20at高效液相色谱仪(日本岛津，shimpackvp-ods，4.6mm×250mm，5μm)固定相：十八烷基硅烷键合硅胶流动相：甲醇-缓冲盐(0.68g/l磷酸二氢钾溶液)-乙腈(58：46：9)，用磷酸溶液(8.3→100)调节ph值至3.0～3.1检测波长：215nm柱温：35℃流速：1.2ml/min进样量：20μl检测图谱：见图2、图3。从图2可以看出：右旋硫辛酸氨丁三醇极易被氧化；且在其他降解条件下，与氧化降解产物相同保留时间处，也存在其他降解杂质色谱峰；经峰纯度考察(图3)，氧化降解产物峰纯度指数为0.001224，小于0.998，提示此色谱峰不是单一色谱峰，该检测方法无法将氧化杂质分离，不能准确的对单个氧化杂质进行定量，且不能用此方法对氧化杂质进行制备以用于 有关物质检测方法学研究。实施例3：根据本发明的方法分离检测右旋硫辛酸氨丁三醇有关物质本实施例考察本发明的方法对右旋硫辛酸氨丁三醇样品中主成份与有关物质的分离效果。右旋硫辛酸氨丁三醇的各样品的制备：样品1(未破坏)：取右旋硫辛酸氨丁三醇约15mg，精密称定，置10ml量瓶中，用稀释液[0.05％磷酸溶液-乙腈(85:15)]溶解并稀释至刻度，摇匀。样品2(氧化破坏)：取右旋硫辛酸氨丁三醇约15mg，精密称定，置10ml量瓶中，加3％过氧化氢溶液1ml溶解，立即加稀释液[0.05％磷酸溶液-乙腈(85:15)]稀释至刻度，摇匀。样品3a(高温破坏-固态)：取右旋硫辛酸氨丁三醇约15mg，精密称定，置10ml量瓶中，于100℃水浴中加热2h后，用稀释液[0.05％磷酸溶液-乙腈(85:15)]溶解并稀释至刻度，摇匀。样品3b(高温破坏-液态)：取右旋硫辛酸氨丁三醇约15mg，精密称定，置10ml量瓶中，加水1ml溶解后，于100℃水浴中加热2h后，用稀释液[0.05％磷酸溶液-乙腈(85:15)]稀释至刻度，摇匀。样品4a(光照破坏-固态)：取右旋硫辛酸氨丁三醇约15mg，精密称定，置10ml量瓶中，于4500lx±500lx照度下，放置24h，用稀释液[0.05％磷酸溶液-乙腈(85:15)]溶解并稀释至刻度，摇匀。样品4b(光照破坏-液态)：取右旋硫辛酸氨丁三醇约15mg，精密称定，加水1ml溶解，置10ml量瓶中，于4500lx±500lx照度下，放置24h，用稀释液[0.05％磷酸溶液-乙腈(85:15)]稀释至刻度，摇匀。样品5(酸破坏)：取右旋硫辛酸氨丁三醇约15mg，精密称定，置10ml量瓶中，加0.1mol/l盐酸溶液1ml，室温放置8h后，加入0.1mol/l氢氧化钠溶液1ml中和，用稀释液[0.05％磷酸溶液-乙腈(85:15)]稀释至刻度，摇匀。样品6(碱破坏)：取右旋硫辛酸氨丁三醇约15mg，精密称定，置10ml量瓶中，加1mol/l氢氧化钠溶液1ml，室温放置8h后，加入1mol/l盐酸溶液1ml中和，用稀释液[0.05％磷酸溶液-乙腈(85:15)]稀释至刻度，摇匀。样品7(碱破坏-高温)：取本品约15mg，精密称定，置10ml量瓶中，加1mol/l氢氧化钠溶液1ml，于100℃水浴中加热0.5h后，加入1mol/l盐酸溶液1ml中和，用稀释液[0.05％磷酸溶液-乙腈(85:15)]稀释至刻度，摇匀。检测方法：hplc法，取各样品溶液进样，注入液相色谱仪，记录色谱图。检测条件为：仪器：lc-20at高效液相色谱仪(日本岛津，shimpackvp-ods，4.6mm×250mm，5μm)固定相：十八烷基硅烷键合硅胶流动相：a：0.02％磷酸溶液，b：0.02％磷酸溶液-乙腈(40：60)检测波长：215nm柱温：25℃流速：1.0ml/min进样量：20μl洗脱方式：梯度洗脱检测图谱：如图4所示。从图4可以看出，在本发明的色谱条件下，分离出4个氧化降解杂质的单峰，右旋硫辛酸氨丁三醇与降解杂质之间的分离度良好，各杂质之间也得到了有效分离。本发明的方法能够有效分离检测右旋硫辛酸氨丁三醇样品中存在的降解杂质，尤其是能更定量分析四种主要的氧化杂质，可作为右旋硫辛酸氨丁三醇有关物质的检测方法。实施例4：根据本发明的方法检测右旋硫辛酸氨丁三醇有关物质的含量本实施例示范性地说明本发明的方法用于检测右旋硫辛酸氨丁三醇有关物质的含量。1、供试品溶液制备取右旋硫辛酸氨丁三醇约15.02mg，精密称定，置10ml量瓶中，加3％过氧化氢溶液1ml溶解，立即加稀释液[0.05％磷酸溶液-乙腈(85:15)]稀释至刻度，摇匀。2、光照降解杂质(式(i)化合物)对照品溶液的制备取光照降解杂质约1mg，用甲醇溶解并稀释制成每1ml中约含1mg的溶液，摇匀。3、检测操作检测方法：hplc法，取供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。检测条件为：仪器：lc-20at高效液相色谱仪(日本岛津，shimpackvp-ods，4.6mm×250mm，5μm)固定相：十八烷基硅烷键合硅胶流动相：a：0.02％磷酸溶液，b：0.02％磷酸溶液-乙腈(40：60)检测波长：215nm柱温：25℃流速：1.0ml/min进样量：20μl洗脱方式：梯度洗脱检测结果：图谱如图5、图6所示。结果分析：色谱峰1、2、3、4为氧化降解杂质峰，分别为22.716、26.337、28.542、29.619分钟，与实施例3是一致的，相对主峰的保留时间分别为0.59、068、0.74和0.76，峰面积百分比分别为3.058％、6.748％、8.320％、6.648％；色谱峰6为右旋硫辛酸氨丁三醇峰，保留时间为38.798分钟；色谱峰7为光照降解杂质(式(i)化合物)峰，保留时间为44.360分钟，相对主峰的保留时间分别为1.14，峰面积百分比为0.043％；光照降解杂质(式(i)化合物)峰对照品色谱峰保留时间为44.093分钟，与色谱峰7基本一致；色谱峰5为未知杂质。从上述实施例可以看出，本发明方法的检测条件优于usp收录的检测方法，能够有效分离检测右旋硫辛酸或其氨丁三醇盐的有关物质的含量，尤其是定量检测四个氧化降解杂质和光照降解杂质。相比现有技术方法，本发明的方法更适用于右旋硫辛酸或其氨丁三醇盐和制剂的质量研究和控制。以上实施例仅是解释说明的目的，本领域普通技术人员可以在本发明描述的基础上进行 改变和修饰，例如基于本发明调整hplc检测条件，如样品溶液配制、进样量、柱温、流动相比例，保留时间等发生的较小变化均属于本发明的构思，只要在不违背本发明的精神前提下做出的改变，均属于本发明所揭示和保护的范围。当前第1页12