本发明涉及亮丙瑞林缓释制剂生产技术领域，特别涉及一种双羟萘酸亮丙瑞林缓释制剂的制备方法。
背景技术：
黄体生成激素释放激素(LHRH)是以脉冲方式由下丘脑分泌的。其作用于垂体，使垂体释放黄体激素(LH)和促卵泡素(FSH)，LH和FSH再作用于性器官，从而调节生殖系统的功能。LHRH于1997年鉴定为十肽,其化学结构式如下：pyroGlu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2。
所有哺乳类动物下丘脑分泌的LHRH都是这一结构。但LHRH在体内失活极快，因为Gly6-Leu7和Pro9-Gly10。之间的肽键极易被肽裂解酶分解而失活。为了寻找高效且作用持久的LHRH类似物，现已合成了上千种LHRH类似物。最初的合成是向着有效的激动剂能作为抗生育剂有效地用于节育这一方向发展的。以后研究发现，LHRH激动剂类似物急性给药后是刺激促性腺激素的释放，而长期给药则可引起垂体腺的快速减敏或脱敏作用，使LH和FSH的分泌受到抑制。这一发现导致了某些强效激动剂在治疗激素依赖性肿瘤方面的运用，这一类激动剂能有效地促进性腺激素的释放，由于它们可被胃肠肽酶降解，因而口服无效，常需皮下注射。连续每天使用此类激动剂，通过对垂体膜上LH-RH受体位点的持续占有而成功地达到选择性药物去势的疗效。临床上已广泛应用于治疗前列腺癌、乳癌、子宫内膜异位症、性早熟等。
醋酸亮丙瑞林(Leuprorelin Acetate)为人工合成的九肽，为黄体生成激素释放激素的高活性衍生物，广泛用于治疗性早熟、子宫内膜异位症、子宫肌瘤或绝经前乳腺癌以及前列腺癌的姑息疗法。由美国Abbott制药公司及日本武田药厂开发研制，于1985年由美国TAP公司上市，至今已有20年的应用。
目前亮丙瑞林微球均采用水溶性醋酸盐以复乳法的工艺制备微球，由于该盐在水中的溶解性极强，因此醋酸亮丙瑞林微球在制备过程中活性物质极易从内水相溶出至外水相造成微球包封率下降，使得在制备过程中不得不过量投料，并且活性物质的溶出使得微球表面出现孔洞，使得药物的突释情况严重。因此不得不在内水相加入明胶通过降温使内水相凝聚来减少活性物质的溶出来提高包封率，通过洗涤微球来去除表面附着的醋酸亮丙瑞林，并且干燥后升温至高于玻璃化温度5℃以上使微球表面孔隙闭合来减少突释。整个过程工艺复杂，步骤多，生产周期长，产品收率低。并且明胶为动物来源的蛋白质，存在致敏性的问题，这些问题长期制约着我国亮丙瑞林微球产业发展。
技术实现要素：
本发明的目的在于解决目前亮丙瑞林微球制备时存在的表面孔隙多，包封率下降，药物的突释情况严重的问题，提供一种双羟萘酸亮丙瑞林缓释制剂的制备方法，先制得亮丙瑞林难溶盐，再采用热熔挤出工艺，简化了生产工艺，微球表面孔隙少，药物包封率高，产品收率高，药物突释情况显著降低。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：
一种双羟萘酸亮丙瑞林缓释制剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)成盐及纯化：以醋酸亮丙瑞林和双羟萘酸盐为原料合成亮丙瑞林双羟萘酸盐，然后对亮丙瑞林双羟萘酸盐进行纯化；双羟萘酸盐可为双羟萘酸的钠盐或钾盐。
2)粉碎：将PLGA或PLA粉碎至400μm以下，将亮丙瑞林双羟萘酸盐粉碎至400μm以下；
(3)混合：将粉碎后的PLGA或PLA与亮丙瑞林双羟萘酸盐混合均匀得混合物，混合物的组分质量百分配比为：PLGA或PLA 60-97％，亮丙瑞林双羟萘酸盐3-40％；
(4)挤出：将混合物经热熔挤出机加热熔融挤出，冷却后，再通过切粒机切粒，得到短棒；
(5)粉碎：将短棒倒入球磨仪中，冷冻后，粉碎，过筛，得到粒径在15～250μm的微球。
本发明针对常规的亮丙瑞林微球制备均以水溶性醋酸盐为原料采用复乳法制备存在的缺陷进行改进，本发明首次采用将亮丙瑞林醋酸盐先制成难溶性盐，然后采用热熔挤出工艺，简化了生产工艺，微球表面孔隙少，药物包封率高，产品收率高，药物突释情况显著降低。
本发明的核心创造点如下：
一、先制成难溶性盐(亮丙瑞林双羟萘酸盐)：
1、提高包封率，醋酸亮丙瑞林在水中极易溶解，在2次乳化和液中干燥的时候药物会从内水相迁移至外水相中，从而降低了包封率。而难溶性盐不会迁移现象，因此会提高包封率。
2、提高收率，醋酸亮丙瑞林微球为了解决包封率的问题，在内水相中加入明胶，同时提高油相中生物可降解材料的浓度，来提高初乳体系的粘度，其粘度高于2000cp。但由此带来一个新的问题，高粘度带来了很大的挂壁现象，罐内残留较高，再加上2次乳化，因而收率不高。使用难溶性盐，不会有迁移现象，因此也就不用提高粘度，残留情况得到了很大的改善。使用热熔挤出设备，残留量很小，以Thermo Scientific Pharma 11这款热熔挤出机为例残留量也仅有20g。
3、本发明的产品无突释情况，醋酸亮丙瑞林微球由于药物本身的高水溶性，在干燥的过程中有致孔的情况，因此必须要在冻干后孵化，即将微球至于高于玻璃化温度5℃以上环境放置较长时间，使生物可降解材料处于玻璃态，孔隙闭合，来消除突释。而使用难溶性盐制备微球则完全无须担心此情况发生，药物必须先在体内水解脱去酸根，才会被体内吸收代谢，因此不会产生突释现象。
二、热熔挤出法生产微球：
1、无溶剂污染，热熔挤出法是通过热熔挤出机将药物和生物可降解材料加热到熔融态后通过螺杆混合均匀的，整个过程不需要加入有机溶剂溶解，也无需干燥工艺。
2、无需致敏性辅料明胶，药物溶分散在熔融的生物可降解材料中，不需要使用明胶。
3、简化工艺、提高生产效率，复乳法制备微球，需要6步，配制油水相外水相、乳化、淬冷硬化、初乳与外水相再次乳化、液中干燥、冻干、孵化。热熔挤出只需4步，粉碎、混合、挤出、粉碎，减少了2步生产工艺，无需冻干，收集后粉末罐装。
4、设备简单，热熔挤出工艺的关键设备只有2个，热熔挤出(包含拉伸、切粒)、球磨仪，无需任何罐体和管路设计，整套设备占地面积很小。能够连续化生产，热熔挤出工艺是以螺杆输送为基础的连续化生产，以Thermo Scientific Pharma 11这款设备为例能够实现0.17～2.4kg/h的产量。而传统的亮丙瑞林微球制备可能需要几天才能够完成一批，批产量也很难超过1kg(所需外水相太大)。
作为优选，步骤(1)中成盐的具体工艺步骤为：
a、过滤除杂：醋酸亮丙瑞林粗品用超纯水溶解，配制成质量浓度5-90％的溶液，过滤除去水不溶杂质得醋酸亮丙瑞林溶液；双羟萘酸盐用超纯水溶解，配制成质量浓度5-90％的溶液，过滤除去水不溶杂质得双羟萘酸盐溶液；
b、过滤除菌：醋酸亮丙瑞林溶液、双羟萘酸盐溶液分别输送至除菌过滤器除菌过滤得醋酸亮丙瑞林除菌液及双羟萘酸盐除菌液；
c、反应：醋酸亮丙瑞林溶液加入反应釜，控制温度-4～-15℃保持10-15min，然后加入双羟萘酸盐除菌液，控制温度0～-10℃，调节pH至6.5-7.5，反应1-2h；
d、后处理：将反应产物过滤后得沉淀，沉淀经蒸馏水清洗后，真空干燥，得亮丙瑞林双羟萘酸盐。
本发明特定开发了上述成盐工艺，反应效率高，杂质少，产率收率高。
作为优选，步骤c中反应时，控制原料醋酸亮丙瑞林与双羟萘酸盐的摩尔比为1:1-1.5。
作为优选，步骤(1)中纯化的具体工艺为：将亮丙瑞林双羟萘酸盐用乙腈溶解，稀释至30-40g/L浓度，用正相向色谱系统等度洗脱，色谱条件如下：
色谱仪：Waters Prep 150LC，
色谱柱：Symmetry 300TMC18，
流动相：乙腈：三氟乙酸：水：三乙胺＝(92-95)：(2-5)：(2-4)：(1-2)，
检测波长：280nm，
收集主峰流动相浓缩，冻干即可。
优选，纯化的具体工艺为：将亮丙瑞林双羟萘酸盐用乙腈溶解，稀释至35g/L浓度，用正相向色谱系统等度洗脱，色谱条件如下：
色谱仪：Waters Prep 150LC，
色谱柱：Symmetry 300TMC18，
流动相：乙腈：三氟乙酸：水：三乙胺＝92.8：3：3：1.2，
检测波长：280nm，
收集主峰流动相浓缩，冻干即可。
主峰的确定是按照常规工艺先制亮丙瑞林双羟萘酸盐的标准图谱，然后，检测结果与标准图谱对比即可确定主峰(亮丙瑞林双羟萘酸盐)的位置。流动相组成：乙腈为；良溶剂。三氟乙酸和三乙胺用于调节色谱体系的酸碱度，此外三乙胺还作为扫尾剂，减少峰拖尾。水在体系中用于调节流动相的溶解性，亮丙瑞林粗品的杂志多为短肽、未成盐的醋酸亮丙瑞林和其他一些在醋酸亮丙瑞林多肽合成过程中的有机酸等，通过水比例调节来改善对杂质的分离。
本发明开发的上述特定纯化工艺，纯化效果好。
作为优选，所述PLGA的丙交酯和乙交酯的摩尔比为90:10-40:60或75:25-40:60，或60:40-40:60或50:50。
作为优选，所述PLGA或PLA的重均分子量为5000～50000道尔顿。
作为优选，所述PLGA或PLA在30℃下质量浓度0.5％的氯仿溶液中的特性粘度为0.05～0.50dL/g。
作为优选，步骤(4)挤出的具体工艺过程为：将混合物加入热熔挤出机的料斗喂料，混合物在传输区加热后被输送至混合区，经过三段混合形成均一的熔融状，在脱气区真空去除熔融物中混入的气泡，在挤出区挤出，挤出的熔融物冷却后，再通过切粒机切粒，得到短棒。
作为优选，热熔挤出机各区的温度设定为：喂料温度20-35℃，传输区温度20-50℃，混合区一段温度50-80℃，混合区二段温度70-110℃，混合区三段温度70-110℃，脱气区温度70-110℃，挤出区温度70-110℃。
本发明热熔挤出机各区参数的不同，多温区设定降低亮丙瑞林双羟萘酸盐在高温区的时间和温度防止亮丙瑞林双羟萘酸盐降解，在喂料、输送区常温低温，使物料保持原始状态(低于PLGA玻璃化温度)，利于输送；在混炼区高温(高于玻璃化温度远低于亮丙瑞林双羟萘酸盐的热分解温度)，快速熔融混合均匀；采用真空脱气，使挤出物无气泡混入，避免粉碎后的微粒出现空囊装结构；挤出区风冷快速降温，略高于PLGA玻璃化温度保持挤出物的热塑性。
作为优选，步骤(4)所述短棒的规格为：直径0.5-2mm，长度2-5mm。
本发明的有益效果是：简化了生产工艺，提高了生产效率，微球表面孔隙少，药物包封率高，产品收率高，药物突释情况显著降低。
附图说明
图1是本发明实施例5和实施例6分产品的体外释放曲线。
图2是本发明实施例5和实施例6分产品的药效动力学曲线。
图3是图2的局部放大图。
具体实施方式
下面通过具体实施例，对本发明的技术方案作进一步的具体说明。
本发明中，若非特指，所采用的原料和设备等均可从市场购得或是本领域常用的。下述实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域的常规方法。
难溶盐是指，在室温20℃时某种物质溶解度在0.01g以下；所述微球是广义的微球，是指药物溶解/分散于高分子材料中形成的微小粒子，其形式不限于球形，可以是不规则状、多面体、椭圆、棒形、丸状等。本发明载药量为实际载药量，按照以下方式计算：载药量＝[微球中药物量/(微球中药物量+高分子量)]X100％。
本发明的原料PLGA(市售)的丙交酯和乙交酯的摩尔比为90:10-40:60或75:25-40:60或60:40-40:60或50:50。所述PLGA的重均分子量为5000～50000道尔顿。优选7500～30000道尔顿，更优选10000～25000。所述PLGA在30℃下质量浓度0.5％的氯仿溶液中的特性粘度为0.05～0.50dL/g。优选0.15～0.25dL/g。
实施例1：
一种双羟萘酸亮丙瑞林缓释制剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)成盐及纯化：以醋酸亮丙瑞林和双羟萘酸二钠盐(4,4'-亚甲双(3-羟基-2-萘酸)二钠盐，CAS：6640-22-8，市售)为原料合成亮丙瑞林双羟萘酸盐，然后对亮丙瑞林双羟萘酸盐进行纯化；
成盐的具体工艺步骤为：
a、过滤除杂：醋酸亮丙瑞林粗品用超纯水溶解，配制成质量浓度5％的溶液，1μm膜堆过滤除去水不溶杂质得醋酸亮丙瑞林溶液；双羟萘酸二钠盐用超纯水溶解，配制成质量浓度5％的溶液，1μm膜堆过滤除去水不溶杂质得双羟萘酸二钠盐溶液；
b、过滤除菌：醋酸亮丙瑞林溶液、双羟萘酸二钠盐溶液分别输送至0.2μm的除菌过滤器除菌过滤得醋酸亮丙瑞林除菌液及双羟萘酸二钠盐除菌液；
c、反应：醋酸亮丙瑞林溶液加入反应釜，控制温度-4℃保持15min，然后加入双羟萘酸二钠盐除菌液，控制温度0℃，调节pH至6.5，反应1h；控制原料醋酸亮丙瑞林与双羟萘酸二钠盐的摩尔比为1:1。
d、后处理：将反应产物过滤后得沉淀，沉淀经蒸馏水清洗后，真空干燥，得亮丙瑞林双羟萘酸盐。
纯化的具体工艺为：将亮丙瑞林双羟萘酸盐用乙腈溶解，稀释至35g/L浓度，用正相向色谱系统等度洗脱，色谱条件如下：
色谱仪：Waters Prep 150LC，
色谱柱：Symmetry 300TMC18(规格：5μm，50×300mm)，
流动相：乙腈：三氟乙酸：水：三乙胺＝92.8：3：3：1.2，
检测波长：280nm，
收集主峰流动相浓缩，冻干即可。
(2)粉碎：PLGA加入球磨机中，冷冻至-50℃后，粉碎至200μm以下；
亮丙瑞林双羟萘酸盐加入粉碎机中粉碎至20μm以下；
(3)混合：将粉碎后的PLGA与亮丙瑞林双羟萘酸盐混合均匀得混合物，混合物的组分质量百分配比为：PLGA 60％，亮丙瑞林双羟萘酸盐40％。
(4)挤出：将混合物加入热熔挤出机的料斗喂料，混合物在传输区加热后被输送至混合区，经过三段混合形成均一的熔融状，在脱气区真空去除熔融物中混入的气泡，在挤出区挤出，挤出的熔融物冷却后，再通过切粒机切粒，得到短棒(直径0.5-2mm，长度2-5mm)。
热熔挤出机参数设计如下：
(5)粉碎：将短棒倒入球磨仪中，冷冻至-50℃后，粉碎，过筛，得到粒径在15～50μm的微球。
实施例2：
一种双羟萘酸亮丙瑞林缓释制剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)成盐及纯化：以醋酸亮丙瑞林和双羟萘酸二钠盐(4,4'-亚甲双(3-羟基-2-萘酸)二钠盐，CAS：6640-22-8，市售)为原料合成亮丙瑞林双羟萘酸盐，然后对亮丙瑞林双羟萘酸盐进行纯化；
成盐的具体工艺步骤为：
a、过滤除杂：醋酸亮丙瑞林粗品用超纯水溶解，配制成质量浓度90％的溶液，1μm膜堆过滤除去水不溶杂质得醋酸亮丙瑞林溶液；双羟萘酸二钠盐用超纯水溶解，配制成质量浓度90％的溶液，1μm膜堆过滤除去水不溶杂质得双羟萘酸二钠盐溶液；
b、过滤除菌：醋酸亮丙瑞林溶液、双羟萘酸二钠盐溶液分别输送至0.2μm的除菌过滤器除菌过滤得醋酸亮丙瑞林除菌液及双羟萘酸二钠盐除菌液；
c、反应：醋酸亮丙瑞林溶液加入反应釜，控制温度-15℃保持10min，然后加入双羟萘酸二钠盐除菌液，控制温度-10℃，调节pH至7.5，反应2h；控制原料醋酸亮丙瑞林与双羟萘酸二钠盐的摩尔比为1:1.05。
d、后处理：将反应产物过滤后得沉淀，沉淀经蒸馏水清洗后，真空干燥，得亮丙瑞林双羟萘酸盐。
纯化的具体工艺为：将亮丙瑞林双羟萘酸盐用乙腈溶解，稀释至35g/L浓度，用正相向色谱系统等度洗脱，色谱条件如下：
色谱仪：Waters Prep 150LC，
色谱柱：Symmetry 300TMC18(规格：5μm，50×300mm)，
流动相：乙腈：三氟乙酸：水：三乙胺＝92.8：3：3：1.2，
检测波长：280nm，
收集主峰流动相浓缩，冻干即可。
(2)粉碎：PLGA加入球磨机中，冷冻至-30℃后，粉碎至200μm以下；
亮丙瑞林双羟萘酸盐加入粉碎机中粉碎至20μm以下；
(3)混合：将粉碎后的PLGA与亮丙瑞林双羟萘酸盐混合均匀得混合物，混合物的组分质量百分配比为：PLGA 97％，亮丙瑞林双羟萘酸盐3％。
(4)挤出：将混合物加入热熔挤出机的料斗喂料，混合物在传输区加热后被输送至混合区，经过三段混合形成均一的熔融状，在脱气区真空去除熔融物中混入的气泡，在挤出区挤出，挤出的熔融物冷却后，再通过切粒机切粒，得到短棒(直径1-2mm，长度2-5mm)。
热熔挤出机参数设计如下：
(5)粉碎：将短棒倒入球磨仪中，冷冻至-30℃后，粉碎，过筛，得到粒径在15～250μm的微球。
实施例3：
一种双羟萘酸亮丙瑞林缓释制剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)成盐及纯化：以醋酸亮丙瑞林和双羟萘酸二钠盐(4,4'-亚甲双(3-羟基-2-萘酸)二钠盐，CAS：6640-22-8，市售)为原料合成亮丙瑞林双羟萘酸盐，然后对亮丙瑞林双羟萘酸盐进行纯化；
成盐的具体工艺步骤为：
a、过滤除杂：醋酸亮丙瑞林粗品用超纯水溶解，配制成质量浓度50％的溶液，1μm膜堆过滤除去水不溶杂质得醋酸亮丙瑞林溶液；双羟萘酸二钠盐用超纯水溶解，配制成质量浓度50％的溶液，1μm膜堆过滤除去水不溶杂质得双羟萘酸二钠盐溶液；
b、过滤除菌：醋酸亮丙瑞林溶液、双羟萘酸二钠盐溶液分别输送至0.2μm的除菌过滤器除菌过滤得醋酸亮丙瑞林除菌液及双羟萘酸二钠盐除菌液；
c、反应：醋酸亮丙瑞林溶液加入反应釜，控制温度-8℃保持12min，然后加入双羟萘酸二钠盐除菌液，控制温度-5℃，调节pH至7，反应1.5h；控制原料醋酸亮丙瑞林与双羟萘酸二钠盐的摩尔比为1:1。
d、后处理：将反应产物过滤后得沉淀，沉淀经蒸馏水清洗后，真空干燥，得亮丙瑞林双羟萘酸盐。
纯化的具体工艺为：将亮丙瑞林双羟萘酸盐用乙腈溶解，稀释至35g/L浓度，用正相向色谱系统等度洗脱，色谱条件如下：
色谱仪：Waters Prep 150LC，
色谱柱：Symmetry 300TMC18(规格：5μm，50×300mm)，
流动相：乙腈：三氟乙酸：水：三乙胺＝92.8：3：3：1.2，
检测波长：280nm，
收集主峰流动相浓缩，冻干即可。
(2)粉碎：PLGA加入球磨机中，冷冻至-10℃后，粉碎至200μm以下；亮丙瑞林双羟萘酸盐加入粉碎机中粉碎至20μm以下；
(3)混合：将粉碎后的PLGA与亮丙瑞林双羟萘酸盐混合均匀得混合物，混合物的组分质量百分配比为：PLGA70％，亮丙瑞林双羟萘酸盐30％。
(4)挤出：将混合物加入热熔挤出机的料斗喂料，混合物在传输区加热后被输送至混合区，经过三段混合形成均一的熔融状，在脱气区真空去除熔融物中混入的气泡，在挤出区挤出，挤出的熔融物冷却后，再通过切粒机切粒，得到短棒(直径1-2mm，长度2-5mm)。
热熔挤出机参数设计如下：
(5)粉碎：将短棒倒入球磨仪中，冷冻至-10℃后，粉碎，过筛，得到粒径在15～50μm的微球。
实施例4
本实施例步骤(1)同实施例3，不同之处在于：
(2)粉碎：称取40g的PLGA(75/25，0.17，13000)TG＝38.1℃(TG表示玻璃化温度)加入研磨机(IKA M20)中，加入100g干冰20s一次间歇式粉碎10min，中途打开设备补加干冰，粉碎后的PLGA过100目筛；称取4g的双羟萘酸亮丙瑞林加入研磨机，间歇式粉碎，过900目筛；
(3)混合：将粉碎后的PLGA 37.5g与亮丙瑞林双羟萘酸盐3.75g混合均匀得混合物。
(4)挤出：将混合物加入单料斗热熔挤出机的料斗喂料，混合物在传输区加热后被输送至混合区，经过三段混合形成均一的熔融状，在脱气区真空去除熔融物中混入的气泡，在挤出区挤出，挤出的熔融物冷却后，再通过切粒机切粒，得到短棒。
热熔挤出机参数设计如下：
(5)粉碎：将短棒倒入球磨仪中，冷冻至-10℃后，粉碎，过筛，得到粒径在15～50μm的微球。
实施例5
本实施例步骤(1)同实施例3，不同之处在于：
(2)粉碎：称取50g的PLGA(75/25，0.17，13000)TG＝38.1℃(TG表示玻璃化温度)加入研磨机中，冷冻至-80℃，粉碎后的PLGA过100目筛；称取5g的双羟萘酸亮丙瑞林加入研磨机，粉碎，过900目筛；
(3)混合：将粉碎后的PLGA 40g与亮丙瑞林双羟萘酸盐4g混合均匀得混合物。
(4)挤出：将混合物加入双料斗热熔挤出机的料斗喂料，混合物在传输区加热后被输送至混合区，经过三段混合形成均一的熔融状，在脱气区真空去除熔融物中混入的气泡，在挤出区挤出，挤出的熔融物冷却后，再通过切粒机切粒，得到短棒。
热熔挤出机参数设计如下：
(5)粉碎：将短棒倒入球磨仪中，冷冻至-20℃后，粉碎，过筛，得到粒径在15～50μm的微球。
实施例6
本实施例与实施例4，不同之处在于：使用PLA(100，0.21，20000)TG＝46.0℃代替PLGA，其它同实施例4。
本发明生产的微球载药量5-45％，收率可达80％，产品质量稳定，产业化程度高。
实施例1-6的工艺制备的产品结果见表1：
表1
从表1的对比结果可以看出，采用难溶性盐和本发明工艺制备的微球包封率、收率和突释情况明显优于常规复乳法生产的醋酸亮丙瑞林微球。使用表2所述释放条件对实施例5、实施例6的产品进行体外释放都考察。表2
对实施例5、6制备的产品按照剂量3.75mg(以亮丙瑞林计)和11.25mg(以亮丙瑞林计)的微球分散到1ml专用溶剂中(甘露醇50mg、羧甲基纤维素钠5mg、Tween80 1mg于蒸馏水的溶液)，使用22G针在比格犬(体重大约11kg)的后腿股二头肌进行肌肉注射。对受试犬定期取血，测定血浆中睾酮的浓度。图2、3分别表示实施例5和实施例6的药物动力学、药物动力学局部放大图和药效动力学。其中实施例5每28天重复给药一次，实施例6为一次给药持续84天。体内研究结果表明，2例均能达到化学去势水平(图中虚线以下表明血清中睾酮浓度达到化学去势水平)，并能够平稳的控制。
实施例5和实施例6分别代表缓释1月制剂和缓释3月制剂，图1表示体外释放情况，图2表示药效情况，表明亮丙瑞林能够长达1月和3月抑制体内的睾酮浓度达到化学去势水平，图3为图2的局部放大情况，以表明3月制剂在第一个月的释放情况和1月制剂同样优秀。
以上所述的实施例只是本发明的一种较佳的方案，并非对本发明作任何形式上的限制，在不超出权利要求所记载的技术方案的前提下还有其它的变体及改型。