奥柳氮钠作为制备防治高尿酸血症和痛风的药物和保健品的应用的制作方法

本发明属于医药品，特别涉及制备防治高尿酸血症和痛风方面的医药品。

背景技术：

痛风是严重威胁人类健康的代谢性疾病，疾病高发年龄为中老年男性和绝经后女性，被列为21世纪的20大顽疾之一。尿酸(Uric acid，UA)是人体嘌呤代谢的终末产物，分解该代谢物成可溶性的尿囊素排出体外，是降低和控制血尿酸水平是治疗和预防痛风的重要措施。但人体缺乏尿酸分解酶，积蓄的结果使人极易形成高尿酸血症。作为治疗痛风的指标，欧洲抗风湿联盟和美国风湿病学会建议血尿酸指标不得高于6 mg/dl。

黄嘌呤氧化酶( Xanthine Oxidase, XO)是尿酸生成的关键酶，直接调控体内尿酸水平，其活性异常增高导致高尿酸血症，抑制该酶活性可以减少尿酸的生成，是抗高尿酸血症药物的良好靶点。作为抑制XO抗痛风药物有别嘌醇和非布索坦。别嘌醇是嘌呤类似物，是竞争性的XO抑制剂，但别嘌醇易引起黄嘌呤肾病和结石（朱深银、周远大、杜冠华.防治痛风药物的研究进展[J].医药导报 2006,25:(8):803-806.）以及出现超敏反应，而超敏反应死亡率极高，特别是HLA-B58阳性的患者服用别嘌呤醇后易出现Stevens-Johnson综合征和中毒性表皮溶解坏死症（Perez-Ruiz F, Liote F. Lowering serum uric acid levels: what is the optimal target for improving clinical outcomes in gout [J]. Arthritis Rheum 2007, 57:1324-132.），且禁用于重度肝损害、冠心病和心力衰竭患者。非布索坦（Febuxtat）是2009年美国FDA批准上市的一种非嘌呤类黄嘌呤氧化酶抑制剂，属于混合型的XO抑制剂，其结构不同于别嘌醇。与别嘌呤醇相比，非布索坦可以快速降低血尿酸水平，尤其适用轻中度肾功能不全的患者，其不良反应报道较少，远期效果与毒副作用仍需进一步观察。寻找新型高效低毒的降尿酸药物依然是药学研究的热点。

奥柳氮钠由一个偶氮键连接2分子的5-氨基水杨酸构成，目前临床上用于轻、中度急、慢性溃疡性结肠炎，成人口服治疗剂量是1500 mg/d（25 mg/kg），必要时日剂量可增加至3000 mg（50 mg/kg）；儿童日剂量20 ~ 40 mg/kg，且无明显严重的不良反应（Hanauer SB． The long-term management of ulcerative colitis[J]. Aliment Pharmacol Ther2004,20(upp14): 97- 101．）。

技术实现要素：

本发明目的是提供一种具有较高降尿酸活性的化合物奥柳氮钠，用于制备防治高尿酸血症和痛风的药物和保健品的新用途。

首先是，以奥柳氮钠作为制备防治高尿酸血症和痛风的药物和保健品的应用。

进一步地，所述的应用是：奥柳氮钠明显抑制黄嘌呤氧化酶活性，其IC₅₀为9.8 μmol/L，系混合型的黄嘌呤氧化酶抑制剂。

进一步地，所述的应用是：奥柳氮钠以5.0 mg/kg剂量即能显著降低氧嗪酸钾诱导的高尿酸血症小鼠的血清尿酸水平，并能显著抑制肝脏黄嘌呤氧化酶和黄嘌呤脱氢酶的活性。

经过大量试验我们发现奥柳氮钠明显抑制黄嘌呤氧化酶的活性，其IC₅₀为9.8 μmol/L，系黄嘌呤氧化酶的混合型抑制剂。体内研究表明该化合物具有较强的抗痛风作用，5.0 mg/kg剂量即可以明显降低氧嗪酸钾诱导的高尿酸血症小鼠的血清尿酸水平，可以用于制备抗痛风的药物和保健品。

本发明有益效果及其进步在于：

本发明使用计算机辅助药物研发快速地蛋白-配体分子对接软件idock，辅以准确的结合亲和力打分算法RF-Score-3以及方便的可视化工具iview进行虚拟筛选，从已批准的药物数据库的约3000种药物中筛选了XO筛选了40多个XO候选抑制剂，极大节省了药物的研发成本，缩短了药物的研发时间，其中，发现奥柳氮钠体外显著抑制XO的活性，其IC₅₀为9.8 μmol/L，具有高效低毒的降尿酸和抗痛风用途。

我们的研究发现奥柳氮钠不仅体外能明显抑制XO的活性，体内研究也表明奥柳氮钠能抑制肝脏XO及XDH活性。尤其是，与奥柳氮钠目前临床上治疗溃疡性结肠炎的成人口服剂量1500 mg/d（25 mg/kg）～3000 mg（50 mg/kg）相比，在尿酸酶抑制剂氧嗪酸钾所致的高尿酸血症小鼠模型上，仅5.0 mg/kg剂量即可以明显降低小鼠的血清尿酸水平，其降尿酸作用所需剂量远远小于临床上治疗溃疡性结肠炎的剂量，降低了不良反应风险，具有显著的降尿酸作用，显示出高效低毒的特点，具有很好的应用价值及市场前景。

附图说明

图1为奥柳氮钠的结构式。

图2为奥柳氮钠对黄嘌呤氧化酶的抑制作用的坐标曲线图，其IC₅₀为9.8微摩尔/L。

图3为别嘌醇对黄嘌呤氧化酶的抑制作用的坐标曲线图。

图4为和非布索坦对黄嘌呤氧化酶的抑制作用的坐标曲线图。

图5 为Lineweaver-Burk氏作图法求奥柳氮钠对黄嘌呤氧化酶抑制类型，奥柳氮钠为混合型抑制。

图6 为Lineweaver-Burk氏作图法求别嘌醇对黄嘌呤氧化酶抑制类型，别嘌醇为竞争型抑制。

图7 为Lineweaver-Burk氏作图法求非布索坦对黄嘌呤氧化酶抑制类型，非布索坦为混合型抑制。

图8为正常对照组、模型组及奥柳氮钠10.0、20.0mg/kg、阳性药非布索坦1.0mg/kg腹腔给药对氧嗪酸钾诱导的高尿酸血症小鼠肝脏XO的影响对比图。

图9为正常对照组、模型组及奥柳氮钠5.0、10.0、20.0 mg/kg、阳性药非布索坦1.0 mg/kg腹腔给药对氧嗪酸钾诱导的高尿酸血症小鼠肝脏XDH的影响对比图。

以下具体实施方式在于以实验室试验和动物试验的定性或定量数据及制剂方法说明发明化合物的医药用途和药理作用，这些定性或定量数据及制剂方法包括但不限制本发明的保护范围。

具体实施方式

1．发明化合物对黄嘌呤氧化酶的抑制作用

黄嘌呤氧化酶(EC 1.1.3.22)为Sigma公司产品，用焦磷酸钠缓冲液配制成适宜浓度备用。奥柳氮钠用焦磷酸钠缓冲液配制成系列浓度备用。系列浓度的奥柳氮钠溶液与黄嘌呤氧化酶在25℃孵育15 min后，参照文献方法[Kong LD, Zhang Y, Pan X, Tan RX, and Cheng CHK (2000) Inhibition of xanthine oxidase by liquiritigenin and isoliquiritigenin isolated from Sinofranchetia chinensis. Cell Mol Life Sci 57:500–505]测定黄嘌呤氧化酶的活性，结果表明奥柳氮钠对黄嘌呤氧化酶的活性有很强的抑制作用，其IC₅₀为9.8 微摩尔/L(图2～4)，抑制类型为混合型抑制（图5～7）。

2. 发明化合物对氧嗪酸钾诱导的高尿酸血症小鼠血尿酸及肝脏黄嘌呤氧化酶和脱氢酶的影响

健康雄性昆明种小鼠（体重18-22 g），由北京华阜康生物科技有限公司提供，实验动物生产许可证号：SCXK(京)2014-0004。动物随机分为正常对照组、高尿酸血症模型组、发明化合物5.0、10.0、20.0 mg/kg组和阳性对照非布索坦1.0 mg/kg组，每组均10只。受试化合物用水配制成适宜浓度，腹腔注射给药，每天2次，共5个剂量。采用尿酸酶抑制剂氧嗪酸钾为化学性诱导剂，腹腔注射氧嗪酸钾500 mg/kg，造成高尿酸血症小鼠，正常对照组则注射等体积溶媒，注射后1h腹腔给予末次剂量的供试化合物，2 h 后拔眼采血，3000 rpm离心10 min，取血清，采用磷钨酸比色法(南京建成生物工程研究所试剂盒)测定血清尿酸水平。留取肝脏冻存于-80℃待测奥柳氮钠对黄嘌呤氧化酶和黄嘌呤脱氢酶的影响。

结果表明，腹腔注射氧嗪酸钾后动物血清尿酸水平显著升高，与正常对照组相比，有显著性差异，提示模型成功。给予发明化合物后，血清尿酸水平明显低于模型对照组，且呈现剂量依赖性，与模型对照组相比差异有统计学意义，提示发明化合物有很好的降尿酸作用 (表1)。

表1 发明化合物腹腔给药对氧嗪酸钾诱导的高尿酸血症小鼠尿酸的影响

x ± s, n = 10, ^#P﹤0.05, ^##P﹤0.01, 与正常对照组相比; ^*P﹤0.05, ^**P﹤0.01, 与模型组相比(t-test).

与正常对照组相比，模型组的肝脏XO活力没有显著性差异。给予发明化合物10.0、20.0mg/kg及阳性药非布索坦1.0mg/kg后，肝脏XO活力明显低于模型对照组，且呈现剂量依赖性，与模型对照组相比差异有统计学意义(图8)。

与正常对照组相比，模型组的肝脏XDH活力水平显著升高，与正常对照组相比，有显著性差异。给予发明化合物5.0、10.0、20.0 mg/kg及阳性药非布索坦1.0 mg/kg后，肝脏XOD活力明显低于模型对照组，且呈现剂量依赖性，与模型对照组相比差异有统计学意义(图9)。