一种肠黏膜TGF-β诱生剂的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种肠黏膜TGF-β诱生剂。其组成为：白头翁提取物1～5重量份、蒙脱石氧化锌复合物5～10重量份；或者白头翁提取物1～5重量份、沸石氧化锌复合物5～10重量份。与饲料中单独添加白头翁提取物或蒙脱石/沸石氧化锌复合物相比，本发明的肠黏膜TGF-β诱生剂显著提高肠黏膜修复过程中TGF-β表达。白头翁提取物和蒙脱石/沸石氧化锌复合物在提高肠黏膜损伤修复过程中TGF-β表达上存在显著交互作用，两者有正的协同组合效应。本发明的肠黏膜TGF-β诱生剂通过各成分的协同效应，大大增强了诱生效果，能大大提高肠黏膜修复过程中TGF-β表达。
【专利说明】—种肠黏膜TGF-β诱生剂【技术领域】
[0001]本发明涉及诱生剂，尤其涉及一种肠黏膜TGF-β诱生剂。
【背景技术】
[0002]幼龄动物，如仔猪和犊牛，肠黏膜发育不完全，由于大量应激因素(出生、生存环境、断奶、日粮变化、疾病等)的存在，肠黏膜极易受到损伤，研究肠黏膜的生长调节与修复，是幼龄动物营养的重要研究内容。近年来，人们在临床和动物试验上对肠道黏膜营养与修复进行了广泛研究，但尚未取得突破性进展。在畜牧生产上，因断奶应激等造成的仔猪、犊牛等胃肠道黏膜损伤，目前仍然是困扰和影响动物高效生产的难题之一。
[0003]肠道不仅是营养物质消化和吸收的重要场所，而且是营养物质代谢的重要器官。消化道黏膜上皮细胞构成了一道防御腔内有害物质的巨大屏障，其生物作用的基础之一就是粘膜层的完整性与上皮细胞的不断更新。消化道粘膜自身存在着完善的再生及修复机制，几乎每48-72小时消化道粘膜上皮就更新一次。生理情况下作为全身分化最快的组织，消化道粘膜上皮细胞始终处于产生、迁移、脱落的平衡状态。如果受到细菌、病毒及寄生虫等的感染，或摄入有害物质的侵害，其粘膜完整性受到损伤，以细胞分化和迁移相联合的修复机制马上开始运转。其中主要是通过受伤粘膜邻近区域或粘膜下具有活力的上皮细胞迁移所致，部分则是依靠上皮细胞的分化和增殖来完成。这一修复过程受多种因素调节，其中粘膜自分泌和旁分泌的多种生物因子对于粘膜上皮细胞的分化、增殖及迁移十分重要。
[0004]转化生长因子β (TGFii)属于调节细胞生长和分化的TGFii超家族，体内多种细胞均可产生。TGF-β对肠上皮细胞的增殖分化和肠黏膜损伤修复有着重要作用，目前在哺乳动物至少发现有TGFeiJGe2JGFi^TGFe eie2四个亚型。外源性TGFii能明显促进肠粘膜损伤模型中损伤区域边缘粘膜细胞的移行，应用TGFi3 i的单克隆抗体可以阻断这一效应。YanakaA等将豚鼠胃粘膜体外置于1.25molL/NaCI溶液中10分钟，造成胃粘膜损伤模型，观察粘膜修复情况，结果发现，应用TGFii抗体后，修复过程延退；应用重组人TGFii后，粘膜则可以复原。TGF-βΙ可促进受损肠黏膜中上皮细胞迁移和胶原合成，提高细胞外基质(ECM)沉积，促进肠黏膜重建。新生小鼠口服TGF-β I或富含TGF-β的牛奶乳清提取物，显著抑制了口服抗原应激造成的免疫反应。TGF-β可阻止TNF-a、IFN-Y等细胞因子、隐孢子虫(C parvum)等对肠上皮细胞紧密连接的损伤,保护肠黏膜屏障功能。Howe et al.(2005)以人T84结肠上皮细胞系,发现TGF-β I阻止了 enterohemorrhagic E.co7i感染细胞引起的紧密连接通透性增加，提高了紧密连接蛋白表达。
[0005]目前，虽已有通过基因工程技术生产的TGF-β产品，但成本很高，应用口服TGF-β来修复肠黏膜不切合生产应用实际。开发肠黏膜TGF-β诱生剂，通过营养调节的方式，来促进肠黏膜损伤修复过程中TGF-β表达，具有现实的应用价值和广阔的市场前景。
【发明内容】
[0006]本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种肠黏膜TGF-β诱生剂。[0007]—种肠黏膜TGF- β诱生剂组成为:白头翁提取物I~5重量份、蒙脱石氧化锌复合物5~10重量份。所述的蒙脱石氧化锌复合物中氧化锌的重量百分含量为5~30%。
[0008]另一种肠黏膜TGF- β诱生剂组成为:白头翁提取物I~5重量份、沸石氧化锌复合物5~10重量份。所述的沸石氧化锌复合物中氧化锌的重量百分含量为5~30%。
[0009]本发明通过将白头翁提取物和蒙脱石/沸石氧化锌复合物进行复配来获得具有显著诱生效果的肠黏膜TGF-β诱生剂。与饲料中单独添加白头翁提取物或蒙脱石/沸石氧化锌复合物相比，本发明的肠黏膜TGF-β诱生剂显著提高肠黏膜修复过程中TGF-β表达。复方中的蒙脱石或者沸石对白头翁提取物有控释作用。白头翁提取物和蒙脱石/沸石氧化锌复合物在提高肠黏膜损伤修复过程中TGF-β表达上存在显著交互作用，白头翁提取物和蒙脱石/沸石氧化锌复合物有正的协同组合效应。本发明的肠黏膜TGF-β诱生剂通过各成分的协同效应，大大增强了诱生效果，能大大提高肠黏膜修复过程中TGF-β表达。
[0010]
【具体实施方式】
[0011]一种肠黏膜TGF-β诱生剂组成为:白头翁提取物I~5重量份、蒙脱石氧化锌复合物5~10重量份。
[0012]另一种肠黏膜TGF-β诱生剂组成为:白头翁提取物I~5重量份、沸石氧化锌复合物5~10重量份。
[0013]所述的白头翁提取物为毛茛科植物白头翁Pulsatilla chinensis (Bge.) Regel根的提取粉。白头翁提取物可市场采购，如西安海佳生物科技有限公司，西安金绿生物工程技术有限公司，郑州伊尹植物提取物科技有限公司等。
[0014]所述的蒙脱石氧化锌复合物中氧化锌的重量百分含量为5~30%。所述的沸石氧化锌复合物中氧化锌的重量百分含量为5~30%。
[0015]本发明结合以下实例作进一步的说明。
[0016]实施例1
予页备:根据文献 “ZnO/montmorillonite for photocatalytic and photochemicaldegradation of methylene blue”(见:Fatimah, I, Wang, SB, ffulandari, D.App1.Clay Sc1.2011，53，553-560.)的方法制备蒙脱石氧化锌复合物。按重量百分比计，蒙脱
石氧化锌复合物中氧化锌的含量为30%。
[0017]取白头翁提取物100公斤、蒙脱石氧化锌复合物500公斤混合后拌匀，即得一种肠黏膜TGF-β诱生剂。在仔猪饲料中的添加量为0.1~0.4%。
[0018]选用128头平均体重为6 kg的21日龄“杜X长X大”断奶仔猪，随机分成4组:对照组；白头翁提取物组；蒙脱石氧化锌复合物组；肠黏膜TGF-β诱生剂组。每组4个重复，每个重复8头仔猪。试验期为14 d。仔猪自由采食和饮水，从7日龄开始诱食并哺乳至21日龄断奶，按常规程序对仔猪进行免疫和饲养管理。
[0019]与对照组，白头翁提取物组或蒙脱石氧化锌复合物组相比，肠黏膜TGF-β诱生剂组仔猪在断奶后3天、7天和10天肠黏膜中TGFP P TG β2、TGFP3的表达显著提高(/Χ0.05)。白头翁提取物和蒙脱石氧化锌复合物在提高肠黏膜中TGF β P TG β 2、TGF β 3表达上存在显著交互作用Ο°〈0.05)。[0020]与对照组相比，肠黏膜TGF-β诱生剂组仔猪断奶后腹泻率显著降低(/Χ0.05)，断奶后3天、7天和10天肠黏膜中TGFβ I的表达分别提高了 35%0°〈Ο.05)，94%0°〈Ο.05)和71%0°<0.05)。仔猪28和35日龄绒毛高度分别提高了 18%和14%(Ρ〈0.05)，血浆D -乳酸含量分别降低了 32%和27% Ο°〈0.05)，血浆二胺氧化酶活性分别降低了 25%和21%(/Χ0.05)。结果提示，断奶仔猪饲粮中添加肠黏膜TGF-β诱生剂，可显著提高仔猪断奶后肠黏膜TGF β表达，促进肠黏膜修复，从而改善肠黏膜形态，降低肠黏膜通透性，缓解仔猪断奶后腹泻。
[0021]实施例2
予页备:根据文献 “Preparation of zinc oxide - montmori I 1nite hybrids，，(见:Khaorapapong, N., N.Khumchoo, M.0gawa.Mater.Lett.2011, 65:657 - 660)的方法制备蒙脱石氧化锌复合物。按重量百分比计，蒙脱石氧化锌复合物中氧化锌的含量为5%。
[0022]取白头翁提取物500公斤、蒙脱石氧化锌复合物1000公斤混合后拌匀，即得一种肠黏膜TGF-β诱生剂。
[0023]试验将400羽21日龄的AA肉鸡分为5个处理组，热中性组(thermoneutralzone)、热应激组、白头翁提取物组(热应激+白头翁提取物)、蒙脱石氧化锌组(热应激+蒙脱石氧化锌)、肠黏膜TGF- β诱生剂组(热应激+肠黏膜TGF- β诱生剂)，每个处理组设4个重复，每个重复20羽。热中性组鸡舍温度为22° C。热应激处理组每天08:00至18:00鸡舍温度为33° C，18:00至次日08:00鸡舍温度为22° C。饲养试验持续21 d。
[0024]与热中性组相比，热应激组肉鸡料重比升高，空肠绒毛高度降低，电阻值降低，荧光素标记葡聚糖(FD4)通透性升高，表明热应激损伤了肠黏膜，使肠黏膜形态和肠屏障功能受损。
[0025]在热应激处理中添加肠黏膜TGF-β诱生剂，使肉鸡肠黏膜中TGF^、TG32、TGF β 3的表达显著提高(7X0.05)。白头翁提取物和蒙脱石氧化锌复合物在提高肠黏膜中TGF β P TG β 2、TGF β 3表达上存在显著交互作用Ο°〈0.05)。
[0026]与热应激组相比，添加肠黏膜TGF-β诱生剂组肉鸡肠黏膜TGFi3 i表达提高了65%0°<0.05)，绒毛高度提高了 27%(P〈0.05)，荧光素标记葡聚糖(FD4)通透性降低了 20%(7X0.05)。结果提示，热应激肉鸡饲粮中添加肠黏膜TGF-β诱生剂，可显著提高肉鸡肠黏膜TGFii表达，促进肠黏膜修复，从而改善热应激肉鸡的肠黏膜形态，改善肠上皮屏障功倉泛。
[0027]实施例3
予页备:根据文献“Ultraviolet resistance and antimicrobial properties ofZnO-supported zeolite filled isotactic polypropylene composites，，(见:Jiang, J.,Li, G., Ding, Q., Mai, K.C., Polym.Degrad.Stabi1.2012，97，833-838.)的方法制备沸石氧化锌复合物。按重量百分比计，沸石氧化锌复合物中氧化锌的含量为20%。
[0028]取白头翁提取物200公斤、沸石氧化锌复合物600公斤混合后拌匀，即得一种肠黏膜TGF-β诱生剂。
[0029]选用96头平均体重为5.7 kg的21日龄“杜X长X嘉”断奶仔猪，随机分成4组:对照组；白头翁提取物组；沸石氧化锌复合物组；肠黏膜TGF-β诱生剂组。每组3个重复，每个重复8头仔猪。试验期为14 d。[0030]与对照组，白头翁提取物组或沸石氧化锌复合物组相比，肠黏膜TGF-β诱生剂组仔猪肠黏膜中TGF β PTG β 2、TGF β 3的表达显著提高Ο°〈0.05)。白头翁提取物和沸石氧化锌复合物在提高肠黏膜中TGFii表达上存在显著交互作用(/Χ0.05)。
[0031]与对照组相比，肠黏膜TGF-β诱生剂组仔猪断奶后腹泻率显著降低0°〈0.05)，断奶后肠黏膜中TGF β i表达提高了 65% (/X0.05)，绒毛高度提高了 20%(P〈0.05)，荧光素标记葡聚糖(FD4)通透性降低了 27% 0°〈0.05)。结果提示，断奶仔猪饲粮中添加肠黏膜TGF-β诱生剂，可显著提高仔猪断奶后肠黏膜TGF β表达，促进肠黏膜修复，从而改善肠黏膜形态，降低肠黏膜通透性 ，缓解仔猪断奶后腹泻。
【权利要求】
1.一种肠黏膜TGF-β诱生剂，其特征在于其组成为:白头翁提取物1~5重量份、蒙脱石氧化锌复合物5~10重量份。
2.根据权利要求1所述的一种肠黏膜TGF-β诱生剂，其特征在于，所述的蒙脱石氧化锌复合物中氧化锌的重量百分含量为5~30%。
3.一种肠黏膜TGF-β诱生剂，其特征在于其组成为:白头翁提取物1~5重量份、沸石氧化锌复合物5~10重量份。
4.根据权利要求3所述的一种肠黏膜TGF-β诱生剂，其特征在于，所述的沸石氧化锌复合物中氧化锌的重量百分含量为5~30%。
【文档编号】A61P1/00GK103784522SQ201410038175
【公开日】2014年5月14日 申请日期:2014年1月27日 优先权日:2014年1月27日
【发明者】胡彩虹, 肖堪, 宋泽和, 柯亚露, 焦乐飞 申请人:浙江大学