本发明系中药新工艺、新技术领域，尤其涉及一种新型发酵中药及其制备方法和用途。
背景技术：
2016年瑞士达沃斯论坛上，马云面对世界媒体直言：阿里巴巴未来将投资重点放在环保和健康产业，任何一个有责任的企业家都应该为人类的健康环境努力。马云一席话，道出了整个中国急待解决的健康危机。随着中国经济持续增长，中国医院越建越多，医疗设备越来越先进，药品新成果辈出，新药、特效药不断翻新。但是，以前难治愈的高血压、心脏病、糖尿病……依然无法根治；原来难得一见的各种癌症像“传染病”一样不断从高龄化向低龄化蔓延。
中药作为中华名字的传统瑰宝，近年来越来越受到人们的重视。发酵中药作为一种新的方式，是将天然药物(中药)提取液以优选的肠道益生菌菌群中一种或几种、一株或几株益生菌作为菌种，利用微生态学、仿生学的方法,通过生物嫁接的方式，在体外模拟人体的肠道环境和中药成分在人体内的消化分解过程，对提取的中药有效成分进行生物学转化，将中药的大分子物质，经过微生物转化成为能够被人体肠道直接吸收的小分子成分，使中药成为快速吸收、定量疗效的新型药物。事实上，在传统的中药生产中的中药炮制就利用了天然微生物中药发酵以提高中药药效、消除中药毒副作用、改变中药药性。例如：六神曲、淡豆豉、半夏曲等传统中药均由天然微生物发酵而成。然而，传统的中药发酵采用天然微生物发酵，菌种不纯，代谢理论、药效成分理念模糊不清，生产可控性差。同时，部分发酵中药的成分复杂，生产过程难以把控。如申请号为201610189936.2、201610092979.9、201610189936.2的发明专利均公开了治疗癌症的益生菌发酵中药组合物，其中的中药原料有数十味之多，且发酵过程较为繁琐。
技术实现要素：
本发明的目的在于解决现有技术中存在的问题，并提供一种新型发酵中药。本发明所采用的技术方案如下：
本发明的新型发酵中药是通过发酵中药的方法获得的，其中药原材料为：铁皮石斛、金杈石斛、北五味子、灵芝、黄芪和绞股篮，其中铁皮石斛、金杈石斛、北五味子、灵芝、黄芪和绞股篮的质量比为(0.5～2.5)：(0.5～2.5)：(0.5～1.5)：(0.5～1.5)：(0.5～1.5)：1。上述比例进一步可以优选为：铁皮石斛、金杈石斛、北五味子、灵芝、黄芪和绞股篮的重量比：2：2：1：1：1：1。石斛优选采用铁皮石斛和金钗石斛，该两种石斛具有更好的药效。
作为优选，所述的铁皮石斛、金杈石斛、北五味子、灵芝、黄芪和绞股篮均为浓缩提取物精粉。进一步的，所述浓缩提取物精粉的浓缩提取比为10～20：1。
本发明的另一目的在于提供一种上述发酵中药的制备方法，其步骤如下：
将清洗粉碎的铁皮石斛、金杈石斛、北五味子、灵芝、黄芪和绞股篮六种中药原材料，制备获得各原材料的浓缩提取物精粉；再将上述浓缩提取物精粉按比例混合，加入水后进行变温固态发酵，将发酵液减压、真空干燥工艺后即获得成品。
浓缩提取物精粉制备方法也可采用现有其他中药精粉的方法制备，但本发明提供了一种优选的制备方法，具体如下：将清洗粉碎的中药原材料，在水醇混合液中加压提取，提取温度60～120℃，同时慢速机械搅拌并控制提取反应时间为8～12小时；提取液经过减压精制、喷雾干燥后，分别获得该中药原材料的浓缩提取物精粉。
作为优选，所述的控温发酵过程中，发酵温度为10～75℃，发酵时间为48～72小时。
本发明的发酵中药可用于制备抗癌药物，特别是针对肺癌或肝癌的具有较好的效果。
本发明中的几味药材本身均是富硒药材，将原料先经超浓缩制成提取物精粉，然后将这种超浓缩制或提取物精粉，再经固态变温控制发酵技术得到发酵中药。这种全新的发酵中药有众多巨大的优势：
1、比传统中药药效有了大幅度提高，有效成分小分子态活化；
2、发酵中药经转化，能够在短时间内较好地被机体吸收利用，且几乎无毒副作用；
3、实现了有效物质的超浓缩和高纯度，经过发酵后的药材，富含高剂量高活性有机硒(硒多糖Se-PⅠSe-PⅡ及硒的若干酚类酮类化合物)和其他活性物质；
本发明在杀灭癌细胞(特别是肺癌和肝癌)、病毒，以及提高人体免疫力、清除氧化自由基方面具有较好的功效。本发明的具体药效将在后续实施例中进行详细说明。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步阐述，以便本领域技术人员更好地理解本发明的实质。本发明中所采用的试剂、原料及菌种如非特殊说明，均采用市售的现有产品。
实施例1
本实施例中，对五种高富硒中药的浓缩提取物精粉进行了制备。六种中药原料分别为铁皮石斛、金钗石斛、北五味子(即五味子)、灵芝、黄芪、绞股篮。本实施例中，原料从湖北恩施地区采购，中药原料富含硒有机硒——硒多糖Se-PⅠSe-PⅡ及硒的若干酚类酮类化合物(当然也制备过程中可以采用其他地区原料)。将上述原材料清洗粉碎备用。
将清洗粉碎的六种高富硒中药原材料，在水醇混合液(水：乙醇＝7：3，体积比)中提取，控制温度60～120℃，同时，慢速机械搅拌并控制反应时间：8～12小时，提取过程中保持微加压状态。多次试验后，最终浓缩提取比范围为10～20：1。
完成提取后，将提取液减压精制、喷雾干燥，获得高含量、高纯度的五种高富硒中药原料的精粉，其有效物质含量提高了10～20倍。
需要注意的是，本实施例中，其最终目的是为了得到高富硒中药的浓缩提取物精粉。上述制备工艺为本发明的一个较佳实施例，但制备过程中的各工艺参数及原料产地、预处理方法、器械装置等均可根据实际情况进行调整。经过试验，工艺参数在上述范围内调整，提取过程中控制温度越高，反应时间就可相应缩短，不会对最终的药效产生较大影响，基本能够保持稳定。
实施例2
本实施例中，采用实施例1中得到的浓缩提取物精粉制备新型发酵中药。其步骤如下：
A.将上述所获得的六种原料铁皮石斛、金杈石斛、北五味子、灵芝、黄芪、绞股蓝精粉，按2：2：1：1：1：1的质量比混合后加入矿泉水，将该混合物放置在发酵罐中变温固态发酵，同时按混合物质量的0.15％比例投入多粘芽孢杆菌(Bacillus polymyxa)和地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)混合而成的发酵菌团(为市售产品，购自山西省临汾市尧都区汾河氨基酸厂；也可采用其他市售产品)，控制发酵温度由10℃逐渐变温至75℃。此过程中，慢速机械搅拌并控制反应时间为60小时。
B.将上述所获得的发酵液减压、真空干燥即获得中药成品。
实施例3
本实施例中，采用实施例1中得到的浓缩提取物精粉制备新型发酵中药。其步骤如下：
A.将上述所获得的六种原料铁皮石斛、金杈石斛、北五味子、灵芝、黄芪、绞股蓝精粉，按1：1：1：1：1：1的质量比混合后加入矿泉水，将该混合物放置在发酵罐中变温固态发酵，同时按混合物质量的0.22％比例投入等比例的多粘芽孢杆菌(Bacillus polymyxa)和地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)混合而成的发酵菌团(菌种为市售产品，与实施例2相同)，控制发酵温度由20℃逐渐变温至75℃。此过程中，慢速机械搅拌并控制反应时间为50小时。
B.将上述所获得的发酵液减压、真空干燥即获得中药成品。
实施例4
本实施例中，采用实施例1中得到的浓缩提取物精粉制备新型发酵中药。其步骤如下：
A.将上述所获得的六种铁皮石斛、金杈石斛、北五味子、灵芝、黄芪、绞股蓝精粉，按0.5：2.5：1.5：0.5：1.5：1的质量比混合后加入矿泉水，在发酵罐中变温固态发酵，同时按0.15％比例投入酵母菌，控制发酵温度由15℃逐渐变温至75℃。此过程中，慢速机械搅拌并控制反应时间48小时。
B.将上述所获得的发酵液减压、真空干燥即获成品。
实施例5
本实施例中，采用实施例1中得到的浓缩提取物精粉制备新型发酵中药。其步骤如下：
A.将上述所获得的六种铁皮石斛、金杈石斛、北五味子、灵芝、黄芪、绞股蓝精粉，按2.5：0.5：0.5：1.5：0.5：1的质量比混合后加入矿泉水，在发酵罐中变温固态发酵，同时按0.15％比例投入乳酸菌，控制发酵温度由10℃逐渐变温至65℃。此过程中，慢速机械搅拌并控制反应时间72小时。
B.将上述所获得的发酵液减压、冷冻干燥即获成品。
实施例6
本实施例中，采用实施例1中得到的浓缩提取物精粉制备新型发酵中药。其步骤如下：
A.将上述所获得的六种铁皮石斛、金杈石斛、北五味子、灵芝、黄芪、绞股蓝精粉，按1.75：2.0：0.9：1.15：0.85：1的质量比混合后加入矿泉水，在发酵罐中变温固态发酵，同时按0.18％比例投入双歧杆菌，控制发酵温度由10℃逐渐变温至65℃。此过程中，慢速机械搅拌并控制反应时间72小时。
B.将上述所获得的发酵液减压、冷冻干燥即获中药成品。
实施例7
本实施例中，所有步骤和参数与实施例6相同，仅将发酵菌种改为等比例的多粘芽孢杆菌(Bacillus polymyxa)和双歧杆菌，最终经发酵液减压、真空干燥获得中药成品。
实施例8
本实施例中，所有步骤和参数与实施例5相同，仅将发酵菌种改为等比例的地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)和乳酸菌，最终经发酵液减压、真空干燥获得中药成品。
实施例4～8中所用的菌种为常用食品加工菌系列，为普通市售菌剂，其共同特性为工程温度控制范围在10～40℃之间。
实施例9
为了验证本发明的发酵中药的效果，通过国家新药筛选中心对其效果进行了测定，结果表明上述实施例2～9所得菌种均具有对癌细胞的抑制作用，实施例2的效果最佳。下面以实施例2所得的中药为例，给出相应的试验数据对其效果进行说明，其余实施例不再赘述，药效基本类似，仅在肿瘤细胞生长抑制率上存在差别。
抗肿瘤生物活性体外筛选试验1
样品编号：NC01090017(即本发明中的实施例2制备得到的发酵中药)
筛选方法：磺酰罗丹明B(sulforhodamine B,SRB)
蛋白染色法
细胞株：A549人肺癌
作用时间：72小时
结果评定：无活性：1mg/ml<50％；
有活性：1mg/ml>50％；
对肿瘤细胞生长的抑制率％
抗肿瘤生物活性体外筛选试验2
样品编号：NC01090017
筛选方法：磺酰罗丹明B(sulforhodamine B,SRB)
蛋白染色法
细胞株：BEL-7402人肺癌
作用时间：72小时
结果评定：无活性：1mg/ml<50％；
有活性：1mg/ml>50％；
对肿瘤细胞生长的抑制率％
化合物对两株人肿瘤细胞的增殖抑制活性筛选报告
本实验采用SRB染色法测试了待测化合物NC01090017对两株人肿瘤细胞人肺癌细胞A-549和人肝癌细胞BEL-7402的增殖抑制作用，结果显示，待测化合物NC01090017对两株人肿瘤细胞都有一定的增殖抑制活性。
1.1试验目的：评价待测化合物NC01090017对人肿瘤细胞的增殖抑制活性，阿霉素作为阳性对照药物。
1.2样品来源与配制：待测化合物NC01090017用生理盐水配制成40mg/ml储液，临用前用生理盐水稀释至所需浓度。
试剂与仪器：
1)磺酰罗单明B(sulforodamine B,SRB)购自Sigma公司。
2)96孔细胞培养板购自Corning公司。
3)主要仪器：酶标仪(absorbance microplate reader molecular devices)，购自MD公司。
1.3细胞培养：本试验中所用细胞株如表1所示。所有细胞置于37℃含5％CO2的饱和湿度培养箱(Thermo Forma，美国)中常规培养。
增殖抑制作用研究采用细胞的组织类型和来源
1.4试验方法：采用磺酰罗丹明B(sulforhodamine B,SRB)蛋白染色法。根据细胞生长速率,将处于对数生长期的肿瘤细胞以90μl/孔接种于96孔培养板，贴壁生长24小时再加药10μl/孔,每个浓度设三复孔,并设相应浓度的生理盐水溶媒对照及无细胞调零孔。肿瘤细胞在37℃、5％CO2条件下培养72小时，然后倾去培养液，用10％冷TCA固定细胞，4℃放置1小时后用蒸馏水洗涤5次，空气中自然干燥。然后加入由1％冰醋酸配制的SRB(Sigma)4mg/ml溶液100μL/孔，室温中染色15分钟，去上清液，用1％醋酸洗涤5次，空气干燥。最后加入100μl/孔的Tris溶液，酶标仪560nm波长下测定OD值。按下列公式计算被测物对癌细胞生长的抑制率，半数抑制量IC50值采用Logit法计算。抑制率＝(对照组OD值－给药组OD值)/对照组OD值×100％。
1.5试验结果：化合物NC01090017对两株肿瘤细胞都有一定的增殖抑制活性，NC01090017在A-549的IC50值为0.202mg/ml，在BEL-7402的IC50为0.085mg/ml。
1.6实验结论：待测化合物NC01090017对两株人肿瘤细胞都有一定的增殖抑制活性。
表1.化合物对A-549肺癌细胞的增殖抑制活性
表2.化合物对BEL-7402肝癌细胞的增殖抑制活性
以上所述的实施例只是本发明的一种较佳的方案，然其并非用以限制本发明。有关技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，还可以做出各种变化和变型。因此凡采取等同替换或等效变换的方式所获得的技术方案，均落在本发明的保护范围内。