一种抗氧化大鲵多肽口服液及其制备方法
【专利摘要】本发明提供了一种具有高抗氧化性能的大鲵多肽，该多肽分子量不大于5000 Da。本发明还提供了一种大鲵多肽抗氧化口服液，该口服液的原料，按质量百分数计，包括：大鲵多肽液20-50%、白砂糖8-12%、苹果汁3-5%、柠檬酸0.01-0.03%、β-环状糊精0.5-1%、黄原胶0.05-0.15%，余量为纯净水；该大鲵多肽液中大鲵多肽的分子量不大于5000 Da，按质量体积比，该大鲵多肽液中大鲵多肽的浓度为1%-2.5%。本发明还提供了制备该大鲵多肽抗氧化口服液的方法，该方法通过利用复合酶对大鲵肉进行酶解处理，并控制分子量的分布范围，得到了具有显著抗氧化功能的口服液。本发明工艺简单、适于规模生产。
【专利说明】一种抗氧化大鲵多肽口服液及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于口服液领域，具体涉及一种抗氧化大鲷多肽口服液及其制备方法。 技术背景
[0002] 大鲷（Giant Salamander)是世界上现存最大的也是最珍贵的两栖动物，被称为 "活化石"。近年来，大鲷的人工养殖已越来越受人们重视，随着大鲷人工饲养技术的成熟和 推广，大鲷产量显著提高，国家有关部门已经批准人工饲养大鲷二代可以进行加工及销售， 但目前市场上大鲷深加工产品基本没有，研究报道也很少见。
[0003] 近年来，天然抗氧化肽因其安全无毒且具有一定的保健功能而备受人们的亲睐。 天然抗氧化肽具有重金属清道夫和过氧化氢分解促进剂的作用，可降低自氧化速率，减少 脂肪过氧化氢含量，减少自由基的生成。其不仅具有较强的抗氧化性，而且具有很高的安全 性，被广泛应用于食品、医药及化妆品等行业。
[0004] 然而，在现有技术中，对大鲷是否可以制备抗氧化产品还没有达成共识，这限制了 大鲷的利用。
[0005] 因此，对大鲷进行深入研究，并利用大鲷开发出可抗氧化的产品，成为了迫在眉睫 的需求。
【发明内容】
[0006] 针对现有技术的缺点，本发明的目的之一是提供一种具有抗氧化性能的大鲷多 肽，该多肽的分子量不大于5000 Da。
[0007] 本发明的目的之二在于提供一种大鲷多肽抗氧化口服液，该口服液的原料，按质 量百分数计，包括：大鲷多肽液20-50%、白砂糖8-12%、苹果汁3-5%、柠檬酸0. 01-0. 03%、 β -环状糊精0. 5-1%、黄原胶0. 05-0. 15%，余量为纯净水；所述大鲷多肽液中大鲷多肽的分 子量不大于5000 Da，按质量体积比，所述大鲷多肽液中大鲷多肽的浓度为1%-2. 5%。
[0008] 所述大鲷多肽液是以大鲷肉为原料制得，制备方法包括如下步骤： 1) 选取人工饲养大鲷肉为原料，剔除油脂及杂质，洗净浙干后，加入质量为大鲷肉2倍 的纯净水进行匀浆处理； 2) 按质量比2:1的比例，将纯净水加入步骤1)匀浆处理后的大鲷肉，再加入复合酶进 行酶解，复合酶用量为浙干大鲷肉质量的〇. 5%-2%，酶解温度为50-60°C，酶解时间为5-7h， 酶解完毕加热酶解液到90°C以上灭酶10_20min，得大鲷酶解多肽液； 3) 微滤：将步骤2)所得大鲷酶解多肽液经0. 45 μ m微滤膜进行微滤，取滤液； 4) 超滤：将步骤3)所得滤液采用5000分子量的超滤膜进行超滤，得大鲷多肽液。
[0009] 优选的，所述口服液的原料，按质量百分数计，包括：大鲷多肽液50 %、白砂糖10 %、苹果汁4 %、柠檬酸0. 025 %、β -环状糊精1 %、黄原胶0. 1 % ;所述大鲷多肽液中大鲷多 肽的分子量不大于5000 Da，所述大鲷多肽液中大鲷多肽的浓度为1%。
[0010] 本发明的另一个目的是提供一种抗氧化大鲷多肽口服液的制备方法，该方法包括 步骤： 1) 选取人工饲养大鲷肉为原料，剔除油脂及杂质，洗净浙干后，加入质量为大鲷肉2倍 的纯净水进行匀浆处理； 2) 按质量比2:1的比例，将纯净水加入步骤1)匀浆处理后的大鲷肉，再加入复合酶进 行酶解，复合酶用量为浙干大鲷肉质量的〇. 5%-2%，酶解温度为50-60°C，酶解时间为5-7h， 酶解完毕加热酶解液到90°C以上灭酶10_20min，得大鲷酶解多肽液； 3) 微滤：将步骤2)所得大鲷酶解多肽液经0. 45 μ m微滤膜进行微滤，取滤液； 4) 超滤：将步骤3)所得滤液采用5000分子量的超滤膜进行超滤，得大鲷多肽液，备 用； 5) 先将大鲷多肽液、白砂糖、苹果汁、柠檬酸、β -环状糊精和水混合均匀，再加入黄原 胶，并混合均匀，按质量百分数计，各组分的比例为：大鲷多肽液20-50%、白砂糖8-12%、苹 果汁3-5%、柠檬酸0. 01-0. 03%、β -环状糊精0. 5-1%、黄原胶0. 05-0. 15%，余量为纯净水； 6) 将步骤5)所得物采用500目滤布过滤，然后进行灌装； 7) 将步骤6)所得物进行高温高压杀菌，杀菌方式为：升温lOmin，110-115°C、0. 07MPa 杀菌15-40min，分级冷却IOmin,冷却至中心温度小于40°C，即得大鲷多肽抗氧化口服液成 品； 所述复合酶，按质量比计，由以下酶组成：中性蛋白酶：木瓜蛋白酶：风味蛋白酶 =2:1:1 复合酶中包含内切酶、外切酶，可以控制分子量，提高低分子量肽的得率；采用优化得 到的酶解工艺条件，可提高水解度和原料利用率； 通过复合酶的配置和酶解工艺的调整，本发明能获得高的多肽得率，更重要的是，能获 得较高的分子量低于5000Da多肽的得率，为有效利用大鲷制取抗氧化多肽奠定了基础。 [0011] 采用微滤处理，是为了除去水解液中的大分子物质和杂质，防止堵塞超滤膜，提高 超滤分离效率。经试验表明分子量低于5000的大鲷肽抗氧化性(清除DPPH自由基和羟基 自由基）比分子量高于5000分别高37. 6%和26. 3%左右； 口服液中添加白糖、柠檬酸、苹果汁和β-环状糊精是为了调节口服液口味，掩蔽异 味。添加黄原胶是为了保持口服液稳定，防止口服液在储藏期间出现沉淀。
[0012] 本发明的有益效果： 1、 本发明采用人工饲养大鲷肉为原料，通过控制酶解工艺和超滤，控制分子量分布，得 到大量的抗氧化肽，具有较强的抗氧化活性，再辅以白砂糖、苹果汁、柠檬酸、β -环状糊精 和黄原胶，制成营养丰富、酸甜适中、风味独特，并具有显著抗氧化功能的大鲷多肽抗氧化 口服液； 2、 多肽得率高，特别是可以获得较高的分子量小于5000Da的多肽的得率； 3、 本发明用于制备大鲷多肽抗氧化口服液的方法工艺简单、操作性强，适合于规模化 生产。
【具体实施方式】
[0013] 实施例1 一种大鲷多肽抗氧化功能口服液的制备经过下列步骤： a、大鲷多肽液的制备 a. 1、原料的处理选取人工饲养大鲷肉为原料，剔除油脂及杂质，洗净浙干后，加入其 质量2倍的纯净水进行匀浆处理； a. 2、酶解将步骤a. 1匀浆处理后的大鲷肉再加入其质量2倍的水进行稀释，加入中性 蛋白酶、木瓜蛋白酶和风味蛋白酶的复合酶进行酶解，其酶用量为原料质量的1% (w/w)，复 合酶其组成质量比为：中性蛋白酶：木瓜蛋白酶：风味蛋白酶=2:1:1。酶解温度为55°C，酶 解时间为5h，酶解完毕加热酶解液到90°C以上保持灭酶15min，得大鲷酶解多肽液； a. 3、微滤将步骤a. 2得到的大鲷酶解多肽液经0. 45 μ m微滤膜进行微滤，即得透明的 大鲷多肽液，其中，按质量体积比，大鲷多肽液中大鲷多肽的浓度为1% ; a. 4、超滤将步骤a. 3得到的大鲷多肽液采用5000分子量的超滤膜进行超滤，得大鲷 多肽液，备用； b、 调配称取步骤a. 4得到的大鲷多肽液50%，称量白砂糖10%、苹果汁5%、柠檬酸 0. 03%、β -环状糊精1%和纯净水，混合后搅拌至全部溶解，最后按黄原胶0. 15%称量黄原 胶溶液，搅拌混合均匀，所有组分的百分比加起来为100%，。
[0014] c、过滤、灌装将步骤b调配好的混合液采用500目滤布过滤，然后进行灌装； d、杀菌、冷却将步骤c灌装好的口服液进行高温高压杀菌，杀菌方式：升温lOmin， 115°C、0. 07MPa杀菌30min，分级冷却lOmin，冷却至中心温度小于40°C，即得成品。
[0015] 实施例2 一种大鲷多肽抗氧化功能口服液的制备经过下列步骤： a、大鲷多肽液的制备 a. 1、原料的处理选取人工饲养大鲷肉为原料，剔除油脂及杂质，洗净浙干后，加入其 质量2倍的纯净水进行匀浆处理； a. 2、酶解将步骤a. 1匀浆处理后的大鲷肉再加入其质量2倍的水进行稀释，加入中性 蛋白酶、木瓜蛋白酶和风味蛋白酶的复合酶进行酶解，其酶用量为原料质量的2 %(w/w)，复 合酶其组成质量比为：中性蛋白酶：木瓜蛋白酶：风味蛋白酶=2:1:1。酶解温度为50°C，酶 解时间为6h，酶解完毕加热酶解液到90°C以上保持灭酶20min，得大鲷酶解多肽液； a. 3、微滤将步骤a. 2得到的大鲷酶解多肽液经0. 45 μ m微滤膜进行微滤，即得透明的 大鲷多肽液； a. 4、超滤将步骤a. 3得到的大鲷多肽液采用5000分子量的超滤膜进行超滤，得大鲷 多肽液，备用； b、 调配称取步骤a. 4得到的大鲷多肽液40%，称量白砂糖8%、苹果汁4%、柠檬酸 0. 015%、β -环状糊精0. 8%和纯净水，混合后搅拌至全部溶解，最后按黄原胶0. 1%称量黄 原胶溶液，搅拌混合均匀。
[0016] c、过滤、灌装将步骤b调配好的混合液采用500目滤布过滤，然后进行灌装； d、杀菌、冷却将步骤c灌装好的口服液进行高温高压杀菌，杀菌方式：升温lOmin， 115°C、0. 07MPa杀菌20min，分级冷却lOmin，冷却至中心温度小于40°C，即得成品。
[0017] 实施例3 一种大鲷多肽抗氧化功能口服液的制备经过下列步骤： a、大鲷多肽液的制备 a. 1、原料的处理选取人工饲养大鲷肉为原料，剔除油脂及杂质，洗净浙干后，加入其 质量2倍的纯净水进行匀浆处理； a. 2、酶解将步骤a. 1匀浆处理后的大鲷肉再加入其质量2倍的水进行稀释，加入中性 蛋白酶、木瓜蛋白酶和风味蛋白酶的复合酶进行酶解，其酶用量为原料质量的〇. 5% (w/w)， 复合酶其组成质量比为：中性蛋白酶：木瓜蛋白酶：风味蛋白酶=2:1:1。酶解温度为60°C， 酶解时间为7h，酶解完毕加热酶解液到90°C以上保持灭酶20min，得大鲷酶解多肽液； a. 3、微滤将步骤a. 2得到的大鲷酶解多肽液经0. 45 μ m微滤膜进行微滤，即得透明的 大鲷多肽液； a. 4、超滤将步骤a. 3得到的大鲷多肽液采用5000分子量的超滤膜进行超滤，得大鲷 多肽液，备用； b、 调配称取步骤a. 4得到的大鲷多肽液20%，称量白砂糖12%、苹果汁3%、柠檬酸 0. 01%、β -环状糊精0. 5%和纯净水，混合后搅拌至全部溶解，最后按黄原胶0. 05%称量黄 原胶溶液，搅拌混合均匀。
[0018] c、过滤、灌装将步骤b调配好的混合液采用500目滤布过滤，然后进行灌装； d、杀菌、冷却将步骤c灌装好的口服液进行高温高压杀菌，杀菌方式：升温lOmin， 115°C、0. 07MPa杀菌20min，分级冷却lOmin，冷却至中心温度小于40°C，即得成品。
[0019] 试验例1 1、大鲷多肽清除DPPH自由基的能力测定 取 2mL 不同浓度（lmg/mL，2mg/mL，3mg/mL，4mg/mL，5mg/mL，6mg/mL，7mg/mL)的 样液，加入2mL 0. lmmol/L DPPH溶液（DPPH溶于无水乙醇中），混合均匀后在室温下避光反 应20min，在波长517nm处测吸光值Ai。空白组为2mL无水乙醇代替DPPH溶液，加入2mL样 液，混合均匀后反应20min，在波长517nm处测定吸光值A」。对照组为2mL DPPH溶液加入2 mL无水乙醇，在波长517nm处测定吸光值A。。
[0020] 计算公式：清除率=[1_ (Ai-Aj) /AJ*100% 2大鲷多肽清除OH ·能力的测定 取ImL 1. 865 mmol/L邻二氮菲溶液(称取0. 0369g邻二氮菲溶解于IOmL无水乙醇中 中，并定容于IOOmL容量瓶中）和2mL不同浓度梯度（0. 5g/L，lg/L，2g/L，4g/L，8g/L) 的样品液，充分混合均匀后加入ImL I. 865mmol/L的FeSO4 (取0. 0129g FeSO4. 7H20溶解于 蒸馏水中，并与25mL容量瓶中定容)，混合均匀后加入ImL 0.03% (V/V) H2O2，混合溶液在 37°C水浴60 min后，536 nm下测其吸光值为A#。以去离子水代替样品液来重复以上操 作，在536 nm测得吸光度Affi;以去离子水代替样品液和H2O2溶液重复上述操作，在536 nm 测其吸光值为A未损。
[0021] 清除率（％)= (A样-A损v( A未损-A损）X 100%。式中：A样为样品组的吸光值；A $为损伤管的吸光值;为未损伤管的吸光值。
[0022] 试验结果见表1。
【权利要求】
1. 一种具有高抗氧化性能的大鲷多肽，其特征在于，所述大鲷多肽的分子量不大于 5000 Da〇
2. -种大鲷多肽抗氧化口服液，其特征在于：所述口服液的原料，按质量百分数计， 包括：大鲷多肽液20-50%、白砂糖8-12%、苹果汁3-5%、柠檬酸0. 01-0. 03%、0 -环状糊精 0. 5-1%、黄原胶0. 05-0. 15%，余量为纯净水；所述大鲷多肽液中大鲷多肽的分子量不大于 5000 Da，按质量体积比，所述大鲷多肽液中大鲷多肽的浓度为1%-2. 5%。
3. 根据权利要求2所述的口服液，其特征在于，所述大鲷多肽液是以大鲷肉为原料制 得，制备方法包括如下步骤： 1) 选取人工饲养大鲷肉为原料，剔除油脂及杂质，洗净浙干后，加入质量为大鲷肉2倍 的纯净水进行匀浆处理； 2) 按质量比2:1的比例，将纯净水加入步骤1)匀浆处理后的大鲷肉，再加入复合酶进 行酶解，复合酶用量为浙干大鲷肉质量的〇. 5%-2%，酶解温度为50-60°C，酶解时间为5-7h， 酶解完毕加热酶解液到90°C以上灭酶10_20min，得大鲷酶解多肽液； 3) 微滤：将步骤2)所得大鲷酶解多肽液经0. 45 y m微滤膜进行微滤，取滤液；4)超 滤：将步骤3)所得滤液采用5000分子量的超滤膜进行超滤，得大鲷多肽液。
4. 根据权利要求2所述的口服液，其特征在于，所述口服液的原料，按质量百分数计， 包括：大鲷多肽液50 %、白砂糖10 %、苹果汁4 %、柠檬酸0. 025 %、0 -环状糊精1 %、黄原 胶0.1 %;所述大鲷多肽液中大鲷多肽的分子量不大于5000 Da，按质量体积比，所述大鲷多 肽液中大鲷多肽的浓度为1 %。
5. -种大鲷多肽抗氧化口服液的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤： 1) 选取人工饲养大鲷肉为原料，剔除油脂及杂质，洗净浙干后，加入质量为大鲷肉2倍 的纯净水进行匀浆处理； 2) 按质量比2:1的比例，将纯净水加入步骤1)匀浆处理后的大鲷肉，再加入复合酶进 行酶解，复合酶用量为浙干大鲷肉质量的〇. 5%-2%，酶解温度为50-60°C，酶解时间为5-7h， 酶解完毕加热酶解液到90°C以上灭酶10_20min，得大鲷酶解多肽液； 3) 微滤：将步骤2)所得大鲷酶解多肽液经0. 45 y m微滤膜进行微滤，取滤液； 4) 超滤：将步骤3)所得滤液采用5000分子量的超滤膜进行超滤，得大鲷多肽液，备 用； 5) 先将大鲷多肽液、白砂糖、苹果汁、柠檬酸、3 -环状糊精和水混合均匀，再加入黄 原胶溶液，并混合均匀，按质量百分数计，各组分的比例为：大鲷多肽液20-50%、白砂糖 8-12%、苹果汁3-5%、柠檬酸0. 01-0. 03%、0 -环状糊精0. 5-1%、黄原胶0. 05-0. 15%，余量为 纯净水； 6) 将步骤5)所得物采用500目滤布过滤，然后进行灌装； 7) 将步骤6)所得物进行高温高压杀菌，杀菌方式为：升温lOmin，于110-115°C、 0. 07MPa杀菌15-40min，分级冷却lOmin，冷却至中心温度小于40°C，即得大鲷多肽抗氧化 口服液成品； 所述复合酶，按质量比计，由以下酶组成：中性蛋白酶：木瓜蛋白酶：风味蛋白酶 =2:1:1。
6. 根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中，复合酶用量为浙干大鲷 肉质量的2 %，酶解温度为55°C，酶解时间为6 h，酶解完毕加热酶解液到90°C以上灭酶15 min〇
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤5)中，按质量百分数计，所述各组分 的比例为：大鲷多肽液50 %、白砂糖10 %、苹果汁4 %、柠檬酸0. 025 %、0 -环状糊精1 %、 黄原胶0. 1 %，余量为纯净水。
【文档编号】A61K9/08GK104432083SQ201510007657
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2015年1月8日 优先权日:2015年1月8日
【发明者】冉旭, 徐阳, 李静, 曾里, 孙强 申请人:四川大学