本发明涉及一种脱细胞绵羊带瓣静脉支架材料的制备方法。
背景技术：
组织工程的迅猛发展，为构建组织工程化带瓣静脉提供了可能。构建中，脱细胞支架因其所具有的无与伦比的三维空间架构、良好的细胞亲和性等优势颇受众多研究者的青睐。目前，来源于同种异体的脱细胞支架获取不易，研究者仍然着眼于异种异体的支架。显然，脱细胞处理过程中残留的蛋白质和细胞组分等免疫原性物质势必会造成受体产生不同程度的免疫反应。因此，脱细胞支架材料的免疫原性评价即成为支架安全性评价中重要的环节。
技术实现要素：
本发明提出一种脱细胞绵羊带瓣静脉支架材料的制备方法。
一种脱细胞绵羊带瓣静脉支架材料的制备方法,包括以下步骤：
（1）无菌条件下切取正常成年绵羊带瓣股静脉数十条，并将其修剪为2厘米左右；
（2）PBS清洗干净后，置于0.5％Triton X-100+0.05％NH40H混合液体中于4℃振摇3d后，超纯水中于4℃振摇漂洗3d；
（3）然后换用DNase+RNase于37℃作用12h，超纯水再漂洗2h，将得到的脱细胞基质材料置Eppendorf管中，封口膜密封，60CO辐照灭菌，零下60-100℃保存；
（4）将脱细胞支架材料置入6孔板内，按6cm2/ml，表面积/体积±10％的比例，加入淋巴细胞培养基；
（5）在37℃孵育(24士2)h，制备支架材料浸提液，并将制备好的支架材料浸提液Eppendorf管中，封口膜密封，于零下20℃保存。
优选地，所述淋巴细胞培养基由RP—MI完全培养液、10％胎牛血清、1％30 mg／ml谷氨酰胺组成。
优选地，所述辐照灭菌，零下80℃保存。
本发明所述方法制备的脱细胞绵羊带瓣静脉支架材料，水溶性好，对细胞无损伤，在培养液中性质稳定，不易自发地氧化或还原，本发明步骤简单，使用性强，经济效益高。
具体实施方式
实施例1。
一种脱细胞绵羊带瓣静脉支架材料的制备方法,包括以下步骤：
（1）无菌条件下切取正常成年绵羊带瓣股静脉数十条，并将其修剪为2厘米左右；
（2）PBS清洗干净后，置于0.5％Triton X-100+0.05％NH40H混合液体中于4℃振摇3d后，超纯水中于4℃振摇漂洗3d；
（3）然后换用DNase+RNase于37℃作用12h，超纯水再漂洗2h，将得到的脱细胞基质材料置Eppendorf管中，封口膜密封，60CO辐照灭菌，零下60-100℃保存；
（4）将脱细胞支架材料置入6孔板内，按6cm2/ml，表面积/体积±10％的比例，加入淋巴细胞培养基；
（5）在37℃孵育(24士2)h，制备支架材料浸提液，并将制备好的支架材料浸提液Eppendorf管中，封口膜密封，于零下20℃保存。
实施例2。
一种脱细胞绵羊带瓣静脉支架材料的制备方法,包括以下步骤：
（1）无菌条件下切取正常成年绵羊带瓣股静脉数十条，并将其修剪为2厘米左右；
（2）PBS清洗干净后，置于0.5％Triton X-100+0.05％NH40H混合液体中于4℃振摇3d后，超纯水中于4℃振摇漂洗3d；
（3）然后换用DNase+RNase于37℃作用12h，超纯水再漂洗2h，将得到的脱细胞基质材料置Eppendorf管中，封口膜密封，60CO辐照灭菌，零下60-100℃保存；
（4）将脱细胞支架材料置入6孔板内，按6cm2/ml，表面积/体积±10％的比例，加入淋巴细胞培养基；
（5）在37℃孵育(24士2)h，制备支架材料浸提液，并将制备好的支架材料浸提液Eppendorf管中，封口膜密封，于零下20℃保存；
（6）所述淋巴细胞培养基由RP—MI完全培养液、10％胎牛血清、1％30 mg／ml谷氨酰胺组成。
实施例3。
一种脱细胞绵羊带瓣静脉支架材料的制备方法,包括以下步骤：
（1）无菌条件下切取正常成年绵羊带瓣股静脉数十条，并将其修剪为2厘米左右；
（2）PBS清洗干净后，置于0.5％Triton X-100+0.05％NH40H混合液体中于4℃振摇3d后，超纯水中于4℃振摇漂洗3d；
（3）然后换用DNase+RNase于37℃作用12h，超纯水再漂洗2h，将得到的脱细胞基质材料置Eppendorf管中，封口膜密封，60CO辐照灭菌，零下60-100℃保存；
（4）将脱细胞支架材料置入6孔板内，按6cm2/ml，表面积/体积±10％的比例，加入淋巴细胞培养基；
（5）在37℃孵育(24士2)h，制备支架材料浸提液，并将制备好的支架材料浸提液Eppendorf管中，封口膜密封，于零下20℃保存；
（6）所述淋巴细胞培养基由RP—MI完全培养液、10％胎牛血清、1％30 mg／ml谷氨酰胺组成；
（7）所述辐照灭菌，零下80℃保存。