本发明涉及生物医药领域，具体而言，本发明涉及构建小型猪损伤止血动物模型的方法和利用该动物模型评价止血产品的方法。
背景技术：
目前市场上有很多用于止血的产品，但是对于这些止血产品的使用评价则没有统一的规定。
技术实现要素：
本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提出构建小型猪损伤止血动物模型的方法和利用该动物模型评价止血产品的方法，利用该小型猪损伤止血动物模型可以有效地对止血产品进行评价，进而为止血药物的筛选和评价提供可靠依据。
为此，在本发明的一个方面，本发明提出了一种构建小型猪损伤止血动物模型的方法。根据本发明的实施例，该方法包括：将小型猪禁食不禁水24h；将所述小型猪进行称重和麻醉处理；将经过所述麻醉处理的小型猪仰卧并固定，并暴露双侧腹股沟和颈部；分别对一侧腹股沟和颈部区域进行备皮处理；于颈中线偏左静脉沟处切开皮肤，分离颈部肌肉，暴露颈动脉大约5cm，在所述颈动脉处插入感应器，缝线固定，监测所述小型猪的心率、心电和血压；在经过所述备皮处理后的一侧股动脉处垂直腹股沟处切口9.5～10.5cm，钝性分离肌间结缔组织，暴露并分离股动脉，分别在近心端和远心端使用动脉夹阻断血流，两动脉夹之间距离为2.5～3.5cm；在两动脉夹之间剪断约1/3周长的动脉壁，先放开远心端的动脉夹，再放开近心端的动脉夹，以便得到小型猪损伤止血动物模型。
根据本发明的实施例，发明人发现，通过采用上述构建小型猪损伤止血动物模型的方法，所获得的动物模型可以有效地对多种止血产品进行测试评价，从而对止血产品的止血性能进行评价，对止血产品的研发提供指导。
另外，根据本发明上述实施例的构建小型猪损伤止血动物模型的方法还可以具有如下附加的技术特征：
在本发明的一些实施例中，所述小型猪的体重为20～30kg。
在本发明的一些实施例中，所述麻醉处理包括：对所述小型猪按照0.1mL/kg的剂量进行肌肉注射陆眠宁Ⅱ；利用内径为7.5mm的气体插管使所述小型猪吸入异氟烷。
在本发明的一些实施例中，对一侧腹股沟和颈部区域进行备皮处理的备皮区域分别独立地为10cm×15cm。
在本发明的一些实施例中，在经过所述备皮处理后的一侧股动脉垂直腹股沟处切口长度为10cm。
在本发明的一些实施例中，所述两动脉夹之间的距离为3cm。
在本发明的另一方面，本发明提出了一种用于评价止血产品的方法。根据本发明的实施例，该方法包括：根据前面所述的方法构建得到小型猪损伤止血动物模型；对所述小型猪损伤止血动物模型施加所述止血产品。
由此，采用上述实施例构建得到的小型猪损伤止血动物模型可以有效地对止血产品进行筛选和评价。
另外，根据本发明上述实施例的用于评价止血产品的方法还可以具有如下附加的技术特征：
在本发明的一些实施例中，对所述小型猪损伤止血动物模型施加所述止血产品按照下列步骤进行：当放开近心端的动脉夹后，迅速用止血产品敷于动脉出血位置，并施加压力辅助止血；观察5min直至无血液渗出。
在本发明的一些实施例中，上述实施例的用于评价止血产品的方法进一步包括：在施加所述止血产品后，关闭创口，并对创口进行消毒；对所述小型猪肌肉注射青霉素钠注射液，以便预防感染。
在本发明的一些实施例中，所述止血产品为止血粉、止血棉和止血纱布中的至少之一。
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
在本发明的一个方面，本发明提出了一种构建小型猪损伤止血动物模型的方法。根据本发明的实施例，该方法包括：将小型猪禁食不禁水24h；将所述小型猪进行称重和麻醉处理；将经过所述麻醉处理的小型猪仰卧并固定，并暴露双侧腹股沟和颈部；分别对一侧腹股沟和颈部区域进行备皮处理；于颈中线偏左静脉沟处切开皮肤，分离颈部肌肉，暴露颈动脉大约5cm，在所述颈动脉处插入感应器，缝线固定，监测所述小型猪的心率、心电和血压；在经过所述备皮处理后的一侧股动脉处垂直腹股沟处切口9.5～10.5cm，钝性分离肌间结缔组织，暴露并分离股动脉，分别在近心端和远心端使用动脉夹阻断血流，两动脉夹之间距离为2.5～3.5cm；在两动脉夹之间剪断约1/3周长的动脉壁，先放开远心端的动脉夹，再放开近心端的动脉夹，以便得到小型猪损伤止血动物模型。
根据本发明的实施例，发明人发现，通过采用上述构建小型猪损伤止血动物模型的方法，所获得的动物模型可以有效地对多种止血产品进行测试评价，从而对止血产品的止血性能进行评价，对止血产品的研发提供指导。
根据本发明的具体实施例，小型猪的体重为20～30kg。
根据本发明的具体实施例，将小型猪称重之后对小型猪进行麻醉处理。具体地，可以根据小型猪的体重给以适当剂量的麻药进行麻醉。根据本发明的具体实施例，麻醉处理具体可以按照下列步骤进行：对所述小型猪按照0.1mL/kg的剂量进行肌肉注射陆眠宁Ⅱ；利用内径为7.5mm的气体插管使所述小型猪吸入异氟烷。因小型猪的体重较大，通过上述二次追加麻醉可以有效维持麻醉效果。另外，发明人还发现，首先采用陆眠宁II进行麻醉，然后采用异氟烷进行吸入麻醉，可以有效地达到麻醉效果，麻醉时效达到1小时以上。其中，异氟烷的用药量可以视小型猪的麻醉深度而定。
根据本发明的具体实施例，备皮处理具体操作为于一侧腹股沟和颈部进行剃毛，得到的两处备皮区域均为10cm×15cm，由此可以便于后续切口暴露出股动脉。发明人发现，如果备皮区域过小，则无法获得足够大的切口区域，进而无法有效地暴露股动脉。根据本发明的具体示例，剃毛并清洁皮肤后，用碘酊对剃除毛的部位进行消毒，再用75％的酒精进行二次消毒、脱碘。备皮处理完成后，在备皮位置铺上创巾，暴露切口部位。
根据本发明的具体实施例，备皮处理后，于颈中线偏左静脉沟处切开皮肤，分离颈部肌肉，暴露颈动脉约5cm，在该颈动脉处插入感应器，缝线固定，检测小型猪的心率、心电和血压。
根据本发明的具体实施例，在经过备皮处理后的一侧股动脉处垂直腹股沟处切口9.5～10.5cm，钝性分离肌间结缔组织，暴露并分离股动脉，分别在近心端和远心端使用动脉夹阻断血流，两动脉夹之间距离为2.5～3.5cm。根据本发明的具体示例，通过在经过备皮处理后的一侧股动脉处垂直腹股沟处切口可以有效地暴露股动脉。根据本发明的具体示例，钝性分离腹外斜肌和腹内斜肌过程中如遇可见大血管需结扎止血，防止出血量较大而影响实验。
另外，发明人发现，根据小型猪的体型大小可以适当调节切口大小，具体长度在9.5～10.5cm比较合适。通常采用体重适中的小型猪，其切口大小可以为10cm。由此可以暴露出适当大小的股动脉，且便于后续在股动脉上形成损伤。发明人发现，切口过小，则视野太小，不便于操作，并且无法暴露出肝脏；切口过大则会导致创伤严重，出血过多，影响实验进行。
根据本发明的具体实施例，暴露并分离股动脉后，分别在近心端和远心端使用动脉夹阻断血流，两动脉夹之间距离可以为2.5～3.5cm。通常采用体重适中的小型猪，两动脉夹之间距离可以为3cm。
根据本发明的具体实施例，用眼科剪在两动脉夹剪断1/3周长的动脉壁，根据小型猪体型的大小，剪断动脉壁周长的长度可以有±0.2mm的变化。发明人发现，如果剪断动脉壁的部分过大，会导致严重出血，可能任何止血产品都达不到理想的效果，进而不能够有效地对止血产品进行评价。如果剪断动脉壁的部分过小，会使出血面积过小，一般的止血产品都能够达到止血效果，进而无法对止血产品进行合理的筛选和评价。为此，发明人通过反复试验发现，规定剪断1/3周长的动脉壁，可以有效地对止血产品进行评价。
根据本发明的具体实施例，进一步地，成功剪断动脉壁的一部分后，依次放开远心端的动脉夹和近心端的动脉夹，以便得到小型猪损伤止血动物模型。
由此，根据本发明上述实施例的构建小型猪损伤止血动物模型的方法是发明人通过大量实验研究得出的，利用上述方法可以有效地在小型猪的股动脉壁上造成出血损伤，该出血损伤的出血量适宜，可以有效地用于止血产品的筛选和评价。本发明上述实施例构建的小型猪损伤止血动物模型可以适用于上述各止血产品的筛选和评价，例如可以用于止血粉、止血棉和止血纱布等。因此，该小型猪损伤止血动物模型的适用性更加广泛。
在本发明的另一方面，本发明提出了一种用于评价止血产品的方法。根据本发明的实施例，该方法包括：根据前面所述的方法构建得到小型猪损伤止血动物模型；对所述小型猪损伤止血动物模型施加所述止血产品。
根据本发明的具体实施例，对所述小型猪损伤止血动物模型施加所述止血产品按照下列步骤进行：当放开近心端的动脉夹后，迅速用止血产品敷于动脉出血位置，并施加压力辅助止血；观察5min直至无血液渗出。
根据本发明的具体实施例，在依次放开远心端的动脉夹和近心端的动脉夹后，迅速用止血产品敷于损伤创口，并施以适当压力进行止血，直至无血液渗出为止。
根据本发明的具体实施例，上述实施例的用于评价止血产品的方法进一步包括：在施加所述止血产品后，关闭腹腔，并对创口进行消毒；对小型猪肌肉注射青霉素钠注射液，以便预防感染。
根据本发明的具体实施例，止血产品为止血粉、止血棉和止血纱布等。由此，本发明上述实施例构建的小型猪损伤止血动物模型可以适用于上述各止血产品的筛选和评价。
根据本发明的具体实施例，根据上述方法对小型猪损伤止血动物模型给以止血产品并关闭腹腔后，进一步加强护理，观察临床变化，并做好记录。
根据本发明的具体实施例，在动物模型给以止血产品后分别于不同时间点解剖，观察股动脉损伤创口的愈合(修复)情况，并取创面组织做病理组织学检查。以便进一步对止血产品的药理作用进行比较研究和评价。
下面参考具体实施例，对本发明进行描述，需要说明的是，这些实施例仅仅是描述性的，而不以任何方式限制本发明。
实施例1
构建小型猪损伤止血动物模型
(1)实验用小型猪(北京DB-11)；体重：25±5kg；性别：雌雄不限。
(2)器械和材料：呼吸麻醉剂、生理监护仪、常规外科手术器械、动脉夹、麻醉药品、急救药品、消毒药物、手术室耗材等。
(3)术前禁饲：动物术前24h禁食不禁水。
(4)麻醉：动物称重，先肌肉注射陆眠宁Ⅱ(吉林省华牧动物保健品有限公司；2014.04,12)，以0.1mL/kg的剂量执行，然后用内径7.5mm的气管插管，吸入麻醉药异氟烷。其中，异氟烷的用药量可以视小型猪的麻醉深度而定。
(5)备皮
切实麻醉后，将小型猪仰卧并固定，四肢用绷带系于手术台的固定环上，暴露双侧腹股沟和颈部，剃毛，备皮10cm×15cm，清洁后用先用碘酊消毒，再用75％的酒精消毒、脱碘。铺上创巾，暴露切口部位。
(6)生理监测
与颈中线偏左静脉沟处切开皮肤，分离颈部肌肉，暴露颈动脉5cm，近心端和远心端分别用动脉夹阻断血流，向近心端插入感应器，缝线固定，释放动脉夹。
(7)暴露股动脉制造损伤创口
用高频电刀在经过备皮处理的一侧股动脉垂直腹股沟处切口，长度为10cm，钝性分离肌肉间结缔组织，遇可见大血管需结扎止血，防止出血量较大而影响实验。暴露并分离股动脉，在近心端和远心端分别使用动脉夹阻断血流，两动脉夹之间距离为3cm。
用眼科剪在两动脉夹之间剪断1/3周长的动脉壁，先放开远心端的动脉夹，再放开近心端的动脉夹，以便构建得到小型猪损伤止血动物模型
实施例2
利用实施例1构建得到的小型猪损伤止血动物模型对止血产品进行评价
按照实施例1的方法构建五头小型猪损伤止血动物模型。
止血产品为止血粉。
评价方法：
(1)在五头小型猪损伤止血动物模型的出血创口立即用止血产品敷于创口，并施以适当压力进行止血。观察5min，直至无血液渗出。
(2)止血切实后，再观察20min，再无出血后关闭腹腔，创口常规消毒。
(3)术后，每日以20万IU/kg青霉素钠(华北制药股份有限公司生产。批号：F3102307)，配以0.9％的生理盐水肌肉注射，预防感染，2次/d。加强护理，观察临床变化，并做好记录。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。