一种脑蛋白水解物的制备方法
【专利摘要】本发明属于医药【技术领域】，本发明提供了一种脑蛋白水解物的制备方法，包括原料处理、前处理、复合酶水解、调节pH值、超滤及纳滤的步骤。本发明所述制备方法简单，易于工业化生产；该方法采用一定比例的复合酶进行水解，得到脑蛋白水解物具有肽含量高，活力高等优点。
【专利说明】一种脑蛋白水解物的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药【技术领域】，具体涉及一种脑蛋白水解物的制备方法。
【背景技术】
[0002] 脑蛋白水解物类药物是近年应用最多生化药物之一。在国内外相关研究领域及市 场上占有重要地位。脑蛋白水解物作为健康、新鲜动物大脑组织经酶解提取的一种活性脑 多肽类物质，含有多种人脑必须氨基酸及脑磷脂、卵磷脂、肽类神经生长因子等重要元素， 能以多种方式作用于中枢神经，调节和改善神经元的代谢，促进突触的形成，诱导神经元的 分化，并进一步保护神经细胞免受各种缺血和神经毒素的损害。它可以通过血脑屏障，促进 脑内蛋白质的合成，影响呼吸链，具有抗缺氧的保护能力，改善脑内能量代谢，激活腺苷酸 环化酶催化其他激素系统，提供神经递质、肽类激素及辅酶前体。目前，临床上主要采用脑 蛋白水解物制成注射剂，用于治疗痴呆和脑功能障碍、脑发育不全、脑萎缩、神经衰弱、脑外 伤综合症、中枢神经系统感染、脑膜炎、老年性痴呆、抑郁症、精神病或脑血管代谢失调等多 种疾病，同时能有效增强学习记忆能力
[0003] CN200410022091. 5公开了一种脑蛋白水解物的制备方法，该发明通过先后使用胃 蛋白酶、胰蛋白酶进行酶解的方法制备脑蛋白水解物，该方法工序复杂，且要调节酸碱性， 可能出现蛋白质变性等问题。
【发明内容】
[0004] 基于上述原因， 申请人:在研究过程中，得到一种新的方法：该方法采用复合酶水 解、调节pH值、超滤和纳滤相结合的步骤，特别是使用一定比例的复合酶，得到脑蛋白水解 物，该脑袋白水解物，具有肽和总氮含量高，活力数值高，药理活性更强的优点。
[0005] 本发明的目的在于提供一种脑蛋白水解物的制备方法。
[0006] 具体而言，本发明提供了：
[0007] -种脑蛋白水解物的制备方法，该方法包括以下步骤：
[0008] a)原料处理：将新鲜或冷冻保存的猪脑去除表面的包膜及血管，洗净，浙干水分， 备用；
[0009] b)前处理：将步骤a)所得的猪脑切碎后加入到2?5倍重量水中，室温条件下匀 浆，冷冻贮藏；
[0010] c)复合酶水解：将步骤b)所得猪脑浆，加入复合酶，温度40-50°C水解，复合酶的 重量百分比为猪脑浆的〇. 5% -3%，水解3-8小时，水解结束后于沸水中保持8-15min灭 酶，冷却后调节pH为6-7,过滤，最后超滤膜过滤水解液去除分子量大于IOkDa的水解产物， 收集超滤水解液于4°C条件下储存；
[0011] d)浓缩：将步骤c)所得超滤水解液用100?IOOODa的纳滤膜进行浓缩，浓缩液 冻干，即得脑蛋白粉末。
[0012] 所述复合酶由嗜热菌蛋白酶、中性蛋白酶组成。
[0013] 所述嗜热菌蛋白酶的酶活力为40万U /克。
[0014] 所述中性蛋白酶的酶活力为10万U /克。
[0015] 复合酶中嗜热菌蛋白酶、中性蛋白酶重量比为（0.5?3) :(1?5)。
[0016] 作为优选，所述复合酶中嗜热菌蛋白酶、中性蛋白酶重量比为1 :2。
[0017] 上述所述的制备方法得到的脑蛋白水解物为原料制备成口服制剂或注射制剂。
[0018] 本发明所述的嗜热菌蛋白酶、中性蛋白酶均购自上海宝丰生化有限公司。
[0019] 本发明与现有技术相比具有以下优点和积极效果：
[0020] 1、由该制备方法简单，易于工业化生产。
[0021] 2、由该方法制备脑蛋白粉末肽含量高，活力高，药理活性强。
【具体实施方式】
[0022] 以下通过【具体实施方式】的描述对本发明作进一步说明，但这并非是对本发明的限 制，本领域技术人员根据本发明的基本思想，可以做出各种修改或改进，但是只要不脱离本 发明的基本思想，均在本发明的范围之内。
[0023] 本发明下述试验是在多次创造性试验基础上，进行的结论性验证试验。
[0024] 实验例1动物药效学试验
[0025] 试验药物：市售复方脑蛋白水解物片（购自大连贝尔药业有限公司）、本发明实施 例5制得的样品，以蒸馏水配成所需浓度的溶液，供口服给药使用。
[0026] 1)对小鼠低压缺氧状态的影响
[0027] 取18_21g小鼠150只，雌雄各半，随机分为3组，按表1所示的药物剂量灌胃给 药，30分钟后，将三组运行同时投入真空仓内，密闭，减压抽真空，当对照组小鼠死亡达半数 以上时，通气后继续观察30分钟，记录各组动物的死亡数。
[0028] 结果见表1。
[0029] 表1小鼠耐缺氣试骀研究
【权利要求】
1. 一种脑蛋白水解物的制备方法，其特征在于：该方法包括以下步骤： a) 原料处理：将新鲜或冷冻保存的猪脑去除表面的包膜及血管，洗净，浙干水分，备 用； b) 前处理：将所得的猪脑切碎后加入到2?5倍重量水中，室温条件下匀浆，冷冻贮 藏； c) 复合酶水解：将冷冻贮藏所得猪脑浆，加入复合酶，温度40-50°C水解，复合酶的重 量百分比为猪脑浆的0. 5% -3%，水解3-8小时，水解结束后于沸水中保持8-15min灭酶， 冷却后调节pH为6-7,过滤，超滤膜过滤水解液去除分子量大于10kDa的水解产物，收集超 滤水解液于4°C条件下储存； d) 浓缩：将超滤水解液用100?lOOODa的纳滤膜进行浓缩，浓缩液冻干，即得脑蛋白 提取物。
2. 根据权利要求1所述的一种脑蛋白水解物的制备方法，其中所述复合酶由嗜热菌蛋 白酶、中性蛋白酶组成。
3. 根据权利要求2所述的一种脑蛋白水解物的制备方法，其中所述嗜热菌蛋白酶的酶 活力为40万U/克。
4. 根据权利要求2所述的一种脑蛋白水解物的制备方法，其中所述中性蛋白酶的酶活 力为10万U/克。
5. 根据权利要求2所述的一种脑蛋白水解物的制备方法，其中所述复合酶中嗜热菌蛋 白酶、中性蛋白酶重量比为（0. 5?3) : (1?5)。
6. 根据权利要求5所述的一种脑蛋白水解物的制备方法，其中所述复合酶中嗜热菌蛋 白酶、中性蛋白酶重量比为1 :2。
7. 根据权利要求1-6任一项所述的一种脑蛋白水解物的制备方法，其中制备方法得到 的脑蛋白水解物为原料制备成口服制剂或注射制剂。
【文档编号】A61P39/00GK104511007SQ201310442847
【公开日】2015年4月15日 申请日期:2013年9月26日 优先权日:2013年9月26日
【发明者】曹捷, 高帆, 周战, 尚磊 申请人:西藏易明西雅医药科技股份有限公司