恰玛古硫代葡萄糖苷提取物及其制备方法
【专利摘要】本发明涉及恰玛古的提取及制备【技术领域】，是一种恰玛古硫代葡萄糖苷提取物及其制备方法；该恰玛古硫代葡萄糖苷提取物按下述制备方法得到：第一步，将原料恰玛古洗净粉碎后真空干燥得到干恰玛古，按1克干恰玛古中加入7毫升至11毫升的体积百分比为80%至100%的甲醇水溶液计，向干恰玛古中加入甲醇水溶液，在温度为80℃下恒温水浴0.5小时至1.5小时进行一次提取，一次提取分离后得到一次提取液和一次残留物。本发明恰玛古硫代葡萄糖苷提取物中硫代葡萄糖苷的平均含量较现有恰玛古提取物中硫代葡萄糖苷的平均含量有很大提高，说明本发明中硫代葡萄糖苷的得率高，从而提高了提取效率，更能满足现有工业化生产的要求。
【专利说明】恰玛古硫代葡萄糖苷提取物及其制备方法 【技术领域】
[〇〇〇1] 本发明涉及恰玛古的提取及制备【技术领域】，是一种恰玛古硫代葡萄糖苷提取物及 其制备方法。 【背景技术】
[0002] 恰玛古，学名为芜菁rapa L.)，维吾尔语称为"恰玛古"（音译）；据 《中国农业百科全书蔬菜卷》介绍，芜菁起源于地中海沿岸及中亚一带，是十字花科芸薹 属芸薹种下的芜菁亚种，中世纪在埃及和欧洲已有栽培。硫代葡萄糖苷（GS)，尤其是芳香 族 GS (gluconasturtiin)。gluconasturtiin 的水解产物苯乙基异硫氰酸脂（Phenethl isothiocyanate，PEITC)被很多研究证明，有着特殊的抑制致肺肿瘤物质中4-甲基亚硝 胺-1- (3-吡啶）-1-丁酮（NNK)的作用，具有潜在的抗肺癌、胃癌、食道癌等功能的生物活 性。中医学认为"药食同源"，在中医经典著作中记述有多种食用植物，它们无毒并可作为辅 助肿瘤治疗的理想研究对象。恰玛古作为一种传统的药食两用植物，含有多种人体的有益 元素，同时恰玛古中的硫代葡萄糖苷作为有效的抗癌成分已得到充分的实验证明。现有常 用恰玛古的硫苷类化合物提取分离方法(王菁等.西北药学杂志，2013,28 (3) ,237-239，） 《新疆芜菁中硫代葡萄糖苷提取工艺条件的优化》中公开了使用沸水回流提取恰玛古中的 硫苷类化合物，但这种方法存在硫代葡萄糖苷得率低，不能满足现有工业化生产的要求。
【发明内容】
[0003] 本发明提供了一种恰玛古硫代葡萄糖苷提取物及其制备方法，克服了上述现有技 术之不足，其能有效解决现有从恰玛古中提取的硫代葡萄糖苷得率低，不能满足现有工业 化生产要求的问题。
[0004] 本发明的技术方案之一是通过以下措施来实现的：一种恰玛古硫代葡萄糖苷提取 物，按下述方法得到：第一步，将原料恰玛古洗净粉碎后真空干燥得到干恰玛古，按1克干 恰玛古中加入7毫升至11毫升的体积百分比为80%至100%的甲醇水溶液计，向干恰玛古 中加入甲醇水溶液，在温度为80°C下恒温水浴0. 5小时至1. 5小时进行一次提取，一次提取 分离后得到一次提取液和一次残留物；第二步，在一次残留物中加入和第一步等体积的体 积百分比为80%至100%的甲醇水溶液，在温度为80°C下恒温水浴0. 5小时至1. 5小时进行 二次提取，二次提取分离后得到二次提取液和二次残留物；第三步，将一次提取液和二次提 取液混合后得到混合提取液，在混合提取液中加入混合提取液1/10至1/8体积的醋酸钡水 溶液并混合均匀，醋酸钡水溶液的浓度为〇. 4摩尔/升，静置30min至50min，然后在离心机 中离心lOmin至20min后，收集上清液；第四步，上清液经滤膜、浓缩干燥后得到固体粉末， 即为恰玛古硫代葡萄糖苷提取物。
[0005] 下面是对上述发明技术方案之一的进一步优化或/和改进： 上述第一步中，将原料恰玛古粉碎至粒径为50目至10目，然后将粉碎后的原料恰玛古 放置在温度为40°C至70°C、压力为-0. 06Mpa至-0. 09Mpa下真空干燥得到质量百分含水率 小于等于20%的干恰玛古。
[0006] 上述离心机的转速为3000rpm至5000rpm。
[0007] 上述滤膜的孔径为0· 45 μ m。
[0008] 上述第四步中，浓缩干燥温度为50°C至70°C、浓缩干燥至恰玛古硫代葡萄糖苷提 取物中质量百分含水率小于等于8%。
[0009] 本发明的技术方案之二是通过以下措施来实现的：一种恰玛古硫代葡萄糖苷提取 物的制备方法，按下述方法进行：第一步，将原料恰玛古洗净粉碎后真空干燥得到干恰玛 古，按1克干恰玛古中加入7毫升至11毫升的体积百分比为80%至100%的甲醇水溶液计， 向干恰玛古中加入甲醇水溶液，在温度为80°C下恒温水浴0. 5小时至1. 5小时进行一次提 取，一次提取分离后得到一次提取液和一次残留物；第二步，在一次残留物中加入和第一步 等体积的体积百分比为80%至100%的甲醇水溶液，在温度为80°C下恒温水浴0. 5小时至 1. 5小时进行二次提取，二次提取分离后得到二次提取液和二次残留物；第三步，将一次提 取液和二次提取液混合后得到混合提取液，在混合提取液中加入混合提取液1/10至1/8体 积的醋酸钡水溶液并混合均匀，醋酸钡水溶液的浓度为〇. 4摩尔/升，静置30min至50min， 然后在离心机中离心lOmin至20min后，收集上清液；第四步，上清液经滤膜、浓缩干燥后得 到固体粉末，即为恰玛古硫代葡萄糖苷提取物。
[〇〇1〇] 下面是对上述发明技术方案之二的进一步优化或/和改进： 上述第一步中，将原料恰玛古粉碎至粒径为50目至10目，然后将粉碎后的原料恰玛古 放置在温度为40°C至70°C、压力为-0. 06Mpa至-0. 09Mpa下真空干燥得到质量百分含水率 小于等于20%的干恰玛古。
[0011] 上述离心机的转速为3000rpm至5000rpm。
[0012] 上述滤膜的孔径为0. 45 μ m。
[0013] 上述第四步中，浓缩干燥温度为50°C至70°C、浓缩干燥至恰玛古硫代葡萄糖苷提 取物中质量百分含水率小于等于8%。
[0014] 本发明恰玛古硫代葡萄糖苷提取物中硫代葡萄糖苷的平均含量较现有恰玛古提 取物中硫代葡萄糖苷的平均含量有很大提高，说明本发明中硫代葡萄糖苷的得率高，从而 提高了提取效率，更能满足现有工业化生产的要求。 【专利附图】
【附图说明】
[0015] 附图1为本发明中甲醇水溶液浓度对恰玛古中硫代葡萄糖苷提取的影响曲线图。
[0016] 附图2为本发明中甲醇水溶液用量对恰玛古中硫代葡萄糖苷提取的影响曲线图。
[0017] 附图3为本发明中提取时间对恰玛古中硫代葡萄糖苷提取的影响曲线图。
[0018] 附图4为本发明中提取次数对恰玛古中硫代葡萄糖苷提取的影响曲线图。 【具体实施方式】
[〇〇19] 本发明不受下述实施例的限制，可根据本发明的技术方案与实际情况来确定具体 的实施方式。下面提到的甲醇水溶液浓度都为体积百分比浓度；甲醇水溶液用量都为按1 克干恰玛古中加入的甲醇水溶液量，甲醇水溶液量的单位为毫升。
[0020] 实施例1，该恰玛古硫代葡萄糖苷提取物，按下述制备方法得到：第一步，将原料 恰玛古洗净粉碎后真空干燥得到干恰玛古，按1克干恰玛古中加入7毫升至11毫升的体积 百分比为80%至100%的甲醇水溶液计，向干恰玛古中加入甲醇水溶液，在温度为80°C下恒 温水浴0. 5小时至1. 5小时进行一次提取，一次提取分离后得到一次提取液和一次残留物； 第二步，在一次残留物中加入和第一步等体积的体积百分比为80%至100%的甲醇水溶液， 在温度为80°C下恒温水浴0. 5小时至1. 5小时进行二次提取，二次提取分离后得到二次提 取液和二次残留物；第三步，将一次提取液和二次提取液混合后得到混合提取液，在混合提 取液中加入混合提取液1/10至1/8体积的醋酸钡水溶液并混合均匀，醋酸钡水溶液的浓度 为0. 4摩尔/升，静置30min至50min，然后在离心机中离心lOmin至20min后，收集上清 液；第四步，上清液经滤膜、浓缩干燥后得到固体粉末，即为恰玛古硫代葡萄糖苷提取物。
[0021] 实施例2,该恰玛古硫代葡萄糖苷提取物，按下述制备方法得到：第一步，将原料 恰玛古洗净粉碎后真空干燥得到干恰玛古，按1克干恰玛古中加入7毫升或11毫升的体积 百分比为80%或100%的甲醇水溶液计，向干恰玛古中加入甲醇水溶液，在温度为80°C下恒 温水浴0. 5小时或1. 5小时进行一次提取，一次提取分离后得到一次提取液和一次残留物； 第二步，在一次残留物中加入和第一步等体积的体积百分比为80%或100%的甲醇水溶液， 在温度为80°C下恒温水浴0. 5小时或1. 5小时进行二次提取，二次提取分离后得到二次提 取液和二次残留物；第三步，将一次提取液和二次提取液混合后得到混合提取液，在混合提 取液中加入混合提取液1/10或1/8体积的醋酸钡水溶液并混合均匀，醋酸钡水溶液的浓度 为0. 4摩尔/升，静置30min或50min，然后在离心机中离心lOmin或20min后，收集上清 液；第四步，上清液经滤膜、浓缩干燥后得到固体粉末，即为恰玛古硫代葡萄糖苷提取物。
[0022] 实施例3,作为上述实施例的优化，实施例3的第一步中，将原料恰玛古粉碎 至粒径为50目至10目，然后将粉碎后的原料恰玛古放置在温度为40°C至70°C、压力 为-0. 06Mpa至-0. 09Mpa下真空干燥得到质量百分含水率小于等于20%的干恰玛古。
[0023] 实施例4,作为上述实施例的优化，实施例4中离心机的转速为3000rpm至 5000rpm〇
[0024] 实施例5,作为上述实施例的优化，实施例5中滤膜的孔径为0. 45 μ m。
[0025] 实施例6,作为上述实施例的优化，实施例6的第四步中，浓缩干燥温度为50°C至 70°C、浓缩干燥至恰玛古硫代葡萄糖苷提取物中质量百分含水率小于等于8%。
[0026] 本发明上述实施例中各工艺参数的优选按如下步骤确定(本发明中以硫代葡萄糖 苷为对照品，按照NY/T 1103. 3-2006转基因植物及其产品食用安全检测抗营养素第3部分 硫代葡萄糖苷的测定方法进行硫代葡萄糖苷吸光度的测定）： 1、甲醇水溶液浓度的考察 甲醇水溶液浓度的单因素考察见表1，按表1中的因素条件从原料恰玛古中提取硫代 葡萄糖苷，并测定其硫代葡萄糖苷吸光度。
[0027] 甲醇水溶液浓度单因素试验结果：从图1可看出，不同浓度的甲醇水溶液对原料 恰玛古中硫代葡萄糖苷的提取率有一定的影响，硫代葡萄糖苷的提取量随着甲醇水溶液浓 度的提高而提高，由图1可以看出，甲醇水溶液的体积百分比浓度为100%时从原料恰玛古 中提取的硫代匍萄糖昔含量最1?。
[0028] 2、甲醇水溶液用量的考察 甲醇水溶液用量的单因素考察见表2,按表2中的因素条件从原料恰玛古中提取硫代 葡萄糖苷，并测定其硫代葡萄糖苷吸光度。
[0029] 甲醇水溶液用量单因素试验结果：从图2可看出，甲醇水溶液的体积百分比浓度 为100%-定时，甲醇水溶液用量对原料恰玛古中硫代葡萄糖苷的提取率有一定的影响，当 甲醇水溶液用量按1克干恰玛古中加入5毫升到7毫升的甲醇水溶液时硫代葡萄糖苷的含 量增加较快，按1克干恰玛古中加入7毫升至13毫升的甲醇水溶液时硫代葡萄糖苷的含量 增加较慢。
[0030] 3、提取时间的考察 提取时间的单因素考察见表3,按表3中的因素条件从原料恰玛古中提取硫代葡萄糖 苷，并测定其硫代葡萄糖苷吸光度。
[0031] 提取时间单因素试验结果：硫代葡萄糖苷溶解于提取介质中需要一定的时间，时 间过短，硫代葡萄糖苷溶解不充分，硫代葡萄糖苷含量不高。从图3中可看出，提取时间在 小于1. 0小时时，硫代葡萄糖苷含量随时间的延长而增加；提取时间超过1. 0小时后，硫代 葡萄糖苷含量随时间的延长而减小。综合考虑提取时间对硫代葡萄糖苷结构稳定性的影 响。实际提取时间控制在1. 〇小时较为合适。
[0032] 4提取次数的考察 提取次数的单因素考察见表4,按表4的因素条件从原料恰玛古中提取硫代葡萄糖苷， 并测定其硫代葡萄糖苷吸光度。
[0033] 提取次数单因素试验结果：原料恰玛古中硫代葡萄糖苷含量较高，一次性提取不 可能将所有的硫代葡萄糖苷从原料恰玛古中提取出来，提取次数过少，会造成硫代葡萄糖 苷损失，原料浪费，进而增加成本，而提取次数过多会导致提取液体积过大，增加浓缩步骤 的负担，因此选择合适的提取次数，对合理利用原料恰玛古资源尤为重要，从图4中可看 出，当提取次数低于2次时，硫代葡萄糖苷含量随着提取次数的增加上升较快，但2次以后， 硫代葡萄糖苷含量上升缓慢，由此可知，提取次数控制在2次为宜。
[0034] 5正交试验 在单因素试验的基础上，选取甲醇水溶液浓度、甲醇水溶液用量和提取时间3项作为 考察因素，每个因素各取3个水平，进行正交试验设计L9 (33);以硫代葡萄糖苷含量为指 标，确定从原料恰玛古中提取硫代葡萄糖苷的最优提取工艺条件，并对最优条件进行验证 试验；正交试验因素水平表见表5 ;硫代葡萄糖苷提取工艺正交试验结果见表6 ;硫代葡萄 糖苷提取工艺方差分析结果见表7。
[0035] 正交试验结果：从表6可知，本发明恰玛古硫代葡萄糖苷提取物中硫代葡萄糖苷 平均含量在13. 90 μ mol/g至17. 15 μ mol/g之间；3个因素对恰玛古中硫代葡萄糖苷提取 的影响大小依次为A>B>C，即甲醇水溶液浓度〉甲醇水溶液用量〉提取时间，最佳提取工艺 为A1B1C2,即按1克干恰玛古中加入11毫升体积百分比浓度为100%甲醇，提取2次，每次 1. 0小时。
[0036] 从表7经方差分析表明：A因素的影响具有显著性（P < 0.05)，B和C因素的影响 均无显著性（P > 0.05)，结合单因素试验结果，从大工业生产和节能降耗等全面综合考虑， 以AiB3C3组合为佳，即加7毫升量100%甲醇，提取2次，每次0. 5小时。
[0037] 6优化工艺的验证 按上述最佳提取工艺条件提取，进行验证试验，硫代葡萄糖苷提取工艺验证试验结果 见表8所示。
[0038] 从表8可以看出，按上述最佳提取工艺条件提取，在最佳条件下，总硫代葡萄糖苷 平均含量达16. 09 μ mol/g，硫代葡萄糖苷含量稳定。
[0039] 7 结论 正交试验表明，本发明从原料恰玛古中提取硫代葡萄糖苷的工艺中，甲醇水溶液浓度 是影响硫代葡萄糖苷提取率的最关键因素，然后依次是甲醇水溶液用量和提取时间。试 验得出，本发明恰玛古中硫代葡萄糖苷提取的最佳工艺条件为甲醇水溶液用量为7毫 升、提取时间为〇. 5小时、提取次数为2次。在最佳条件下，总硫代葡萄糖苷平均含量达 16. 09 μ mol/g，表明该提取方法稳定可行。
[0040] 根据上述实施例得到的恰玛古硫代葡萄糖苷提取物中硫代葡萄糖苷的平均含量 为13. 90 μ mol/g至17. 15 μ mol/g ;而现有从恰玛古中提取硫代葡萄糖苷的方法中提取物 中硫代葡萄糖苷的平均含量为12. 72 μ mol/g，本发明恰玛古硫代葡萄糖苷提取物中硫代葡 萄糖苷的平均含量较现有恰玛古提取物中硫代葡萄糖苷的平均含量有很大提高，说明本发 明中硫代葡萄糖苷的得率高，从而提高了提取效率，更能满足现有工业化生产的要求。
[0041] 以上技术特征构了本发明的实施例，其具有较强的适应性和实施效果，可根据实 际需要增减非必要的技术特征，来满足不同情况的需求。
【权利要求】
1. 一种恰玛古硫代葡萄糖苷提取物，其特征在于按下述方法得到：第一步，将原料恰 玛古洗净粉碎后真空干燥得到干恰玛古，按1克干恰玛古中加入7毫升至11毫升的体积百 分比为80%至100%的甲醇水溶液计，向干恰玛古中加入甲醇水溶液，在温度为80°C下恒温 水浴0. 5小时至1. 5小时进行一次提取，一次提取分离后得到一次提取液和一次残留物；第 二步，在一次残留物中加入和第一步等体积的体积百分比为80%至100%的甲醇水溶液，在 温度为80°C下恒温水浴0. 5小时至1. 5小时进行二次提取，二次提取分离后得到二次提取 液和二次残留物；第三步，将一次提取液和二次提取液混合后得到混合提取液，在混合提取 液中加入混合提取液1/10至1/8体积的醋酸钡水溶液并混合均匀，醋酸钡水溶液的浓度为 0. 4摩尔/升，静置30min至50min，然后在离心机中离心lOmin至20min后，收集上清液； 第四步，上清液经滤膜、浓缩干燥后得到固体粉末，即为恰玛古硫代葡萄糖苷提取物。
2. 根据权利要求1所述的恰玛古硫代葡萄糖苷提取物，其特征在于第一步中，将原 料恰玛古粉碎至粒径为50目至10目，然后将粉碎后的原料恰玛古放置在温度为40°C至 70°C、压力为-0. 06Mpa至-0. 09Mpa下真空干燥得到质量百分含水率小于等于20%的干恰 玛古。
3. 根据权利要求1或2所述的恰玛古硫代葡萄糖苷提取物，其特征在于离心机的转速 为 3000rpm 至 5000rpm。
4. 根据权利要求1或2或3所述的恰玛古硫代葡萄糖苷提取物，其特征在于滤膜的孔 径为 0· 45 μ m。
5. 根据权利要求1或2或3或4所述的恰玛古硫代葡萄糖苷提取物，其特征在于第四 步中，浓缩干燥温度为50°C至70°C、浓缩干燥至恰玛古硫代葡萄糖苷提取物中质量百分含 水率小于等于8%。
6. -种恰玛古硫代葡萄糖苷提取物的制备方法，其特征在于按下述方法进行：第一 步，将原料恰玛古洗净粉碎后真空干燥得到干恰玛古，按1克干恰玛古中加入7毫升至11 毫升的体积百分比为80%至100%的甲醇水溶液计，向干恰玛古中加入甲醇水溶液，在温度 为80°C下恒温水浴0. 5小时至1. 5小时进行一次提取，一次提取分离后得到一次提取液和 一次残留物；第二步，在一次残留物中加入和第一步等体积的体积百分比为80%至100%的 甲醇水溶液，在温度为80°C下恒温水浴0. 5小时至1. 5小时进行二次提取，二次提取分离后 得到二次提取液和二次残留物；第三步，将一次提取液和二次提取液混合后得到混合提取 液，在混合提取液中加入混合提取液1/10至1/8体积的醋酸钡水溶液并混合均匀，醋酸钡 水溶液的浓度为〇. 4摩尔/升，静置30min至50min，然后在离心机中离心lOmin至20min 后，收集上清液；第四步，上清液经滤膜、浓缩干燥后得到固体粉末，即为恰玛古硫代葡萄糖 苷提取物。
7. 根据权利要求6所述的恰玛古硫代葡萄糖苷提取物的制备方法，其特征在于第一步 中，将原料恰玛古粉碎至粒径为50目至10目，然后将粉碎后的原料恰玛古放置在温度为 40°C至70°C、压力为-0. 06Mpa至-0. 09Mpa下真空干燥得到质量百分含水率小于等于20% 的干恰玛古。
8. 根据权利要求6或7所述的恰玛古硫代葡萄糖苷提取物的制备方法，其特征在于离 心机的转速为3000rpm至5000rpm。
9. 根据权利要求6或7或8所述的恰玛古硫代葡萄糖苷提取物的制备方法，其特征在 于滤膜的孔径为0. 45 μ m。
10.根据权利要求6或7或8或9所述的恰玛古硫代葡萄糖苷提取物的制备方法，其特 征在于第四步中，浓缩干燥温度为50°C至70°C、浓缩干燥至恰玛古硫代葡萄糖苷提取物中 质量百分含水率小于等于8%。
【文档编号】A61K36/31GK104055822SQ201410266700
【公开日】2014年9月24日 申请日期:2014年6月16日 优先权日:2014年6月16日
【发明者】安熙强, 马媛, 胡旭, 向阳, 向小东, 张涛, 赵婷婷, 程江南, 张娟 申请人:新疆维吾尔自治区药物研究所, 柯坪县圣泉实业有限公司