一种用于补血的药物及其制备方法与流程

本发明涉及一种起补血作用的药物及其制备方法，具体涉及白芍中起补血作用的芍药内酯苷及其制备方法，属于医药技术领域。

背景技术：

白芍为毛茛科植物芍药(Paeonia lactiflora Pall.)的干燥根，是中医常用补血药，苦、酸，微寒，归肝、脾经，具有养血调经，敛阴止汗，柔肝止痛，平抑肝阳的功效，用于血虚萎黄，月经不调，自汗，盗汗，胁痛，腹痛，四肢挛痛，头痛眩晕。

白芍含有一组单萜类物质，包括芍药苷、芍药内酯苷等。并且，芍药苷具有明确的补血作用。由于芍药内酯苷难于分离纯化，在专利和文献中对芍药内酯苷鲜有报道。因此有必要对芍药内酯苷单一成分进行研究。

技术实现要素：

本发明目的在于提供一种用于补血的药物及其制备方法，具体提供一种起补血作用的芍药内酯苷及其制备方法。

芍药内酯苷在制备补血药物中的应用。

所述芍药内酯苷在制备治疗血虚症的药物中的应用。

一种用于补血的芍药内酯苷，该药物由如下方法制成：

步骤1：提取：白芍药材以水或醇为溶剂经常规方法提取，提取液经浓缩、过滤，得白芍提取液备用；

步骤2：大孔树脂精制：白芍提取液，通过大孔树脂柱，弃去流出液；用0～20％醇溶剂冲洗树脂柱，弃去冲洗液；用30～70％醇溶剂洗脱树脂柱，收集洗脱液，经减压浓缩回收醇，减压干燥，得大孔树脂精制物。

步骤3：氧化铝精制：取大孔树脂精物加水或醇溶解，白芍大孔树脂精制物加2-8重量倍的氧化铝混匀，干燥，装入渗漉器，以洗脱剂洗脱，收集全部流出液，得氧化铝精制液备用；

步骤4：活性炭精制：氧化铝精制液通过活性炭柱，收集流出液，回收全部溶剂，干燥，得活性炭精制物备用；

步骤5：硅胶精制：将活性炭精制物加8～20体积洗脱剂溶解，通过硅胶柱，以洗脱剂洗脱，收集流份，薄层检视，分别收集含芍药苷、芍药苷和芍药内酯苷、芍药内酯苷的流份，回收全部溶剂，分别得芍药苷、芍药苷和芍药内酯苷混合物、芍药内酯苷。

步骤6：所述芍药苷和芍药内酯苷混合物按上述步骤5方法，重复精制，得芍药苷、芍药内酯苷。

优选的，步骤1中，白芍提取溶剂为水，提取方法为渗漉，流速1～4倍药材量/小时，收集6～15倍白芍重量倍的渗漉液；

优选的，步骤2中，所述大孔树脂是ME-1、D-101、DA-201、D-301、AB-8中的一种；

优选的，步骤2中，所述醇溶液为甲醇、乙醇或丙醇的水溶液。

优选的，步骤2中，大孔树脂用量为白芍1-3重量倍。流速为0.5～3倍树脂量/小时。冲洗树脂柱用1～5大孔树脂重量倍的0～20％醇溶剂，冲洗液弃去。收集的洗脱液为3～8大孔树脂重量倍的30～70％醇溶剂；

优选的，步骤3中，白芍大孔树脂精制物加4重量倍的氧化铝混匀；收集洗脱液为氧化铝的4-8重量倍；

优选的，步骤4中，活性炭柱相当于白芍大孔树脂精制物1-6重量倍，优选2重量倍；制备的活性炭精制物含芍药苷和芍药内酯苷之和大于95％。

上述步骤3和步骤5所用洗脱剂可以由下列的一种或多种溶剂混合组成，比例可以根据相当于乙酸乙酯:甲醇为3-9:1的极性进行选择或混合：

液态醇类：甲醇、乙醇、丙醇、丙醇等；

液态酯类：甲酸甲酯、甲酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、乙酸戊酯等；

液态酮类：丙酮、丁酮、戊酮等；

液态烷烃类：石油醚、戊烷、己烷、庚烷、辛烷等；

液态醚类：乙醚、丙醚、二乙二醇丁醚、甲基叔丁基醚等；

液态卤代烷类：三氯甲烷、二氯甲烷、四氯化碳等；

例如：戊酮；乙酸丁酯-乙醇8:1；甲酸乙酯-乙醇6:1；丁酮-异丙醇7:1；二氯甲烷-丙酮3:1；二氯甲烷-甲醇5:1；丁酮-丙醇9:2；甲基叔丁基醚-丁酮5:2等。

优选的，步骤5中，比上样量为上述活性炭精制物比硅胶柱横截面积为0.02-0.09g/cm²,流速为1-4倍硅胶量/小时，

上述步骤5的薄层检视方法可以为现有技术所载的方法，优选如下方法：

分别取硅胶柱各洗脱流份，作为供试品溶液。另取芍药苷、芍药内酯苷对照品，加乙醇制成每1ml各含1mg溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液20μ1，标准品溶液10μ1，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以4:1的乙酸乙酯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。即以薄层检视，有单一芍药苷斑点的流份所含为芍药苷；有单一芍药内酯苷斑点的流份所含为芍药内酯苷；有芍药苷和芍药内酯苷两个斑点的流份所含为芍药苷和芍药内酯苷混合物；分别合并收集各流份即可。

本发明所述体积与重量的对应关系是ml与g的关系。

一种用于补血的药物制剂，每单位制剂含芍药内酯苷的量按照每日服用制剂总量为90mg～270mg/天推导计算。所述单位制剂是指药学上常规的制剂单位，如胶囊为每粒，颗粒剂为每袋，口服液体制剂为每毫升等。

优选的，每单位制剂含芍药内酯苷的量按照每日服用制剂总量为120mg或180mg或240mg。

本发明所述的芍药内酯苷用于补血药物及其制备方法，具有以下优点：

①净化：分别用氧化铝柱除去极性大的糖类和具有酚羟基和羧基的羟基芍药苷、苯甲酰芍药苷、鞣质、有机酸、黄酮、三萜苷类杂质，用活性炭柱除去极性小的色素类杂质；制得的芍药内酯苷、芍药苷混合物纯度≥95％，避免了杂质吸附于硅胶上，使硅胶柱可以重复使用，简便操作，可连续生产。

②特定的上样方式：芍药内酯苷、芍药苷混合物溶于洗脱剂加入硅胶柱，不经干燥过程，硅胶对芍药内酯苷、芍药苷吸附能力较弱，虽然制备的产品纯度较低，但含量仍＞90％，符合1类新药原料药的标准；且洗脱速率高，生产工时少(每次上样洗脱约2小时)；因硅胶柱可以重复使用，仅第一次上样时有部分芍药内酯苷、芍药苷不能洗脱，以后均能全部洗脱，产品收率高。

③固定比例的混合溶剂洗脱剂：硅胶柱采用固定混合溶剂的比例作为洗脱，回收的溶剂可以重复使用，降低成本；

④工业生产可行：因硅胶柱可重复使用，无需拆装，且上样采用溶液上样，可管道输送，能实现生产设备全密闭，控制因有机溶剂挥发而导致的易燃、易爆、毒害、污染等危害。

⑤制成的产品，芍药苷含量≥95％，芍药内酯苷含量≥92％，符合1类新药原料药标准。

⑥芍药内酯苷具有补血作用，芍药内酯苷的补血作用优于芍药苷。

⑦芍药内酯苷补血作用的起效剂量低，芍药内酯苷具有较强的补血作用。

实验例1

1实验材料

1.1实验动物

雄性昆明种小鼠，体重22±2g。动物由北京维通利华实验动物有限公司提供，许可证编号SCXK(京)2012-0001。

1.2药品

受试药：芍药苷、芍药内酯苷。

芍药苷、芍药内酯苷制备(由实施例2制备得到的)：

经HPLC法测定，芍药苷含量为98.1％，芍药内酯苷含量为93.2％。

阳性药：四物汤颗粒，吉泰安(四川)药业有限公司，批号：1206064。经HPLC法测定，芍药苷含量为0.536％。

1.3仪器与试剂

Beckman Coulter Ac.T 5血细胞分析仪，美国Beckman Coulter.Inc。Beckman Coulter Ac.T 5diff Rinse，美国Beckman Coulter.Inc，批号：03202C21926；Ac.T 5diff WBC Lyse，美国Beckman Coulter.Inc，批号：16502B02838；Ac.T 5diff Fix，美国Beckman Coulter.Inc，批号：17602E07007；Ac.T 5diff Hgb Lyse，美国Beckman Coulter.Inc，批号：04802A0170。

2实验方法

2.1芍药苷和芍药内酯苷组实验

适应性喂养后，将90只小鼠按体重随机分成9个组，即正常组，血虚模型组、四物汤颗粒组、芍药苷1、2、3剂量组、芍药内酯苷1、2、3剂量组，每组10只。其中正常对照组、模型组每天灌胃蒸馏水，芍药苷1、2、3剂量组分别给予芍药苷120mg·kg^-1，60mg·kg^-1，30mg·kg^-1，芍药内酯苷1、2、3剂量组分别给予芍药内酯苷120mg·kg^-1，60mg·kg^-1，30g·kg^-1。按每10g体重灌胃0.2mL给药，每日一次。

小鼠连续给药7天，然后进行为期两周的造模。模型组、四物汤颗粒组、芍药苷剂量组、芍药内酯剂量组隔天由眼底静脉丛放血0.3mL，次日温水游泳20min，同时每天饲料按75g·kg^-1体重控制，自由饮水，造模期间仍继续给药。于第0、7、14天眼眶采血40μL，检测血象。

2.2统计学方法

实验数据采用SPSS软件进行one-way ANOVA统计学分析，结果用表示。

3实验结果

3.1.1芍药苷、芍药内酯苷对红细胞数的影响

造模第7天，与空白组相比，模型组的红细胞数明显降低(P<0.001)。与模型组相比，阳性药组即四物汤颗粒组、120mg·kg^-1芍药内酯苷、120mg·kg^-1芍药苷的红细胞数升高，差异非常显著(P<0.01)；60mg·kg^-1芍药内酯苷、30mg·kg^-1芍药内酯苷红细胞升高，差异显著(P<0.05)。与芍药苷同剂量组相比，30mg·kg^-1芍药内酯苷的红细胞数升高明显(P<0.05)。

造模第14天，与空白组相比，模型组的红细胞数明显降低(P<0.001)。与模型组相比，阳性药组即四物汤颗粒组、120mg·kg^-1芍药内酯苷的红细胞数升高，差异极显著(P<0.001)，60mg·kg^-1芍药内酯苷、30mg·kg^-1芍药内酯苷的红细胞数有非常显著的差异(P<0.01)，120mg·kg^-1芍药苷红细胞也有显著差异(P<0.05)。与芍药苷同剂量组相比，120mg·kg^-1芍药内酯苷、30mg·kg^-1芍药内酯苷的红细胞数升高明显(P<0.05)。结果见表1。

表1.芍药苷、芍药内酯苷对小鼠红细胞的影响

注：与模型组比*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001，芍药内酯苷与芍药苷同剂量组比#P<0.05，##P<0.01，###P<0.001

3.1.2芍药苷、芍药内酯苷对血红蛋白含量的影响

造模第7天，与空白组相比，模型组的血红蛋白含量明显降低(P<0.001)。与模型组相比，阳性药组即四物汤颗粒组、120mg·kg^-1芍药内酯苷、60mg·kg^-1芍药内酯苷的血红蛋白含量升高明显，差异非常显著(P<0.01)；30mg·kg^-1芍药内酯苷、120mg·kg^-1芍药苷的血红蛋白差异升高明显，差异显著(P<0.05)。与芍药苷同剂量组相比，芍药内酯苷的血红蛋白含量无显著差异(P>0.05)。

造模第14天，与空白组相比，模型组的血红蛋白含量明显降低(P<0.001)。与模型组相比，阳性药组即四物汤颗粒组、120mg·kg^-1芍药内酯苷的血红蛋白含量升高差异极显著(P<0.001)，60mg·kg^-1芍药内酯苷、30mg·kg^-1芍药内酯苷的血红蛋白差异非常显著(P<0.01),120mg·kg^-1芍药苷血红蛋白含量差异显著(P<0.05)；与芍药苷相同剂量组比，30mg·kg^-1芍药内酯苷组的血红蛋白差异显著(P<0.05)。结果见表2。

表2.芍药苷、芍药内酯苷对小鼠血红蛋白的影响

注：与模型组比*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001,芍药内酯苷与芍药苷同剂量组比#P<0.05，##P<0.01，###P<0.001

本实验采用了综合放血法血虚模型，结果显示模型组小鼠外周血象中红细胞和血红蛋白数降低明显，说明模型成立。造模第7天和第14天，阳性药组即四物汤颗粒组、芍药内酯苷各剂量组红细胞数和血红蛋白含量升高，即芍药内酯苷的起效剂量为30mg·kg^-1，而芍药苷只有高剂量组的红细胞数和血红蛋白含量升高，即芍药苷的起效剂量为120mg·kg^-1。同剂量组对比，造模第7天，30mg·kg^-1芍药内酯苷的红细胞数高于芍药苷(P<0.05)；第14天，120mg·kg^-1芍药内酯苷的红细胞数高于芍药苷(P<0.05)，30mg·kg^-1芍药内酯苷的红细胞数、血红蛋白含量都高于芍药苷(P<0.05)。因此，芍药内酯苷与芍药苷同样具有补血作用，并且芍药内酯苷的补血作用优于芍药苷。

附图说明

为了使本发明的内容更容易被清楚的理解，下面根据本发明的具体实施例并结合附图，对本发明作进一步详细的说明，其中：

图1是本发明工艺流程示意图。

具体实施方式

实施例1：

取白芍5kg，加水浸泡2小时，煎煮提取2次，每次1小时，第一次加水12倍，第二次加水10倍，煎煮液合并，减压浓缩，过滤，得白芍提取液10L备用；

上述白芍提取液，通过装置20kgME-1大孔树脂柱，弃去流出液；用20L水冲洗树脂柱，弃去冲洗液；用40％乙醇溶剂洗脱树脂柱，收集25L洗脱液，经减压浓缩回收醇，减压干燥。得大孔树脂精制物256g备用。

上述大孔树脂精物加2倍量甲醇溶解，加氧化铝1.5kg混匀，干燥，装入渗漉器，丁酮-异丙醇(7:1)洗脱，收集收集9L流出液，得氧化铝精制液备用；

上述氧化铝精制液，通过装1.5kg活性炭(100目)柱，收集流出液，回收全部溶剂，干燥，得活性炭精制物98g备用；

上述活性炭精制物20g加洗脱剂乙酸丁酯-乙醇(8:1)200mL溶解，通过硅胶柱(直径30cm，4kg)，以洗脱剂洗脱，收集流份，薄层检视，分别收集含芍药苷、芍药苷和芍药内酯苷、芍药内酯苷的流份，回收溶剂，再以水溶解提取物，过滤，滤液干燥，分别得芍药苷、芍药苷和芍药内酯苷混合物、芍药内酯苷。上述芍药苷和芍药内酯苷混合物与上述活性炭精制物混合后，通过硅胶柱，以洗脱剂洗脱，收集流份，薄层检视，以此进行重复精制，得芍药苷68.6g、芍药内酯苷20.4g、芍药苷和芍药内酯苷混合物5.4g。

含量测定方法：色谱条件与系统适用性：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.1％磷酸溶液(加1％氢氧化钠溶液调整PH为4.2)(34:66)为流动相；检测波长为230nm。理论板数按芍药苷峰计算应不低于2500。对照品溶液的制备：精密称取芍药内酯苷对照品加50％乙醇制成每lml含芍药内酯苷0.02mg的溶液，即得。供试品溶液的制备：取本品粉末0.1g，精密称定，置1000ml量瓶中，加50％乙醇950ml超声使溶解，加50％乙醇至刻度，摇匀，即得。测定法：分别精密吸取上述照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得。

采用前述的芍药苷和芍药内酯苷含量HPLC检测方法测定：芍药内酯苷含量为92.3％。

将上述方法获得的芍药内酯苷制成丸剂，给患有血虚症的患者服用，每日服用2丸，每丸剂中含芍药内酯苷的量为45mg，连续服用20天，药效明显。

实施例2：

取白芍5kg，在渗漉器内加水20L，浸泡2小时后进行渗漉，收集40L渗漉液，减压浓缩，过滤，得白芍提取液10L备用；

上述白芍提取液，通过装置10kgD-101大孔树脂柱，弃去流出液；用45L水冲洗树脂柱，弃去冲洗液；用50％乙醇溶剂洗脱树脂柱，收集60L洗脱液，经减压浓缩回收醇，减压干燥。得大孔树脂精制物247g备用。

上述大孔树脂精物加50％乙醇250mL溶解，加氧化铝1kg混匀，干燥，装入渗漉器，以乙酸乙酯:甲醇(6:1)为洗脱剂洗脱，收集6L流出液，得氧化铝精制液备用；

上述氧化铝精制液通过装置0.5kg活性炭的柱，收集流出液，回收溶剂，干燥，得活性炭精制物99g备用；

上述活性炭精制物15g加洗脱剂(乙酸乙酯:甲醇＝8:1)200mL溶解，通过硅胶柱(直径30cm，4kg)，以洗脱剂洗脱，收集流份，薄层检视，分别收集含芍药苷、芍药苷和芍药内酯苷、芍药内酯苷的流份，回收溶剂，再以水溶解提取物，过滤，滤液干燥，分别得芍药苷、芍药苷和芍药内酯苷混合物、芍药内酯苷。上述芍药苷和芍药内酯苷混合物与上述活性炭精制物混合后，通过硅胶柱，以洗脱剂洗脱，收集流份，薄层检视，以此进行重复精制，得芍药苷70.6g、芍药内酯苷24.2g、芍药苷和芍药内酯苷混合物4.6g。

采用实施例1的芍药内酯苷含量HPLC检测方法测定芍药内酯苷含量为93.2％。

将上述方法获得的芍药内酯苷制成胶囊剂，给患者服用，每日服用胶囊剂3粒，每粒胶囊中含芍药内酯苷的量为40mg，连续服用20天，药效明显。

实施例3：

取白芍5kg，加50％乙醇浸泡2小时，回流提取2次，每次1小时，第一次加醇10倍，第二次加醇8倍，提取液合并，减压回收乙醇,减压浓缩，过滤，得白芍提取液20L备用；

上述白芍提取液，通过装置20kgD-201大孔树脂柱，弃去流出液；用60L10％乙醇冲洗树脂柱，弃去冲洗液；用40％乙醇溶剂洗脱树脂柱，收集80L洗脱液，经减压浓缩回收醇，减压干燥。得大孔树脂精制物239g备用。

上述大孔树脂精物加水500mL溶解，加氧化铝2kg混匀，干燥，装入渗漉器，以二氯甲烷-甲醇(5:1)为洗脱剂洗脱，收集6L流出液，得氧化铝精制液备用；

上述氧化铝精制液通过装置0.8kg活性炭的柱，收集流出液，回收溶剂，干燥，得活性炭精制物93g备用；

上述活性炭精制物30g加洗脱剂二氯甲烷-甲醇(5:1)400mL溶解，通过硅胶柱(直径30cm，5kg)，以洗脱剂洗脱，收集流份，薄层检视，分别收集含芍药苷、芍药苷和芍药内酯苷、芍药内酯苷的流份，回收溶剂，再以水溶解提取物，过滤，滤液干燥，分别得芍药苷、芍药苷和芍药内酯苷混合物、芍药内酯苷。上述芍药苷和芍药内酯苷混合物与上述活性炭精制物混合后，通过硅胶柱，以洗脱剂洗脱，收集流份，薄层检视，以此进行重复精制，得芍药苷66.1g、芍药内酯苷21.2g、芍药苷和芍药内酯苷混合物2.2g。

采用用实施例1的芍药内酯苷含量HPLC检测方法测定：芍药内酯苷含量为93.0％。

将上述方法获得的芍药内酯苷制成颗粒剂，给患有血虚症的患者服用，每日服用颗粒剂3袋，每袋颗粒剂中含芍药内酯苷的量为90mg，服用7天，药效明显。

实施例4：

取白芍5kg，加70％乙醇浸泡1小时，回流提取2次，每次1小时，第一次加醇9倍，第二次加醇7倍，提取液合并，减压回收乙醇,减压浓缩，过滤，得白芍提取液15L备用；

上述白芍提取液，通过装置10kgD-101大孔树脂的柱，弃去流出液；用60L10％乙醇冲洗树脂柱，弃去冲洗液；用40％乙醇溶剂洗脱树脂柱，收集80L洗脱液，经减压浓缩回收醇，减压干燥。得大孔树脂精制物248g备用。

上述大孔树脂精物加水500mL溶解，加氧化铝2kg混匀，干燥，装入渗漉器，以乙酸乙酯-丙酮(6:1)为洗脱剂洗脱，收集6L流出液，得氧化铝精制液备用；

上述氧化铝精制液通过装置1.0kg活性炭的柱，收集流出液，回收溶剂，干燥，得活性炭精制物95g备用；

上述活性炭精制物30g加洗脱剂乙酸乙酯-丙酮(6:1)400mL溶解，通过硅胶柱(直径30cm，5kg)，以洗脱剂洗脱，收集流份，薄层检视，分别收集含芍药苷、芍药苷和芍药内酯苷、芍药内酯苷的流份，回收溶剂，再以水溶解提取物，过滤，滤液干燥，分别得芍药苷、芍药苷和芍药内酯苷混合物、芍药内酯苷。上述芍药苷和芍药内酯苷混合物与上述活性炭精制物混合后，通过硅胶柱，以洗脱剂洗脱，收集流份，薄层检视，以此进行重复精制，得芍药苷67.4g、芍药内酯苷22.9g、芍药苷和芍药内酯苷混合物3.1g。

采用用实施例1的芍药内酯苷含量HPLC检测方法测定：芍药内酯苷含量为92.2％。

将上述方法获得的芍药内酯苷制成片剂，给患者服用，每日服用片剂4片，每片的片剂中含芍药内酯苷的量为60mg，连续服用7天，药效明显。

实施例5：

取白芍5kg，在渗漉器内加水30L，浸泡2小时后进行渗漉，收集50L渗漉液，减压浓缩，过滤，得白芍提取液20L备用；

上述白芍提取液，通过装置7.5kgD-101大孔树脂的柱，弃去流出液；用30L水冲洗树脂柱，弃去冲洗液；用40％乙醇溶剂洗脱树脂柱，收集60L洗脱液，经减压浓缩回收醇，减压干燥。得大孔树脂精制物248g备用。

上述大孔树脂精物加水500mL溶解，加氧化铝1.5kg混匀，干燥，装入渗漉器，以三氯甲烷-甲醇(7:1)为洗脱剂洗脱，收集6L流出液，得氧化铝精制液备用；

上述氧化铝精制液通过装置1.0kg活性炭的柱，收集流出液，回收溶剂，干燥，得活性炭精制物94g备用；

上述活性炭精制物30g加洗脱剂三氯甲烷-甲醇(9:1)300mL溶解，通过硅胶柱(直径30cm，5kg)，以洗脱剂洗脱，收集流份，薄层检视，分别收集含芍药苷、芍药苷和芍药内酯苷、芍药内酯苷的流份，回收溶剂，再以水溶解提取物，过滤，滤液干燥，分别得芍药苷、芍药苷和芍药内酯苷混合物、芍药内酯苷。上述芍药苷和芍药内酯苷混合物与上述活性炭精制物混合后，通过硅胶柱，以洗脱剂洗脱，收集流份，薄层检视，以此进行重复精制，得芍药苷65.1g、芍药内酯苷23.2g、芍药苷和芍药内酯苷混合物2.7g。

采用用实施例1的芍药内酯苷含量HPLC检测方法测定：芍药内酯苷含量为95.0％。

将上述方法获得的芍药内酯苷制成胶囊剂，给患者服用，每日服用2粒，每丸剂中含芍药内酯苷的量为135mg，连续服用5天，药效明显。

实施例6：

取白芍5kg，加70％乙醇浸泡2小时，回流提取3次，每次1小时，第一次加醇8倍，第二、三次加醇6倍，提取液合并，减压回收乙醇,减压浓缩，过滤，得白芍提取液10L备用；

上述白芍提取液，通过装置15kgME-1大孔树脂的柱，弃去流出液；用45L10％乙醇冲洗树脂柱，弃去冲洗液；用70％乙醇溶剂洗脱树脂柱，收集80L洗脱液，经减压浓缩回收醇，减压干燥。得大孔树脂精制物266g备用。

上述大孔树脂精物加50％甲醇250mL溶解，加氧化铝2kg混匀，干燥，装入渗漉器，以乙酸丁酯-甲醇(8:1)为洗脱剂洗脱，收集5L流出液，得氧化铝精制液备用；

上述氧化铝精制液通过装置1.5kg活性炭的柱，收集流出液，回收溶剂，干燥，得活性炭精制物97g备用；

上述活性炭精制物15g加洗脱剂乙酸丁酯-甲醇(8:1)225mL溶解，通过硅胶柱(直径30cm，4kg)，以洗脱剂洗脱，收集流份，薄层检视，分别收集含芍药苷、芍药苷和芍药内酯苷、芍药内酯苷的流份，回收溶剂，再以水溶解提取物，过滤，滤液干燥，分别得芍药苷、芍药苷和芍药内酯苷混合物、芍药内酯苷。上述芍药苷和芍药内酯苷混合物与上述活性炭精制物混合后，通过硅胶柱，以洗脱剂洗脱，收集流份，薄层检视，以此进行重复精制，得芍药苷66.7g、芍药内酯苷21.8g、芍药苷和芍药内酯苷混合物5.6g。

采用用实施例1的芍药内酯苷含量HPLC检测方法测定：芍药内酯苷含量为93.5％。

将上述方法获得的芍药内酯苷制成片剂，给患者服用，每日服用片剂2片，每片的片剂中含芍药内酯苷的量为90mg，连续服用7天，药效明显。

实施例7：

由芍药内酯苷制成的口服液体制剂，给患者服用，每日服用的口服液体制剂2瓶，每瓶10ml，每瓶中含有芍药内酯苷的量为105mg，连续服用15天，药效明显。

实施例8：

由芍药内酯苷制成的注射剂，给患有血虚症的患者进行注射，每日注射剂中含有芍药内酯苷的量为240mg，每支注射剂含有芍药内酯苷120mg,每日注射2支，注射7天，药效明显。