一种转移因子及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及免疫促进技术领域，具体涉及一种转移因子及其应用。
【背景技术】
[0002] 转移因子（Transferfactor，简称TF)是淋巴细胞释放的一种能够转移致敏信息 的物质，动物TF分子量一般在3000~15000Da;不含蛋白质，是小分子多肽，含6种以上氨 基酸；不同动物和不同抗原特异性TF的分子量、肽分子大小和氨基酸种类略有差别；TF无 热原，其活性不被胰酶所破坏，但对热不稳定，在冷冻条件下稳定。它能够特异地将供体的 细胞免疫信息转移给受体，从而增强受体的免疫功能，目前在国外已成为一种应用广泛的 增强免疫制剂。
[0003] 除了在人类医学中得到广泛应用之外，近年来转移因子在兽医、尤其是在增强畜 禽疫苗免疫效果方面也表现出了突出的功效。例如，有研究显示注射TF后，接种减蛋综合 征灭活油佐剂疫苗可以显著提高鸡体的免疫水平；另有研究者通过实验发现口服转移因子 可以提高雏鸡外周血液ANAE+T淋巴细胞百分率；还有研究者将TF加入到狂犬病疫苗中发 现，加入TF后抗体效价高且抗体产生时间提前；还有研究表明试验组免疫后产生保护力时 间提前，保护期延长，淋巴细胞转化率提高；还有研究指出TF对IBD具有良好的疗效。综上 所述，大量的试验研究证明，TF对疫苗均具有协同作用，能显著提高机体细胞免疫水平，缩 短机体免疫应答期，促进抗体的产生，并延长抗体高峰期，使之维持更长的时间。TF越来越 多用于动物临床应用。
[0004] 现有技术中，转移因子的制备方法主要为透析法（Laurence法）和过滤法。其中 透析法是指对动物脾脏匀浆的上清液进行若干次透析，实现对转移因子的分离纯化，此法 操作简单，但生产周期长，操作费用高，难以进行工业化大规模生产；而过滤法是先对脾脏 组织进行破碎匀浆，再离心取上清液进行过滤，实现对转移因子的分离纯化，此方法的破碎 步骤普遍分为组织初步破碎和冻融破碎，其中冻融破碎步骤耗费时间较长，而初步破碎由 于破碎设备的限制常存在细胞破碎不完全的现象。因此，为了最大限度保持产物活性、提高 得率同时适应规模化生产需求，有必要开发一种周期更短、得率更高的转移因子制备方法。
【发明内容】
[0005] 本发明旨在针对现有技术的技术缺陷，提供一种以方法来表征的转移因子，以解 决现有技术的转移因子制备方法产物收率较低的技术问题。
[0006] 本发明解决的另一技术问题是避免因制备工艺所导致的转移因子活性降低。
[0007] 本发明解决的再一技术问题是转移因子制备周期过长。
[0008] 本发明解决的又一技术问题是转移因子制备成本过高。
[0009] 本发明解决的又一技术问题是提升转移因子对畜禽的疫苗免疫促进效果。
[0010] 本发明解决的又一技术问题完善转移因子在提升禽畜免疫力方面的应用。
[0011] 为实现以上技术目的，本发明采用以下技术方案：
[0012] -种转移因子，是由以下方法制备的：
[0013] 1)取动物脾脏，绞碎，得到脾脏匀浆；
[0014] 2)取步骤1)所述脾脏匀浆固液分离，取上清；
[0015] 3)取步骤2)所述上清液均质破碎，收集均质液；
[0016] 4)取步骤3)所述的均质液固液分离，取上清；
[0017] 5)取步骤4)所述的上清液超滤，收集透过液。
[0018] 优选的，步骤1)所述的绞碎，是先利用肉类粉碎装置粉碎，而后再利用胶体磨研 磨；在此基础上进一步优选的：先利用肉类粉碎装置粉碎1遍而后再利用胶体磨研磨2~3 遍；在此基础上进一步优选的：利用肉类粉碎装置粉碎后，加入脾脏原料重量0. 2~0. 6倍 的纯化水混匀，而后再利用胶体磨研磨；在此基础上进一步优选的：利用胶体磨研磨后，加 入脾脏原料重量0. 9~1. 3倍的的纯化水混匀，得到脾脏匀浆。
[0019] 优选的，所述肉类粉碎装置的筛目尺寸为2~4mm，更优的是3mm。
[0020] 优选的，所述纯化水的温度是5~8°C，更优的是6°C。
[0021] 优选的，步骤2)所述的固液分离是利用三足离心机离心，所述三足离心机的截留 筛为40~60目，更优的是50目；在此基础上进一步优选的，离心转速为600~1000r/min， 更优的转速是800r/min。
[0022] 优选的，步骤3)所述的均质破碎，其执行压力为65~75MPa，更优的是70MPa。
[0023] 优选的，步骤3)均质破碎过程中，物料温度不高于48°C。
[0024] 优选的，步骤4)所述的固液分离，是在2~6°C温度下完成的，更优的是4°C。
[0025] 优选的，步骤4)所述的固液分离是以4500~5500r/min的转速离心8~12min， 更优的是：以5000r/min的转速离心lOmin。
[0026] 优选的，步骤4)用于超滤的膜组件是内压式膜组件，材质为聚醚砜，截留分子量 为5~7KDa，更优的为6KDa。
[0027] 优选的，还包括步骤6)，所述步骤6)的技术特征为：取步骤5)所述透过液作为转 移因子原液，经检测合格进行配药、无菌分装、检验、包装，检验合格并批准后，可上市销售。
[0028] 此外，本发明还提供了所述转移因子作为动物疫苗免疫促进剂的应用，该应用 具体为：每天口服〇. 5~ImL的转移因子，持续3~5d，所述转移因子中多肽含量不低于 I.Omg/ml、核糖含量不低于30yg/ml。
[0029] 本发明结合使用冷冻破碎和高压破碎的工艺进行转移因子生产，降低生产温度， 能更有效的保持转移因子活性；同时，由于无需冻融步骤，因此半成品生产周期缩短为1 天，与冻融法（2天）比较，缩短了一半生产周期；与透析法（4天）比较，缩短更长生产周 期；此外，本发明方法显著提升了产率，传统冻融和透析方法生产的转移因子原液，每Ikg 脾脏生产含2.Omg/ml的原液2500ml，而本发明每Ikg脾脏生产含量约为6.Omg/ml的原液 1400ml，折合产量增加68% ;
[0030] 本发明以健康猪脾脏为原料，经去脂肪、细胞破碎、微滤、超滤制备的转移因子溶 液，不含蛋白质，属小分子多肽，无热原，活性不被胰酶所破坏，无毒性反应，是一种广泛应 用的免疫调节剂，用于增强动物机体免疫功能。利用本发明制备的转移因子能够对畜禽起 到显著的免疫促进作用，有助于提升疫苗效价，延长抗体持续期，增强机体免疫功能，提高 治疗率。
【具体实施方式】
[0031] 以下将对本发明的【具体实施方式】进行详细描述。为了避免过多不必要的细节，在 以下实施例中对属于公知的结构或功能将不进行详细描述。
[0032] 以下实施例中所使用的近似性语言可用于定量表述，表明在不改变基本功能的情 况下可允许数量有一定的变动。因此，用"大约"、"左右"等语言所修正的数值不限于该准 确数值本身。在一些实施例中，"大约"表示允许其修正的数值在正负百分之十（10%)的 范围内变化，比如，"大约1〇〇"表示的可以是90到110之间的任何数值。此外，在"大约第 一数值到第二数值"的表述中，大约同时修正第一和第二数值两个数值。在某些情况下，近 似性语言可能与测量仪器的精度有关。
[0033] 除有定义外，以下实施例中所用的技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人 员普遍理解的相同含义。
[0034] 实施例1
[0035] -、转移因子口服液制备
[0036] (1)领料根据生产计划领料40kg，进入生产区除去外包装；
[0037] (2)粗绞按冻肉绞肉机操作规程，冻肉绞肉机粗绞，并加入0. 4倍纯化水混合，搅 拌成流体状；
[0038] (3)精绞按胶体磨操作规程，胶体磨研磨粗绞液2~3遍，收获精绞液55kg;
[0039] (4)离心精绞液以原料：纯化水=1:1. 5比例加纯化水稀释，搅勾，收获97kg稀释 液，经离心机（60目筛）除去大片筋膜，收获精绞液88kg;
[0040] (5)细胞破碎离心后精绞液经高压均质机（75MPa)破碎，收获均质液87kg;
[0041] (6)离心均质液在4°C下，经5000r/min离心lOmin，去除沉淀，收获上清，共 60. 8kg；
[0042] (7)超滤离心上清经超滤装置（截留分子量6KDa)进行超滤，收集透过液，共 56. 3kg，即为半成品；
[0043] (8)半成品检验留样检测，剩余无菌过滤至4°C无菌罐，暂存；
[0044] (9)配药半成品检验合格，多肽含量为5. 6mg/ml，核糖含量为196. 3yg/ml;按成 品含量要求：多肽含量彡I. 〇mg/ml，核糖含量彡30. 0yg/ml，半成品用纯化水稀释4. 6倍， pH值调节约为7. 0,共配制258.Okg;
[0045] (10)无菌灌装规格200ml/瓶（多肽含量彡I.Omg/ml，核糖含量彡30. 0yg/ml)， 共生产1290瓶；
[0046] (11)成品检验成品抽检，合格放行。
[0047] 二、以上制备的转移因子对新城疫疫苗效价的提高作用
[0048] (1)分组选择鸡场，20日龄雏鸡，设正常免疫组、转移因子组和不免疫组，每组500 只，共1500只雏鸡；
[0049] (2)方法除不免疫组外，其余雏鸡均使用新城疫IV系活苗滴鼻免疫，同时转移因子 组按产品说明书饮用转移因子口服液，连续3天；分别于接种后2、5、8、ll、14、30、45d各组 随机抓取10只鸡采集血液，分离血清，测定新城疫HI抗体效价；
[0050] (3)结果和讨论新城疫HI抗体效价测定结果见表1。正常免疫组和转移因子组的 抗体在14天达最高峰，缩短机体免疫