预防或治疗听力损失的方法与流程

发明领域

本发明涉及预防或治疗听力损失的方法以及预防或抑制个体毛细胞变性或毛细胞死亡的方法。

发明背景

听力损失与毛细胞的损伤有关，例如由于例如持续的应激状态或创伤事件(例如导致炎症通路的激活)造成的毛细胞的细胞凋亡。听力损失可以由噪声损伤、医疗干预、缺血性损伤、导致突然听力损失的非特异性应激、或年龄引起，或者可以被化学诱导，其中化学诱导由例如抗生素或化学治疗剂引起。儿童听力损失可能由产前或产后的神经细胞的能量稳态缺陷引起。听力损失还可以由线粒体功能障碍引起。(c.m.suephd,fracp1，cochlearoriginofhearinglossinmelassyndrome，annalsofneurology.第43卷，第3期，第350-359页，1998年3月)。此外，可以证明代谢综合征和听力损失之间的联系(ml,jonssonb,tuvemot,pa,lundgrenm,jclinendocrinolmetab.2005年8月；90(8):4452-6.epub2005年5月31日)。听力损失可能是感觉神经源性的，其由导致早期脑发育中的细胞营养不良的损伤引起。

毛细胞完全分化，且细胞死亡后不能被更换(出生时只有几千个细胞)。在文献中已经充分地描述，在毛细胞的应激和损伤之后，细胞可以进入静息状态，没有与听觉过程相关的功能，但在静息状态下仍然存活。刺激新毛细胞发育或再生的方法，例如通过施用生长因子或通过基于干细胞的疗法来实现疾病改变，具有促肿瘤发生副作用(pro-tumorigenicside-effects)的风险。

听力障碍是一个重大的全球健康问题，具有深刻的社会和经济影响，影响了全球2.75亿人。由于例如噪音暴露增加和人口老龄化，听力损失的发生快速上升。在现在没有已批准的药物疗法的情况下，未满足的医疗需求非常高。特别地，需要提供有效的预防和随后治疗听力损失的方法，其使得能够立即和长期维持预防和/或治疗效果。

发明概述

本发明概括而言涉及使用ppar激动剂预防或治疗听力损失的方法和预防或抑制毛细胞变性或毛细胞死亡的方法。本发明提供了使得可以保护毛细胞抵御应激的方法，例如，来自噪声诱导的应激或来自化学诱导的应激(如由抗生素或化学治疗剂诱导的应激)或可能引起听力损失的非特异性应激。使用本文描述的方法，可以实现预防和/或治疗效果的立即和随后的长期维持。在听力损失研究中建立的标准模型中，可证明使用ppar激动剂的治疗保护了一旦暴露于抗生素后通常在48小时内被破坏的毛细胞。在抗生素攻击之前加入ppar激动剂能够以剂量依赖的方式阻止毛细胞的细胞凋亡和细胞死亡。不限于理论，假设预防或治疗听力损失和/或预防或抑制毛细胞变性或毛细胞死亡是通过以下一种或多种或者以下通路相互作用的组合实现的：通过减少氧化性应激和/或通过经由防止jnk磷酸化来下调mapk通路和/或通过经由irs1通路、akt通路、glut4通路或gsk3通路来恢复胰岛素敏感性，和/或通过恢复核糖体功能，和/或通过改善线粒体含量或功能性。

在第一个方面，本发明涉及用于预防或治疗个体听力损失的方法的ppar激动剂。

在另一个方面，本发明涉及用于预防或抑制个体毛细胞变性或毛细胞死亡的方法的ppar激动剂。

在另一个方面，本发明涉及包含ppar激动剂和药学上可接受的稀释剂、赋形剂或载体的药物组合物，其用于预防或治疗个体听力损失的方法。

在另一个方面，本发明涉及用于在个体中预防或治疗听力损失或预防或抑制毛细胞变性或毛细胞死亡的试剂盒，其包含ppar激动剂。

附图简述

图1a-c显示了corti氏器(oc)的顶转、底转和中转剩余的毛细胞平均数量的定量。虽然庆大霉素(200μm)处理导致每个片段毛细胞数量一致减少约50-70％，但两种浓度(2μm和10μm)的吡格列酮均能够显著地防止在所有回转的庆大霉素依赖性毛细胞损失。对用于每个条件的10个oc，将每个回转的值平均。使用方差分析(anova)、然后使用最小显著性差异(lsd)事后检验(statview5.0)来确定各治疗组之间ohc和ihc(ohc＝外毛细胞；ihc＝内毛细胞)的显著性差异。与小于0.05的p值相关的差异被认为具有统计学意义。所有数据以平均值±sd表示。

图2显示了在豚鼠中噪声攻击后一周或两周通过听性脑干反应(abr)确定的平均听阈与处理前相比的变化。通过从噪声前的值减去噪声后的值，计算每个动物在各个频率的阈移(thresholdshift)。确定每个频率的组平均值。通过将8-20khz的各个频移平均，计算每个处理组和时间点的总体阈移。数据是平均值±s.d。*p<0.05。

图3a-c显示了在corti氏器(oc)的底转中部的确定段内剩余的毛细胞平均数量的定量。虽然庆大霉素(50μm)处理导致毛细胞数量一致减少约50％，但是替格列扎、莫格列扎和非诺贝酸均能够显著地防止庆大霉素依赖性毛细胞损失。对于每个条件使用的5-7个oc，将各值平均。使用方差分析(anova)、然后使用最小显著性差异(lsd)事后检验(statview5.0)来确定各治疗组之间毛细胞数量的显著性差异。与小于0.05的p值相关的差异被认为具有统计学意义。所有数据以平均值±sd表示。****＝p≤0.001。

发明详述

本发明提供了预防或治疗听力损失的方法以及预防或抑制毛细胞变性或毛细胞死亡的方法。

为了解释本说明书，将采用以下定义，且只要适用，单数使用的术语也将包括复数，反之亦然。应理解，本文使用的术语仅用于描述具体实施例的目的，而不是限制性的。除非另有说明，术语“包含”，“具有”和“包括”应被解释为开放性术语(即，意指“包括但不限于”)。

本文所用的术语“ppar激动剂”是指活化过氧化物酶体增殖物激活受体(ppar)如pparγ受体、pparα受体、pparδ受体或其组合的药物，包括pparγ激动剂，例如吡格列酮、曲格列酮或罗格列酮，pparα激动剂如贝特类如非诺贝特(非诺贝酸)、氯贝丁酯或吉非贝齐，ppar双重激动剂(pparα/γ或pparα/δ激动剂)如阿格列扎、莫格列扎、替格列扎、拉格列扎、沙罗格列扎、gft505或那格列扎，pparδ激动剂如gw501516，ppar泛激动剂(pparα/δ/γ激动剂)或选择性ppar调节剂，例如int131和这些化合物的盐。通常在本发明的方法中使用pparγ激动剂、ppar调节剂、pparα激动剂和/或pparα/γ双重激动剂，在本发明的方法中尤其使用pparγ激动剂、pparα激动剂和/或pparα/γ双重激动剂，更加尤其使用选自吡格列酮、罗格列酮、曲格列酮的pparγ激动剂、优选吡格列酮，选自非诺贝特(非诺贝酸)、氯贝丁酯和吉非贝齐的pparα激动剂、优选非诺贝特(非诺贝酸)，和/或选自以下的pparα/γ双重激动剂：阿格列扎、莫格列扎、替格列扎、拉格列扎、沙罗格列扎、gft505和那格列扎、优选莫格列扎或替格列扎。优选地，本发明的方法中使用pparγ激动剂，更优选使用选自吡格列酮、罗格列酮、曲格列酮、int131的pparγ激动剂或调节剂、甚至更优选使用选自吡格列酮、罗格列酮和曲格列酮的pparγ激动剂。最优选使用吡格列酮或其盐，例如盐酸吡格列酮。吡格列酮描述于例如美国专利号4,687,777或dormandyja,charbonnelb,ecklanddj,erdmanne,massi-benedettim,moulesik,skeneam,tanmh,lefèbvrepj,murraygd,standle,wilcoxrg,wilhelmsenl,betteridgej,birkelandk,golaya,heinerj,korányil,laaksom,mokánm,norkusa,piragsv,podart,scheena,scherbaumw,schernthanerg,schmitzo,skrhaj,smithu,tatonj；proactiveinvestigators.lancet.2005年10月8日；366(9493):1279-89中，由下述结构式表示：

曲格列酮描述于例如florezjc,jablonskika,sunmw,bayleyn,kahnse,shamoonh,hammanrf,knowlerwc,nathandm,altshulerd；diabetespreventionprogramresearchgroup.jclinendocrinolmetab.2007年4月；92(4):1502-9中，由下述结构式表示：

罗格列酮描述于例如nissense,wolskik.nengljmed.2007年6月14日；356(24):2457-71.erratumin:nengljmed.2007年7月5日；357(1):100中。非诺贝特描述于例如bondsde,cravente,busej,crousejr,cuddihyr,elamm,ginsberghn,kirchnerk,marcovinas,mychaleckyjjc,o'connorpj,sperl-hillenja.diabetologia.2012年6月；55(6):1641-50中，由下述结构式表示：

氯贝丁酯描述于例如rabkinsw,haydenm,frohlichj.atherosclerosis.1988年10月；73(2-3):233-40中，由下述结构式表示：

非诺贝特(非诺贝酸)描述于例如schimasm,maciejewskisr,hillemande,williamsma,mohiuddinsm.expertopinpharmacother.2010年4月；11(5):731-8中，由下述结构式表示：

吉非贝齐描述于例如adabagas,mithanis,alaloulb,collinsd,bertogs,bloomfieldhe；veteransaffairshigh-densitylipoproteincholesterolinterventiontrialstudygroup.amheartj.2009年5月；157(5):913-8中，由下述结构式表示：

阿格列扎描述于例如lincoffam,tardifjc,schwartzgg,nichollssj,rydénl,nealb,malmbergk,wedelh,busejb,henryrr,weicherta,cannatar,svenssona,volzd,grobbeede；alecardioinvestigators.jama.2014年4月16日；311(15):1515-25中，由下述结构式表示：

莫格列扎描述于例如fernandezm,gastaldellia,triplittc,hardiesj,casolaroa,petzr,tantiwongp,musin,cersosimoe,ferranninie,defronzora.diabetesobesmetab.2011年10月；13(10):893-902中，由下述结构式表示：

替格列扎描述于例如baysh,mcelhattanj,bryzinskibs；gallant6studygroup.diabvascdisres.2007年9月；4(3):181-93中，由下述结构式表示：

拉格列扎描述于例如saadmf,grecos,oseik,lewinaj,edwardsc,nunezm,reinhardtrr；ragaglitazardose-rangingstudygroup.diabetescare.2004年6月；27(6):1324-9中，由下述结构式表示：

沙罗格列扎描述于例如agrawalr.currdrugtargets.2014年2月；15(2):151-5中，由下述结构式表示：

那格列扎描述于例如ahlawatp,srinivasnr.eurjdrugmetabpharmacokinet.2008年7月至9月；33(3):187-90中。gw501516描述于例如wangx,sngmk,foos,chonghc,leewl,tangmb,ngkw,luob,choongc,wongmt,tongbm,chibas,loosc,zhup,tanns.jcontrolrelease.2015年1月10日；197:138-47中，由下述结构式表示：

gft505描述于例如carioub,staelsb.expertopininvestigdrugs.2014年10月；23(10):1441-8中，由下述结构式表示：

int131描述于例如taygerlyjp,mcgeelr,rubensteinsm,houzejb,cushingtd,liy,motania,chenjl,frankmoellew,yeg,learnedmr,jaenj,miaos,timmermanspb,thoolenm,kearneyp,flygarej,beckmannh,weiszmannj,lindstromm,walkern,liuj,biermannd,wangz,hagiwaraa,iidat,aramakih,kitaoy,shinkaih,furukawan,nishiuj,nakamuram.bioorgmedchem.2013年2月15日；21(4):979-92中，由下述结构式表示：

通过ppar激动剂活化ppar在低纳摩尔范围至低微摩尔浓度范围内是通常强的，例如在0.1nm至100μm的范围内。在一些实施方案中，ppar活化是弱的或部分的，即在本发明的方法中使用ppar激动剂，其与已知导致最大ppar活化的参考ppar激动剂相比，在报告基因测定系统中产生10％至100％的ppar-受体的最大活化。ppar激动剂的相互作用的优选靶标是毛细胞(最优选的)、神经细胞和内皮细胞，且还包括脂肪细胞、肝细胞、免疫细胞、例如巨噬细胞或树突状细胞、或骨骼肌细胞。

本文中与术语“听力损失”可互换使用的术语“听力损伤”是指对个体通常听到的声音的敏感性降低。听力损失的严重程度根据，在听众可以检测到音量水平之前，所需的在通常水平以上的音量的增加来进行分类。本文使用的术语“听力损失”包括在文献中也称为“突发性感觉神经性听力损失(sshl)”的突发性听力损失(shl)。shl是指主要在一只耳朵中的以突发性、快速的感觉神经性听力损失为特征的疾病，没有明显的原因，通常伴有头晕，无前庭症状。shl定义为在至少三个连续频率超过30db的听力降低，其发生在72小时或更少的时期。shl可由例如非特异性应激引起。

本文所述的听力损失定义为能像其他人一样听到声音的能力下降。这可能由传导性听力损失、感觉神经性听力损失或两者的组合引起。

传导性听力损失意味着振动不会从外耳传导到内耳、特别是耳蜗。这可能是由于耳垢过多积累、胶耳、有炎症和液体积聚的耳部感染、耳膜穿孔或听小骨(中耳中的骨)的功能障碍。还可能是耳膜有缺陷。

感觉神经性听力损失是由内耳功能障碍、耳蜗、听神经或脑损伤引起的。通常，这种类型的听力损失是由于耳蜗中毛细胞的损伤。

本文所述的听力损失通常是感觉神经性听力损失或传导性听力损失与感觉神经性听力损失的组合。感觉神经性听力损失可能与年龄，与急性或持续暴露于噪音或化学物质，与可能导致突发性听力损失的脑外伤或非特异性应激有关。

本文所用的术语“毛细胞变性”是指毛细胞功能和完整性的逐渐丧失和/或最终导致毛细胞死亡。

本文所用的术语“毛细胞死亡”是指内耳中毛细胞的细胞凋亡。

本文可互换使用的术语“毛细胞损伤的鉴别”或“毛细胞损伤的检测”是指可以确定内耳中毛细胞损伤程度的方法。这样的方法是本领域已知的，并且包括例如毛细胞的荧光成像，如实施例中所述。表明在中等至高频率下听力敏感性损失的听力图也表示毛细胞损伤。听力潜能下降而无后续恢复也是对毛细胞损伤的诊断。

本文所述术语“化学诱导的听力损失”或“化学品诱导的听力损失”是指由化学试剂(如有耳毒性的溶剂、气体、油漆、重金属和/或药物)诱导和/或引起的听力损失。

本文所述的术语声压级(spl)或声压强度是相对于参考值而言的声音的有效声压的对数量度。

表示为lp的声压级以db测定(高于标准参考水平)由下式给出：

lp＝10log10(prms²/p0²)＝20log10(prms/p0)db(spl)

其中prms是以pa为单位测定的均方根声压，p0是以pa为单位测定的参考声压。空气中常用的参考声压为p0＝20μpa(均方根)或0.0002达因/cm²，这通常被认为是人类听觉的界限。

本文所用的术语“药学上可接受的载体”是指适合用于人和/或动物的载体或赋形剂或稀释剂，其没有与合理的收益/风险比相称的过度的副作用(如毒性、刺激和过敏反应)。其可以是用于将本发明化合物递送至个体的药学上可接受的溶剂、悬浮剂或介质。

术语“受试者”、“个体”或“患者”在本文中可互换使用。在某些实施方案中，个体是哺乳动物。哺乳动物包括但不限于灵长类动物(包括人类和非人灵长类动物)。在优选的实施方案中，个体是人。

本文所用的术语“约”是指给定量度的+/-5％。

一个方面，本发明提供了用于预防或治疗个体听力损失的方法的ppar激动剂。在本发明的另一个方面，本发明提供了预防或治疗个体的听力损失的方法，该方法包括向个体施用ppar激动剂。在一些实施方案中，将ppar激动剂以足以预防或治疗个体的听力损失的量施用于个体。在另一个方面，本发明提供了ppar激动剂在制备用于预防或治疗个体的听力损失的药物中的用途。

在一些优选实施方案中，通过本发明的方法预防或治疗的听力损失是由噪声损伤、由医疗干预、由缺血性损伤、由年龄引起的，或是化学诱导的。因此，听力损失可以是医疗干预的结果，例如，耳蜗植入。化学诱导通常是由化学试剂例如由抗生素或化学治疗剂引起的。在一些优选实施例中，听力损失是突发性听力损失。由年龄引起的听力损失包括例如老年性耳聋。优选地，通过本发明的方法来预防或治疗由噪声损伤、人工耳蜗植入或化学诱导的、优选由抗生素诱导的听力损失。更优选地通过本发明的方法来预防或治疗由噪声损伤引起的或化学诱导的、优选由抗生素诱导的听力损失。在一些实施方案中，听力损失是感觉神经源性的，其是由导致早期脑发育中的细胞营养不良的损伤引起的。在这种情况下，使用ppar激动剂进行早期治疗可以改善疾病，防止进一步的损害。

在一些实施方案中，ppar激动剂在个体已经出现听力损失、毛细胞变性、毛细胞死亡和/或以毛细胞损伤为特征的病症之前或处于发展听力损失、毛细胞变性、毛细胞死亡和/或以毛细胞损伤为特征的病症的风险之前施用。在一些实施方案中，在个体罹患听力损失、毛细胞变性、毛细胞死亡和/或以毛细胞损伤为特征的病症之后施用ppar激动剂。

与毛细胞变性和/或毛细胞死亡相关的、由其引起或以其为特征的、并且可以通过本发明的方法预防或治疗的其它疾病、障碍或病症为例如，美尼尔病、急性外周性前庭病(acuteperipheralvestibulopthy)和耳鸣。

因此，在一些实施方案中，本发明提供了用于预防或抑制个体毛细胞变性或毛细胞死亡的方法的ppar激动剂，其中毛细胞变性或毛细胞死亡与美尼尔病、急性外周性前庭病和/或耳鸣相关和/或由美尼尔病、急性外周性前庭病和/或耳鸣引起。

在一些实施方案中，本发明提供了用于预防或治疗个体美尼尔病的方法的ppar激动剂。

在一些实施方案中，本发明提供了用于预防或治疗个体急性外周性前庭病的方法的ppar激动剂。

在一些实施方案中，本发明提供了用于预防或治疗个体的耳鸣的方法的ppar激动剂。

由噪声损伤或医疗干预引起的听力损失、毛细胞变性或毛细胞死亡

暴露于大声的噪声通过损害了corti氏器而引起噪声诱导的听力损失(nihl)。nihl的损伤取决于噪声的水平和暴露的持续时间这二者。如果修复机制能够恢复corti氏器，则听力损失可能是暂时的(暂时性阈移，tts)。然而，当毛细胞或神经元死亡时，则听力损失变为永久性的(永久性阈移，pts)。与噪声损伤相关的结构变化有两种类型：(1)突触和/或毛细胞静纤毛的轻度损伤，其可以通过细胞修复机制修复，称为tts和复原，(2)不能通过细胞修复机制修复的引发毛细胞和神经细胞凋亡的严重损伤，称为pts。

本文所述的噪声损伤是足以导致corti氏器损伤的噪声，特别是导致暂时性或永久性听力损失的噪声损伤。暴露于例如至少70db(spl)，至少90db(spl)，至少100db(spl)，至少120db(spl)或至少130db(spl)的声压水平可以引起噪声损伤。

听力损失也可以由医疗干预引起，通常是由在耳中进行的医疗干预引起，例如由耳蜗手术如耳蜗植入引起。

在一些实施方案中，ppar激动剂在个体暴露于噪声损伤或医疗干预之前施用。在一些实施方案中，ppar激动剂在个体暴露于噪声损伤或医疗干预之后施用。在一个具体实施方案中，ppar激动剂在耳蜗手术之前，即在个体经历耳蜗手术之前施用。

由年龄引起的听力损失、毛细胞变性或毛细胞死亡

年龄引起的听力损失在文献中也被称为“年龄相关听力损失”，是听力老化的累积效应。其通常是进行性双侧对称性年龄相关的感觉神经性听力损失。听力损失在较高的频率下最明显。有四种由年龄引起的听力损失的病理类型：

1)感官的：其特征为corti氏器变性。2)神经元的：其特征为螺旋神经节细胞变性。3)纹性的(strial)/代谢性的：其特征在于耳蜗所有回转的血管纹萎缩。4)耳蜗传导的：由于基底膜的硬化，从而影响其运动。

通过本发明的方法预防或治疗的年龄引起的听力损失通常与第一种病理类型相关，即特征为corti氏器变性的听力损失。因此，在一些实施方案中，将ppar激动剂在corti氏器变性之前施用于个体，例如，在毛细胞损伤或细胞凋亡之前和/或在毛细胞变性或毛细胞死亡之前施用。

化学诱导的听力损失、毛细胞变性或毛细胞死亡

听力损失、毛细胞变性或毛细胞死亡可以是化学诱导的，即由化学试剂、例如抗生素、药物、化学治疗剂、重金属或有机物质诱导。可能引起听力损失的抗生素包括例如头孢菌素类如头孢氨苄(keflex)、头孢克洛(ceclor)和头孢克肟(suprax))；氨基糖苷类如庆大霉素、妥布霉素和链霉素；大环内酯类如红霉素、阿奇霉素(zithromax)和克拉霉素；磺胺类如甲氧苄啶-磺胺甲噁唑或四环素类如四环素或多西环素。尤其是在暴露于庆大霉素的个体中，通过本发明的方法有效地预防或治疗了听力损失、毛细胞变性或毛细胞死亡。

化学治疗剂，例如可能引起听力损失、毛细胞变性或毛细胞死亡的抗癌剂包括例如含铂活性剂，例如顺铂和卡铂，优选顺铂。可能引起听力损失、毛细胞变性或毛细胞死亡的药物包括例如呋塞米、奎宁、阿司匹林和其他水杨酸盐类。可能引起听力损失的重金属包括汞、铅等。可能导致听力损失、毛细胞变性或毛细胞死亡的有机试剂包括例如甲苯，二甲苯或苯乙烯。在一些实施方案中，在个体暴露于化学试剂之前，将ppar激动剂施用于个体，从而防止个体发生化学诱导的听力损失、毛细胞变性或毛细胞死亡。在一些实施方案中，在个体暴露于化学试剂之后将ppar激动剂施用于个体，从而治疗具有化学诱导的听力损失、毛细胞变性或毛细胞死亡的个体。

在一个优选的实施方案中，当听力损失是由噪声损伤引起或被化学诱导时，将ppar激动剂在个体暴露于噪声损伤或化学品之前施用于个体，其中预防了由噪声损伤或化学试剂引起的毛细胞细胞损伤的至少50％、优选至少60％、更优选至少70％、特别是至少80％、更特别至少90％。

在本发明的一个方面，本发明提供了用于预防或抑制个体毛细胞变性或毛细胞死亡的方法的ppar激动剂。在本发明的另一个方面，本发明提供预防或抑制个体毛细胞变性或毛细胞死亡的方法，该方法包括向个体施用ppar激动剂。在一些实施方案中，ppar激动剂以足以预防或抑制个体毛细胞变性或毛细胞死亡的量施用于个体。在另一个方面，本发明提供了ppar激动剂在制备用于预防或抑制个体毛细胞变性或毛细胞死亡的药物中的用途。

在一些实施方案中，个体毛细胞变性或毛细胞死亡是由噪声损伤、由年龄、医疗干预、突发性听力损失或缺血性事件如缺血性损伤引起的，或者是化学诱导的，其中化学诱导是由例如抗生素或化学治疗剂引起的。噪声损伤、年龄、医疗干预、突发性听力损失或缺血事件或化学诱导可引起个体的毛细胞变性或毛细胞死亡，所述个体如上文对预防或治疗听力损失的方法中所述。

在一些实施方案中，听力损失、毛细胞变性或毛细胞死亡是由毛细胞损伤引起的。在一些实施方案中，在鉴别所述毛细胞损伤之前，即在发生毛细胞损伤之前，将ppar激动剂施用于个体。在一个优选的实施方案中，当毛细胞损伤是由噪声损伤或化学诱导引起时，将ppar激动剂在个体暴露于噪声损伤或化学试剂之前施用于个体，其中预防了由噪声损伤或化学试剂引起的毛细胞细胞损伤的至少50％、优选至少60％、更优选至少70％、特别是至少80％、更特别至少90％。毛细胞损伤的鉴别/发生通常通过毛细胞状态的评价来确定，其可以如上所述或如实施例中所公开那样容易地实现。

用于本发明方法的药物组合物

本文还提供药物组合物，其包含ppar激动剂和例如用于本文所述方法的药学上可接受的稀释剂、赋形剂或载体。因此，在另一个方面，本发明提供了用于预防或治疗个体听力损失的方法的ppar激动剂，其中将所述ppar激动剂作为药物组合物施用于个体，所述药物组合物包含ppar激动剂和药学上可接受的稀释剂、赋形剂或载体。本发明还提供了包含ppar激动剂和药学上可接受的稀释剂、赋形剂或载体的药物组合物，其用于预防或治疗个体听力损失的方法。在一些实施方案中，将药物组合物以足以预防或治疗个体的听力损失的量施用于个体。在另一个方面，本发明提供了预防或治疗个体听力损失的方法，该方法包括向个体施用包含ppar激动剂和药学上可接受的稀释剂、赋形剂或载体的药物组合物。在一些实施方案中，将药物组合物以足以预防或治疗个体的听力损失的量施用于个体。在另一个方面，本发明提供了包含ppar激动剂和药学上可接受的稀释剂、赋形剂或载体的药物组合物在制备用于预防或治疗个体的听力损失的药物中的用途。

在另一个方面，本发明提供了用于预防或抑制个体毛细胞变性或毛细胞死亡的方法的ppar激动剂，其中将所述ppar激动剂作为药物组合物施用于个体，所述药物组合物包含ppar激动剂和药学上可接受的稀释剂、赋形剂或载体。本发明还提供了包含ppar激动剂和药学上可接受的稀释剂、赋形剂或载体的药物组合物，其用于预防或抑制个体毛细胞变性或毛细胞死亡的方法。在一些实施方案中，将药物组合物以足以预防或抑制个体毛细胞变性或毛细胞死亡的量施用于个体。在另一个方面，本发明提供了预防或抑制个体毛细胞变性或毛细胞死亡的方法，该方法包括向个体施用包含ppar激动剂和药学上可接受的稀释剂、赋形剂或载体的药物组合物。在一些实施方案中，将药物组合物以足以预防或治疗个体的听力损失的量施用于个体。在另一个方面，本发明提供了包含ppar激动剂和药学上可接受的稀释剂、赋形剂或载体的药物组合物在制备用于预防或抑制个体毛细胞变性或毛细胞死亡的药物中的用途。

在一些实施方案中，药物组合物包含其它药物或药剂、稀释剂、赋形剂、载体、辅助剂、如防腐剂、稳定剂、润湿剂或乳化剂、增溶剂、用于调节渗透压的盐和/或缓冲剂。稀释剂为例如水、二醇、油或醇。载体为例如淀粉或糖类。赋形剂为例如表面活性物质、乳化剂、稳定剂、防腐剂、矫味剂或填充剂。

在其它实施方案中，药物组合物还含有其它治疗物质。任选地，药物组合物中包含耳保护剂，如抗氧化剂、α硫辛酸、钙、磷霉素或铁螯合剂，以对抗可能由使用特定治疗剂或赋形剂、稀释剂或载体而引起的潜在的耳毒性作用。

在一些实施方案中，药物组合物包含染料，以在施用时有助于提高药物组合物的可视性。在其它实施方案中，药物组合物还包含一种或多种ph调节剂或缓冲剂，以提供内淋巴或外淋巴适合的ph。合适的ph调节剂或缓冲剂包括但不限于乙酸盐、碳酸氢盐、氯化铵、柠檬酸盐、磷酸盐、其药学上可接受的盐或其组合或组合。所述ph调节剂和缓冲剂的含量为将组合物的ph保持在约5至约9的ph所需的量，在优选的实施方案中保持在约6.5至约7.5的ph。

施用和治疗方式

递送到内耳和/或中耳的药物通过口服、静脉内或肌内途径全身施用。本文所述方法中使用的ppar激动剂或药物组合物通常口服施用、局部施用于耳中或通过注射至内耳中和/或中耳中施用、优选通过注射至中耳中施用。对于某些施用途径，例如注射至内耳中和/或注射至中耳中，可以使用缓释系统。在一些施用途径中，通过转运增强剂促进活性成分的渗透，如透明质酸、dmso。在一些施用途径中，特别是当ppar激动剂或药物组合物通过注射至内耳中和/或中耳中来施用时，使用触变性(tixotropic)或热胶凝(thermogeling)制剂以保证无痛施用和形成凝胶或高粘性组合物来确保活性成分延长和持续释放至内耳和/或中耳中。在一些施用途径中，特别是当ppar激动剂或药物组合物作为耳滴施用时，可以使用增强穿透皮肤而使得耳朵部位的ppar局部活化的制剂。

可以将ppar激动剂或药物组合物定位为与蜗窗嵴(cristafenestraecochlea)、圆窗、鼓室、鼓膜、中耳或外耳接触。在进一步或替代实施方案中，ppar激动剂或药物组合物可以通过鼓室内注射施用于圆窗膜上或附近。在其它实施方案中，通过经耳后切口和手术操作进入圆窗或蜗窗嵴区域内或其附近，来将ppar激动剂或药物组合物施用于圆窗或蜗窗嵴上或附近。或者，将ppar激动剂或药物组合物通过注射器和针头施用，其中针头穿过鼓膜并被引导到圆窗或蜗窗嵴的区域。然后将ppar激动剂或药物组合物沉积在圆窗或蜗窗嵴上或附近，用于局部治疗。

优选地，将本文所述的ppar激动剂或药物组合物通过鼓室内注射施用于内耳和/或中耳中，优选中耳中。治疗剂的鼓室内注射是将药剂注射至鼓膜后面进入中耳中和/或内耳中、优选进入中耳中的技术。

在一个实施方案中，将本文所述的组合物通过经鼓室(transtympanic)注射直接施用于圆窗膜上。在另一个实施方案中，将本文所述的耳可接受的组合物通过到达耳内的非鼓室途径施用于圆窗膜上。在另外的实施方案中，将本文所述的组合物通过到达圆窗膜的外科手术方法施用至圆窗膜上，其包括对蜗窗嵴的修饰。

在一个实施方案中，递送系统是能够刺穿鼓膜并直接达到内耳的圆窗膜或蜗窗嵴的注射器和针头装置。

在一些实施方案中，递送装置是设计用于向中耳和/或内耳施用治疗剂的装置。仅作为示例：gyrusmedicalgmbh提供微型耳镜，用于圆窗龛的可视化和药物递送至圆窗龛；arenberg已经在美国专利编号5,421,818；5474529；和5,476,446中描述了将流体递送到内耳结构的医疗装置。美国专利申请编号08/874,208描述了一种用于植入流体递送导管以将治疗剂递送到内耳的手术方法。美国专利申请公开2007/0167918进一步描述了一种用于鼓室内液体取样和药物应用的组合式耳抽吸器和药物分配器。

本文描述的ppar激动剂或药物组合物可用于外科手术，包括以下非限制性实例，耳蜗手术、迷路切开术、乳突切除术、镫骨切除术、内淋巴球囊切开术等。在优选的实施方案中，在外科手术之前、特别是在耳蜗手术之前施用本文所述的ppar激动剂或药物组合物。

施用本文所述的ppar激动剂或药物组合物用于预防性和/或治疗性治疗。预防性治疗包括防范性治疗(prophylactictreatments)。在预防性应用中，将ppar激动剂或药物组合物施用于怀疑患有本文所述的疾病、障碍或病症或处于发展为本文所述的疾病、障碍或病症的风险的个体。在治疗应用中，将ppar激动剂或药物组合物以足以治愈或至少部分阻止本文所述疾病、障碍或病症的症状的量施用于个体，例如已经患有本文公开的障碍的患者。对该应用有效的量将取决于所述疾病、障碍或病症严重性和病程、先前的治疗、个体的健康状况和对药物的反应以及治疗医师的判断。

在个体的状况没有改善的情况下，ppar激动剂或药物组合物的施用可以长期施用，其为长时间的，包括在个体的整个生命期间，以改善或以其他方式控制或限制个体的疾病或病症的症状。

在个体的状况确实改善的情况下，可以连续给予ppar激动剂或药物组合物的施用；或者，所施用的药物的剂量可以暂时减少或暂时停止一段时间(即，“休药期”)。

一旦发生了患者耳部病症的改善，必要时施用维持性的ppar激动剂或药物组合物剂量。随后，将施用剂量或频率或两者任选地减少(作为症状的函数)至维持改善的疾病、障碍或病症的水平。

在一些优选的实施方案中，ppar激动剂或药物组合物通过单次注射施用于内耳中和/或中耳中，优选通过单次鼓室内注射至内耳中、然后口服施用或者通过单次鼓室内注射至中耳中、然后口服(这是优选的)，或作为滴耳剂渗透至内耳中而施用。可以长期地提供口服施用，其为长时间的，包括个体整个生命期间。在长期治疗后的一些实施方案中，例如，在采用口服施用的长期治疗后，听力基于从静息状态重新激活毛细胞而增加。在长期治疗后的一些实施方案中，例如，在采用口服施用的长期治疗后，听力基于ppar活化后毛细胞数量或毛细胞功能的增加而增加。

施用的ppar激动剂的量将取决于以下因素而变化：如具体化合物、疾病状况及其严重性而变化，并根据病例的具体情况而变化，包括例如施用的具体ppar激动剂、施用途径、治疗的病症、治疗的目标区域和被治疗的个体或宿主。

在一些实施方案中，ppar激动剂以在使用ppar激动剂治疗糖尿病所需剂量以下的剂量施用于个体。在一些实施方案中，将ppar激动剂以比为治疗糖尿病所评价和测试的最高剂量低8-20倍的剂量施用于个体，特别是比为治疗人类糖尿病所评价和测试的最高剂量低8-20倍的剂量。为治疗人类糖尿病所评价和测试的最高剂量，例如对于pparγ激动剂如吡格列酮而言，通常在约30-45mg/天的范围内。在一些实施方案中，在所使用的ppar剂量没有出现在治疗糖尿病中见到的副作用。

在一些实施方案中，将ppar激动剂以在ppar激动剂的抗糖尿病或抗血脂异常作用的活性剂量以下的剂量、特别是以在ppar激动剂在人类中的抗糖尿病或抗血脂异常作用的活性剂量以下的剂量施用于个体。

在一些实施方案中，将ppar激动剂、通常为pparγ激动剂、pparα激动剂和/或pparα/γ双重激动剂、优选pparγ激动剂、更优选吡格列酮以0.05-30mg/天、优选0.1-10mg/天、更优选0.5-5mg/天的剂量口服施用于人。

在一些实施方案中，将ppar激动剂、通常为pparγ激动剂、pparα激动剂和/或pparα/γ双重激动剂、优选pparγ激动剂、更优选吡格列酮通常以0.001％w/v至10％w/v的浓度、优选0.005％w/v至5％w/v的浓度、更优选0.01％w/v至2％w/v的浓度局部施用于人耳中。通常施用50μl至1ml、优选1ml含有ppar激动剂的溶液。

在一些实施方案中，将ppar激动剂、通常是pparγ激动剂、pparα激动剂和/或pparα/γ双重激动剂、优选pparγ激动剂、更优选吡格列酮通过注射至内耳中和/或中耳中，以每单次注射0.005％w/v至10％w/v、优选0.01％w/v至5％w/v的浓度通过注射施用于人。通常通过单次注射来注射50μl至1ml、优选1ml含有ppar激动剂的溶液。

本发明中还包括鉴别怀疑患有听力损失、毛细胞变性或毛细胞死亡或处于发展为听力损失、毛细胞变性或毛细胞死亡的风险的患者的方法。在一些实施方案中，通过测定血清和/或血浆脂联素水平，特别是测定高分子量脂联素水平来鉴别怀疑患有听力损失、毛细胞变性或毛细胞死亡或处于发展为听力损失、毛细胞变性或毛细胞死亡的风险的患者。在一些实施方案中，通过血清和/或血浆脂联素水平的测定来实现治疗成功的监测和/或个体的鉴别，例如怀疑患有听力损失、毛细胞变性或毛细胞死亡或处于发展为听力损失、毛细胞变性或毛细胞死亡的风险的个体的鉴别。

药盒/制品

本公开还提供了在个体、优选人中用于预防或治疗听力损失和/或预防或抑制的毛细胞变性或毛细胞死亡的药盒。所述药盒通常包含本文公开的一种或多种ppar激动剂或药物组合物，以及用于该药盒的说明书。本公开还涉及本文公开的一种或多种ppar激动剂或药物组合物在制备药物中的应用，所述药物用于在患有或怀疑患有听力损失、毛细胞变性或毛细胞死亡或者处于发展为听力损失、毛细胞变性或毛细胞死亡的风险的哺乳动物中、如人中来治疗、减轻、减少或改善疾病、功能障碍或病症的症状。

在一些实施方案中，药盒包括被分隔成容纳一个或多个容器(例如小瓶，管等)的载体、包装或容器，每个容器包括要用于本文所述方法的分开的元件中的一个。合适的容器包括例如瓶、小瓶、注射器和试管。在其他实施方案中，容器由诸如玻璃或塑料的各种材料形成。

本文提供的制品通常包含本文公开的一种或多种ppar激动剂或药物组合物和包装材料。药物包装材料的实例包括但不限于泡罩包装、瓶、管、吸入器、泵、袋、小瓶、容器、注射器、瓶以及适于所选组合物并适于预期的施用和治疗模式的任何包装材料。

实施例

实施例1：防止抗生素诱导的毛细胞损伤

corti氏器从出生后第5天的sprague-dawley大鼠获得，并置于器官培养物中。在培养48小时后，庆大霉素处理导致50-70％的毛细胞损失。吡格列酮联合治疗是保护性的，几乎完全防止了庆大霉素依赖性毛细胞损失，并且在很大程度上保持了器官形态。

方法

动物操作

所有动物手术均按照瑞士巴塞尔的kantonales批准的方案进行。使用出生后5天(p5)的sprague-dawley大鼠进行研究。使用来自p5动物的corti氏器(oc)外植块在体外进行研究。处死动物，并小心地解剖耳蜗以将corti氏器与螺旋神经节、血管纹状体和赖斯纳氏膜分离[sobkowiczhm,loftusjm,slapnicksm.actaotolaryngolsuppl.1993；502:3-36]。

组织培养

收获oc，然后置于培养基[补充有10％fcs、25mmhepes和30u/ml青霉素(invitrogen，carlsbad，ca，美国)的dulbecco改良的eagle培养基]中，并在37℃在95％o2/5％co2的气氛中孵育24小时。之后，将该培养基用不含化合物的新鲜培养基或仅含200μm庆大霉素的新鲜培养基或含具有2或10μm吡格列酮的200μm庆大霉素的新鲜培养基进行替换，并在37℃下再孵育48小时。每个处理条件使用10个oc外植块。

毛细胞计数

用化合物孵育后，将oc固定在4％低聚甲醛中，洗涤，然后用荧光素(fitc)缀合的鬼笔环肽(phalloidin)染色，以检测内毛细胞和外毛细胞。染色后，使用荧光显微镜(olympusfsx100)将oc显像并拍照。对各corti氏器的顶转、底转和中转的外毛细胞和内毛细胞分别定量。对用于每个条件的10个oc，将每个回转的值平均。使用方差分析(anova)、然后使用最小显著性差异(lsd)事后检验(statview5.0)来确定各处理组之间ohc和ihc的显著性差异。与小于0.05的p值相关的差异被认为具有统计学意义。所有数据以平均值±sd表示。

结果

未处理的corti氏器在培养48小时后保存完好，其中存在完整有序的外毛细胞(ohc)和内毛细胞(ihc)的行列。单独使用2或10μm的吡格列酮处理对毛细胞数量或形态没有影响，表明吡格列酮没有直接的副作用(图1a-c)。相比之下，庆大霉素200微克处理导致毛细胞几乎完全破坏和丧失(图1a-c)。2和10μm的吡格列酮均能够拮抗庆大霉素的作用并保持毛细胞数量和形态(图1a-c)。进行定量图像分析，分别计算每个corti氏器的顶转、底转和中转的ihc和ohc。虽然庆大霉素处理导致每个片段毛细胞数量一致减少约50-70％，但两种浓度的吡格列酮都能够完全防止在所有回转中的庆大霉素依赖性毛细胞损失。

实施例2：防止噪声诱导的听力损失

将吡格列酮的制剂或单独的介质施用于豚鼠的中耳。然后将动物暴露于噪声损伤(宽频噪声4-20khz，115db(spl))，并在7-14天后进行标准频率范围内的听觉敏感度记录。将听力测试中获得的结果与损伤前的基线值比较。吡格列酮保护了听力，导致吡格列酮处理的动物相对于介质对照的阈移减少了>50％。

方法

动物操作

豚鼠模型是听力研究中优选的动物物种。在全身麻醉下施加药物应用以及噪声损伤。动物到达后在实验前经历至少一周的驯化期。在12h/12h光照/黑暗循环的温度和湿度控制的环境中，成对饲养动物，不限制食物和水。该方案经德国柏林政府动物使用委员会批准。

首先麻醉豚鼠，然后通过标准abr方法评估听力，然后分入处理组。每只动物双耳接受测试物质的单次圆窗应用。第二天，在麻醉下将动物暴露于115db宽频噪声2小时。在噪声暴露后一周和两周，动物进行了第二次听力评价。

在噪声暴露前的那一天，将单次40μl的吡格列酮制剂或匹配的介质施用于动物双耳的耳蜗圆窗上。对于这种方法，在颅骨的嘴侧部分钻一个孔，以直接达到bulla，这使得能在目视操纵下将药物施用于圆窗。

在麻醉(60mg/kg氯胺酮和6mg/kg赛拉嗪)下，在115db声压级(spl)，将动物在隔音室(0.8x0.8x0.8m，最小衰减60db)中噪声暴露于宽频白噪声(5-20khz)2小时。噪声由位于动物头部上方的扬声器(htc11.19；visaton，haan，德国)向双耳传送。将扬声器与音频放大器(tangentamp-50；aulum，丹麦)和dvd播放器连接。

听力评价

在噪声暴露之前的基线和噪声后第7天和第14天，对所有处理的动物和对照动物记录频率特异性(2；4；8；12；16；20；24；28；32；36；40；40；40khz)听性脑干反应(abr)。听觉刺激用正弦波发生器(ssu2型；werkfernmeldewesen，berlin，德国)在不同的spl下双耳传递。使用数字计数器(1941adigitalcounter；fluke，scarborough，ontario，加拿大)控制和调整频率输出。将皮下针电极放置在颅顶(记录电极)、乳突(参考电极)和一只脚(地面电极)中。用vikingiv-测量系统(viasyshealthcare，conshohocken，宾夕法尼亚)进行abr记录。将脑干反应放大(100,000x)，过滤(带通0.15-3khz)，并平均(300x)，其通过vikingiv系统进行。通过改变信号放大的衰减，在不同声强下测定abr波的振幅。对每个测试频率计算振幅-增长函数，并将线性回归拟合到数据的线性部分。可以通过将回归线的线性振幅-增长函数外推至零来计算每个频率的听阈。从这些数据中，使用平均值计算对照和噪声暴露动物之间的阈值差异(平均阈移)。结果表示为实验组与对照组相比的平均相对听力损失(±sd)(分贝)(db)。

结果

在一周时，介质处理的动物在噪声攻击(5-20khz)的频率范围内显示出31.9±2.2db(平均值±sd)的显著的平均听力损失。吡格列酮对噪声引起的听力损失提供了大约60％的显著保护，只有12.7±1.3db(平均值±sd)的中等的阈移(图2)。

在两周时，注意到两组均有轻微恢复。介质处理的动物在两周时显示出27.3±12.6db(平均值±sd)的显著的平均听力损失。吡格列酮处理的动物在两周时仅显示6.3±3.9db的(平均值±标准差)的中等的阈移(图2)。这些数据表明了吡格列酮保护听力的效用。

实施例3：通过双重pparα/γ激动剂和pparα选择性激动剂防止抗生素诱导的毛细胞损伤

该实验类似于实施例1中的实验进行。庆大霉素处理，在暴露于培养的小鼠oc24小时后，导致50％的毛细胞损失。用双重pparα/γ激动剂莫格列扎和替格列扎以及用pparα选择性激动剂非诺贝酸处理，防止庆大霉素依赖性毛细胞损失。

方法

该方法与实施例1的方法相似。主要区别在于使用小鼠oc而不是大鼠oc。此外，用50μm庆大霉素进行24小时处理。每个实验条件使用的oc数量为3-5。测试物质替格列扎和莫格列扎的浓度为2μm和10μm，非诺贝酸为25μm和150μm。

结果

未处理的corti氏器培养24小时后完好保存,存在完整有序的外毛细胞(ohc)和内毛细胞(ihc)行列。单独的测试物质和任何浓度均没有对毛细胞数量或形态有影响，表明没有直接的不利影响(图3a-c)。相反，50μm庆大霉素治疗导致毛细胞约50％的损失(图3a-c)。2和10μm的替格列扎均能够拮抗庆大霉素的作用并保持毛细胞数量和形态(图3a)。莫格列扎在2μm时没有效果，但在10μm时是部分保护的(图3b)。非诺贝酸在25μm时无效，但在150μm时是完全保护的(图3c)。