米诺环素在制备治疗慢性缺血性血管性痴呆药物中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了米诺环素在制备治疗慢性缺血性血管性痴呆药物中的应用，本发明利用小鼠单侧颈总动脉结扎模型模拟慢性血管性痴呆，在手术造模后给予不同剂量的米诺环素，探索药物对慢性缺血性血管性痴呆的治疗作用。本发明通过新事物识别和Morris水迷宫实验评价药物对慢性缺血后小鼠空间学习记忆能力的作用，并通过白质染色、髓鞘标志性蛋白MBP免疫组化和免疫印迹实验、电镜实验、NF200免疫组化染色、少突胶质细胞和少突胶质前体免疫组化染色计数等实验评价药物对慢性缺血引起的小鼠脑白质髓鞘损伤的作用，从而探讨米诺环素对慢性缺血性血管性痴呆的治疗作用。本发明对慢性缺血性血管性痴呆的治疗具有重要意义。
【专利说明】米诺环素在制备治疗慢性缺血性血管性痴呆药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药【技术领域】，涉及米诺环素的药物用途，尤其涉及米诺环素在制备 治疗慢性缺血性血管性痴呆药物中的应用。
【背景技术】
[0002] 血管性痴呆是目前继老年性痴呆（阿尔兹海默病）之后，临床发病率排在第二位 的认知障碍性疾病。其中由慢性缺血再灌导致小血管疾病而引起的缺血性血管性痴呆是其 主要类型之一。导致慢性缺血性血管性痴呆的危险因素众多，如高血压、高血脂、糖尿病、心 脏病等。针对此类病变，目前临床上主要以控制危险因素等防范措施为主，药物治疗（如胆 碱酯酶抑制剂、血管扩张药等）的疗效有限，且不能有效逆转已经发生的损伤、减缓疾病的 进程，到目前为止还没有针对慢性缺血性血管性痴呆的特效药物，这也成为临床慢性缺血 性血管性痴呆治疗的重大难题，所以寻找新的防治药物迫在眉睫。
[0003] 米诺环素是一个半合成的第二代四环素，被用来治疗多种感染性疾病，具有较小 的不良反应。但是由于四环素的抗菌耐药性和其他新的抗生素的产生，米诺环素作为抗生 素的使用在临床上有所下降。近期除了抗菌作用外，米诺环素还被发现有新的功能，如抗 炎、抗凋亡等。由于米诺环素具有较高的脂溶性，所以容易通过血脑屏障。因此，米诺环素 可以用于治疗中枢神经系统疾病。但迄今，尚未见有关米诺环素在慢性血管性痴呆中应用 的报道。
【发明内容】
[0004] 本发明采用右侧颈总动脉永久结扎（right unilateral common carotid occlusion，rUCCAO)造成慢性缺血模拟慢性血管性痴呆，考察米诺环素对慢性血管性痴呆 的治疗作用。本发明通过新事物识别和Morris水迷宫实验评价药物对慢性缺血的小鼠空 间学习记忆能力的作用，并通过白质染色（Kliiver-Barrera染色）、髓鞘标志性蛋白MBP免 疫组化染色和免疫印迹实验、电镜观察髓鞘损伤情况、NF-200染色考察轴突损伤情况、少突 胶质细胞和少突胶质前体免疫组化染色计数等实验评价药物对慢性缺血引起的小鼠脑白 质损伤的作用，探讨米诺环素对慢性缺血性血管性痴呆的治疗作用。
[0005] 结果显示给予米诺环素不同剂量能逆转慢性缺血诱导的小鼠新事物识别分数的 下降，并逆转慢性缺血诱导的小鼠寻找平台潜伏期的延长。并且，给予米诺环素能显著逆转 慢性缺血诱导的白质神经纤维损伤、MBP蛋白表达的减少、髓鞘损伤和轴突损伤。进一步研 究发现米诺环素可以减少少突胶质细胞的死亡、促进少突胶质前体细胞的增殖，由此减轻 白质髓鞘损伤、促进髓鞘再生。以上结果表明米诺环素可用于慢性缺血性血管性痴呆疾病 的治疗。
[0006] 本发明的有益效果是，米诺环素可以改善学习记忆能力，减轻缺血后的白质损伤， 因此可以用于治疗慢性缺血性血管性痴呆，在制备治疗慢性缺血性血管性痴呆药物中具有 广阔的应用前景。
【专利附图】
【附图说明】
[0007] 图1米诺环素对慢性缺血小鼠新事物识别测试的影响，其中:与假手术组相比 P〈0. 01 :和慢性缺血组相比P〈0. 01 :和慢性缺血组相比P〈0. 001 ;
[0008] 图2米诺环素对慢性缺血小鼠 Morris水迷宫测试的影响，其中:与sham组相 比P〈0. 01 :和慢性缺血组相比P〈0. 05 :和慢性缺血组相比P〈0. 01 ;
[0009] 图3米诺环素对慢性缺血小鼠白质纤维损伤的影响，其中:与假手术组相比 P〈0. 01 :和慢性缺血组相比P〈0. 05 :和慢性缺血组相比P〈0. 001 ;标尺为50 μ m ;
[0010] 图4米诺环素对慢性缺血小鼠髓鞘蛋白MBP表达的影响，其中A为免疫组化结果； B为免疫印迹结果；:与假手术组相比P〈0. 01 ;### :与假手术组相比P〈0. 001 :和慢 性缺血组相比P〈〇. 001 ;标尺为50 μ m ;
[0011] 图5米诺环素对慢性缺血后小鼠髓鞘的影响，A-C :假手术组；D-F :慢性缺血组； G-K :米诺环素组；其中:与假手术组相比P〈0. 01 ;### :与假手术组相比P〈0. 001 :与 慢性缺血组相比P〈〇. 01，:与慢性缺血组相比P〈〇. 001 ;A，D，G :放大倍数为8900,标尺 为1μπι;Β，Ε，Η(为A，D，G虚线框内部分放大图）：放大倍数为39000,标尺为200nm;C，F， 1(为B，E，H虚线框内部分放大图）：放大倍数为135000,标尺为50nm;
[0012] 图6米诺环素对慢性缺血后小鼠胼胝体部位轴突的影响，其中:与假手术组相 比P〈0. 01 :与慢性缺血组相比P〈0. 01 ;标尺为50 μ m ;
[0013] 图7米诺环素对慢性缺血后小鼠胼胝体部位少突胶质细胞数量的影响，其中### : 与假手术组相比P〈〇. 〇〇1 :与慢性缺血组相比P〈〇. 01 ;标尺为50 μ m ;
[0014] 图8米诺环素对慢性缺血后小鼠胼胝体部位少突胶质前体细胞数量的影响，其中 :与假手术组相比P〈〇. 01 :与慢性缺血组相比P〈〇. 001 ;标尺为50 μ m ;
[0015] 图9米诺环素对慢性缺血后小鼠侧脑室下区增殖的少突胶质前体细胞数量的影 响，A :侧脑室下区增殖的细胞（BrdU阳性）数目；B :侧脑室下区增殖的少突胶质前体细胞 计数，其中:与假手术组相比P〈〇. 01 :与慢性缺血组相比P〈〇. 05 ;标尺为50 μ m。
【具体实施方式】
[0016] 下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步的说明，但并不因此将本发明限制 在所述的实施例范围之内。
[0017] 实施例一米诺环素对慢性缺血后小鼠新事物识别测试的影响
[0018] 1.动物设组：雄性C57/6J小鼠，随机分组，实验开始前适应环境一周。分组如表 1. 1
[0019] 表1. 1实验一所需动物及设组情况
[0020]
【权利要求】
1. 米诺环素在制备治疗慢性缺血性血管性痴呆药物中的应用。
2. 根据权利要求1所述米诺环素在制备治疗慢性缺血性血管性痴呆药物中的应用，其 特征在于，米诺环素通过减少少突胶质细胞的死亡、促进少突胶质前体细胞的增殖，来减轻 白质髓鞘损伤、促进髓鞘再生，从而减轻白质神经纤维的损伤，最终改善学习记忆能力。
【文档编号】A61P25/28GK104055783SQ201410300272
【公开日】2014年9月24日 申请日期:2014年6月26日 优先权日:2014年6月26日
【发明者】陈忠, 胡薇薇, 马婧, 张翔南, 张菁 申请人:浙江大学