本发明涉及一种洛铂的新应用，具体是涉及一种洛铂在制备治疗神经母细胞瘤药物中的应用。技术背景近年来，儿童恶性肿瘤的发病率逐年上升，已成为严重危害儿童健康和生命的疾病。神经母细胞肿瘤(neuroblastoma,nb)起源于交感神经系统的原始神经嵴细胞的胚胎性肿瘤，交感神经链、肾上腺髓质是最常见的原发部位。nb是儿童最常见的实体肿瘤之一，占所有儿童肿瘤的8％～10％，占婴儿总癌症发病率的28％，为婴儿发病率最高的恶性肿瘤。nb病死率高，占所有小儿恶性肿瘤死亡病死率的15％，其发病多为5岁以下，大约有1％家族史。我国每年新发病3000例左右，有将近一半的神经母细胞瘤发生在2岁以内的婴幼儿。神经母细胞瘤属于神经内分泌性肿瘤，可以起源于交感神经系统的任意神经脊部位，其主要转移途径为淋巴及血行。在局限性病变病人中约35％有局部淋巴结浸润，血行转移主要发生于骨髓、骨、肝和皮肤，终末期或复发时可有脑和肺转移。神经母细胞瘤临床表现复杂多样，恶性程度高，病情进展迅速，早期易发生转移，多数患儿(大于50％)诊断之后处于晚期高危状态，预后较差，长期存活率低。传统手术、化疗、放疗为神经母细胞瘤治疗的三大主要手段，一般对局限性肿瘤主张先手术切除，再化疗。手术不能切除者在确诊后采用先化疗、后手术、再化疗或加放疗的策略。除此之外，还有免疫治疗方法。目前，治疗神经母细胞瘤的有效药物较少，且药物灵敏度及稳定性不够，毒副作用大，现如今缺乏更灵敏、安全以及治疗效果更好的化疗药物。洛铂(lobaplatin，d-19466)又名洛巴铂，是继顺铂、卡铂之后由德国爱斯达制药股份有限公司(astamedicaag)研发的第三代铂类抗肿瘤药物。其化学名称为：1,2-二甲基-环丁烷-乳酸合铂。分子式为c9h18n2o3pt，分子量为397.34。本发明申请人分别在专利申请号为cn201010556219.1、名称为“一种以草酸盐制备洛铂三水合物的方法”和专利申请号为cn201010500619.0、名称为“一种抗肿瘤药物制剂的制备方法”的发明专利中公开了洛铂三水合物的制备方法以及注射用洛铂的制备方法。现有技术表明，洛铂对多种动物和人肿瘤细胞株有明确的细胞毒作用，与顺铂的抑瘤 作用相当或者更好，克服了顺铂的肾毒性、消化道毒性，骨髓抑制比卡铂轻，且与顺铂无交叉耐药。洛铂副作用比顺铂和卡铂低，抗肿瘤活性强，毒性较小，安全，溶解度好，在水中稳定，主要用于乳腺癌、小细胞肺癌及慢性粒细胞性白血病的治疗。虽然之前的研究表明洛铂可以用于制备治疗乳腺癌、小细胞肺癌及慢性粒细胞性白血病等多种病症，但未见利用洛铂及其制剂对神经母细胞瘤方面的治疗作用的专利文献和研究报道。本申请人在随后的研究中发现，洛铂及其制剂可以用于神经母细胞瘤的治疗。技术实现要素：本发明的目的是提供洛铂的一种新应用，实质上是洛铂在制备治疗神经母细胞瘤药物中的应用。所述的洛铂的有效治疗量为30-60mg/m2体表面积，优选治疗量为40-50mg/m2体表面积，最优选的治疗量为40mg/m2体表面积。所述的铂在制备治疗神经母细胞瘤药物中的应用是将洛铂制成冻干粉针剂、小容量注射液或大容量注射液。优选冻干粉针剂。在应用时，可以根据需要加入或不加入药学上常规载体，如赋形剂、稳定剂、表面活性剂、调节剂等，按照药学领域的常规方法制备成所需剂型。前述的洛铂制剂给药途径为静脉注射给药。本发明洛铂及注射用洛铂可以是上市药品，也可以按照专利申请号cn201010556219.1或cn201010500619.0中的方法来进行制备。洛铂是最新的第三代铂类化疗药，与顺铂(第一代)、卡铂(第二代)相比，对恶性肿瘤的治疗效果相当或更好，且对人体毒性更小，副作用最小，更为安全。洛铂抗瘤谱广泛，对多个癌种有效。洛铂对治疗神经母细胞瘤具有显著的疗效，其副作用小，临床用药更为安全。本申请人进一步的试验研究发现，洛铂确可用于制备治疗神经母细胞瘤的药物。具体实施方式为了使本领域普通技术人员更好的理解本发明，以下通过实施例来进一步阐述本发明洛铂在治疗神经母细胞瘤药物中的实验研究。需要说明的是：以下实施例仅为阐释本发明，而不是限制本发明。实施例1：洛铂体外抗神经母细胞瘤细胞的活性研究1.1材料及试剂1.1.1药物名称和来源：洛铂为白色冻干粉，海南长安国际制药有限公司；卡铂为白 色粉末，昆明贵研药业有限公司；注射用硫酸长春新碱，山西振东泰盛制药有限公司；顺铂为黄色粉末，江苏豪森药业股份有限公司。配制方法：以上药物均用无血清培养基配成相应浓度。1.1.2细胞株神经母细胞瘤sh-sy5y细胞、神经母细胞瘤sk-n-sh细胞，购自美国标准生物品收藏中心(atcc)，神经母细胞瘤n2a细胞，购于中科院上海生命科学院细胞资源中心，按照所提供的说明书培养。1.1.3试剂及仪器dmem/f12(1:1)培养基、胎牛血清(美国gibco公司)、青霉素(10万u/l)、链霉素(100mg/l)、co2孵箱、elx800型酶标仪(美国bio-tek公司)。1.2研究方法1.2.1细胞培养以含10％胎牛血清、10万u/l青霉素和100mg/l链霉素的dmem/f12(1:1)培养基，于37℃、5％co2培养箱中常规传代培养sh-sy5y细胞、sk-n-sh细胞和n2a细胞。1.2.2细胞抑制率测定取对数生长期sh-sy5y细胞、sk-n-sh细胞和n2a细胞，分别制成细胞悬液，以40000ml－1细胞密度接种于96孔板(边缘孔用无菌磷酸盐缓冲液(pbs)填充)，于5％co2、37℃孵育5小时，药物分别设5-7个浓度，每个浓度设2个复孔，连续作用36小时后，每孔加入0.5％mtt溶液20μl，继续培养5小时。终止培养，小心吸去孔内培养液，每孔加入150μl二甲基亚砜(dmso)，置于摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。以酶标仪在490nm波长处测定光密度(od)。空白对照以新鲜无血清培养基替换。计算药物抑制率及半数抑制浓度(ic50)：药物抑制率(％)＝(空白对照od－用药od)/空白对照od×100％半数抑制浓度(ic50)：指被抑制一半时抑制剂的浓度，即凋亡细胞与全部细胞数之比等于50％时所对应的浓度。诱导能力越强，该数值越低。1.3试验结果不同剂量的洛铂、顺铂、卡铂和长春新碱单用时能明显抑制体外神经母细胞瘤sh-sy5y细胞、sk-n-sh细胞和n2a细胞的增殖，其中洛铂剂量为20-40mg/m2时，抑制率程递增趋势且递增幅度明显；洛铂剂量为40-60mg/m2时，抑制率缓慢递增，当洛铂剂量为70mg/m2 时，其抑制率保持平稳，不再增长。洛铂剂量为20mg/m2时，药物浓度太低，抑制作用弱于顺铂、卡铂和长春新碱。洛铂剂量为30-70mg/m2时，抑制作用略优于顺铂，二者活性强于卡铂和长春新碱。具体结果见表1和表2：表1洛铂、顺铂、卡铂和长春新碱对体外神经母细胞瘤sh-sy5y细胞、sk-n-sh细胞和n2a细胞抑制率(％)结果注：顺铂、卡铂和长春新碱为最佳抑制浓度。表2洛铂、顺铂、卡铂和长春新碱对体外神经母细胞瘤sh-sy5y细胞、sk-n-sh细胞和n2a细胞半数抑制浓度(ic50)结果细胞株sh-sy5y细胞sk-n-sh细胞n2a细胞药物名称半数抑制浓度(μm)半数抑制浓度(μm)半数抑制浓度(μm)长春新碱14.213.513.2卡铂46.547.845.7顺铂12.611.410.9洛铂10.910.59.81.4实验结论不同剂量洛铂、顺铂、卡铂和长春新碱单用时均对体外神经母细胞瘤sh-sy5y细胞、sk-n-sh细胞和n2a细胞的增殖和生长有抑制作用，抑制作用具有明显的剂量依赖关系。 其中洛铂剂量为20-40mg/m2时，抑制率程递增趋势且递增幅度明显；洛铂剂量为40-60mg/m2时，抑制率缓慢递增，当洛铂剂量为70mg/m2时，其抑制率保持平稳，不再增长。洛铂剂量为30-70mg/m2时，抑制作用略优于顺铂，二者活性强于卡铂和长春新碱，在此给药剂量范围内的洛铂均具有显著的抗体外神经母细胞瘤sh-sy5y细胞、sk-n-sh细胞和n2a细胞增殖作用。洛铂剂量为20mg/m2时，药物浓度太低，抑制作用弱于顺铂、卡铂和长春新碱。综上所述，为了考虑成本以及机体对药物的耐受度，洛铂最佳剂量为40mg/m2。试施例2：洛铂对神经母细胞瘤的体内疗效研究2.1材料和试剂：2.1.1药物名称和来源：洛铂为白色冻干粉，海南长安国际制药有限公司；卡铂为白色粉末，昆明贵研药业有限公司；注射用硫酸长春新碱，山西振东泰盛制药有限公司；顺铂为黄色粉末，江苏豪森药业股份有限公司。2.1.2实验动物和细胞清洁级balb/c小鼠，由山西医科大学实验动物中心提供；神经母细胞瘤n2a细胞，购于中科院上海生命科学院细胞资源中心。2.1.3试剂及仪器dmem/f12(1:1)培养基、胎牛血清(美国gibco公司)、青霉素(10万u/l)、链霉素(100mg/l)、倒置显微镜、co2孵箱、移液管、吸耳球、酒精灯。2.2试验方法2.2.1细胞培养n2a细胞接种于含10％胎牛血清、100u/ml链霉素和100u/ml青霉素的dmem培养液中，在37℃、饱和湿度的5％co2孵箱中传代培养。2.2.2注射用细胞悬液的制备选择对数生长期细胞，经消化、吹打、加培养液等制成单细胞悬液。2.2.3模型建立及给药balb/c小鼠腹腔注射n2a细胞株，待瘤体积生长至100～200mm3之间后，将动物随机分为生理盐水对照组(ns组)、洛铂组、顺铂组、卡铂组和长春新碱组。每组10只，长春新碱组每日静脉注射注射用硫酸长春新碱1mg/m2体表面积，连续两周。顺铂组每日静脉注射顺铂40mg/m2体表面积，连续两周。洛铂组按不同给药剂量每日同一时间静脉注射洛铂(见下表)，连续两周。卡铂组每日同一时间静脉注射卡铂40mg/m2体表面积，连续两周。对照 组每日同一时间静脉注射ns2ml。每周测2-3次瘤体积，称鼠重，记录数据。计算肿瘤体积(tv)、相对肿瘤体积(rtv)和抑瘤率(ir)。肿瘤体积(tv)＝1/2×a(长径)×b2(宽径)相对肿瘤体积(rtv)＝vt/v0(式中v0为分组给药时测得的肿瘤体积，vt为每次测量时的肿瘤体积)抑瘤率(ir)％＝(1-长春新碱组或洛铂组或顺铂组或卡铂组平均瘤重/ns组平均瘤重)×100％2.2.4试验结果长春新碱、顺铂、卡铂和不同剂量的洛铂单用时均对神经母细胞瘤有治疗效果，能明显抑制神经母细胞瘤的生长；其中洛铂剂量为20-40mg/m2时，抑瘤率程递增趋势且递增幅度明显；洛铂剂量为40-60mg/m2时，抑瘤率缓慢递增，当洛铂剂量为70mg/m2时，其抑瘤率保持平稳，不再增长。洛铂剂量为20mg/m2时，药物浓度太低，对神经母细胞瘤的治疗效果弱于顺铂、卡铂和长春新碱。洛铂剂量为30-70mg/m2时，对神经母细胞瘤的治疗效果略优于顺铂，二者疗效明显强于卡铂和长春新碱。此外，洛铂给药剂量为70mg/m2体表面积时，由于给药浓度最高，一只小鼠出现流感样症状伴随精神不振和呕吐；顺铂给药后导致一只小鼠出现药物相关性死亡。表1长春新碱、顺铂、卡铂和不同剂量洛铂对神经母细胞瘤n2a细胞生长抑制疗效注：d0：第一次给药时间；dn：第一给药后20天；顺铂、卡铂和长春新碱为最佳给药浓度。2.3试验结论长春新碱、顺铂、卡铂和不同剂量的洛铂单独给药时均对神经母细胞瘤有显著的治疗效果，能明显抑制神经母细胞瘤的生长；其中洛铂剂量为20-40mg/m2时，抑瘤率程递增趋势且递增幅度明显；洛铂剂量为40-60mg/m2时，抑瘤率缓慢递增，当洛铂剂量为70mg/m2时，其抑瘤率保持平稳，不再增长。洛铂剂量为20mg/m2时，药物浓度太低，对神经母细胞瘤的治疗效果弱于顺铂、卡铂和长春新碱。洛铂剂量为30-70mg/m2时，对神经母细胞瘤的治疗效果略优于顺铂，二者疗效明显强于卡铂和长春新碱，但是洛铂给药剂量为70mg/m2体表面积时，药物浓度过高，毒副作用明显，因此，洛铂剂量为30-60mg/m2时，为治疗神经母细胞瘤有效治疗量；综上所述，为了考虑成本以及机体对药物的耐受度，洛铂给药剂量为40mg/m2体表面积时，为最优给药剂量。实施例3：洛铂治疗神经母细胞瘤的临床试验1、病例选择：对于有典型症状的神经母细胞瘤的儿童患者，通过活检、骨髓穿刺和尿vma/hva确诊，筛选出明确诊断为神经母细胞瘤患儿30例。根据uicctnm分期，处于ⅲ期6例，ⅳ期24例。将30例患者随机分为两组，治疗组15例，男8例，女7例，年龄17-60月，平均38.5月，处于ⅲ期3例，ⅳ期12例；对照组15例，男7例，女8例，年龄17-59月，平均40月，处于ⅲ期3例，ⅳ期12例。所以患者kps评分均小于60。两组在年龄、性别、病程、病情方面均具有可比性。治疗前根据入组时患者的具体病情，进行x光、ct、mri、骨扫描、骨髓细胞学等检查，准确评估患者的肿瘤情况。做血常规、血液生化检查、心电图和(或)超声心动图等检查，评估患者基本状况。所有患者均未接受化疗，患者预计生存大于3个月。2、治疗方法：对照组给予注射长春新碱0.05mg/kg，静脉滴注，第1、2天，顺铂静脉滴注3mg/kg，一周一次，卡铂静脉滴注80mg/m2，连续五天，疗程3周，为一周期，2周期记录试验结果。治疗组静脉滴注洛铂40mg/m2，一周一次，疗程3周，为一周期，2周期记录试验结果。3、判定方法：疗效按recist评价标准进行评定：完全缓解(cr)，部分缓解(pr)，稳定(sd)，进展(pd)和无变化(nc)。以cr+pr计算有效率(rr)，以cr+pr+sd计算疾病控制率(dcr)。生活质量评定以kps评分为标准，治疗后评分上升10分以上为提高，10分以内为稳定，减少10分以上为降低。4、结果4.1近期疗效：治疗组15例中有效率(cr+pr)为73.3％，疾病控制率(cr+pr+sd)为93.3％；对照组有效率(cr+pr)为66.7％，疾病控制率(cr+pr+sd)为86.7％；治疗组近期疗效优于对照组。两组近期疗效比较见表1。表1两组患者近期疗效比较组别例数crprsdpdrr(％)dcr(％)治疗组15473173.393.3对照组15373266.786.74.2近期生活质量：治疗组中有11例(73.3％)患者生活质量得到改善，对照组中生活质量改善为9例(60％)，治疗组患者生活质量优于对照组。两组患者近期生活质量比较见表2。表2两组患者近期生活质量比较组别例数改善(％)稳定(％)下降(％)治疗组1511(73.3％)3(20％)1(6.7％)对照组159(60％)4(26.7％)2(13.3％)4.3讨论：从上述结果可知，治疗组的疗效和患者的生活质量均优于对照组，洛铂作为治疗神经母细胞瘤药物优于长春新碱、顺铂和卡铂联合用药。说明洛铂对恶性神经母细胞瘤具有良好的疗效和潜在的治疗价值。当前第1页12