新环脂肽抗生素罗克霉素（locillomycin）A、B、C及其制造方法
【专利摘要】本发明涉及一组新环脂肽抗生素罗克霉素（Locillomycin）A、B、C及其制造方法，以罗克霉素A、B、C为活性成分的药物组合物以及罗克霉素A、B、C在制备抗真菌、细菌和病毒药物中的应用，所说罗克霉素A、B、C是由枯草芽胞杆菌Bs916菌株（Bacillus?subtilis?Bs916）培养物中分离得到的新环脂肽类抗生素（cyclic?lipopeptides），体外活性实验结果证明，罗克霉素A、B、C对病原真菌、细菌和病毒都具有很强的抑制活性，作为新的抗真菌、细菌和病毒药物，具有良好的开发前景。
【专利说明】新环脂肽抗生素罗克霉素(I OCi I lomycin) A、B、C及其制造
方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及的是一组新的环脂肽抗生素(cyclic lipopeptides):罗克霉素A、B、C及其制备方法，以罗克霉素A、B、C为活性成分的药物组合物以及罗克霉素A、B、C在制备抗真菌、细菌、病毒药物中的应用。
【背景技术】
[0002]迄今发现来源微生物的抗生素已超越万余种，其中许多作为医药、农药和工业添加剂已得到广泛应用。环脂肽抗生素是20世纪40年代从芽胞杆菌发现的一类具有广泛生物活性的抗生素，其结构是由含7~10氨基酸残基的短肽和长链疏水性脂肪酸组成的环状次生代谢产物。脂肽抗生素一般具有较强的抗真菌活性和溶血性能，具有一定的抗细菌和病毒活性，甚至有些还具有抗肿瘤活性，在医药、农药和工业上具有广泛的应用价值。由于环脂肽抗生素具有广泛的生物活性，引起世界许多研究机构的重视，并对这类抗生素进行了深入研究。到目前为止，已发现环脂肽抗生素20几种，根据其化学结构的差异可分为表面活性素(Surfactin),结构如下:
[0003]
【权利要求】
1.一组环脂肽抗生素，包括罗克霉素A、罗克霉素B、罗克霉素C，其结构式分别如下:
2.权利要求1所述环脂肽抗生素的制备方法，其特征是所说方法包括以下步骤: 1)罗克霉素Α、B、C的发酵培养； 2)罗克霉素Α、B、C的提取分离； 3)罗克霉素Α、B、C的色谱检测；` 4)罗克霉素Α、B、C的结构鉴定。
3.如权利要求2所述的制备方法，其特征是发酵培养系将生长于斜面的枯草芽胞杆菌Bs916菌株(保藏编号为=CGMCC N0.0808)接种于试管培养基，在旋转摇床上培养，然后转入摇瓶培养基继续培养，收获发酵液。
4.如权利要求2所述的制备方法，其特征是提取分离系在发酵培养液中，发酵液离心除去菌体，用浓盐酸调pH至2.8，离心得到沉淀，甲醇抽提，过0.22 μ mol.L（-1）微孔滤膜后即为粗提物；粗提物先经氨基固相萃取柱对含有目标化合物的组分进行分离，洗脱溶剂为采用含有不同剂量甲酸的甲醇溶液；对含有目标化合物的组分然后采用碳18固相萃取柱进行纯化，洗脱溶剂为含有不同梯度的甲醇水溶液；对含有目标产物的洗脱液氮气吹干甲醇后，真空干燥得到白色固体粉末即为目标化合物罗克霉素组合物的纯化物；罗克霉素组合物的纯化物最后继续采用碳18固相萃取柱进行分离，洗脱溶剂为更为精细梯度的甲醇水溶液，依次收集含有目标化合物的洗脱液，收集洗脱液氮气吹干甲醇后，真空干燥得到白色固体粉末依次为目标化合物罗克霉素A、B、C的纯化物。
5. 如权利要求2或4所述的制备方法，其特征是高效液相色谱检测条件为:采用C18(5μπι ；250by4.6mm ；VYDAC218TP ；VYDAC, Hesperia, CA)柱；流动相为乙腈:水:三氟乙酸(50: 50: 0.5vol/vol);流速为0.5mL.min_l ;紫外检测波长为230nm ;检测结果表明提取的罗克霉素A、B、C已达到色谱纯，保留时间分别为9.0min, 13.0min, 17.8min。
6.如权利要求2或4所述的制备方法，其特征是结构鉴定系根据根据紫外光谱、氨基酸分析、Edman降解测序、多级质谱MS-MS、NMR实验(主要包括1H-NMRj3C-NMI^ 13C_editedHSQC、HMBC、COSY、TOCSY、NOESY或ROESY等)数据的综合分析，确定了罗克霉素A、B、C的结构。确定目标化合物罗克霉素A、B和C的结构。
7.含有权利要求1所述环脂肽抗生素的药物组合物，其特征是所说组合物系以罗克霉素A、B、C为有效成分，分别与一种或多种药上可以接受的载体所组成。
8.权利要求1所述环脂肽抗生素在制备抗真菌、细菌、病毒药物中应用。
【文档编号】A61P31/04GK103524600SQ201310416487
【公开日】2014年1月22日 申请日期:2013年9月13日 优先权日:2013年9月13日
【发明者】罗楚平, 陈志谊, 刘雪辉, 郭俊尧, 王晓宇, 刘邮洲 申请人:江苏省农业科学院