本发明属于植物提取领域，具体而言，涉及一种治疗Ⅱ型糖尿病及其并发症的小豆蔻和小豆蔻种皮种子提取物及其应用。
背景技术：
：糖尿病是由碳水化合物、蛋白质和脂肪代谢紊乱引起的血糖高的疾病。据世界健康组织（WHO）统计，全世界有3.46亿人口患有糖尿病，到2030年患病人口数目将要翻一番。葡萄糖代谢紊乱导致血管病变可以引发难以治愈的糖尿病并发症。1型糖尿病是由于胰脏的β-细胞不能产生胰岛素导致的，而Ⅱ型糖尿病则是由于胰岛素抵抗或β-细胞功能障碍引起的。糖苷酶抑制剂能够抑制α-淀粉酶(EC3.2.1.1)和α-葡萄糖苷酶(EC3.2.1.20)的活性，α-淀粉酶广泛存在于胰液、唾液，能够将淀粉降解为易吸收小分子糖；α-葡萄糖苷酶广泛存在于哺乳动物肠粘膜内部，能够催化淀粉降解的最后一步，使二糖降解，这两种酶参与碳水化合物的消化吸收，能够显著影响餐后血糖水平。抑制α-淀粉酶和α-葡糖糖苷酶的活性能够推迟碳水化合物在小肠内部的降解，降低血糖上升速度。糖苷酶酶抑制剂是抗Ⅱ型糖尿病药物的一种，其中阿卡波糖的效果最好，这类药物最大的优点就是适合不依赖胰岛素型糖尿病病人，即Ⅱ型糖尿病病人的康复治疗。豆蔻（Amomum），姜科植物，陆生地下茎植物属，分布于亚洲非洲热带地区。不同地区性状略有不同，黑豆蔻产于巴基斯坦拉合尔市，黑豆蔻种子具有兴奋效果、增进食欲、解毒、止血的功能，用于治疗消化不良、呕吐、腹部疼痛和直肠类疾病，并且能够促进胆汁的清除，用来治疗充血性黄疸，也治疗淋病的效果，从种子中提取的精油可以用于治疗眼睛的发炎。干黑豆蔻具有很多功能，例如：镇痛、抗炎、抗菌、抗氧化、抗溃疡、利尿、降血糖。小豆蔻产于中国，用于烹饪和治疗嗓子发炎、胃病。小豆蔻提取物对血糖和硫喷妥酸反应（TBRAS）具有明显影响，具有抗氧化的潜力。在世界上许多国家尤其是第三世界国家，植物提取物或者是几种不同植物提取物允许被用来作为治疗糖尿病或其他疾病的药物。目前已经发现400多种植物以不同的形式可以用来治疗高血糖。几种α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶抑制剂已经从药用植物中提取出来，能够在治疗糖尿病过程中比化学合成药物产生较少的副作用。药用植物提取物中不仅有这两种酶的抑制剂，而且还含有丰富的酚酸类物质，因此也具有抗氧化的活性。然而小豆蔻和小豆蔻作为药用植物的研究很少，本专利首次通过体外试验将它们的种子和皮的抗糖尿病的活性成分进行了研究。技术实现要素：鉴于现有研究不足，本发明的目的在于通过对黑豆蔻和小豆蔻提取物的体外试验研究，提供一种治疗Ⅱ型糖尿病及并发症的黑豆蔻和小豆蔻提取物及其应用。本发明的目的是这样实现的：一种治疗Ⅱ型糖尿病及并发症的黑豆蔻和小豆蔻提取物，在制备抗高血糖药物中的应用。一种治疗Ⅱ型糖尿病及并发症的黑豆蔻和小豆蔻提取物，在制备抗高血糖并发症药物中的应用。所述的黑豆蔻种子提取物由如下方法制备得到的：黑豆蔻经过清洗、去杂质后室温晾干，将种子与皮分离，用粉碎机将黑豆蔻种子研磨成粉，取10g粉末放入100ml蒸馏水中在提取温度28℃，搅拌转速为280rmp浸提条件下避光浸提3天，收集上清液经过滤，滤液经60℃旋转蒸发仪中浓缩后，冷冻干燥得到黑豆蔻种子提取物。所述的黑豆蔻种皮提取物由如下方法制备得到的：黑豆蔻经过清洗、去杂质后室温晾干，将种子与皮分离，用粉碎机将黑豆蔻种皮研磨成粉，取10g粉末放入100ml蒸馏水中在提取温度28℃，搅拌转速为280rmp浸提条件下避光浸提3天，收集上清液经过滤，滤液经60℃旋转蒸发仪中浓缩后，冷冻干燥得到黑豆蔻种皮提取物。所述的小豆蔻种子提取物由如下方法制备得到的：小豆蔻经过清洗、去杂质后室温晾干，将种子与皮分离，用粉碎机将小豆蔻种子研磨成粉，取10g粉末放入100ml蒸馏水中在提取温度28℃，搅拌转速为280rmp浸提条件下避光浸提3天，收集上清液经过滤，滤液经60℃旋转蒸发仪中浓缩后，冷冻干燥得到小豆蔻种子提取物。所述的小豆蔻种皮提取物由如下方法制备得到的：小豆蔻经过清洗、去杂质后室温晾干，将种子与皮分离，用粉碎机将小豆蔻种皮研磨成粉，取10g粉末放入100ml蒸馏水中在提取温度28℃，搅拌转速为280rmp浸提条件下避光浸提3天，收集上清液经过滤，滤液经60℃旋转蒸发仪中浓缩后，冷冻干燥得到小豆蔻种皮提取物。所述的抗Ⅱ型糖尿病的药物包括上述提取物和药学上可以接受的载体或常规副食。所述的抗Ⅱ型糖尿病并发症的药物包括上述提取物和药学上可以接受的载体或常规副食。有益效果]与现有技术相比，本发明有以下有益的技术效果：黑豆蔻和小豆蔻种子与种皮提取物对于α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶具有明显的抑制效果，能够控制Ⅱ型糖尿病病人的餐后血糖升高速度，因此黑豆蔻和小豆蔻水浸提浓缩物对开发治疗Ⅱ型糖尿病药物具有潜在价值。【具体实施方式】以下结合实例，对本发明提供的具体实施方式详述如下：实施例1:黑豆蔻种子提取物对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制效果试验黑豆蔻种子提取物处理：称取黑豆蔻种子提取物溶解于二甲基亚砜（DMSO(v/v1:1)）中制成0-4mg/ml浓度的溶液备用。黑豆蔻种子对α-淀粉酶抑制效果试验：取上述各浓度溶液500μl于试管中，向试管中加入含有0.5mg/ml的α-淀粉酶（溶解于0.02M，pH为6.9磷酸缓冲液）溶液500μl，于25℃孵育10min，再次加入1%（溶解于0.02M，pH为6.9磷酸缓冲液）的淀粉溶液500μl，于25℃孵育10min，加入显色剂终止反应。将试管置于沸水中加热5min后冷却至室温，向试管中加入15ml蒸馏水稀释后于540nm测定吸光度。三次平行，空白对照组为缓冲溶液代替α-淀粉酶溶液，其他条件不变。质控组为缓冲溶液代替黑豆蔻种子提取物溶液，其他条件不变。抑制率计算公式：抑制率（%）={(Ac–Ae)/Ac}100其中Ac为质控组吸光度，Ae为黑豆蔻种子提取液吸光度黑豆蔻种子对α-葡萄糖苷酶抑制效果试验：取上述各浓度溶液50μl于96孔酶标板中，向试管中加入含有1.0U/ml的α-葡萄糖苷酶（溶解于0.1M，pH为6.9磷酸缓冲液）溶液100μl，于25℃孵育10min，再次加入5mM的硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷（溶解于0.1M，pH为6.9磷酸缓冲液）溶液50μl于25℃孵育10min，在504nm测定吸光度。三次平行，空白对照组为缓冲溶液代替α-淀粉酶溶液，其他条件不变。质控组为缓冲溶液代替黑豆蔻种子提取物溶液，其他条件不变。抑制率计算公式：抑制率（%）={(Ac–Ae)/Ac}100其中Ac为质控组吸光度，Ae为黑豆蔻种子提取液吸光度黑豆蔻种子提取物对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制结果：黑豆蔻种子提取物对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶具有抑制，具有抗Ⅱ型糖尿病活性，其结果如表1、表2所示：表1：黑豆蔻种子提取物对α-淀粉酶抑制结果提取物浓度（mg/ml）淀粉酶抑制率（%）阿卡波糖抑制率（%）0.867.3327.91.672.3640.42.477.6354.13.285.1774.25487.1879.3表2：黑豆蔻种子提取物对α-葡萄糖苷酶抑制结果提取物浓度（mg/ml）葡萄糖苷酶抑制率（%）阿卡波糖抑制率（%）0.810.7423.21.623.8339.62.433.9358.13.252.9464.5459.1571.2实施例2:黑豆蔻种皮提取物对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制效果试验黑豆蔻种皮提取物处理：称取黑豆蔻种皮提取物溶解于二甲基亚砜（DMSO(v/v1:1)）中制成0-4mg/ml浓度的溶液备用。黑豆蔻种皮对α-淀粉酶抑制效果试验：取上述各浓度溶液500μl于试管中，向试管中加入含有0.5mg/mlα-淀粉酶（溶解于0.02M，pH为6.9磷酸缓冲液）溶液500μl，于25℃孵育10min，再次加入1%（溶解于0.02M，pH为6.9磷酸缓冲液）淀粉溶液500μl，于25℃孵育10min，加入显色剂终止反应。将试管置于沸水中加热5min后冷却至室温，向试管中加入15ml蒸馏水稀释后于540nm测定吸光度。三次平行，空白对照组为缓冲溶液代替α-淀粉酶溶液，其他条件不变。质控组为缓冲溶液代替黑豆蔻种皮提取物溶液，其他条件不变。抑制率计算公式：抑制率（%）={(Ac–Ae)/Ac}100其中Ac为质控组吸光度，Ae为黑豆蔻种皮提取液吸光度黑豆蔻种皮对α-葡萄糖苷酶抑制效果试验：取上述各浓度溶液50μl于96孔酶标板中，向试管中加入含有1.0U/mlα-葡萄糖苷酶（溶解于0.1M，pH为6.9磷酸缓冲液）溶液100μl，于25℃孵育10min，再次加入5mM的硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷（溶解于0.1M，pH为6.9磷酸缓冲液）of溶液50μl于25℃孵育10min，在504nm测定吸光度。三次平行，空白对照组为缓冲溶液代替α-淀粉酶溶液，其他条件不变。质控组为缓冲溶液代替黑豆蔻种子提取物溶液，其他条件不变。抑制率计算公式：抑制率（%）={(Ac–Ae)/Ac}100其中Ac为质控组吸光度，Ae为黑豆蔻种皮提取液吸光度黑豆蔻种皮提取物对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制结果：黑豆蔻种皮提取物对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶具有抑制，具有抗糖尿病活性，其结果如表3、表4所示：表3：黑豆蔻种皮提取物对α-淀粉酶抑制结果提取物浓度（mg/ml）淀粉酶抑制率（%）阿卡波糖抑制率（%）0.853.2627.91.665.9340.42.475.8754.13.279.2174.25486.9379.3表4：黑豆蔻种皮提取物对α-葡萄糖苷酶抑制结果提取物浓度（mg/ml）葡萄糖苷酶抑制率（%）阿卡波糖抑制率（%）0.822.9128.21.640.5546.452.443.9658.13.256.6564.5461.871.2实施例3:小豆蔻种子提取物对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制效果试验小豆蔻种子提取物处理：称取小豆蔻种子提取物溶解于二甲基亚砜（DMSO(v/v1:1)）中制成0-4mg/ml浓度的溶液备用。小豆蔻种子对α-淀粉酶抑制效果试验：取上述各浓度溶液500μl于试管中，向试管中加入含有0.5mg/mlα-淀粉酶（溶解于0.02M，pH为6.9磷酸缓冲液）溶液500μl，于25℃孵育10min，再次加入1%（溶解于0.02M，pH为6.9磷酸缓冲液）淀粉溶液500μl，于25℃孵育10min，加入显色剂终止反应。将试管置于沸水中加热5min后冷却至室温，向试管中加入15ml蒸馏水稀释后于540nm测定吸光度。三次平行，空白对照组为缓冲溶液代替α-淀粉酶溶液，其他条件不变。质控组为缓冲溶液代替小豆蔻种子提取物溶液，其他条件不变。抑制率计算公式：抑制率（%）={(Ac–Ae)/Ac}100其中Ac为质控组吸光度，Ae为小豆蔻种子提取液吸光度小豆蔻种子对α-葡萄糖苷酶抑制效果试验：取上述各浓度溶液50μl于96孔酶标板中，向试管中加入含有1.0U/mlα-葡萄糖苷酶（溶解于0.1M，pH为6.9磷酸缓冲液）溶液100μl，于25℃孵育10min，再次加入5mM的硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷（溶解于0.1M，pH为6.9磷酸缓冲液）of溶液50μl于25℃孵育10min，在504nm测定吸光度。三次平行，空白对照组为缓冲溶液代替α-淀粉酶溶液，其他条件不变。质控组为缓冲溶液代替小豆蔻种子提取物溶液，其他条件不变。抑制率计算公式：抑制率（%）={(Ac–Ae)/Ac}100其中Ac为质控组吸光度，Ae为小豆蔻种子提取液吸光度小豆蔻种子提取物对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制结果：小豆蔻种子提取物对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶具有抑制，具有抗Ⅱ型糖尿病活性，其结果如表5、表6所示：表5：小豆蔻种子提取物对α-淀粉酶抑制结果提取物浓度（mg/ml）淀粉酶抑制率（%）阿卡波糖抑制率（%）0.852.5130.91.665.1249.82.471.6460.43.279.3979.2483.9190.1表6：小豆蔻种子提取物对α-葡萄糖苷酶抑制结果提取物浓度（mg/ml）葡萄糖苷酶抑制率（%）阿卡波糖抑制率（%）0.818.2631.21.634.3652.12.436.5360.43.242.4179.1454.7984.6实施例4:小豆蔻种皮提取物对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制效果试验小豆蔻种皮提取物处理：称取小豆蔻种皮提取物溶解于二甲基亚砜（DMSO(v/v1:1)）中制成0-4mg/ml浓度的溶液备用。小豆蔻种皮对α-淀粉酶抑制效果试验：取上述各浓度溶液500μl于试管中，向试管中加入含有0.5mg/mlα-淀粉酶（溶解于0.02M，pH为6.9磷酸缓冲液）溶液500μl，于25℃孵育10min，再次加入1%（溶解于0.02M，pH为6.9磷酸缓冲液）淀粉溶液500μl，于25℃孵育10min，加入显色剂终止反应。将试管置于沸水中加热5min后冷却至室温，向试管中加入15ml蒸馏水稀释后于540nm测定吸光度。三次平行，空白对照组为缓冲溶液代替α-淀粉酶溶液，其他条件不变。质控组为缓冲溶液代替小豆蔻种皮提取物溶液，其他条件不变。抑制率计算公式：抑制率（%）={(Ac–Ae)/Ac}100其中Ac为质控组吸光度，Ae为小豆蔻种皮提取液吸光度小豆蔻种皮对α-葡萄糖苷酶抑制效果试验：取上述各浓度溶液50μl于96孔酶标板中，向试管中加入含有1.0U/mlα-葡萄糖苷酶（溶解于0.1M，pH为6.9磷酸缓冲液）溶液100μl，于25℃孵育10min，再次加入5mM的硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷（溶解于0.1M，pH为6.9磷酸缓冲液）of溶液50μl于25℃孵育10min，在504nm测定吸光度。三次平行，空白对照组为缓冲溶液代替α-淀粉酶溶液，其他条件不变。质控组为缓冲溶液代替小豆蔻种子提取物溶液，其他条件不变。抑制率计算公式：抑制率（%）={(Ac–Ae)/Ac}100其中Ac为质控组吸光度，Ae为小豆蔻种皮提取液吸光度小豆蔻种皮提取物对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制结果：小豆蔻种皮提取物对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶具有抑制，具有抗Ⅱ型糖尿病活性，其结果如表7、表8所示：表7：小豆蔻种皮提取物对α-淀粉酶抑制结果提取物浓度（mg/ml）淀粉酶抑制率（%）阿卡波糖抑制率（%）0.853.2630.91.665.9349.82.475.8760.43.279.2179.2486.9390.1表8：小豆蔻种皮提取物对α-葡萄糖苷酶抑制结果提取物浓度（mg/ml）葡萄糖苷酶抑制率（%）阿卡波糖抑制率（%）0.84.0231.21.68.2552.12.410.2160.43.217.9579.1429.184.6经过体外试验验证，黑豆蔻和小豆蔻的皮和种子提取物对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶均有抑制作用。黑豆蔻种子提取物在浓度为4mg/ml时，其对这两种酶的抑制率为87.1%和59.1%；黑豆蔻皮提取物在该浓度时，其对这两种酶的抑制率为86.9%和61.8%。黑豆蔻种子提取物在浓度为4mg/ml时，其对这两种酶的抑制率为83.9%和54.7%；黑豆蔻皮提取物在该浓度时，其对这两种酶的抑制率为69.3%和29.1%，黑豆蔻与小豆蔻种子与种皮提取物抑制试验分别与专门用于治疗高血糖的药物阿卡波糖作对比具有明显的抑制作用，由此得出结论：黑豆蔻与小豆蔻具有开发为降糖药物或副食的潜力。当前第1页1 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