专利名称：制备转移因子工艺方法－加热法的制作方法
技术领域：
本发明属于医药新技术领域，涉及转移因子的制备工艺的改进最新技术。
背景技术：
转移因子发现于二十世纪四十年代并于二十世纪七十年代应用于临床，是一种能传递迟发性超敏反应、分子量小于10000的具有生物活性的多肽及核苷酸的混合物，其具有活性不被胰蛋白酶、核糖核酸酶所破坏，耐热、无种属界限的特点。目前主要用于对病毒性感染及自身免疫性质病的治疗。能双向调节机体的免疫功能，对于细胞免疫功能与体液免疫功能的增高和低下具有双向免疫调节作用。同时促进T淋巴细胞的增殖，对骨髓造血免疫功能有调节作用。近年来，试验证实转移因子对乙肝病毒等病毒具有一定的抗病毒作用。
过去转移因子的一般工艺流程如下(1)对新鲜组织进行预处理，用匀浆捣碎机进行匀浆后进行-20℃-37℃反复冻融三次，以破碎细胞。
(2)用高速冷冻离心机离心，取离心液。
(3)用透析技术在4℃条件下透析，取透析外液。
(4)将透析外液进行限分子量超滤，截留分子量6000-10000取超滤液。
(5)将所获不同分子量的超滤液供制备不同剂型的转移因子需要<包括冻干粉针、水针、口服液>。
(6)根据制备转移因子剂型的浓度需要用冻融法适量浓缩。
上述制备转移因子的工艺流程从原料处理到制备出半成品所需时间长约一星期，细胞破碎不完全及原材料浪费多，得率低，成本高而活性容易降低，产品浓缩费时费力，有一定难度。
发明内容
本发明解决了以往转移因子制备工艺中的冻融、透析等步骤而造成的制备工艺时间长，生物活性受影响，有效成分产出率低，生产成本高等诸多不足之处，具有制备时间短、生物活性得以保护，产出率高同时试验证明转移因子具有耐热的特点，因此将加热法、纳滤浓缩技术应用到转移因子制备工艺中可以半获取高浓度半成品、进一步降低成本等众多优点，适合于制备不同剂型需要的转移因子原料液。
本发明提出的制备的转移因子的主要工艺流程如下(1)在10-12℃以下在对转移因子原材料进行初步处理的基础上，用匀浆捣碎机高速匀浆捣碎处理原材料以最大限度的破碎细胞，控制温度及匀浆速率是保证活性和保证高得率的重要步骤。
(2)将经过组织细胞破碎处理的组织液用微波技术进行加热处理，用强微波快速加热至80度，10分钟内完成后迅速冷却至10度以下。
(3)高速冷冻离心后取离心液经压滤器压滤为第一步滤过，去除粗蛋白。
(4)用不同规格分子量的超滤膜进行分级超滤，获取分子量为6000或10000的超滤液得到为一级原料液适应制备单位含量较低的不同剂型转移因子制剂的需要。
(5)根据转移因子生产制剂单位含量浓度的需要，应用纳滤浓缩技术进行浓缩成二级原料液为高浓度原料液，以满足制备高含量浓度制剂的需要。
本制备工艺发明要点如下(1)在10度温度条件下，将转移因子制备原材料经过初步处理后应用高速匀浆器捣碎脾脏组织保证了组织细胞高细胞破碎率。
(2)将转移因子脾组织细胞提取液应用微波加热 技术将提取液迅速加热至80度十分钟内完成后，既迅速冷却至10度以下。试验已证实转移因子具有耐热的特性，因此，增加此工艺加速了蛋白质的变性，提高了转移因子产品的产出率，保证了转移因子的活性等优点。
(3)高速冷冻离心后取离心液后经压滤器压滤进一步除掉粗蛋白，此步骤缩短了生产时间，增加产出率，保证了制品的生物活性。
(4)用不同规格分子量超滤膜进行分级连续梯度超滤截流分子量为6000以下或10000以下的转移因子供制备不同剂型转移因子产品的需要。如注射用转移因子(限分子量6000)口服用转移因子(限分子量10000)，使产品质量完全符合国家该产品质量标准的要求，保证产品质量。
(5)将纳滤浓缩技术应用到转移因子超滤液的浓缩，可制备出高浓度的转移因子原料液，以供制备不同规格的高含量转移因子的产品需要或根据需要储存-35℃以下备用。
(6)在上述转移因子制备工艺的基础上制备注射用转移因子，特别是静脉注射用转移因子通过在一定时间内及一定温度下高压加温处理，对于保证产品的质量起到了十分重要的作用。因为试验证实在一定程度温度下及时间内转移因子具有耐热的特性。
权利要求
用加热法制备的转移因子工艺流程采用各种不同的滤过法—压滤法、梯度超滤法、纳滤法完成制备全过程中加入加热法这一工艺技术是本发明工艺特征的核心内容。1、将经过初步处理的制备转移因子的原材料在10℃以下用高速组织匀浆捣碎机、对新鲜脾脏组织进行处理以最大限度破碎细胞，保证了有效成分的高提取率。
2.将经过组织细胞破碎处理的组织液用微波加热技术进行加热处理，用微波加热技术快速加热至80度，10分钟内完成后，迅速冷却至10度以下。用微波技术加热法作为制备转移因子制剂原材料的工艺方法之一是本发明的权利要求核心内容。
3.在转移因子不同规格、不同浓度的原料或制剂制备的工艺进行过程中任何一个环节使用微波加热技术或其它高温高压加热技术作为制备转移因子原料或制剂的方法均为本发明专利的要求范围。
4.高速冷冻离心处理上述组织液后弃残渣用压滤机对冷冻离心所获取的离心液进行压滤去除粗蛋白。压滤技术在转移因子原料液制备过程中的应用是本发明权利要求。
5.采用不同规格或不同型号的超滤设备进行的连续梯度超滤技术对压滤液进行超滤截留分子量为6000或10000物质。
6.应用钠滤浓缩技术对超滤液根据需要进行浓缩，获取高浓度原料液。钠滤浓缩技术在转移因子制备工艺中的应用。
全文摘要
本发明涉及医药技术领域，转移因子制备工艺的新技术。转移因子是一种能传递迟发性超敏反应、具有生物活性的多肽及核苷酸的混合物，具有耐热、无种属界限等特点。主要用于对病毒性感染及自身免疫性疾病的治疗。能双向调节机体免疫功能，对于细胞免疫功能与体液免疫功能的增高和低下具有双向免疫调节作用。试验证明转移因子具有耐热的特点，本发明将目前常用的微波加热技术法、纳滤浓缩技术法应用到转移因子制备工艺中。本发明具有制备时间短、保证生物活性，产出率高的特点可以获取高浓度半成晶、进一步降低成本等优点，适合于制备不同剂型及规格、需要的转移因子原料及制剂而且便于适应生产上的需要储存备用。
文档编号A61P31/12GK1654477SQ20041003944
公开日2005年8月17日 申请日期2004年2月13日 优先权日2004年2月13日
发明者霍保来 申请人:北京世纪昭宝转移因子研究中心