一种转移因子溶液及其制备方法
【专利摘要】本发明属于生物制药【技术领域】，具体的说是一种转移因子溶液及其制备方法。具体，动物脾脏与NaCl溶液按重量比为1∶1.3-1.4的混合经反复冻融后调节pH值至6.2～7.2，再经过滤，即为转移因子溶液。采用本发明方法利于提高转移因子溶液有效成分的含量、提高产品收率、增加药物的稳定性和安全性。
【专利说明】
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物制药【技术领域】，具体的说是一种转移因子溶液及其制备方法。 一种转移因子溶液及其制备方法
【背景技术】
[0002] 转移因子溶液是一种天然双向免疫调节剂，是目前治疗免疫功能低下、缺陷等相 关疾病的理想药物。
[0003] 转移因子溶液系用健康猪或牛脾脏为原料，经去脂肪、细胞破碎、透析或超滤制成 的分子量小于6000道尔顿的多肽、氨基酸和多核苷酸混合物的溶液。
[0004] 但，现有技术制得的转移因子溶液中多肽、游离氨基酸、核苷酸的含量较低，高分 子物质含量相对较高，转移因子溶液的收率较低。
【发明内容】
[0005] 本发明目的在于提供一种转移因子溶液及其制备方法。
[0006] 为实现上述目的，本发明采用技术方案为：
[0007] -种转移因子溶液，动物脾脏与NaCl溶液按重量比为1:1. 3-1. 4的混合经反复冻 融后调节PH值至6. 2?7. 2,再经过滤，即为转移因子溶液。
[0008] 进一步的说，动物脾脏与NaCl溶液按重量比为1:1. 3-1. 4的混合，混合后磨匀获 得的匀浆液经反复冻融处理4-6次，冻融后用HCL溶液，调匀浆液PH值3. 5?4. 5,而后离 心收集上清液，上清液再经NaOH溶液调节PH值至6. 2?7. 2,最后过滤，即得转移因子溶 液。
[0009] 所述反复冻融处理是将匀浆液在_25±3°C冷冻48-56小时，而后在20-25°C的 循环水中融化，作为一次冻融处理，按照此冻融条件反复冻融3-4次；而后再以下述另一 冻融条件反复冻融1-2次，另一冻融条件为将匀浆液在_25±3°C冷冻12-18小时，而后在 20-25 °C的循环水中融化。
[0010] 所述动物脾脏为猪或牛的脾脏。
[0011] 所述动物脾脏与NaCl溶液按重量比为1:1. 3-1. 4的混合，混合后加入胶体磨机中 磨1?2分钟，即得勻楽液；其中，胶体磨的缝隙5?10um。
[0012] 一种转移因子溶液的制备方法，动物脾脏与NaCl溶液按重量比为1:1. 3-1. 4的混 合经反复冻融后调节PH值至6. 2?7. 2,再经过滤，即为转移因子溶液。
[0013] 进一步的说，动物脾脏与NaCl溶液按重量比为1:1. 3-1. 4的混合，混合后磨匀获 得的匀浆液经反复冻融处理5-6次，冻融后用HCL溶液，调匀浆液PH值3. 5?4. 5,而后离 心收集上清液，上清液再经NaOH溶液调节PH值至6. 2?7. 2,最后过滤，即得转移因子溶 液。
[0014] 所述反复冻融处理是将匀浆液在-25 ± 3 °C冷冻48-56小时，而后在20-25 °C的 循环水中融化，作为一次冻融处理，按照此冻融条件反复冻融3-4次；而后再以下述另一 冻融条件反复冻融2-3次，另一冻融条件为将匀浆液在-25±3°C冷冻12-18小时，而后在 20-25 °C的循环水中融化。
[0015] 所述动物脾脏与NaCl溶液按重量比为1:1. 3-1. 4的混合，混合后加入胶体磨机中 磨1?2分钟，即得勻楽液；其中，胶体磨的缝隙5?10um。
[0016] 所述PH值3. 5?4. 5的匀浆液在2000-2500转/分钟的速度离心20-30分钟，收 集上清液，上清液再经NaOH溶液调节PH值至6. 2?7. 2,调节PH值后过滤，过滤后滤液再经 中空纤维柱超滤滤液即得转移因子溶液；其中，中空纤维柱超滤压力控制在0. 1-0. 2Mpa。
[0017] 本发明所具有的优点：
[0018] 本发明所获得的转移因子溶液有效成分的含量高，主要技术指标多肽6mg/ ml，核苷酸：彡170 μ g/ml (以D-核糖计），高于标准的2倍。高分子物质低于3% (标准 为5% )。同时采用本发明方法利于提高转移因子溶液有效成分的含量、提高产品收率、增 加药物的稳定性和安全性。
【专利附图】
【附图说明】
[0019] 图1为本发明实施例提供的工艺流程图。
【具体实施方式】
[0020] 实施例1
[0021] 转移因子溶液的制备方法（参见图1):
[0022] 将融化后的猪脾脏用纯化水冲洗，去除脂肪，剪去结缔组织，置入绞肉机内绞碎， 绞碎（2-3mm)后待用。
[0023] 绞碎后脾脏与0. 9% NaCl(W/V) (W/V，质量体积比）溶液按重量比为1:1. 3的混 合，混合后加入至胶体磨机中磨1?2分钟，即得匀浆液，其中，胶体磨的缝隙5?lOum。
[0024] 匀浆液经反复冻融处理5次，冻融后用2mol/L的HCL溶液调匀浆液PH值4. 0,而 后以2000转/分钟的速度离心30分钟，收集上清液，上清液再经2mol/L的NaOH溶液调节 PH值至7. 0,调节PH值后过滤，过滤后滤液再经中空纤维柱超滤，滤液即得转移因子溶液， 所得转移因子溶液分装，送入_25±3°C低温冷冻保存。其中，中空纤维柱超滤压力控制在 0. 1-0. 2Mpa〇
[0025] 所述反复冻融处理是将匀浆液在_25±3°C冷冻48小时，而后在20°C的循环水中 融化，作为一次冻融处理，按照此冻融条件反复冻融4次；而后再以下述另一冻融条件反复 冻融1次，另一冻融条件为将匀浆液在_25±3°C冷冻18小时，而后在20°C的循环水中融 化。
[0026] 通过上述制备所得的转移因子溶液有效成分的含量高，主要技术指标多肽： 彡6mg/ml，核苷酸：彡170μ g/ml(以D -核糖计），高于标准（标准为多肽：彡1. 5mg/ml， 核苷酸（以D-核糖计）：彡50 μ g/ml)的3倍以上。高分子物质低于3% (标准为不得过 5% )。细胞活力测定玫瑰花结百分率彡15% (标准为玫瑰花结百分率彡10% );每毫升含 游离氨基酸的量大于2. 5mg (标准规定不得少于2mg)。
[0027] 实施例2
[0028] 转移因子溶液的制备方法（参见图1):
[0029] 将融化后的猪脾脏用纯化水冲洗，去除脂肪，剪去结缔组织，置入绞肉机内绞碎， 绞碎后待用。
[0030] 绞碎后脾脏与0. 9% NaCl溶液按重量比为1:1. 4的混合，混合后加入至胶体磨机 中磨1?2分钟，即得勻楽液。其中，胶体磨的缝隙5?10um。
[0031] 匀浆液经反复冻融处理5次，冻融后用2mol/L的HCL溶液调匀浆液PH值4. 0,而后 以2500转/分钟的速度离心20分钟，收集上清液，上清液再经2mol/L的NaOH溶液调节PH 值至7. 0,调节PH值后过滤，过滤后滤液再经中空纤维柱超滤（压力控制在0. 1-0. 2Mpa)， 滤液即得转移因子溶液，所得转移因子溶液分装，送入_25±3°C低温冷冻保存。其中，中空 纤维柱超滤压力控制在〇· 1-0. 2Mpa。
[0032] 所述反复冻融处理是将匀浆液在_25±3°C冷冻56小时，而后在25°C的循环水中 融化，作为一次冻融处理，按照此冻融条件反复冻融3次；而后再以下述另一冻融条件反复 冻融2次，另一冻融条件为将匀浆液在-25±3°C冷冻12小时，而后在25°C的循环水中融 化。
[0033] 通过上述制备所得的转移因子溶液有效成分的含量高，主要技术指标多肽： 彡6mg/ml，核苷酸：彡170μ g/ml(以D -核糖计），高于标准（标准为多肽：彡1. 5mg/ml， 核苷酸（以D-核糖计）：彡50 μ g/ml)的3倍以上。高分子物质低于3% (标准为不得过 5% )。细胞活力测定玫瑰花结百分率彡15% (标准为玫瑰花结百分率彡10% );每毫升含 游离氨基酸的量大于2. 5mg (标准规定不得少于2mg)。
【权利要求】
1. 一种转移因子溶液，其特征在于：动物脾脏与NaCl溶液按重量比为1:1. 3-1. 4的混 合经反复冻融后调节PH值至6. 2?7. 2,再经过滤，即为转移因子溶液。
2. 按权利要求1所述的转移因子溶液，其特征在于：动物脾脏与NaCl溶液按重量比为 1:1. 3-1. 4的混合，混合后磨匀，获得的匀浆液经反复冻融处理4-6次，冻融后用HCL溶液， 调匀浆液PH值3. 5?4. 5,而后离心收集上清液，上清液再经NaOH溶液调节PH值至6. 2? 7. 2,最后过滤，即得转移因子溶液。
3. 按权利要求1或2所述的转移因子溶液，其特征在于：所述反复冻融处理是将匀浆 液在-25±3°C冷冻48-56小时，而后在20-25°C的循环水中融化，作为一次冻融处理，按照 此冻融条件反复冻融3-4次；而后再以下述另一冻融条件反复冻融1-2次，另一冻融条件为 将匀浆液在_25±3°C冷冻12-18小时，而后在20-25°C的循环水中融化。
4. 按权利要求1或2所述的转移因子溶液，其特征在于：所述动物脾脏为猪或牛的脾 脏。
5. 按权利要求1或2所述的转移因子溶液，其特征在于：所述动物脾脏与NaCl溶液按 重量比为1:1. 3-1. 4的混合，混合后加入胶体磨机中磨1?2分钟，即得匀浆液。
6. -种权利要求1所述的转移因子溶液的制备方法，其特征在于：动物脾脏与NaCl溶 液按重量比为1:1. 3-1. 4的混合经反复冻融后调节PH值至6. 2?7. 2,再经过滤，即为转移 因子溶液。
7. 按权利要求6所述的转移因子溶液的制备方法，其特征在于：动物脾脏与NaCl溶液 按重量比为1:1. 3-1. 4的混合，混合后磨匀，获得的匀浆液经反复冻融处理5-6次，冻融后 用HCL溶液，调匀浆液PH值3. 5?4. 5,而后离心收集上清液，上清液再经NaOH溶液调节 PH值至6. 2?7. 2,最后过滤，即得转移因子溶液。
8. 按权利要求6或7所述的转移因子溶液，其特征在于：所述反复冻融处理是将匀浆 液在-25±3°C冷冻48-56小时，而后在20-25°C的循环水中融化，作为一次冻融处理，按照 此冻融条件反复冻融3-4次；而后再以下述另一冻融条件反复冻融2-3次，另一冻融条件为 将匀浆液在_25±3°C冷冻12-18小时，而后在20-25°C的循环水中融化。
9. 按权利要求6或7所述的转移因子溶液，其特征在于：所述动物脾脏与NaCl溶液按 重量比为1:1. 3-1. 4的混合，混合后加入胶体磨机中磨1?2分钟，即得匀浆液。
10. 按权利要求6或7所述的转移因子溶液，其特征在于：所述PH值3. 5?4. 5的匀 浆液在2000-2500转/分钟的速度离心20-30分钟，收集上清液，上清液再经NaOH溶液调 节PH值至6. 2?7.2,调节PH值后过滤，过滤后滤液再经中空纤维柱超滤，滤液即得转移因 子溶液。
【文档编号】A61P37/02GK104095879SQ201410306339
【公开日】2014年10月15日 申请日期:2014年6月30日 优先权日:2014年6月30日
【发明者】贾天亮, 郑桂荣, 梁爱葵 申请人:辽宁天医生物制药股份有限公司