一种小柴胡胶囊的制备方法及应用的制作方法
【专利摘要】本发明提供一种小柴胡胶囊的制备方法，由柴胡445g、姜制半夏222g、黄芩167g、党参167g、甘草167g、生姜167g、大枣167g作为原料药制成，采用超临界萃取制备而成，使得含量有很大提高，服用量减少，本发明还提供了小柴胡胶囊在制备抑制人组织细胞淋巴瘤U937细胞增殖药物和升高红细胞药物中的应用。
【专利说明】一种小柴胡胶囊的制备方法及应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及中药制剂【技术领域】，具体涉及一种小柴胡胶囊的制备方法及应用。
【背景技术】
[0002]小柴胡胶囊记载于部颁标准，处方为柴胡445g、姜制半夏222g、黄芩167g、党参167g、甘草167g、生姜167g、大枣167g，以上七味，党参45g及甘草粉碎成细粉，取96g备用，其余细粉与剩余党参及柴胡、黄芩、大枣加水煎煮二次，每次1.5小时，合并滤液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.0 - 1.2 (800C );姜半夏、生姜照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法(中国药典2010年版一部附录10)，用70 %的乙醇作溶剂，浸溃24小时后，以每分钟1- 3ml的速度缓缓渗漉，收集渗漉液约900ml，回收乙醇，与浓缩液合并，浓缩成相对密度为1.20 — 1.25(80°C)的稠膏，加入上述备用细粉，混匀，干燥，研细，制成颗粒，干燥，制成1000粒胶囊，即得。
[0003]现有技术中，尚未有小柴胡胶囊在提取制备方面采用超临界技术的报道，而采用水煎煮的方法，工艺 粗糙、落后，杂质多，导致患者用量过大，不方便服用，严重影响了本品在临床上应用。
【发明内容】
[0004]发明目的:为了解决上述问题，本发明的目的在于提供一种小柴胡胶囊的制备方法。
[0005]本发明的另一个目的在于提供一种小柴胡胶囊在制备抑制人组织细胞淋巴瘤U937细胞增殖药物和升高红细胞药物中的应用。
[0006]技术方案:本发明的目的是通过如下的方案实现的:
[0007]一种小柴胡胶囊的制备方法，由柴胡445g、姜制半夏222g、黄芩167g、党参167g、甘草167g、生姜167g、大率167g作为原料药制成,所述的方法由下列步骤组成:柴胡445g、姜制半夏222g、黄芩167g、党参167g、甘草167g、生姜167g、大枣167g加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6%，萃取压力15-30MPa，温度30_50°C，C02流量l_3ml/g生药.π?η，萃取时间150_180min，得超临界萃取物，浓缩成80°C时相对密度为1.20 — 1.25的稠膏，加入淀粉，混匀，干燥，研细，制成颗粒，干燥，制成1000粒胶囊，即得。
[0008]上述小柴胡胶囊的制备方法，所述CO2超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%。
[0009]上述小柴胡胶囊的制备方法，所述CO2超临界萃取的萃取压力20MPa，温度40°C，CO2流量2ml/g生药.min,萃取时间160min。
[0010]上述小柴胡胶囊在制备抑制人组织细胞淋巴瘤U937细胞增殖药物中的应用，小柴胡胶囊由柴胡445g、姜制半夏222g、黄芩167g、党参167g、甘草167g、生姜167g、大枣167g作为原料药制成，制备方法由下列步骤组成:取柴胡445g、姜制半夏222g、黄芩167g、党参167g、甘草167g、生姜167g、大枣167g加入到C02超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6%，萃取压力15-30MPa，温度30_50°C，C02流量l-3ml/g生药.min，萃取时间150_180min，得超临界萃取物，浓缩成80°C时相对密度为
1.20 — 1.25的稠膏，加入淀粉，混匀，干燥，研细，制成颗粒，干燥，制成1000粒胶囊，即得。
[0011]上述小柴胡胶囊在制备抑制人组织细胞淋巴瘤U937细胞增殖药物中的应用，小柴胡胶囊制备方法中所述CO2超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%。
[0012]上述小柴胡胶囊在制备抑制人组织细胞淋巴瘤U937细胞增殖药物中的应用，小柴胡胶囊制备方法中所述CO2超临界萃取的萃取压力20MPa，温度40°C，CO2流量2ml/g生药.min,萃取时间160min。
[0013]上述小柴胡胶囊在制备升高红细胞药物中的应用，小柴胡胶囊由柴胡445g、姜制半夏222g、黄芩167g、党参167g、甘草167g、生姜167g、大枣167g作为原料药制成，制备方法由下列步骤组成:取柴胡445g、姜制半夏222g、黄芩167g、党参167g、甘草167g、生姜167g、大枣167g加入到C02超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6%，萃取压力15-30MPa，温度30_50°C，C02流量l_3ml/g生药.π?η，萃取时间150-180min，得超临界萃取物，浓缩成80°C时相对密度为1.20 - 1.25的稠膏，加入淀粉，混匀，干燥，研细，制成颗粒，干燥，制成1000粒胶囊，即得。
[0014]上述小柴胡胶囊在制备升高红细胞药物中的应用，小柴胡胶囊制备方法中所述CO2超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%。
[0015]上述小柴胡胶囊在制备升高红细胞药物中的应用，小柴胡胶囊制备方法中所述CO2超临界萃取的萃取压力20MPa，温度40°C，CO2流量2ml/g生药.π?η，萃取时间160min。
[0016]现有技术中，原小柴胡胶囊每粒片0.4g，每次4粒，一日3次，采用本发明制备成的小柴胡胶囊每粒0.4g，但含有的药材量约是原来的2倍，因此每次仅需2粒，一日服用3次，在具有更多活性成分的条件下大大减少了服用量。
[0017]试验一、不同方法制备的小柴胡胶囊中柴胡皂苷a含量的比较
[0018]1、仪器及试药本发明小柴胡胶囊:按实施例3方法制备，取柴胡445g、姜制半夏222g、黄芩167g、党参167g、甘草167g、生姜167g、大枣167g加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%，萃取压力20MPa，温度40°C，CO2流量2ml/g生药.min，萃取时间160min，得超临界萃取物，浓缩成80°C时相对密度为1.22的稠膏，加入淀粉，混匀，干燥，研细，制成颗粒，干燥，制成1000粒胶囊，即得。Agilentl200高效液相色谱仪；METTLER AE240电子分析天平；柴胡皂苷a标准品(中国药品生物制品检定所)。
[0019]2、方法
[0020]色谱条件与系统适用性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水(66:34)，为流动相；检测波长为204nm。理论板数按柴胡皂苷a峰计算，应不低于3000。
[0021]对照品溶液的制备:精密称取在60°C减压干燥4小时的柴胡皂苷a对照品适量，加甲醇制成每1ml含18μ g的溶液，即得。
[0022]供试品溶液的制备:取本发明小柴胡胶囊和原小柴胡胶囊，研细，混匀，取lg，精密称定，精密加入70%乙醇20ml，密塞，超声处理10分钟，离心，取上清液，即得。
[0023]测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得。
[0024]3、结果
[0025]结 果表明，本发明小柴胡胶囊中柴胡皂苷a的含量为0.36mg/粒；而原小柴胡胶囊中柴胡皂苷a的含量为0.17mg/粒，在服用量减少的情况下，柴胡皂苷a含量有很大提高。
[0026]上述研究表明，采用本发明制备的小柴胡胶囊，有效成分含量高于部颁标准法制备的小柴胡胶囊，服用量可以减少。
【具体实施方式】
[0027]以下通过实施例形式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例，凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
[0028]实施例1
[0029]取柴胡445g、姜制半夏222g、黄芩167g、党参167g、甘草167g、生姜167g、大枣167g加入到C02超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4%，萃取压力15MPa，温度30。。，CO2流量lml/g生药.π?η，萃取时间150min，得超临界萃取物，浓缩成80°C时相对密度为1.20的稠膏，加入淀粉，混匀，干燥，研细，制成颗粒，干燥，制成1000粒胶囊，即得。
[0030]实施例2
[0031]取柴胡445g、姜制半夏222g、黄芩167g、党参167g、甘草167g、生姜167g、大枣167g加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为6%，萃取压力30MPa，温度50°C，CO2流量3ml/g生药.π?η，萃取时间180min，得超临界萃取物，浓缩成80°C时相对密度为1.25的稠膏，加入淀粉，混匀，干燥，研细，制成颗粒，干燥，制成1000粒胶囊，即得。
[0032]实施例3
[0033]取柴胡445g、姜制半夏222g、黄芩167g、党参167g、甘草167g、生姜167g、大枣167g加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%，萃取压力20MPa，温度40°C，CO2流量2ml/g生药.π?η，萃取时间160min，得超临界萃取物，浓缩成80°C时相对密度为1.22的稠膏，加入淀粉，混匀，干燥，研细，制成颗粒，干燥，制成1000粒胶囊，即得。
[0034]试验二:小柴胡胶囊抑制U937细胞增殖的实验研究资料
[0035]I实验材料
[0036]1.1实验用细胞株
[0037]人组织细胞淋巴瘤U937细胞，南京医科大学实验室细胞库，DMEM+10% FBS常规培养。
[0038]1.2实验药物
[0039]研究药物:本发明小柴胡胶囊:按实施例3方法制备。
[0040]药液储液:称取IOOmg小柴胡胶囊，溶于5ml无水乙醇中，0.2 μ m滤器过滤，500 μ Idoff管分装，_20°C存储，同时0.2 μ m滤器过滤无水乙醇以备对照组之用。按同样方法制备柴胡的对照组样品。[0041]1.3实验试剂
[0042]DMEM(GIBC0 公司 Cat.N0.12100_061Lot.N0.758137);胎牛血清(浙江天杭生物科技有限公司Lot.N0.100419) ；NaHC03 (上海久亿化学试剂有限公司Cat.N0.11810-033Lot.N0.1088387) ;Trypsin(AMRESC0 公司批号:2010/04) ；EDTA(AMRESC0公司批号:2009/10) ；Penicillin G Sodium Salt(AMRESC0 公司批号:2010242)；Streptomycin Sulfate (AMRESC0公司批号:2010382);无水乙醇(南京化学试剂有限公司批号:080310182) ;MTT(Biosharp 批号:0793) ;PBS(实验室自配)；
[0043]1.4实验器材
[0044]莱卡倒置显微镜(德国Leica型号:DM1L);可见-紫外光微孔板检测仪(美国MD公司型号:SPECTRA MAX190) ;C02培养箱(F0RMA型号:3111);超净台(苏净集团安泰公司制造型号:SW-CJ-ZFD);纯水仪(美国Spring公司型号:S/N020579);精密移液器(法国吉尔森公司型号:P2);电子天平(德国赛多利斯有限公司型号:BT323S);全自动高压灭菌锅(日本SANK)公司型号:MLS-3020);台式电热鼓风干燥箱(上海精密实验设备公司型号:DHG9123A);冰箱(西门子公司型号:KG18V21TI);液氮罐(CBS型号:2001);低速离心机(上海安亭科学仪器厂型号:ΚΑ-1000) ;0.2μπι滤器(MILLIP0RE型号:SLGP033RB) ；10cm培养皿(NEST公司)、96孔培养板(NEST公司);细胞计数板；离心管、移液管、Tips若干。
[0045]2实验方法
[0046]1)U937细 胞用DMEM+10%FBS于37°C、5%C02进行常规培养(IOcm培养皿)，当细胞生长至对数期时，收集细胞，弃去培养液，PBS轻洗3遍，加入3ml0.25%胰蛋白酶-0.04%EDTA，37°C消化2min后，向其中加入5ml完全培养基中和反应，吹打细胞后将其转入离心管中，1000rpm离心5min，调整细胞悬液浓度3X 104个/ml。
[0047]2)将细胞种入96孔培养板中，每孔加入细胞悬液180 μ I,培养板放入细胞培养箱中(37°C，5% C02)常规培养。
[0048]3)根据细胞生长情况，一般长至50% -70%，加入小柴胡胶囊溶液或柴胡的对照组样品，继续培养24h。
[0049]4) 24h 后加入 20 μ I MTT 溶液(5mg/ml，即 0.5% MTT)，继续培养 4h。
[0050]5) 4h后扣板法倒去上清，用吸水纸轻轻拍干，每孔加入200 μ I 二甲基亚砜，置摇床上低速振荡lOmin，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪490nm处测量各孔的吸光值。
[0051]6)同时设置本底(不加细胞，只加培养液)，对照孔(细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜)，每组设定6个复孔。
[0052]7)结果以药物对细胞的抑制率表示:
[0053]细胞增值抑制率(％ )=(对照孔OD值-给药孔OD值)/对照孔OD值X 100 %。实验重复3次。
[0054]3统计处理
[0055]采用Microsoft Excel2003软件中的相关分析和Student t检验，数据以mean+ S.D.表不。
[0056]4实验结果
[0057]MTT法实验后统计结果显示，与对照组比较，当剂量达到5mg/ml时，对U937细胞增殖抑制有差异(p〈0.05)，剂量在10mg/ml时该差异具有显著性(P〈0.01)，当剂量达到15-20mg/ml时有极显著性差异(P〈0.001)。
[0058]表1小柴胡胶囊对U937细胞增殖抑制影响研究(文土 SD)
【权利要求】
1.一种小柴胡胶囊的制备方法，由柴胡445g、姜制半夏222g、黄芩167g、党参167g、甘草167g、生姜167g、大枣167g作为原料药制成，其特征在于所述的方法由下列步骤组成:柴胡445g、姜制半夏222g、黄芩167g、党参167g、甘草167g、生姜167g、大枣167g加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6%，萃取压力15-30MPa，温度30_50°C，C02流量l_3ml/g生药.π?η，萃取时间150_180min，得超临界萃取物，浓缩成80°C时相对密度为1.20 — 1.25的稠膏，加入淀粉，混匀，干燥，研细，制成颗粒，干燥，制成1000粒胶囊，即得。
2.根据权利要求1所述一种小柴胡胶囊的制备方法，其特征在于所述CO2超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%。
3.根据权利要求1所述一种小柴胡胶囊的制备方法，其特征在于所述CO2超临界萃取的萃取压力20MPa,温度40°C, CO2流量2ml/g生药.min,萃取时间160min。
4.根据权利要求1所述一种小柴胡胶囊在制备抑制人组织细胞淋巴瘤U937细胞增殖药物中的应用，其特征在于小柴胡胶囊由柴胡445g、姜制半夏222g、黄芩167g、党参167g、甘草167g、生姜167g、大枣167g作为原料药制成，制备方法由下列步骤组成:取柴胡445g、姜制半夏222g、黄芩167g、党参167g、甘草167g、生姜167g、大枣167g加入到C02超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6%，萃取压力15-30MPa，温度30_50°C，C02流量l_3ml/g生药.π?η，萃取时间150_180min，得超临界萃取物，浓缩成80°C时相对密度为1.20 — 1.25的稠膏，加入淀粉，混匀，干燥，研细，制成颗粒，干燥，制成1000粒胶囊，即得。
5.根据权利要求4所述一种小柴胡胶囊在制备抑制人组织细胞淋巴瘤U937细胞增殖药物中的应用，其特征在 于小柴胡胶囊制备方法中所述CO2超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5 %。
6.根据权利要求4所述一种小柴胡胶囊在制备抑制人组织细胞淋巴瘤U937细胞增殖药物中的应用，其特征在于小柴胡胶囊制备方法中所述CO2超临界萃取的萃取压力20MPa，温度40°C, CO2流量2ml/g生药.min，萃取时间160min。
7.根据权利要求1所述的小柴胡胶囊在制备升高红细胞药物中的应用，其特征在于小柴胡胶囊由柴胡445g、姜制半夏222g、黄芩167g、党参167g、甘草167g、生姜167g、大枣167g作为原料药制成，制备方法由下列步骤组成:取柴胡445g、姜制半夏222g、黄芩167g、党参167g、甘草167g、生姜167g、大枣167g加入到C02超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6%，萃取压力15-30MPa，温度30_50°C，C02流量l-3ml/g生药.min，萃取时间150_180min，得超临界萃取物，浓缩成80°C时相对密度为1.20 — 1.25的稠膏，加入淀粉，混匀，干燥，研细，制成颗粒，干燥，制成1000粒胶囊，即得。
8.根据权利要求7所述一种小柴胡胶囊在制备升高红细胞药物中的应用，其特征在于小柴胡胶囊制备方法中所述CO2超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%。
9.根据权利要求7所述一种小柴胡胶囊在制备升高红细胞药物中的应用，其特征在于小柴胡胶囊制备方法中所述CO2超临界萃取的萃取压力20MPa，温度40°C，CO2流量2ml/g生药.min,萃取时间160min。
【文档编号】A61K9/48GK103977391SQ201410256768
【公开日】2014年8月13日 申请日期:2014年6月11日 优先权日:2014年6月11日
【发明者】杨建云 申请人:云南云龙制药股份有限公司