一种治疗糖原累积症的葡萄糖缓释制剂的制作方法

本发明属于药物制剂领域，本发明提供了一种治疗糖原累积症的葡萄糖缓释制剂及其制备方法。

背景技术：

糖原累积症(glycogenstoragedisease，gsd)是一类由于先天性酶缺陷所造成的糖原代谢障碍疾病，多数属常染色体隐性遗传，发病因种族而异。目前，糖原累积症仍属于罕见病范畴，鉴于其酶缺乏种类的差异所导致的复杂的疾病分型，关于其发病率各国尚无准确的统计数据，根据欧洲资料，欧洲范围内该病的发病率约为1/20000～1/25000。

糖原是由葡萄糖单位构成的高分子多糖，主要贮存在肝和肌肉中作为备用能量，正常肝和肌肉分别含有约4％和2％糖原。摄入体内的葡萄糖在葡萄糖激酶、葡糖磷酸变位酶和尿苷二磷酸葡糖焦磷酸化酶的催化下形成尿苷二磷酸葡萄糖(udpg)。然后由糖原合成酶将udpg提供的葡萄糖分子以α-1，4-糖苷键连接成一个长链；每隔3～5个葡萄糖残基由分支酶将1，4位连接的葡萄糖转移成1，6位连接，形成分支，如是扩展，最终构成树状结构的大分子。糖原的分子量高达数百万以上，其最外层的葡萄糖直链较长，大多为10～15个葡萄糖单位。糖原的分解主要由磷酸化酶催化、从糖原分子中释放1－磷酸葡萄糖。但磷酸化酶的作用仅限于1，4糖苷键，并且当分枝点前仅存4个葡萄糖残基时就必须由脱支酶(淀粉1，6－葡糖苷酶)将其中的三个残基转移至其他直链以保证磷酸化酶的作用继续进行。与此同时，脱支酶可以解除α-l，6-糖苷键连接的最后一个葡萄糖分子，这样反复进行便保证了机体对葡萄糖的需求。存在于溶酶体中的α-1，4葡糖苷酶(酸性麦芽糖酶)也能水解不同长度的葡萄糖直链，使之成为麦芽糖等低聚糖分子。上述糖原合成和分解过程中任一酶的缺陷即导致不同临床表现的各型糖原累积病。

gsd是由于患者缺乏糖原代谢有关的酶，从而不能正常合成或代谢糖原，使糖原合成或分解发生障碍，导致糖原沉积于组织中而致病。糖原合成和分解代谢中所必需的各种酶至少有8种，由于酶缺陷的种类不同，造成的糖原代谢病至少可分为13种临床类型，其中ⅰ、ⅲ、ⅳ、ⅵ、ⅸ型以肝脏病变为主；ⅱ、ⅲ、ⅴ、ⅶ型以肌肉组织受累为主。其中早发型糖原累积症ⅱ型，通常在1岁内发病，累及多个器官，尤其是心脏，严重可致命。

糖原累积症的主要临床表现为肝大、低血糖，包括ⅰa型(葡萄糖-6-磷酸酶缺乏)及更罕见的ⅰb型(g-6-p微粒体转移酶缺乏)、ⅲ型、ⅵ型和伴x染色体与常染色体隐性遗传的磷酸酶β激酶缺乏。肌-能量障碍性糖原累积症主要表现为肌肉萎缩、肌张力低下、运动障碍，包括ⅲ型、ⅴ型、ⅶ型，磷酸甘油变位酶缺乏和ldhm亚单位缺乏另有ⅱ型、ⅳ型等。

本病系遗传性疾病，患儿出生时即发病，随着年龄的增长，出现明显低血糖症状，如软弱无力、出汗、呕吐、惊厥和昏迷，并可以出现酮症酸中毒，因糖原逐渐累积而出现肝脾大。患儿生长发育迟缓，智力无障碍，体型矮小、肥胖，皮肤颜色淡黄，腹部膨隆，肝脏显著增大，质地坚硬，肌肉发育差，无力，尤其以下肢最为显著。多数患此病症者不能存活至成年，往往死于酸中毒昏迷。轻症病例在成年后可以获得好转。

临床上对该疾病主要采用饮食指导及生玉米淀粉治疗的方法，基本原则是：使血糖维持在较平稳的正常水平，尽量避免进食后一过性高血糖进而增加糖原累积，以及避免因患者无法动员糖原而造成的空腹低血糖等症状，使患儿能够获得正常生长发育，以及避免因为血糖波动而造成的一些列并发症(严重时可危及生命)。饮食指导方法一般为：通过用高蛋白、低脂低糖饮食，少量多次喂养，以维持血糖正常水平，尤应于午夜加餐1次，以避免次晨低血糖。其他治疗包括防止感染、纠正酸中毒等。目前，生玉米淀粉治疗是最常用于糖原累积症的治疗方法，尤其适用于幼儿及儿童患者，亚洲地区接受此治疗的患者人数估计为2～5万，国内患者约为1～3万。生玉米淀粉的治疗原理为通过人体消化可以较为缓慢而持续的释放葡萄糖，进而维持患者的血糖水平。

然而，生玉米淀粉治疗方法虽然治疗成本很低，但其服用方法却具有诸多缺陷：1)服用次数多，每天不少于4次，一般要在两顿饭中间吃，尤其是夜间凌晨3点左右服用；2)服用条件苛刻，一定要吃“生”玉米淀粉，煮熟的淀粉或玉米面粥不行，必须凉水冲服，即使在冬天也需用凉水，许多患者难以接受；3)服用剂量大，生玉米淀粉经凉水冲服后体积膨胀，儿童一次服用治疗量的淀粉有很大困难；4)耐受性差，幼儿消化系统常常不耐受，容易导致腹泻；5)依从性差，需长期服药，但服药方式复杂，会给日常生活带来许多不便；6)市售生玉米淀粉质量差异较大，从而造成治疗效果偏差较大；7)生玉米淀粉中维持缓释的有效成分较少，从而增加了患儿的服用量。

综上，虽然生玉米淀粉疗法具有成本低的优点，但其固有的缺陷大大限制了其使用，临床上急需能够替代该疗法的新制剂，本发明一种治疗糖原累积症的葡萄糖缓释制剂即通过维持葡萄糖持续缓慢释放从而使患儿血糖维持在正常范围内，避免血糖波动过大而达到治疗目的。本发明具有服用方便、服用次数少、服用量少、口感改善、耐受性好、依从性好等优点，能够在一定程度上克服该疗法缺陷，从而具有很大的深度开发和应用前景。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种治疗糖原累积症的葡萄糖缓释制剂及其制备方法。

本发明的葡萄糖缓释制剂其特征在于：所述葡萄糖缓释制剂由葡萄糖丸芯和薄膜衣两部分组成，制备所述葡萄糖缓释制剂的原料组成按重量份为：

葡萄糖丸芯：葡萄糖一水合物360；微晶纤维素36～40；

薄膜衣：乙基纤维素80～120；羟丙基纤维素10～30；

柠檬酸三乙酯8～12；95％乙醇1800～2300；

纯化水450～575。

进一步地，所述微晶纤维素为微晶纤维素-101。

进一步地，所述乙基纤维素为乙基纤维素-20p或乙基纤维素-45p，所述羟丙基纤维素为羟丙基纤维素-ef。

进一步地，制备本发明葡萄糖缓释制剂的原料组成按重量份为：

葡萄糖丸芯：葡萄糖一水合物360；微晶纤维素-10140；

薄膜衣：乙基纤维素-20p120；羟丙基纤维素-ef15；

柠檬酸三乙酯12；95％乙醇1800；

纯化水450。

进一步地，制备本发明葡萄糖缓释制剂的原料组成按重量份为：

葡萄糖丸芯：葡萄糖一水合物360；微晶纤维素-10136；

薄膜衣：乙基纤维素-20p120；羟丙基纤维素-ef30；

柠檬酸三乙酯12；95％乙醇2300；

纯化水575。

进一步地，制备本发明葡萄糖缓释制剂的原料组成按重量份为：

葡萄糖丸芯：葡萄糖一水合物360；微晶纤维素-10140；

薄膜衣：乙基纤维素-45p80；羟丙基纤维素-ef10；

柠檬酸三乙酯8；95％乙醇2055；

纯化水515。

另外，本发明还提供了一种所述葡萄糖缓释制剂的制备方法，参见附图1，包括以下步骤：

1)葡萄糖微丸的制备：

①软材的制备：称取处方量的葡萄糖一水合物和微晶纤维素放入湿法混合制粒机中，混合5～10分钟，选用纯化水为润湿剂，并以雾化方式加入，粒化后即得软材；

②挤出--滚圆制微丸：取软材适量依次放入挤出机中制备挤出料，将挤出物料加入滚圆机中，调整滚圆速度及时间；

③载药丸芯干燥：将制备好的微丸放入流化床中，设置进风温度为52～58℃，进风气量为55～60m³/h，干燥3～4小时，控制微丸含水量在6.0％以下至干燥终点；

④筛分：干燥后的葡萄糖微丸，先后过25目筛和40目筛，获得25目～40目之间的微丸，用于包衣实验；

2)微丸包衣：

①溶剂配制：称取处方量的乙醇、纯化水配制成重量百分含量为80％的乙醇-水溶液；

②薄膜衣包衣液配制：称取处方量的羟丙基纤维素，在①步获得的溶剂中持续搅拌状态下匀速加入，搅拌至完全溶解；加入处方量的乙基纤维素，搅拌60分钟以上，溶液应呈澄清透明状；包衣液使用前，在搅拌条件下，加入处方量的柠檬酸三乙酯，搅拌45～60分钟；

③薄膜衣包制：使用流化床底喷装置进行微丸薄膜衣的包制，薄膜衣包制过程控制物料温度于35±2℃范围内；

④微丸干燥：薄膜衣包制结束后，维持物料温度干燥30～40分钟后出料。

进一步地，所述葡萄糖缓释制剂的制备方法，包括以下步骤：

1)葡萄糖微丸的制备：

①软材的制备：称取处方量的葡萄糖一水合物和微晶纤维素放入湿法混合制粒机中，混合5分钟，选用纯化水为润湿剂，并以雾化方式加入，粒化后即得软材；

②挤出--滚圆制微丸：取软材适量依次放入挤出机中制备挤出料，将挤出物料加入滚圆机中，调整滚圆速度及时间；

③载药丸芯干燥：将制备好的微丸放入innojet流化床中，设置进风温度为55℃，进风气量为60m³/h，干燥3.5小时，控制微丸含水量在5.0％以下至干燥终点；

④筛分：干燥后的葡萄糖微丸，先后过25目筛和40目筛，获得25目～40目之间的微丸，用于包衣实验；

2)微丸包衣：

①溶剂配制：称取处方量的乙醇、纯化水配制成重量百分含量为80％的乙醇-水溶液；

②薄膜衣包衣液配制：称取处方量的羟丙基纤维素，在①步获得的溶剂中持续搅拌状态下匀速加入，搅拌至完全溶解；加入处方量的乙基纤维素，搅拌60分钟以上，溶液应呈澄清透明状；包衣液使用前，在搅拌条件下，加入处方量的柠檬酸三乙酯，搅拌60分钟；

③薄膜衣包制：使用流化床底喷装置进行微丸薄膜衣的包制，薄膜衣包制过程控制物料温度于35±2℃范围内；

④微丸干燥：薄膜衣包制结束后，维持物料温度干燥40分钟后出料。

经释放度测定试验证实，本发明的葡萄糖缓释制剂具有良好的缓释性能，能够在6个小时内逐步缓慢释放，不同处方葡萄糖缓释制剂在6小时时的释放率为40～70％，从而可代替生玉米淀粉用于治疗糖原累积症。

附图说明

图1葡萄糖缓释制剂制备工艺流程图。

图2三种不同处方葡萄糖缓释制剂释放度曲线图。

具体实施方式

实施例1

仪器及设备：

数显型顶置式机械搅拌器(rw20)

流化床制粒干燥机(flzb1.5，创志机电)

innojet流化床(ventilvsl，德国innojet)

挤出滚圆机(s-250，重庆英格造粒包衣技术有限公司)

低温旋转挤出机(ltae-200，深圳信宜特科技)

湿法混合制粒机(hlshz-6，北京航空制造工程研究所)

分析天平

处方一：

原料的重量比：

葡萄糖丸芯：葡萄糖一水合物360；微晶纤维素-10140；

薄膜衣：乙基纤维素-20p120；羟丙基纤维素-ef15；

柠檬酸三乙酯12；95％乙醇1800；

纯化水450。

制备方法如下：

1)葡萄糖微丸的制备：

①软材的制备：称取处方量的葡萄糖一水合物和微晶纤维素-101(作为稀释剂)放入湿法混合制粒机中，混合6分钟，选用纯化水为润湿剂，并以雾化方式加入，粒化后即得软材；

②挤出--滚圆制微丸：取软材适量依次放入挤出机中制备挤出料，将挤出物料加入滚圆机中，调整滚圆速度及时间；

③载药丸芯干燥：将制备好的微丸放入流化床中，设置进风温度为52℃，进风气量为58m³/h，干燥4小时，控制微丸含水量在5.0％以下至干燥终点；

④筛分：干燥后的葡萄糖微丸，先后过25目筛和40目筛，获得25目～40目之间的微丸，用于包衣实验；

2)微丸包衣：

①溶剂配制：称取处方量的乙醇、纯化水配制成重量百分含量为80％的乙醇-水溶液；

②薄膜衣包衣液配制：称取处方量的羟丙基纤维素-ef(作为致孔剂)，在①步获得的溶剂中持续搅拌状态下匀速加入，搅拌至完全溶解；加入处方量的乙基纤维素-20p(作为成膜剂)，搅拌60分钟以上，溶液应呈澄清透明状；包衣液使用前，在搅拌条件下，加入处方量的柠檬酸三乙酯(作为增塑剂)，搅拌45分钟；

③薄膜衣包制：使用流化床底喷装置进行微丸薄膜衣的包制，薄膜衣包制过程控制物料温度于35±2℃范围内；

④微丸干燥：薄膜衣包制结束后，维持物料温度干燥35分钟后出料。关键工艺参数如下表所示：

关键工艺参数表

实施例2

仪器及设备：同实施例1。

处方二：

原料的重量比：

葡萄糖丸芯：葡萄糖一水合物360；微晶纤维素-10136；

薄膜衣：乙基纤维素-20p120；羟丙基纤维素-ef30；

柠檬酸三乙酯12；95％乙醇2300；

纯化水575。

制备方法如下：

1)葡萄糖微丸的制备：

①软材的制备：称取处方量的葡萄糖一水合物和微晶纤维素-101(作为稀释剂)放入湿法混合制粒机中，混合10分钟，选用纯化水为润湿剂，并以雾化方式加入，粒化后即得软材；

②挤出--滚圆制微丸：取软材适量依次放入挤出机中制备挤出料，将挤出物料加入滚圆机中，调整滚圆速度及时间；

③载药丸芯干燥：将制备好的微丸放入流化床中，设置进风温度为58℃，进风气量为55m³/h，干燥3小时，控制微丸含水量在6.0％以下至干燥终点；

④筛分：干燥后的葡萄糖微丸，先后过25目筛和40目筛，获得25目～40目之间的微丸，用于包衣实验；

2)微丸包衣：

①溶剂配制：称取处方量的乙醇、纯化水配制成重量百分含量为80％的乙醇-水溶液；

②薄膜衣包衣液配制：称取处方量的羟丙基纤维素-ef(作为致孔剂)，在①步获得的溶剂中持续搅拌状态下匀速加入，搅拌至完全溶解；加入处方量的乙基纤维素-20p(作为成膜剂)，搅拌60分钟以上，溶液应呈澄清透明状；包衣液使用前，在搅拌条件下，加入处方量的柠檬酸三乙酯(作为增塑剂)，搅拌50分钟；

③薄膜衣包制：使用流化床底喷装置进行微丸薄膜衣的包制，薄膜衣包制过程控制物料温度于35±2℃范围内；

④微丸干燥：薄膜衣包制结束后，维持物料温度干燥30分钟后出料。

关键工艺参数同实施例1。

实施例3

仪器及设备：同实施例1。

处方三：

原料的重量比：

葡萄糖丸芯：葡萄糖一水合物360；微晶纤维素-10140；

薄膜衣：乙基纤维素-45p80；羟丙基纤维素-ef10；

柠檬酸三乙酯8；95％乙醇2055；

纯化水515。

制备方法如下：

1)葡萄糖微丸的制备：

①软材的制备：称取处方量的葡萄糖一水合物和微晶纤维素-101(作为稀释剂)放入湿法混合制粒机中，混合5分钟，选用纯化水为润湿剂，并以雾化方式加入，粒化后即得软材；

②挤出--滚圆制微丸：取软材适量依次放入挤出机中制备挤出料，将挤出物料加入滚圆机中，调整滚圆速度及时间；

③载药丸芯干燥：将制备好的微丸放入流化床中，设置进风温度为55℃，进风气量为60m³/h，干燥3.5小时，控制微丸含水量在5.0％以下至干燥终点；

④筛分：干燥后的葡萄糖微丸，先后过25目筛和40目筛，获得25目～40目之间的微丸，用于包衣实验；

2)微丸包衣：

①溶剂配制：称取处方量的乙醇、纯化水配制成重量百分含量为80％的乙醇-水溶液；

②薄膜衣包衣液配制：称取处方量的羟丙基纤维素-ef(作为致孔剂)，在①步获得的溶剂中持续搅拌状态下匀速加入，搅拌至完全溶解；加入处方量的乙基纤维素--45p(作为成膜剂)，搅拌60分钟以上，溶液应呈澄清透明状；包衣液使用前，在搅拌条件下，加入处方量的柠檬酸三乙酯(作为增塑剂)，搅拌60分钟；

③薄膜衣包制：使用流化床底喷装置进行微丸薄膜衣的包制，薄膜衣包制过程控制物料温度于35±2℃范围内；

④微丸干燥：薄膜衣包制结束后，维持物料温度干燥40分钟后出料。

关键工艺参数同实施例1。

实施例4

上述三种处方葡萄糖缓释制剂释放度测定试验

释放度测定方法：

缓释微丸释放度测定按中国药典2010版(二部)第一法进行。

溶出介质：超纯水500ml；

转速：100r/min；

温度：37℃±0.5℃。

称取样品约400mg置于转篮中，分别于0.5h，2h，4h，6h取样2ml(并补充等量水)以0.45μm滤膜过滤，进行hplc检测。

高效液相色谱条件：

仪器：agilenthplc1260；

色谱柱：agilenthi-plexca300×7.7μm；

检测器：agilentelsd；

流动相：水；

流速：0.8ml/min；

柱温：80℃；

进样量：20μl。

标准曲线绘制：

精密称取葡萄糖一水合物以水配制成浓度分别为50、100、200、300、400μg/ml溶液，进样。以峰面积对数和含量对数作标准曲线，y＝1.3825x-0.2531，r＝0.999。结果表明：在50-400μg/ml范围内，含量与峰面积有良好线性。

释放度测定结果：

上述三种处方葡萄糖缓释制剂均具有良好的缓释性能，能够在6个小时内逐步缓慢释放，不同处方葡萄糖缓释制剂在6小时时的释放率为40-70％，各处方样品的具体释放度及释放曲线参见附图2(图中各处方样品释放度结果系根据葡萄糖一水合物理论含量计算得出)。