地瑞那韦乙醇盐在制备预防或治疗内毒素血症和脓毒症的药物中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明提供了地瑞那韦乙醇盐的药物新用途，具体涉及地瑞那韦乙醇盐通过抑制高迁移率族蛋白B1(highmobility?groupprotein，HMGB1)的表达从而抑制内毒素血症和脓毒症的发生发展，以致于预防或治疗内毒素血症和脓毒症。在上述应用中，其注射使用剂量范围是50mg～2000mg；优选50～1000mg；口服使用剂量范围是100mg～6000mg；优选200～3000mg。
【专利说明】地瑞那韦乙醇盐在制备预防或治疗内毒素血症和脓毒症的 药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及地瑞那韦乙醇盐抑制脓毒症的发生发展从而预防或治疗内毒素血症 和脓毒症；具体涉及地瑞那韦乙醇盐通过抑制高迁移率族蛋白B1 (high mobility group protein，HMGB1)的表达，以致于预防或治疗内毒素血症和脓毒症。
【背景技术】
[0002] 脓毒症（sepsis)，即脓毒血症。是一种由感染引起的临床综合征。化脓性病原菌 侵入血流并在其中大量的繁殖，并随血流向全身扩散，在组织器官引起的新的多发性化脓 性病灶。脓毒症常伴有下列征象：体温高于或低于正常，白细胞增多或减少、心动过速、呼吸 急促或每分钟通气量异常升高，如临床上出现其中两项或两项以上症状，即可诊断脓毒血 症；当伴发器官功能衰竭，即称为重症脓毒血症（severe sepsis)。美国每年有50万名脓 毒血症患者，存活率仅55 %?65%。
[0003] 脓毒症是严重创伤、烧伤、休克、大手术后常见的并发症，也是外科危重患者重要 的死亡原因之一。目前研究认为HMGB-1在脓毒症中也起着关键作用[Wang H，Bloom 0， Zhang M,Vishnubhakat JM,Qmbrellino M,Che J. HMG-las a late mediator of endotoxin lethality in mice. Sciencel999,285 (5425) :248-251；Andersson U,Tracey KJ. HMGBlin sepsis. Scand J Infect Dis2003,35 (9) :577-584.]。
[0004] 地瑞那韦乙醇盐（darunavir ethalolate，又称"达如那韦"，商品名prezista)适 用于与小剂量利托那韦或其它抗HIV药合用治疗其它抗HIV药治疗无效的成人HIV感染， 是一种新的HIV-1蛋白酶抑制药，其作用机制是选择性抑制感染细胞内的编码Gag-Pol多 蛋白HIV卵裂，继而抑制形成成熟的病毒粒，但地瑞那韦乙醇盐在预防或治疗内毒素血症 和脓毒症的药理作用未见报道。本发明人通过大量的研究发现地瑞那韦乙醇盐可以通过抑 制脂多糖刺激的人腹腔巨噬细胞HMGB1的表达从而在预防或治疗内毒素血症和脓毒症有 明显的作用。基于此，本发明人发明了地瑞那韦乙醇盐通过抑制巨噬细胞HMGB1的的表达 从而抑制脓毒症的发生发展，以致于预防或治疗内毒素血症和脓毒症。
【发明内容】
[0005] 本发明提供了地瑞那韦乙醇盐在制备预防或治疗内毒素血症和脓毒症的药物中 的应用。
[0006] 本发明提供了地瑞那韦乙醇盐在抑制内毒素血症和脓毒症中HMGB1的药物中的 应用。
[0007] 本发明提供了地瑞那韦乙醇盐在制备预防或治疗内毒素血症的药物中的应用。
[0008] 本发明提供了地瑞那韦乙醇盐在制备预防或治疗脓毒症的药物中的应用。
[0009] 发明提供的地瑞那韦乙醇盐在用于脓毒症时，其注射使用剂量范围是50mg? 2000mg ;优选50?lOOOrng ;其口服使用剂量范围是100mg?6000mg ;优选200?3000mg。
[0010] 本发明还提供的地瑞那韦乙醇盐可以和药学上可接受的载体或辅料组成的药物， 该药物可以以药学常规方法制备成注射液、冻干粉针、片剂、胶囊剂、薄膜包衣片，优选以冻 干粉针和薄膜包衣片形式存在。
【具体实施方式】
[0011] 实施例1地瑞那韦乙醇盐冻干粉针制备
[0012] 取地瑞那韦乙醇盐50. 0g，加注射用水2000ml使其溶解，加甘露醇8g，搅拌溶解， 超滤，得到无热源的澄清液，灌入l〇ml西林瓶中，2ml/只，按冻干粉针工艺冻干，制成每支 含地瑞那韦乙醇盐50. Omg的冻干粉针。
[0013] 实施例2地瑞那韦乙醇盐薄膜包衣片制备
[0014] 称取100. 0g地瑞那韦乙醇盐、和100. 0g羧甲基淀粉钠充分混合均匀后过100目 筛，加入适量的3% PVPK3(I水溶液适量制软材，20目筛制粒，60°C干燥3小时，18目筛整粒， 加入2. 0g硬脂酸镁，混合均匀后压片。制备包衣液，在不锈钢容器中加入纯水，后加入物 料，持续搅拌，脱泡。包衣将压好的片子装入包衣锅中，预热后进行喷雾包衣，待喷雾结束后 继包衣锅至片子干燥。将干燥的片子进行冷却，加入巴西棕搁蜡进行打光，片重约200mg。
[0015] 具体实施例
[0016] 试验例1地瑞那韦乙醇盐对脂多糖刺激的人腹腔巨噬细胞HMGB1表达的影响
[0017] 1.1实验材料
[0018] DMEM培养基为Gibco公司产品，新生牛血清为杭州四季青公司产品
[0019] 脂多糖（LPS)购自sigma公司，批号：20130412
[0020] 人腹腔巨噬细胞株购自中国典型培养物保藏中心，用含10%胎牛血清（Hyclone 公司）的低糖DMEM培养基（GIBC0公司），常规培养于5%的C02, 37°C人工培养箱中，细胞 呈贴壁生长。HMGB1 -抗购买于sigma公司。
[0021] 地瑞那韦乙醇盐（纯度99. 5%，购买于上海翰香生物科技有限公司）
[0022] 1. 2试验方法
[0023] 当细胞生长融合至70% -80%，用无血清培养基饥饿24h，换新鲜培养液，将传代 的人腹腔巨噬细胞分为：（1)阴性对照组；（2)LPS处理组（2μ g/L作用时间24h) ; (3)LPS 处理组（2 μ g/L作用时间24h) +地瑞那韦乙醇盐0. 3 μ Μ ; (4) LPS处理组（2 μ g/L作用时间 24h) +地瑞那韦乙醇盐1 μ Μ ; (5) LPS处理组（2 μ g/L作用时间24h) +地瑞那韦乙醇盐3 μ Μ ; (6) LPS处理组（2 μ g/L作用时间24h) +地瑞那韦乙醇盐10 μ Μ。培养的细胞进行裂解，BCA 蛋白测定试剂盒（Pierce公司）测定蛋白浓度后，取50 μ g样品蛋白进行10%的十二烷基 磺酸钠-聚丙烯酰胺（SDS-PAGE)凝胶变性电泳、然后转至聚偏二氟乙烯（PVDF)膜，加入 HMGB1 -抗，β -actin作内参，Western blot检测细胞HMGB1蛋白的表达。以LPS未刺激 组作为对照，计为相应蛋白的100 %，分析各浓度药物与单纯LPS刺激组对HMGB1蛋白的表 达差异。组间进行T检验。
[0024] 表1地瑞那韦乙醇盐对脂多糖刺激的人腹腔巨噬细胞HMGB1表达影响（η = 5)
[0025]
【权利要求】
1. 本发明提供了地瑞那韦乙醇盐在制备预防或治疗内毒素血症和脓毒症的药物中的 应用。
2. 根据权利要求1所述的应用，地瑞那韦乙醇盐是通过抑制HMGB1表达达到预防或治 疗内毒素血症和脓毒症。
3. 根据权利要求2所述的应用，地瑞那韦乙醇盐可预防或治疗内毒素血症。
4. 根据权利要求2所述的应用，地瑞那韦乙醇盐预防或治疗脓毒症。
5. 根据权利要求3和4所述的应用，地瑞那韦乙醇盐用于内毒素血症和脓毒症时，其 注射使用剂量范围是50mg?2000mg ;优选50?lOOOmg ;其口服使用剂量范围是lOOmg? 6000mg ;优选 200 ?3000mg。
6. 根据权利要求5所述的应用，地瑞那韦乙醇盐和药学上可接受的载体或辅料组成的 药物，该药物可以以药学常规方法制备成注射液、冻干粉针、片剂、胶囊剂、薄膜包衣片，优 选以冻干粉针和薄膜包衣片形式存在。
【文档编号】A61P31/04GK104095862SQ201410379496
【公开日】2014年10月15日 申请日期:2014年7月26日 优先权日:2014年7月26日
【发明者】蒋王林, 亢泽春 申请人:滨州医学院