Smoothened多肽及使用方法
【专利摘要】本发明公开一种分离的或纯化的多肽或肽模拟物，或其脂肪酸衍生物，所述多肽或肽模拟物包括Smoothened(SMO)蛋白一部分、其功能片段、或所述部分或所述功能片段的功能变体的氨基酸序列，其中所述部分包括SMO蛋白任一胞内环的氨基酸序列，其中所述功能片段包括所述胞内环的至少7个连续氨基酸，并且其中所述功能片段或功能变体抑制患病细胞的增殖。还提供了相关缀合物、核酸、重组表达载体、宿主细胞、和药物组合物。本发明还提供抑制患病细胞增殖、治疗或预防癌症、治疗肿瘤或银屑病、和抑制参与Hedgehog信号传导途径的基因表达由此抑制Hedgehog信号传导途径的方法。
【专利说明】SMOOTHENED多肽及使用方法
[0001] 本申请是申请日为2007年10月30日、题为“SMOOTHENED多肽及使用方法”的中国专利申请N0.200780046085.5的分案申请。
_2] 相关申请的交叉参考
[0003]本专利申请要求于2006年10月31日提交的美国临时专利申请号60/855，422的利益，其通过引用结合于此。
_4] 通过引用结合的以电子形式提交的材料
[0005]计算机可读的核苷酸/氨基酸序列表通过引用完全结合于此，其与本申请同时提交，并且标识如下:一个于2007年10月24日生成的名为“701943Sequence_ST25.TXT”的53，510字节ASCII (文本)文件。
[0006]发明背景
[0007]癌症是由信号转导途径的调控不良引起的。一种这样的途径是Hedgehog(HH)信号转导途径，其包括Patch(Ptch)和Smoothened(SMO)蛋白。HH途径是胚胎细胞生长必需的(Beachy等，自然(Nature),432:324-331 (2004))，并且发现其在一些癌症中调控不良，所述癌症包括乳腺癌(Katano 等，癌症通信(Cancer Lett.)，227:99-104(2005))、前列腺癌(Sanchez 等，美国国家科学院学报(Proc.Natl.Acad.Sc1.U.S.A.), 101:12561-12566 (2004))、胃癌(Berman 等，自然(Nature) ,425:846-851 (2003))、结肠癌(Douard 等，手术(Surgery)，139:665-670(2006))、肝癌(Sicklick等，癌发生(Carcinogenesis), 27:748-757(2006))、黑素瘤(Pons等，Clin.Transl.Qncol.，8:466-474(2006))、基细胞癌(Lam等，癌基因(Oncogene), 18，833-836(1999))、和成神经管细胞瘤(Berman 等，科学.(Science)，297，1559-1561 (2002)和 Romer 等，癌症研究(CancerRes.)，65，4975-4978 (2005))。存在对在癌症治疗中使用的HH途径的抑制剂的需求。
[0008]发明简沭
[0009]本发明提供分离的或纯化的多肽或肽模拟物(peptidomimetic)，及其脂肪酸衍生物。所述多肽或肽模拟物包括与SMO蛋白的一部分相对应的氨基酸序列，其中所述部分包括SEQ ID N0s:2-4中的任一氨基酸序列，其中每个序列通常与SMO蛋白的胞内环相对应。所述多肽或肽模拟物可以是所述部分的功能片段，所述功能片段包括SEQ ID N0:2、3、或4的至少7个连续氨基酸。所述多肽或肽模拟物可以是所述部分或所述功能片段的功能变体。本发明的多肽和肽模拟物(包括其脂肪酸衍生物，功能片段和功能变体)抑制HH途径和/或患病细胞的增殖。
[0010]本发明还提供包括任意本发明的多肽或肽模拟物、或其脂肪酸衍生物的缀合物。本发明还提供编码本发明多肽的核酸，以及相关的重组表达载体和宿主细胞。此外，本发明提供包括任意本发明的多肽、肽模拟物、脂肪酸衍生物、缀合物、核酸、和重组表达载体的药物组合物。
[0011]本发明的药物组合物有效用于抑制患病细胞增殖，以致本发明还提供一种抑制患病细胞增殖的方法。所述方法包括使所述患病细胞与有效抑制患病细胞增殖的量的本发明药物组合物接触。
[0012]本发明提供本发明药物组合物的其它应用方法，包括在患者中治疗或预防癌症的方法，在患者中治疗银屑病的方法，在患者中治疗肿瘤的方法，以及在患病细胞中抑制选自Gl1-1、Gl1-2、Gli_3、Ptch、Shh, Smo、或 NES 的基因的表达的方法。
[0013]数副附图简述
[0014]图1描述按照本发明的一个实施方案，作为SM0il-l、SM0i2_l、和SM0i3_l脂化多肽浓度的函数的，在48小时处理时存活的MCF-7乳腺癌细胞(相对于对照)的％。
[0015]图2描述在用0、5、或10 μ M(分别为白色、黑色、线条)环杷明(cyclopamine)、SM0i3-l、或SM0i2-l处理时，胃腺癌细胞的存活细胞量。
[0016]图3描述按照本发明的一个实施方案，在用包括基于SMO蛋白第三个胞内环的氨基酸序列的多肽处理48小时时，存活的MCF-7细胞(相对于对照)的％。
[0017]图4描述按照本发明的一个实施方案,在用SM0i2_8或逆反(retroinverso)类似物即SM0i2-16和SM0i2-17处理48小时时，存活的SK_Mel2细胞的％。
[0018]图5描述按照本发明的一个实施方案，在用环杷明、SM0i3_l、或SM0i2_l多肽处理48小时时，DU145细胞中HH途径的基因的相对表达。
[0019]图6描述按照本发明的一个实施方案，在用SM0i2_8或在SM0i2_8位置5处代替Trp残基包含苯甲酰苯丙氨酸(BPA)残基的多肽模拟物处理60小时时，存活的SK_Mel2细胞的％。
[0020]图7描述按照本发明的一个实施方案,在暴露于肽化合物48小时后,在SK_Mel2黑素瘤细胞中通过MTT测定法确定的第二胞内环衍生物(SM0i2-12(圆形)和SM0i2-17(方形))的毒性。
[0021]图8描述按照本发明的一个实施方案，随着增高SM0i2-8/WMC_77比对探针测量的荧光发射强度。
[0022]图9描述按照本发明的一个实施方案，在暴露于SM0i2_12(菱形)或SM0i2_20(方形)时，对乳腺癌、黑素瘤、肝细胞瘤(heptaoma)、和胰腺癌细胞的生长抑制。
[0023]图10描述SM0i2_8 (菱形)和SM0i2_16 (三角形)肽的圆二色性光谱。
[0024]发明详沭
[0025]SMO蛋白是在Hedgehog(HH)信号转导途径中起作用的跨膜蛋白(参见，例如，Huangfu 和 Anderson,发育学(Development) 133:3-14 (2006))，如讨论地,其与一些癌症相关，例如，乳腺癌、前列腺癌、胃癌等。这些蛋白包括一个胞外结构域、7个跨膜结构域、3个胞内环、和一个胞内结构域。SMO蛋白在一般拓扑学方面与G蛋白偶联受体(GPCR)相似，但是似乎以与GPCRs不同的方式进行信号传导。SMO蛋白的实例包括人SMO蛋白(例如，GenBank登记号NP_005622 (SEQ ID NO:1)),及其直向同源物，诸如小鼠SMO蛋白(例如，GenBank登记号NP_795970)、大鼠SMO蛋白(例如，GenBank登记号NP_036939)、果蝇SMO蛋白(例如，GenBank登记号NP_523443)、斑马鱼SMO蛋白(例如，GenBank登记号NP_571102)、鸡SMO蛋白、(例如，GenBank登记号AAB84389)、非洲爪蟾SMO蛋白(例如，GenBank 登记号 AAK15464)。
[0026]本发明提供分离的或纯化的多肽，其包括与SMO蛋白的一部分相对应的氨基酸序列，其中所述部分包括SEQ ID NOs: 2-4中的任一氨基酸序列，所述每一条序列与SMO蛋白的胞内环相同或基本相同。例如，SEQID NO:2在SMO第二胞内环的N-端包含一个额外的氨基酸(Leu)。[0027]当用于本文时，术语"多肽"是指通过一个或多个肽键连接的单链氨基酸。在这点上，该术语包括任何长度的肽、寡肽、和多肽，条件是存在至少一个肽键。为了本发明的目的，本发明的多肽包括至少6个肽键，例如，10个或更多个肽键。
[0028]本发明多肽包括SMO蛋白的一部分的氨基酸序列。即，本发明的多肽不包括任何全长的、野生型SMO蛋白，例如，SEQ ID NO:1。在这一方面，本发明多肽包括野生型SMO蛋白的少于约780个氨基酸。例如，本发明多肽包括野生型SMO蛋白的少于约500个氨基酸。最优选地，本发明多肽包括野生型SMO蛋白的少于约75个，例如，约50个氨基酸。本发明的多肽包括约10-约12个氨基酸(排除任何CPP，如本文所讨论)也是优选的。
[0029]按照本发明的一个实施方案，SMO蛋白的所述部分包括SEQ ID NOs: 2-4中的任一氨基酸序列。在这一点上，本发明的多肽可以包括、基本由、或由SEQ ID N0:2、3、或4的氨基酸序列组成。
[0030]备选地，SMO蛋白的所述部分包括SEQ ID NOs: 5-8中的任一氨基酸序列。在这一点上，本发明的多肽可以包括、基本由、或由SEQ ID N0:5、6、7、或8的氨基酸序列组成。
[0031]本文所述的本发明多肽的功能片段包含在本发明范围之内。当参照本发明的多肽使用时，术语"功能片段"是指本发明多肽的任何部分(part)或部分(portion)，所述部分(part)或部分(portion)保留其作为一部分的多肽(亲本多肽)的生物学活性。所述功能片段可以是包括其作为一部分的多肽的连续氨基酸的任何片段，条件是所述功能片段抑制患病细胞的增殖。功能片段包括，例如，本发明多肽的那些部分，所述那些部分保留与亲本多肽以相似程度、相同程度、或更高程度抑制增殖、或治疗或预防疾病(例如，癌症、肿瘤、银屑病)的能力。参照亲本多肽，所述功能片段可以包括，例如，亲本多肽的约10%、25%、30%、50%、68%、80%、90%、95%,、或更多。
[0032]所述功能片段可以在氨基或羧基端、或两端包括额外的氨基酸，例如，在亲本多肽的氨基酸序列中不存在的氨基酸。理想地，所述额外的氨基酸不妨碍所述功能片段的生物学功能，例如，抑制增殖 、或治疗或预防疾病(例如，癌症，肿瘤，银屑病)。更理想地，当与所述亲本多肽的生物学活性相比较时，所述额外的氨基酸增强生物学活性。
[0033]在本发明的一个优选实施方案中，所述功能片段包括SEQ ID N0:2、3、或4的至少5个连续的氨基酸，并且抑制患病细胞的增殖。在本发明的一个更优选实施方案中，所述功能片段包括SEQ ID N0:2、3、或4的至少7个连续的氨基酸。在本发明的另一个优选实施方案中，所述功能片段包括SEQ ID N0:2、3、或4的至少4个连续的氨基酸并且抑制患病细胞的增殖。所述功能片段可以，例如，包括选自由SEQ ID NOs:5-8组成的组的一个氨基酸序列。例如，所述功能片段可以包括选自由SEQ ID NOs:9-33组成的组的一个氨基酸序列。此外，本发明的功能片段可以基本由或由SEQ ID NOs:9-33中任一的氨基酸序列组成。
[0034]本发明多肽的功能变体、以及本文所述的本发明功能片段的功能变体也包括在本发明范围之内。当用于本文时，术语"功能变体"是指与亲本多肽或亲本功能片段具有基本的或显著的序列同一性或相似性的多肽，所述功能变体保留其作为变体的多肽或功能片段的生物学活性。功能变体包括，例如，本文所述的本发明多肽(亲本多肽)的那些变体和本文所述的功能片段(亲本功能片段)的那些变体，所述变体保留以与所述亲本多肽或亲本功能片段相似的程度、相同的程度、或更高的程度抑制患病细胞增殖的能力。参照所述亲本多肽或亲本功能片段，所述功能变体可以，例如，与所述亲本多肽或亲本功能片段的氨基酸序列有至少约30%、50%、75%、80%、90%、98%或更多的同一性。
[0035]所述功能变体可以，例如，包括具有至少一个保守氨基酸置换的亲本多肽或亲本功能片段氨基酸序列。在这一点上，所述功能变体可以包括具有2个、3个、4个、5个、或更多个保守氨基酸置换的亲本多肽或亲本功能片段的氨基酸序列。备选地或另外地，所述功能变体可以包括具有至少一个非保守氨基酸置换的亲本多肽或亲本功能片段的氨基酸序列。在这一点上，所述功能变体可以包括具有2个、3个、4个、5个、或更多个非保守氨基酸置换的亲本多肽或亲本功能片段的氨基酸序列。在这种情形中，对于所述非保守氨基酸置换，优选不妨碍或抑制所述功能变体的生物学活性。优选地，所述非保守氨基酸置换提高所述功能变体的生物学活性，以致当与所述亲本多肽或亲本功能片段相比较时，所述功能变体的生物学活性提高。
[0036]所述功能变体优选地包括一个或多个保守氨基酸置换。在本领域内，保守氨基酸置换是已知的，并且包括这样的氨基酸置换，即，其中一个具有某种物理和/或化学特性的氨基酸被换为另一个具有相同化学或物理特性的氨基酸。例如，保守氨基酸置换可以是用酸性氨基酸置换另一个酸性氨基酸(例如，Asp或Glu)，用具有非极性侧链的氨基酸置换另一个具有非极性侧链的氨基酸(例如，Ala, Gly, Val, He, Leu, Met, Phe, Pro, Trp, Val,等)，用碱性氨基酸置换另一个碱性氨基酸(Lys，Arg，等)，用具有极性侧链的氨基酸置换另一个具有极性侧链的氨基酸(Asn, Cys, Gin, Ser, Thr, Tyr,等)，用芳香氨基酸(Trp, Phe, Tyr,等)置换另一个芳香氨基酸，等。
[0037]理想地，本发明的功能变体包括SEQ ID NO: 2、3、或4的至少4个连续氨基酸，与所述亲本多肽或亲本功能片段具有至少75%的序列同一性(例如，80%, 85%, 90%, 95%的序列同一性)，并且抑制患病细胞增殖。
[0038]例如，所述功能变体可以是SEQ ID NOs: 17-21和23_33中任一序列的功能变体。在这一点上，所述功能变体可以包括SEQ ID NOs:38-54和57-59中任一氨基酸序列，其中Xaa选自由Tyr、Phe、或BPA.组成的组。
[0039]此外，例如，所述功能变体可以是SM0i2_8(SEQ ID NO:23)的功能变体，其包括在位置1_7、9、11、和12处的氨基酸之一被Ala置换的SM0i2_8氨基酸序列。
[0040]备选地，所述功能变体可以包括本文所述的任意本发明多肽或功能片段的逆反类似物。术语"逆反类似物"是指包括反转的亲本多肽氨基酸序列的多肽，以致所述逆反类似物的氨基酸序列(当从N端向C端读取时)与当从C端向N端读取时的亲本多肽的氨基酸序列相同。此外，关于逆反类似物，每一个氨基酸是该氨基酸的D异构体，D异构体与L异构体相反。例如，三肽Val-Ala-Gly的逆反类似物具有氨基酸序列Gly-Ala-Val，其中每个氨基酸是D异构体。关于本发明，所述功能变体优选包括SEQ ID N0:23、26、或33的逆反类似物。在这一点上，所述功能变体包括SEQ ID NOs:34-37中的任一氨基酸序列。
[0041]本发明的多肽(包括功能片段和功能变体)可以通过本领域已知的方法获得。合适的从头合成多肽的方法记述在参考文献中，诸如Chan等，Fmoc固相肽合成(FmocSolid Phase Peptide Synthesis),牛津大学出版社(Oxford University Press),牛津，英国，2005;妝和蛋白药物分析(Peptide and Protein Drug Analysis), Reid, R.编，Marcel Dekker 公司，2000;表位绘图(Epitope Mapping)，Westwoood 等编，牛津大学出版社(Oxford University Press),牛津，英国，2000;和美国专利号5，449，752。此外，可以使用本文所述的核酸用标准重组方法重组生产多肽。参见，例如，Sambrook等，分子克隆:实验室手册(Molecular Cloning:A Laboratory Manual),第3版.，冷泉港出版社(Cold Spring Harbor Press),冷泉港，纽约2001;和Ausubel等，现代分子生物学方法(Current Protocols in Molecular Biology),格林和 John Wiley & Sons 出版协会(Greene Publishing Associates and John Wiley & Sons),纽约，1994。此外，本发明的一些多肽(包括其功能片段和功能变体)可以从这样的来源如植物、细菌、昆虫、哺乳动物如大鼠、人等分离和/或纯化。分离和纯化的方法在本领域内是公知的。备选地，本文所述的多肽(包括其功能片段和功能变体)可以合成或从公司如Synpep (Dublin, CA),肽技术公司(Peptide Technologies Corp.) (Gaithersburg, MD),和多妝系统(Multiple PeptideSystems)(圣地亚哥，CA)商购获得。在这一方面，本发明多肽可以是合成的、重组的、分离的、和/或纯化的。
[0042]本发明还提供任意本文所述本发明多肽(包括功能片段和功能变体)的肽模拟物。当用于本文时，术语"肽模拟物"是指具有与相对应多肽基本相同的通用结构具有增加其稳定性或生物学功能的修饰的化合物。肽模拟物包括，例如，包括相对应多肽的相同氨基酸序列的那些化合物，所述相对应多肽在两个或更多个氨基酸之间具有改变的主链。另外，所述肽模拟物可以包括合成的或非天然存在的氨基酸来代替天然存在的氨基酸。
[0043]在一个优选的实施方案中，所述肽模拟物是拟肽。当用于本文时，术语"拟肽"是指这样的肽模拟物，其中每个氨基酸的侧链粘附在氨基酸的氮原子上而不是α碳上。例如，拟肽可以被视为N-置换的甘氨酸，其具有NRCH2CO通用结构的重复单位，并且其具有与相对应的多肽相同或基本相同的氨基酸序列。
[0044]在另一个优选的实施方案中，所述肽模拟物包括改变的主链，其中在每个氨基酸之间的键是甲基化的。在这一点上，所述肽模拟物可以包括下述结构的甲基化肽主链:
[0045]
【权利要求】
1.分离的或纯化的多肽、肽模拟物，或所述多肽或肽模拟物的脂肪酸衍生物，所述多肽或肽模拟物包括Smoothened(SMO)蛋白(SEQ ID NO:1)的一部分、其功能片段、或者所述部分或所述功能片段的功能变体的氨基酸序列，其中所述部分包括SEQ ID N0:2至4中的任一氨基酸序列，其中所述功能变体包括与SEQ ID NO: 2、3、或4具有至少90%序列同一性的氨基酸序列，其中所述多肽或肽模拟物长度小于或等于50个氨基酸，其中所述功能片段包括SEQ ID N0:2、3、或4的至少7个连续氨基酸，并且其中所述功能片段或功能变体抑制患病细胞的增殖。
2.权利要求1的分离的或纯化的多肽或肽模拟物或脂肪酸衍生物，其中所述肽模拟物是拟肽。
3.权利要求1或2的分离的或纯化的多肽或肽模拟物或脂肪酸衍生物，其中所述功能片段包括SEQ ID N0:5至8中的任一氨基酸序列。
4.权利要求1或2中任一项的分离的或纯化的多肽或肽模拟物或脂肪酸衍生物，其中所述功能片段包括选自由SEQ ID NO:9至33组成的组中的一个氨基酸序列。
5.权利要求1或2的分离的或纯化的多肽或肽模拟物或脂肪酸衍生物，其中所述功能变体包括SEQ ID NO:23的氨基酸序列，其中在SEQ ID NO:23的位置1_7、9、11和12中的任一位置具有一个氨基酸置换，其中在所述位置的氨基酸被Ala置换。
6.权利要求1或2的分离的或纯化的多肽或肽模拟物或脂肪酸衍生物，其中所述功能变体包括SEQ ID N0:23、26、或33的逆反类似物。
7.权利要求6的分离的或纯化的多肽或肽模拟物或脂肪酸衍生物，其中所述逆反类似物包括SEQ ID N0:34-37、84、和92-94中的任一氨基酸序列。
8.权利要求6的分离的或纯化的多肽或肽模拟物，其包括下示通用结构:
序列X-连接体1-Ν?—(CH2)、
JCh-CO-Y-脂肪.序列X-连接体2 -NH -(CH2)111 其中序列X选自由以下组成的组:Ac-LAKFSTHWAYTL(全是_D) (SEQ ID NO:85)；Ac-AKFSTHWAYTL(全是-D) (SEQ ID NO:86);和 Ac-KFSTHWAYTL(全是 _D) (SEQ ID NO:87)；其中连接体I和连接体2每一个是任选地存在，并且每一个独立地是Gly、β -Ala、氨基丙酸、Y-氛基丁酸、氛基己酸(aminocaproic acid)、或氛基己酸(aminohexanoic acid);其中η和m为0-6 ;其中Y是K、C、高Cys、Orn、二氨基丙酸(DPA)、二氨基丁酸(DBA);并且其中所述脂肪酸是硬脂酸、棕榈酸、肉豆蘧酸、月桂酸、癸酸或辛酸。
9.权利要求1或2的分离的或纯化的多肽或肽模拟物或脂肪酸衍生物，其中所述功能变体包括SEQ ID NO:38至59中的任一氨基酸序列。
10.权利要求1或2的分离的或纯化的多肽或肽模拟物或脂肪酸衍生物，其中所述脂肪酸衍生物在氨基(N-)端，羧基(C-)端，或N-和C-端两端包括脂肪酸分子，所述脂肪酸分子任选地包含至少一个氨基基团。
11.权利要求10的分离的或纯化的多肽或肽模拟物或脂肪酸衍生物，其中，当脂肪酸分子位于C端时，所述脂肪酸分子通过选自由以下组成的组的一个氨基酸附着到所述多肽或肽模拟物上:Lys、Cys、高半胱氨酸、Orn、α , Y - 二氨基丁酸、和α，β - 二氨基丙酸。
12.权利要求11的分离的或纯化的多肽或肽模拟物或脂肪酸衍生物，其中所述氨基酸是 Lys。
13.权利要求10的分离的或纯化的多肽或肽模拟物或脂肪酸衍生物，其中，当脂肪酸分子位于C端时，所述脂肪酸分子是式I或式II的分子，其中式I是NH2 (CH2)nCOOH,并且式II 是 CH3(CH2)CH(NH2)COOH,其中每一个 η 和 m 是 1-24。
14.权利要求1或2的分离的或纯化的多肽或肽模拟物或脂肪酸衍生物，其还包括细胞-穿透肽(CPP)。
15.权利要求1或2的分离的或纯化的多肽或肽模拟物或脂肪酸衍生物，其中所述肽模拟物包括具有下示结构的甲基化肽主链:
16.一种缀合物，其包括(i)多肽或肽模拟物，或其脂肪酸衍生物，所述多肽或肽模拟物包括Smoothened(SMO)蛋白(SEQ ID NO:1)的一部分、其功能片段、或者所述部分或所述功能片段的功能变体的氨基酸序列，其中所述部分包括SEQ ID N0:2至4中的任一氨基酸序列，其中所述功能片段包括SEQ ID N0:2、3、或4的至少7个连续氨基酸，并且其中所述功能片段或功能变体抑制患病细胞的增殖，和(ii)靶向部分。
17.编码多肽的分离的或纯化的核酸，所述多肽包括Smoothened(SMO)蛋白(SEQIDNO:1)的一部分、其功能片段、或者所述部分或所述功能片段的功能变体的氨基酸序列，其中所述部分包括SEQ ID N0:2至4中的任一氨基酸序列，其中所述功能片段包括SEQ IDNO: 2、3、或4的至少7个连续氨基酸，并且其中所述功能片段或功能变体抑制患病细胞的增殖。
18.药物组合物，其包括:权利要求1或2的多肽或肽模拟物或脂肪酸衍生物、权利要求16的缀合物、或权利要求17的核酸，以及任选地脂质，和药用载体。
19.分离的或纯化的多肽或肽模拟物，其包括Smoothened(SMO)蛋白(SEQID NO:1)的一部分或其功能变体的氨基酸序列，其中所述部分包括SEQ ID N0:5至8中的任一氨基酸序列，其中所述多肽或肽模拟物长度小于约50个氨基酸，其中所述功能变体包括SEQ IDNO:80的氨基酸序列。
20.权利要求1、2或19的多肽或肽模拟物或脂肪酸衍生物，其用于在宿主中治疗或预防癌症、治疗银屑病或治疗肿瘤。
【文档编号】A61P17/06GK103435694SQ201310334389
【公开日】2013年12月11日 申请日期:2007年10月30日 优先权日:2006年10月31日
【发明者】娜佳·塔拉索瓦, 迈克尔·迪安, 楼宏 申请人:美国政府卫生与公共服务部