本发明属于药物制剂领域，特别涉及一种前列地尔冻干微乳剂、原料组合物及其制备方法。
背景技术：
：前列地尔，又称前列腺素E1(PGE1)，其水溶性较差，在水溶液中不稳定，而且前列地尔的临床刺激性与其游离浓度有直接联系，其所处的pH环境直接影响前列地尔的降解，因而对前列地尔的制剂提出了更高的技术要求。根据目前研究，提高前列地尔乳剂的包封率可有效降低前列地尔的游离浓度，减缓前列地尔的降解，进而降低其临床刺激性。下表1和2为现有技术研究的不同pH下前列地尔的油水相分布情况和不同pH下前列地尔的降解速率常数。可以看出乳剂中，前列地尔主要分布在油水相-界面层和水相两部分，其在乳剂中的降解速率常数小于水相中降解速率常数。因此，若要降低乳剂中前列地尔的游离浓度，减少其临床刺激性以及减少前列地尔药物的降解，就需要提高前列地尔在油水相-界面层的浓度，也就是要提高乳剂中前列地尔的包封率。表1不同pH下前列地尔的油水相分布情况表2不同pH下前列地尔的降解速率常数pH水溶液中K乳剂中K0.01010-12.010-110-2.73.010-1.810-34.010-2.710-3.25.010-3.410-36.010-3.210-2.77.010-2.810-2.78.010-2.610-2.59.010-2.210-2.410.010-110-1目前前列地尔的制剂发展经历了四个主要阶段：(1)普通冻干制剂，(2)环糊精包合后冻干制剂，(3)载药脂肪乳制剂，(4)载药脂肪乳冻干制剂。其中，普通冻干制剂稳定性差，注射后半衰期短，副作用多，治疗剂量大，给药时间长，会引起剧烈疼痛；环糊精包合后冻干制剂虽然制剂稳定性相对较好，疗效稳定，但半衰期短，剂量大，会引起剧烈疼痛，且环糊精作为注射用辅料有一定风险；载药脂肪乳制剂剂量减少，且具有靶向性，持续高效，低副作用，但脂微球遇热易集结，冻结易破乳，使得脂肪乳保存储藏条件苛刻，贮存、运输成本高；而载药脂肪乳冻干制剂由于减少了药物与水的接触，不仅具有靶向性，持续高效，低副作用和良好的稳定性，且贮存运输成本低，用药更安全，成为目前研究的热点。但是，现有的前列地尔冻干乳剂一般采用蛋黄卵磷脂作为乳化剂，如目前已上市的“优帝尔”前列地尔冻干乳剂，其主要成分包括乳糖、蛋黄卵磷脂、枸橼酸钠、油酸钠、大豆油和甘油，由于蛋黄卵磷脂的乳化能力有限，导致其在配制时需用高压均质机剪切均质，才能满足乳粒实现过滤灭菌的要求，不仅制备工艺繁琐，还会引起前列地尔药物的降解，且制得的制剂过滤除菌能力有限，配制批量较小，并且粒径较大，在200nm左右。而乳粒的粒径大小与粒径分布又与脂肪乳注射液的物理稳定性、临床安全性和有效性密切相关。粒径大容易发生聚结，会引起乳粒进一步加大，临床持续输注时，大乳粒过多进入体内后，容易阻塞毛细血管，导致炎症反应；在肺部滞留，会引起肺血管栓塞；也可能引起肝功能损伤。因此，乳粒的大小与粒径分布是评价脂肪乳注射液稳定性及安全性的重要指标，在研发和生产中，务必控制乳剂粒径的大小，从而保证制剂的稳定性和安全性。此外，由于前列地尔冻干乳剂在冷冻干燥前是先配制成乳剂，而脂肪乳剂为热力学和动力学不稳定体系，因此容易发生聚结和破乳等现象。“优帝尔”前列地尔冻干乳剂除了存在前述乳粒粒径较大缺陷以外，还存在不同批次间的包封率和粒径差异较大的问题，究其原因主要是该乳剂热力学不稳定，对贮存和运输条件比较敏感，导致其在贮存和运输过程批次间包封率和粒径浮动较大。因此，急需发展一种热力学和动力学稳定的乳剂体系，使得前列地尔冻干乳剂在贮存、运输和使用过程中更稳定。综上，如何以一种简化的工艺获得包封率高、粒径小且稳定、安全、高效、靶向的前列地尔冻干乳剂成为目前亟待解决的问题。技术实现要素：本发明所要解决的技术问题在于克服现有的前列地尔冻干乳剂乳粒粒径较大、批次间包封率和粒径浮动幅度大、稳定性较差以及配制时需采用高压均质机剪切均质，不仅制备工艺繁琐，还会引起前列地尔药物降解的缺陷，提供了一种粒径小、包封率高、稳定、安全、高效、靶向、刺激性等副作用少的前列地尔冻干微乳剂、原料组合物及其制备方法。本发明的前列地尔冻干微乳剂先采用本发明特定的原料组合物制得前列地尔微乳制剂，然后经冷冻干燥去除水分得到，较佳地，可采用本发明特定的原料组合物配合特定工艺制得前列地尔微乳制剂然后再冻干得到，其中前列地尔微乳制剂是以水、油、乳化剂和助乳化剂按适当的比例自发形成的各向同性、透明或半透明、略带乳光的、热力学和动力学稳定的胶体分散体系，其液滴被乳化剂形成的界面膜所稳定，经热压灭菌或离心都不能使之分层。本发明的前列地尔冻干微乳剂复溶后制剂质量稳定且可有效控制，与目前上市的普通脂肪乳剂相比，包封率高，贮存运输方便，有效期长，与目前上市的冻干脂肪乳剂相比，乳粒粒径更小。本发明的制备方法操作简单便捷，成本低，在前列地尔冻干微乳剂制备过程中无需进行热压灭菌，一方面避免了高压均质过程中引起的前列地尔药物降解，另一方面大大简化了工艺。本发明提供了一种前列地尔冻干微乳剂的原料组合物，所述原料组合物包括前列地尔、油、乳化剂、助乳化剂、稳定剂、冻干保护剂、pH调节剂和水，各组分的用量按照组分质量占100mL原料组合物的体积比计，所述前列地尔的用量为0.1～10mg/100mL，所述油的用量为0.5～20g/100mL，所述乳化剂的用量为0.5～30g/100mL，所述助乳化剂的用量为0.5～2g/100mL，所述稳定剂的用量为5～40mg/100mL，所述冻干保护剂的用量为5～20g/100mL，所述pH调节剂的用量为0.5～500mg/100mL，余量为水；所述乳化剂为聚乙二醇十二羟基脂肪酸酯(SolutolHS15)，或者为聚乙二醇十二羟基脂肪酸酯(SolutolHS15)与蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂、聚乙二醇化卵磷脂和氢化卵磷脂中的一种或几种组成的复合乳化剂。其中，所述前列地尔为本领域常规使用的前列地尔。所述前列地尔的用量较佳地为0.2～3mg/100mL，更佳地为0.25～0.5mg/100mL。其中，所述油为本领域常规使用的注射用油，符合中国药典注射用油的规定，所述油较佳地为大豆油和/或中链甘油三酸酯(MCT)。所述油的用量较佳地为1～10g/100mL，更佳地为1.5～1.52g/100mL。其中，所述前列地尔和所述油的用量比较佳地为1:750～1:10000，更佳地为1:1000～1:6000，最佳地为1:3000～1:6000。其中，所述乳化剂较佳地为聚乙二醇十二羟基脂肪酸酯(SolutolHS15)和蛋黄卵磷脂组成的复合乳化剂；所述复合乳化剂中所述聚乙二醇十二羟基脂肪酸酯和所述蛋黄卵磷脂的用量比较佳地为1:1～8:1，更佳地为4:1～8:1，最佳地为6:1。其中，所述蛋黄卵磷脂较佳地为精制蛋黄卵磷脂。所述乳化剂的用量较佳地为1～15g/100mL，更佳地为3.5～13.5g/100mL。其中，所述助乳化剂为本领域常规使用的助乳化剂，较佳地为甘油。所述助乳化剂的用量较佳地为0.5～1.5g/100mL，更佳地为0.9g/100mL。其中，所述稳定剂为本领域常规使用的稳定剂，较佳地为油酸和/或油酸钠。所述稳定剂的用量较佳地为10～30mg/100mL，更佳地为20mg/100mL。其中，所述冻干保护剂为本领域常规使用的冻干保护剂，所述冻干保护 剂较佳地为乳糖、葡萄糖、海藻糖、麦芽糖、蔗糖和甘露醇中的一种或多种，更佳地为乳糖、葡萄糖和海藻糖中的一种或几种。所述冻干保护剂的用量较佳地为8～15g/100mL。所述冻干保护剂一般以水溶液的形式加入，所述冻干保护剂的水溶液的质量分数可采用本领域常规的质量分数，一般为10～60％，较佳地为14～54％。其中，所述pH调节剂为本领域常规使用的pH调节剂，所述pH调节剂较佳地为调节所述原料组合物的pH至3.0～6.0的pH调节剂，更佳地为调节所述原料组合物的pH至3.0～5.0的pH调节剂。所述pH调节剂较佳地为盐酸、氢氧化钠、枸橼酸钠、枸橼酸、枸橼酸缓冲盐和磷酸中的一种或多种，更佳地为枸橼酸和/或枸橼酸钠。所述pH调节剂的用量较佳地为0.5～10mg/100mL。其中，所述水为本领域常规使用的注射用水，符合中国药典注射用水的规定即可。在本发明一较佳实施例中，所述原料组合物中各组分用量按照组分质量占100mL原料组合物的体积比计：所述前列地尔的用量为0.2～3mg/100mL，所述油的用量为1～10g/100mL，所述乳化剂的用量为1～15g/100mL，所述助乳化剂的用量为0.5～1.5g/100mL，所述稳定剂的用量为10～30mg/100mL，所述冻干保护剂的用量为8～15g/100mL，所述pH调节剂的用量为0.5～10mg/100mL，余量为水；所述乳化剂为聚乙二醇十二羟基脂肪酸酯(SolutolHS15)，或者为聚乙二醇十二羟基脂肪酸酯(SolutolHS15)与蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂、聚乙二醇化卵磷脂和氢化卵磷脂中的一种或几种组成的复合乳化剂。在本发明另一较佳实施例中，所述原料组合物中各组分用量按照组分质量占100mL原料组合物的体积比计：所述前列地尔的用量为0.25～0.5mg/100mL，所述油的用量为1.5～1.52g/100mL，所述乳化剂的用量为3.5～13.5g/100mL，所述助乳化剂的用量为0.9g/100mL，所述稳定剂的用量为20mg/100mL，所述冻干保护剂的用量为8～15g/100mL，所述pH调节 剂的用量为0.5～10mg/100mL，余量为水；所述乳化剂为聚乙二醇十二羟基脂肪酸酯(SolutolHS15)，或者为聚乙二醇十二羟基脂肪酸酯(SolutolHS15)与蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂、聚乙二醇化卵磷脂和氢化卵磷脂中的一种或几种组成的复合乳化剂。本发明还提供了一种前列地尔冻干微乳剂的制备方法，所述制备方法采用如前所述的前列地尔冻干微乳剂的原料组合物进行，按照本领域常规方法即可得到前列地尔冻干微乳剂。所述制备方法较佳地包括下述步骤：(1)在惰性氛围下，将所述油、所述乳化剂、所述助乳化剂和所述稳定剂混合，加热溶解，然后再向其中加入所述前列地尔，加热搅拌混匀，得到油相；将所述冻干保护剂与部分水混合，搅拌溶解，得到水相；(2)在惰性氛围下，将所述水相以0.5～5mL/min的滴加速度滴加入所述油相中，于30～50℃下剪切乳化，得到微乳；(3)在惰性氛围下，用所述pH调节剂调节所述微乳的pH至3.0～6.0，然后加入剩余量的水，经无菌过滤，冷冻干燥，即得前列地尔冻干微乳剂。步骤(1)、(2)和(3)中，所述惰性氛围为本领域常规惰性氛围，较佳地为氮气和/或氩气氛围，更佳地为氮气氛围。步骤(1)中，所述的加热的温度较佳地为25～80℃，更佳地为40～70℃。步骤(1)中，所述的部分水的用量为本领域常规用量，只要能使所述冻干保护剂在水中分散并混合均匀即可，所述冻干保护剂与部分水混合后得到的水相中所述冻干保护剂占的质量分数一般为10～60％，较佳地为14～54％。步骤(2)中，所述的滴加速度较佳地为1～4mL/min。步骤(2)中，所述的剪切可采用本领域常规剪切条件，只要满足剪切速度在10000～20000r/min即可。所述的剪切较佳地采用弗鲁克(Fluko)剪切。步骤(3)中，所述pH较佳地调节至3.0～5.0。步骤(3)中，所述无菌过滤可按照本领域常规操作进行，一般采用除菌级过滤器进行，所述除菌级过滤器的膜的孔径较佳地为0.22μm。步骤(3)中，所述冷冻干燥可按照本领域常规操作进行，一般在冻干箱中进行，所述冷冻干燥较佳地按下述方式进行：先在-30～-50℃下预冻4～12h，然后依次在-30～-20℃下干燥8～10h，-20～-15℃下干燥4～6h，-10～0℃下干燥4～6h，10～15℃下干燥3～5h，25～30℃下干燥2～5h。步骤(3)中，所述的剩余量的水为所述原料组合物配方中的余量。步骤(3)中，所进行的操作中较佳地不包括热压均质灭菌操作。本发明还提供了一种由上述制备方法制得的前列地尔冻干微乳剂。本发明的前列地尔冻干微乳剂的乳粒平均粒径一般为48～123nm，包封率可达80～92％，水分含量低于0.5％。在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。本发明所用试剂和原料均市售可得。本发明的积极进步效果在于：1、本发明的前列地尔冻干微乳剂用于注射给药时具有以下优点：①纳米粒径，可降低血液栓塞的风险；②可过滤灭菌；③黏度低，可减轻注射时的疼痛；④小粒径还可适当增加药物在血液中的循环时间，具有缓释、控释和靶向作用；制备微乳时，使用合适的辅料还可进一步提高药物在血液中的循环时间；⑤热力学和动力学稳定；⑥制备简单，可自发形成；⑦对于一些热不稳定、在溶液中易降解的药物，也可将其包裹在粒径小的乳粒中，过滤灭菌，然后再将其冻干从而以无水形态保存，临用前用5％葡萄糖或0.9％的生理盐水稀释即可。2、本发明的前列地尔冻干微乳剂复溶后制剂质量稳定且可有效控制，药物包封率在80％以上。与目前上市的普通脂肪乳剂相比，批次间包封率差异更小，贮存运输方便，有效期长；与目前上市的冻干脂肪乳剂相比，乳粒粒径更小。3、本发明的制备方法操作简单便捷，成本低，在前列地尔冻干微乳剂制备过程中无需进行热压灭菌，避免了高压均质过程中引起的前列地尔药物 降解。具体实施方式下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。下述实施例中，所用前列地尔(PGE1)由吉林英联生物技术有限公司提供；所用中链甘油三酸酯(MCT)、油酸、蛋黄卵磷脂由德国Lipoid公司提供；所用大豆油由铁岭药业有限公司提供；所用SolutolHS15由德国巴斯夫公司提供；所用甘油由湖南尔康股份制药有限公司提供；所用乳糖由德国美剂乐公司(Meggle)公司提供；所用葡萄糖由上海长富金山制药厂提供；所用麦芽糖、蔗糖由国药集团有限公司提供；其余原料均市售可得。实施例1一种前列地尔冻干微乳剂的原料组合物，其组分及含量如下所示：本实施例的前列地尔冻干微乳剂的制备方法包括如下步骤：(1)在氮气氛围下，按上述配方将大豆油、MCT、SolutolHS15、蛋黄卵磷脂、甘油和油酸混合，40℃加热溶解，再向其中加入前列地尔，溶解 混匀，得到油相；将乳糖与80mL注射用水混合，搅拌溶解，得到水相；(2)在氮气氛围下，将所得水相以0.5mL/min的滴加速度滴加入油相中，于50～60℃下采用Fluko剪切条件乳化，得到微乳；(3)在氮气氛围下，用枸橼酸调节所得微乳的pH至4.5，然后再用注射用水将其稀释定容至100mL，之后用0.22μm滤器进行无菌过滤，过滤后将其置冻干西林瓶中，每瓶装样2.0mL，再用冻干箱冷冻干燥除去水分，冷冻干燥工艺如下：先在-30℃下预冻12h，然后依次在-25℃下干燥8h，-20℃下干燥4h，-10℃下干燥6h，10℃下干燥3h，25℃下干燥2h，出箱，即得前列地尔冻干微乳剂。其中无菌过滤后每瓶冻干西林瓶中装的2.0mL样在冷冻干燥后得到的前列地尔冻干微乳剂记为一支冻干微乳剂。实施例2一种前列地尔冻干微乳剂的原料组合物，其组分及含量如下所示：本实施例的前列地尔冻干微乳剂的制备方法包括如下步骤：(1)在氮气氛围下，按上述配方将大豆油、MCT、SolutolHS15、蛋黄卵磷脂、甘油和油酸混合，25℃加热溶解，再向其中加入前列地尔，溶解混匀，得到油相；将葡萄糖与60mL注射用水混合，搅拌溶解，得到水相；(2)在氮气氛围下，将所得水相以1.0mL/min的滴加速度滴加入油相 中，于40～45℃下采用Fluko剪切条件乳化，得到微乳；(3)在氮气氛围下，用枸橼酸缓冲盐调节所得微乳的pH至5.0，然后再用注射用水将其稀释定容至100mL，之后用0.22μm滤器进行无菌过滤，过滤后将其置冻干西林瓶中，每瓶装样2.0mL，再用冻干箱冷冻干燥除去水分，冷冻干燥工艺如下：先在-40℃下预冻8h，然后依次在-30℃下干燥10h，-15℃下干燥6h，-5℃下干燥4h，10℃下干燥5h，25℃下干燥2h，出箱，即得前列地尔冻干微乳剂。其中无菌过滤后每瓶冻干西林瓶中装的2.0mL样在冷冻干燥后得到的前列地尔冻干微乳剂记为一支冻干微乳剂。实施例3一种前列地尔冻干微乳剂的原料组合物，其组分及含量如下所示：本实施例的前列地尔冻干微乳剂的制备方法包括如下步骤：(1)在氮气氛围下，按上述配方将大豆油、MCT、SolutolHS15、蛋黄卵磷脂、甘油和油酸钠混合，50℃加热溶解，再向其中加入前列地尔，溶解混匀，得到油相；将蔗糖与80mL注射用水混合，搅拌溶解，得到水相；(2)在氮气氛围下，将所得水相以1.5mL/min的滴加速度滴加入油相中，于30～50℃下采用Fluko剪切条件乳化，得到微乳；(3)在氮气氛围下，用枸橼酸缓冲盐调节所得微乳的pH至5.2，然后 再用注射用水将其稀释定容至100mL，之后用0.22μm滤器进行无菌过滤，过滤后将其置冻干西林瓶中，每瓶装样2.0mL，再用冻干箱冷冻干燥除去水分，冷冻干燥工艺如下：先在-40℃下预冻12h，然后依次在-20℃下干燥8h，-15℃下干燥6h，-5℃下干燥6h，15℃下干燥3h，25℃下干燥5h，出箱，即得前列地尔冻干微乳剂。其中无菌过滤后每瓶冻干西林瓶中装的2.0mL样在冷冻干燥后得到的前列地尔冻干微乳剂记为一支冻干微乳剂。实施例4一种前列地尔冻干微乳剂的原料组合物，其组分及含量如下所示：本实施例的前列地尔冻干微乳剂的制备方法包括如下步骤：(1)在氮气氛围下，按上述配方将大豆油、MCT、SolutolHS15、蛋黄卵磷脂、甘油和油酸混合，30℃加热溶解，再向其中加入前列地尔，溶解混匀，得到油相；将乳糖与40mL注射用水混合，搅拌溶解，得到水相；(2)在氮气氛围下，将所得水相以2.0mL/min的滴加速度滴加入油相中，于55～60℃下采用Fluko剪切条件乳化，得到微乳；(3)在氮气氛围下，用枸橼酸缓冲盐调节所得微乳的pH至6.0，然后再用注射用水将其稀释定容至100mL，之后用0.22μm滤器进行无菌过滤，过滤后将其置冻干西林瓶中，每瓶装样2.0mL，再用冻干箱冷冻干燥除去水 分，冷冻干燥工艺如下：先在-50℃下预冻4h，然后依次在-30℃下干燥10h，-15℃下干燥4h，0℃下干燥4h，15℃下干燥5h，30℃下干燥2h，出箱，即得前列地尔冻干微乳剂。其中无菌过滤后每瓶冻干西林瓶中装的2.0mL样在冷冻干燥后得到的前列地尔冻干微乳剂记为一支冻干微乳剂。实施例5一种前列地尔冻干微乳剂的原料组合物，其组分及含量如下所示：本实施例的前列地尔冻干微乳剂的制备方法包括如下步骤：(1)在氮气氛围下，按上述配方将大豆油、MCT、SolutolHS15、蛋黄卵磷脂、甘油和油酸混合，60℃加热溶解，再向其中加入前列地尔，溶解混匀，得到油相；将乳糖与30mL注射用水混合，搅拌溶解，得到水相；(2)在氮气氛围下，将所得水相以3.0mL/min的滴加速度滴加入油相中，于55～60℃下采用Fluko剪切条件乳化，得到微乳；(3)在氮气氛围下，用枸橼酸缓冲盐调节所得微乳的pH至6.35，然后再用注射用水将其稀释定容至100mL，之后用0.22μm滤器进行无菌过滤，过滤后将其置冻干西林瓶中，每瓶装样2.0mL，再用冻干箱冷冻干燥除去水分，冷冻干燥工艺如下：先在-40℃下预冻8h，然后依次在-25℃下干燥10h，-15℃下干燥5h，-10℃下干燥5h，10℃下干燥4h，30℃下干燥5h，出箱， 即得前列地尔冻干微乳剂。其中无菌过滤后每瓶冻干西林瓶中装的2.0mL样在冷冻干燥后得到的前列地尔冻干微乳剂记为一支冻干微乳剂。实施例6一种前列地尔冻干微乳剂的原料组合物，其组分及含量如下所示：本实施例的前列地尔冻干微乳剂的制备方法包括如下步骤：(1)在氮气氛围下，按上述配方将大豆油、MCT、SolutolHS15、蛋黄卵磷脂、甘油和油酸混合，70℃加热溶解，再向其中加入前列地尔，溶解混匀，得到油相；将乳糖与15mL注射用水混合，搅拌溶解，得到水相；(2)在氮气氛围下，将所得水相以1.0mL/min的滴加速度滴加入油相中，于60～65℃下采用Fluko剪切条件乳化，得到微乳；(3)在氮气氛围下，用枸橼酸缓冲盐调节所得微乳的pH至5.0，然后再用注射用水将其稀释定容至100mL，之后用0.22μm滤器进行无菌过滤，过滤后将其置冻干西林瓶中，每瓶装样2.0mL，再用冻干箱冷冻干燥除去水分，冷冻干燥工艺如下：先在-50℃下预冻5h，然后依次在-25℃下干燥10h，-15℃下干燥5h，-10℃下干燥4h，15℃下干燥4h，25℃下干燥2h，出箱，即得前列地尔冻干微乳剂。其中无菌过滤后每瓶冻干西林瓶中装的2.0mL样在冷冻干燥后得到的前列地尔冻干微乳剂记为一支冻干微乳剂。实施例7一种前列地尔冻干微乳剂的原料组合物，其组分及含量如下所示：本实施例的前列地尔冻干微乳剂的制备方法包括如下步骤：(1)在氮气氛围下，按上述配方将大豆油、MCT、SolutolHS15、蛋黄卵磷脂、甘油和油酸钠混合，80℃加热溶解，再向其中加入前列地尔，溶解混匀，得到油相；将麦芽糖与60mL注射用水混合，搅拌溶解，得到水相；(2)在氮气氛围下，将所得水相以1.5mL/min的滴加速度滴加入油相中，于65～70℃下采用Fluko剪切条件乳化，得到微乳；(3)在氮气氛围下，用枸橼酸缓冲盐调节所得微乳的pH至5.0，然后再用注射用水稀释定容至100mL，之后用0.22μm滤器进行无菌过滤，过滤后将其置冻干西林瓶中，每瓶装样2.0mL，再用冻干箱冷冻干燥除去水分，冷冻干燥工艺如下：先在-45℃下预冻6h，然后依次在-30℃下干燥10h，-15℃下干燥5h，0℃下干燥5h，10℃下干燥4h，25℃下干燥2h，出箱，即得前列地尔冻干微乳剂。其中无菌过滤后每瓶冻干西林瓶中装的2.0mL样在冷冻干燥后得到的前列地尔冻干微乳剂记为一支冻干微乳剂。实施例8一种前列地尔冻干微乳剂的原料组合物，其组分及含量如下所示：本实施例的前列地尔冻干微乳剂的制备方法包括如下步骤：(1)在氮气氛围下，按上述配方将大豆油、MCT、SolutolHS15、蛋黄卵磷脂、甘油和油酸混合，70℃加热溶解，再向其中加入前列地尔，溶解混匀，得到油相；将乳糖与70mL注射用水混合，搅拌溶解，得到水相；(2)在氮气氛围下，将所得水相以1.0mL/min的滴加速度滴加入油相中，于60～65℃下采用Fluko剪切条件乳化，得到微乳；(3)在氮气氛围下，用枸橼酸缓冲盐调节所得微乳的pH至4.5，然后再用注射用水将其稀释定容至100mL，之后用0.22μm滤器进行无菌过滤，过滤后将其置冻干西林瓶中，每瓶装样2.0mL，再用冻干箱冷冻干燥除去水分，冷冻干燥工艺如下：先在-30℃下预冻12h，然后依次在-30℃下干燥10h，-15℃下干燥5h，0℃下干燥6h，10℃下干燥6h，25℃下干燥2h，出箱，即得前列地尔冻干微乳剂。其中无菌过滤后每瓶冻干西林瓶中装的2.0mL样在冷冻干燥后得到的前列地尔冻干微乳剂记为一支冻干微乳剂。实施例9一种前列地尔冻干微乳剂的原料组合物，其组分及含量如下所示：本实施例的前列地尔冻干微乳剂的制备方法包括如下步骤：(1)在氮气氛围下，按上述配方将大豆油、MCT、SolutolHS15、蛋黄卵磷脂、甘油和油酸混合，70℃加热溶解，再向其中加入前列地尔，溶解混匀，得到油相；将乳糖与80mL注射用水混合，搅拌溶解，得到水相；(2)在氮气氛围下，将所得水相以1.5mL/min的滴加速度滴加入油相中，于60～65℃下采用Fluko剪切条件乳化，得到微乳；(3)在氮气氛围下，用枸橼酸缓冲盐调节所得微乳的pH至4.5，然后再用注射用水将其稀释定容至100mL，之后用0.22μm滤器进行无菌过滤，过滤后将其置冻干西林瓶中，每瓶装样2.0mL，再用冻干箱冷冻干燥除去水分，冷冻干燥工艺如下：先在-40℃下预冻6h，然后依次在-30℃下干燥10h，-15℃下干燥5h，0℃下干燥6h，15℃下干燥5h，25℃下干燥2h，出箱，即得前列地尔冻干微乳剂。其中无菌过滤后每瓶冻干西林瓶中装的2.0mL样在冷冻干燥后得到的前列地尔冻干微乳剂记为一支冻干微乳剂。实施例10一种前列地尔冻干微乳剂的原料组合物，其组分及含量如下所示：本实施例的前列地尔冻干微乳剂的制备方法包括如下步骤：(1)在氮气氛围下，按上述配方将大豆油、MCT、SolutolHS15、蛋黄卵磷脂、甘油和油酸混合，60℃加热溶解，再向其中加入前列地尔，溶解混匀，得到油相；将葡萄糖与50mL注射用水混合，搅拌溶解，得到水相；(2)在氮气氛围下，将所得水相以1.0mL/min的滴加速度滴加入油相中，于40～45℃下采用Fluko剪切条件乳化，得到微乳；(3)在氮气氛围下，用磷酸调节所得微乳的pH至4.5，然后再用注射用水将其稀释定容至100mL，之后用0.22μm滤器进行无菌过滤，过滤后将其置冻干西林瓶中，每瓶装样2.0mL，再用冻干箱冷冻干燥除去水分，冷冻干燥工艺如下：先在-50℃下预冻6h，然后依次在-30℃下干燥10h，-15℃下干燥5h，0℃下干燥6h，15℃下干燥5h，25℃下干燥2h，出箱，即得前列地尔冻干微乳剂。其中无菌过滤后每瓶冻干西林瓶中装的2.0mL样在冷冻干燥后得到的前列地尔冻干微乳剂记为一支冻干微乳剂。对比例1一种前列地尔冻干微乳剂的原料组合物，其组分及含量如下所示：本对比例的前列地尔制剂的制备方法包括如下步骤：(1)在氮气氛围下，按上述配方将大豆油、MCT、蛋黄卵磷脂、甘油和油酸混合，80℃加热溶解，再向其中加入前列地尔，溶解混匀，得到油相；将葡萄糖与50mL注射用水混合，搅拌溶解，得到水相；(2)在氮气氛围下，将所得水相以1.0mL/min的滴加速度滴加入油相中，于40～45℃下采用Fluko剪切条件乳化，无法得到均一的透明或半透明的微乳；(3)在氮气氛围下，用磷酸调节步骤(2)所得产物的pH至4.5，然后再用注射用水将其稀释定容至100mL，之后用0.22μm滤器进行无菌过滤，所得液体无法顺利通过0.22μm的微孔滤膜。对比例2一种前列地尔冻干微乳剂的原料组合物，其组分及含量如下所示：本对比例的前列地尔制剂的制备方法包括如下步骤：(1)在氮气氛围下，按上述配方将大豆油、MCT、SolutolHS15、蛋黄 卵磷脂、甘油和油酸混合，80℃加热溶解，再向其中加入前列地尔，溶解混匀，得到油相；将乳糖与50mL注射用水混合，搅拌溶解，得到水相；(2)在氮气氛围下，将所得水相以1.0mL/min的滴加速度滴加入油相中，于40～45℃下采用Fluko剪切条件乳化，得到微乳，无法得到均一的透明或半透明的微乳；(3)在氮气氛围下，用磷酸调节步骤(2)所得产物的pH至4.5，然后再用注射用水将其稀释定容至100mL，之后用0.22μm滤器进行无菌过滤，所得液体无法顺利通过0.22μm的微孔滤膜。效果实施例1评价实施例1～10所制备的前列地尔冻干微乳剂样品，评价指标为外观、再分散性、pH、乳粒、包封率和水分，具体评价标准和测试方法如下。①外观：以维持原体积，不塌陷，不皱缩，可整块脱落但不散碎，色泽均匀，无花斑，质地细腻为佳。②再分散性：取各实施例的冻干微乳剂样品一支，加入2mL注射用水复溶，振摇分散，振摇后能很快分散得到均匀的溶液者为佳，振摇次数越少，再分散性越好。③pH：取各实施例的冻干微乳剂样品一支，用5.0mL注射用水复溶，复溶后测定pH，pH在4.0～6.0范围内较佳。④乳粒：采用动态光散射法分析，乳粒的平均粒径在120nm以下较佳。⑤包封率：包封率在80％以上较佳。包封率测定方法：取各实施例的冻干微乳剂样品一支，用2.0mL注射用水将其复溶，然后置于100k的超滤离心管内，离心力600G，离心15min，得到澄清透明的超滤液，取0.5mL超滤液，测定其游离药物含量，同时，参照含量测定项方法，测定药物总含量。药物含量采用液相色谱测定，色谱条件为：以十八烷基键合硅胶为填充剂，以0.0067mol·L-1磷酸盐缓冲液-乙腈(体积比为70:30)为流动相，流速为每分钟1mL，柱后反应液为1mol·L-1的KOH溶液，柱后反应管为聚四氟 乙烯管()；柱温为60℃；检测波长为278nm。其中磷酸盐缓冲液的pH为6.3，其制备方法如下：取磷酸二氢钾9.07g，加水使之溶解，配成1000mL的溶液A，另取无水磷酸氢二钠9.46g，加水使之溶解，制成1000mL的溶液B，将溶液B加入到溶液A中，直到pH为6.3，取此混合液100mL加水至1000mL，摇匀，即得。包封率计算公式为：包封率＝(药物总含量－游离药物总含量)/主药总含量×100％。⑥水分：取各实施例的冻干微乳剂样品，按照水分测定法(中国药典2010年版二部附录ⅧM第一法A)测定，不得超过5.0％。测定结果如下表3。表3实施例1～10评价结果由上表可知，本发明前列地尔冻干微乳剂的包封率均在80％以上，根据本领域的认识，药物包封率大于80％就说明产品合格，可以上市，因此，药物包封率在80％以上还是90％以上对本领域来说无显著性差异。效果实施例2由于前列地尔上市制剂临床使用时，需经生理盐水或5％葡萄糖溶液复溶、稀释后给药，因此在此研究了本发明自制的冻干微乳剂经上述两种稀释溶剂稀释后的稳定性(均为100mL稀释)，考察样品经稀释8h后，PGE1含量、杂质PGA1含量、包封率和乳粒的变化。本效果实施例以本发明实施例9为例，取其制备的前列地尔冻干微乳剂一支，与市售前列地尔普通脂肪乳剂和市售前列地尔冻干乳剂进行对照，其中，采用吉林省育华药业有限责任公司提供的凯彤和北京泰德制药股份有限公司提供的凯时作为市售前列地尔普通脂肪乳剂的代表样品，分别标为上市制剂A和上市制剂B，采用重庆药友制药有限责任公司提供的优帝尔作为市售前列地尔冻干乳剂的代表样品，标为上市制剂C。对乳粒进行评价时，参照美国药典(UnitedStatesPharmacopoeial，USP)标准进行考察，即同时采用两种粒径测定方法评价：一是采用动态光散射(DLS)技术测定平均粒径；二是采用光消减-单粒子光学传感(LightExtinction-SingleParticalOpticalSensing，LE/SPOS)技术测定粒径分布，规定乳粒的平均粒径(MDD)<500nm，体积径(PSDV)>5μm的乳粒体积之和与分散相总体积的百分比(percentageoffatglobules>5μm，PFAT5)≤0.05％。下表4为上市制剂A、B和C的PGE1含量、PGA1含量含量、包封率和粒径测试结果，其中上市制剂A和B是直接测定，上市制剂C是将其一支冻干品用2.0mL注射用水复溶后测定。表4上市制剂稀释前的质量评价由上表4可以看到，上市脂肪乳制剂A和B的包封率均大于80％，而上市冻干乳剂C两个批次的包封率分别为92.59％和72.21％，批次间差异很大。而本发明前列地尔冻干微乳剂的包封率如表3所示，均在80％以上，与上市制剂相比其包封率不存在显著性差异，而且本发明前列地尔冻干微乳剂批次间的包封率差异更小、更稳定，更能有效控制制剂质量，便于产业化生产和应用。下面对上市冻干乳剂C包封率不稳定的原因进行了分析，经分析可能有以下三个因素造成：1、脂肪乳剂配制过程中高压均质的强机械力导致批次间质量存在差异；2、由于上市制剂C的粒径为200～220nm，而过滤除菌的滤膜粒径为220nm，因此过滤过程比较困难，容易导致包封率发生变化；3、脂肪乳剂是热力学和动力学不稳定体系，在冻干过程中，以及贮存或运输过程中，制剂受到温度和光照的影响，从而引起批次间差异。下表5和6为上市制剂A、B和C及本发明实施例9自制的一支冻干乳剂分别经100mL生理盐水和100mL5％葡萄糖溶液配伍稀释后，参照国家药品标准以及美国药典对粒径的要求，采用DLS法测定的平均粒径与90％累积粒径结果，以及采用LE/SPOS技术测定的大乳粒分布即PFAT5值的实验结果。表5上市制剂A、B和C及实施例9的制剂采用生理盐水配伍的实验结果表6上市制剂A、B和C及实施例9的制剂采用5％葡萄糖溶液配伍的实验结果由上表5和6可以看到，本发明实施例9冻干微乳剂的平均粒径明显小于市售制剂A、B和C，并且其经生理盐水或5％葡萄糖溶液稀释后，室温放置8h内，PGE1含量、PGA1含量、平均粒径、PFAT5值、包封率均没有明显变化，具有较好的稳定性。实施例1～8和实施例10的效果同实施例9相当。效果实施例3由于上市制剂C(优帝尔)为市售前列地尔冻干乳剂，与本发明的前列地尔剂型相同，因此，本效果实施例将实施例9的一支冻干微乳剂与上市制剂C(优帝尔，选用包封率较高的批次：11070150)同时进行了影响因素研究，结果如下表7所示。表7实施例9冻干微乳剂与上市制剂C的影响因素实验结果由上表结果可见，PGE1对热较为敏感，在40℃与60℃的条件下均有不同程度的降解。光照对PGE1的稳定性没有明显影响，均未检出杂质PGA1。 因此产品应该贮存在阴凉处，避免高温。在40℃与60℃的条件下，冻干产品的包封率均有下降，原因可能是温度超过了样品的Tg(玻璃化转化温度)，产品外观出现皱缩的现象，干乳粒可能发生了融化、破裂、聚集等变化，造成包封率下降。实施例9的冻干微乳剂在高温放置后，粒径变小，原因可能是乳粒发生了破乳，导致包封率偏低，破裂后的乳粒复溶后粒径变小；而上市制剂C高温放置后粒径变大，可能是因为干乳粒主要发生了融化、聚集，导致包封率偏低，聚集的乳粒复溶后粒径变大。综上所述，上市制剂C与本发明自制的前列地尔冻干微乳剂在高温下不稳定，主药含量，包封率均有所下降，杂质PGA1含量升高；在复溶粒径方面，上市制剂C的粒径会增大，自制前列地尔冻干微乳剂的粒径会减小。相对于上市制剂，自制前列地尔冻干微乳剂的主要优点是粒径更小，冻干产品的干乳粒不容易发生聚集，安全性有所提高。效果实施例4对本发明前列地尔剂型与上市制剂C(优帝尔，选用包封率较高的批次：11070150)同时进行溶血性实验，溶血试验参照国家食品药品监督管理局药品审评中心颁布的《化学药物刺激性和溶血性研究的技术指导原则》，具体制备过程如下。2％红细胞混悬液的配制：于家兔耳缘静脉取兔血约10mL，放入含玻璃珠的三角烧瓶中振摇10分钟，除去纤维蛋白原。加入约10倍量的0.9％氯化钠溶液，摇匀，3000r/min离心5分钟，除去上清液，沉淀的红细胞再用0.9％氯化钠溶液按上述方法洗涤2～3次，至上清液不显红色，离心，弃去上清液，即得红细胞。取2mL红细胞，用0.9％氯化钠溶液配成100mL的2％的混悬液。取洁净试管7只，进行编号，按表8所示依次加入2％红细胞悬液、0.9％氯化钠溶液、蒸馏水、复溶乳液，混匀。立即将试管置37±0.5℃的水浴中温育，开始每隔15分钟观察1次，1h后，每隔1h观察一次，共观察3h，比较样品管与阳性对照管和阴性对照管，判断是否有溶血或红细胞凝聚发生。 1～5号管为样品管，6号管为阳性对照管，7号管为阴性对照管。表8溶血试验各溶液加入量及顺序试管编号12345672％红细胞悬液(mL)2.52.52.52.52.52.52.50.9％氯化钠溶液(mL)2.42.32.22.12/2.5蒸馏水(mL)/////2.5/复溶乳液(mL)0.10.20.30.40.5//溶血试验结果显示：实施例1～10的前列地尔冻干微乳剂和上市制剂C在4小时内均无溶血或红细胞凝聚现象发生，因而均可以用于注射使用，制剂安全性较好。效果实施例5按照国家食品药品监督管理局药品审评中心颁布的《化学药物刺激性和溶血性研究的技术指导原则》，对实施例9的前列地尔冻干微乳剂和上市制剂C(优帝尔，选用包封率较高的批次：11070150)进行过敏反应实验，设立阴性、阳性对照组和受试物不同剂量组。阴性对照组给予0.5mL生理盐水，阳性对照组给予5mg/只牛血清白蛋白，即致敏物质，受试物以体表面积法和临床推荐剂量换算其给药量，每组动物数6只，连续肌肉注射3次，然后于第14天及第21天，从腹腔注射致敏剂量的2倍。致敏期间每日观察每组动物，初次、最后一次致敏和激发当日测定每组每只动物的体重，激发后，观察每只动物的反应，发现给药后1h内自制制剂和上市制剂C均未见明显的过敏反应。实施例1～8和实施例10的效果同实施例9相当。效果实施例6按照国家食品药品监督管理局药品审评中心颁布的《化学药物刺激性和溶血性研究的技术指导原则》，对实施例9的前列地尔冻干微乳剂上市制剂C(优帝尔，选用包封率较高的批次：11070150)进行血管刺激性实验。选取新西兰白兔雄性3只，体重约2.5～3.0kg，按临床推荐剂量换算出每只兔子的 给药量，再按此剂量均于右耳缘静脉缓慢推注复溶后冻干乳剂，左耳缘静脉推注同样体积量的生理盐水，每天一次，每次约0.5mL，连续注射三天，每天观察注射部位有无水肿、红斑。末次注射2小时后，将实验动物处死，切除兔耳，然后做病理切片观察实验。实验结果显示：本试验条件下，未见实施例9前列地尔冻干微乳剂和上市制剂C复溶后的注射液及生理盐水引起兔耳静脉血管及周围组织刺激性病理改变。实施例1～8和实施例10的效果同实施例9相当。当前第1页1 2 3