包含有机酸的组合的组合物的制作方法
本发明涉及包含有机酸的组合的组合物及其用途。在某些实施方案中，本发明涉及包含琥珀酸和乌头酸的组合的组合物以及此类组合物用于破坏生物膜的用途。
背景技术：
已经认定了有机酸以及它们组合用于多种组合物中，包括用于口腔护理的组合物中。例如，国际公布第wo2012/001347号描述了口腔健康组合物，该组合物包含香菇、菊苣和/或树莓的提取物以及来源于该提取物的低摩尔质量级分。所述的这些组合物可包含或可补充有以下化合物中的一种或多种：奎尼酸、腺苷、肌苷、反式乌头酸、顺式乌头酸、草酸、腺苷和琥珀酸。虽然该参考文献通过若干作用机理来要求保护其组合物的抗生物膜效应，但是并未公开由以上化合物的任何特定组合产生的意料不到的益处。
技术实现要素：
申请人意外地发现有机酸的某些组合可经组合以制备趋于表现出显著和意想不到益处(包括增加的生物膜破坏)的组合物。
根据某些实施方案，本发明涉及包含琥珀酸、乌头酸和载体的组合物，其中琥珀酸和乌头酸以约0.9:1至约40:1的比率存在。
根据某些其它实施方案，本发明还涉及破坏生物膜的方法，该方法包括将受本发明权利要保护的组合物施用到具有生物膜的表面。
根据某些其它实施方案，本发明涉及从表面除去生物膜的方法，该方法包括将受本发明权利要求保护的组合物施用到具有生物膜的表面。
根据某些其它实施方案，本发明涉及减少表面细菌附着的方法，该方法包括将受本发明权利要求保护的组合物施用到表面。
附图说明
图1是在总浓度21mm(0.25至0.37％w/w，取决于sa与aa的比率，参见表7)下处于不同比率的含琥珀酸(sa)和乌头酸(aa)的制剂在多次处理(与水相比)后生物膜的除去百分比与细菌附着(与水相比)的减少百分比的曲线图。
图2是在总浓度21mm(0.25至0.37％w/w，取决于sa与aa的比率，参见表7)下处于不同比率(与图1中的那些不同)的含琥珀酸(sa)和乌头酸(aa)的制剂在多次处理(与水相比)后生物膜的除去百分比与细菌附着(与水相比)的减少百分比的曲线图。
具体实施方式
除非另外特别提及，否则本说明书中列出的所有百分比均为固体/活性物质的量按重量计的百分比。
如上所述，申请人已意外地发现，在载体中包含琥珀酸和乌头酸两者的组合的组合物倾向于表现出优于其它有机酸的组合的显著益处。具体地，在某些实施方案中，申请人已经发现此类组合物表现出在破坏生物膜方面的显著增加。更具体地，如下文进一步描述并且在表和附图中示出的，申请人已经发现，相比于其它有机酸的组合，琥珀酸和乌头酸的组合倾向于在以下两方面表现出均显著增加：(a)生物膜的除去百分比和(b)细菌附着的减少百分比。申请人注意到，如本文所用的“破坏生物膜”是指从表面除去生物膜，减少表面细菌附着或两者。
任何合适的琥珀酸均可用于本发明中。琥珀酸(通过iupac系统名称也被称为丁二酸，或历史名称“琥珀的精神”)是具有化学式c4h6o4和结构式hooc-(ch2)2-cooh的双质子二羧酸。本文所使用的琥珀酸可为天然的或合成来源的。在某些实施方案中，琥珀酸是合成来源的。琥珀酸的可商购获得的来源包括acrosorganics、阿法埃莎公司(alfaaesar)、飞世尔化工公司(fisherchemical)、fluka、mpbiomedicals、西格玛奥德里奇公司(sigmaaldrich)、斯百全化学公司(spectrumchemicals)和梯希爱精细化工(tcifinechemicals)。
任何合适的乌头酸均可用于本发明中。乌头酸(通过iupac系统名称也称为丙-1-烯-1,2,3-三羧酸或历史名称蓍草酸、即问荆酸、乌头酸(citridinicacid)或焦柠檬酸)是这样的有机酸，其具有化学式c6h6o6和结构式ho2cch＝c(co2h)ch2co2h并且具有两种异构体：顺式乌头酸和反式乌头酸。在某些实施方案中，使用反式乌头酸。在其它实施方案中，使用顺式乌头酸。本文所使用的乌头酸可为天然的或合成来源的。在某些实施方案中，乌头酸是合成来源的。乌头酸的可商购获得的来源包括阿法埃莎公司、fluka、mpbiomedicals、parchemfine&specialtychemicals、西格玛奥德里奇公司、斯百全化学公司和梯希爱精细化工。
任何合适的量以及比率的琥珀酸和乌头酸均可用于本发明的组合物中。如本领域技术人员将认识到的，基于本发明中所使用的琥珀酸和乌头酸相应pka值，它们在多数ph下将与它们相应盐形式平衡。因此，本文所述和受权利要求保护的琥珀酸和乌头酸所有的量和比率是指特定组合物中处于其酸和盐这两种形式的此类酸的总量。例如，基于组合物的总重量计，包含0.2％w/w琥珀酸的组合物具有0.2％w/w的处于其酸和盐形式的组合固体/活性琥珀酸的总量。基于组合物的总重量计，包含总组合量为1％w/w的琥珀酸和反式乌头酸的组合物包含1％w/w的处于其酸和盐形式的琥珀酸以及处于其酸和盐形式的反式乌头酸的组合固体/活性量。
在某些实施方案中，琥珀酸和乌头酸以总组合量存在于组合物中，该总组合量能够有效地预防和破坏口腔中生物膜形成并且在该总组合量下组合物稳定。一般来讲，基于组合物的总重量计(％w/w)，该组合物含有总组合量为约0.1重量％至约2重量％的琥珀酸和乌头酸。在某些实施方案中，琥珀酸和乌头酸的总组合量为组合物的约0.1％w/w至约1％w/w，或组合物的约0.1％w/w至约0.9％w/w，或组合物的约0.1％w/w至约0.5％w/w，或组合物的约0.1％w/w至约0.3％w/w。在某些实施方案中，组合物包含占组合物的约0.13％w/w至约0.89％w/w、占组合物的约0.13％w/w至约0.52％w/w，或占组合物的约0.13％w/w至约0.3％w/w的琥珀酸和乌头酸的总组合量。
一般来讲，本发明组合物中琥珀酸与乌头酸的比率(琥珀酸：乌头酸)为约0.9:1至约40:1。在某些实施方案中，琥珀酸与乌头酸的比率为约0.9:1至约20:1，或约0.9:1至约14:1或约0.9:1至约9:1，或约0.9:1至约6:1，或约0.9:1至约4:1。在某些实施方案中，琥珀酸与乌头酸的比率为约1.1:1至约20:1，或约2.5:1至约20:1，或约6:1至约20:1，或约1.1:1至约14:1，或约2.5:1至约14:1，或约6:1至约14:1，或约1.1:1至约9:1，或约2.5:1至约9:1，或约6:1至约9:1。在某些实施方案中，琥珀酸与乌头酸的比率为约1.3:1至约20:1，或约1.3:1至约13:1，或约1.3:1至约8.33:1，或约1.3:1至约6:1，或约2.5:1至约13:1，或约2.5:1至约8.33:1，或约2.5:1至约6:1，或约6:1至约8.33:1，或约4:1至约5.5:1。在某些优选实施方案中，琥珀酸与乌头酸的比率为约0.9:1至约14:1。
在本发明的组合物中可使用各种口服可接受的载体中的任一种。载体可为水性的或非水的。水性载体通常为水，但是也可采用水/醇混合物。在某些实施方案中，(适量，拉丁语“所需要的”)水被加入到组合物中。在某些实施方案中，按组合物的重量计，水相占约60％至约95％，或约75％至约90％。在某些实施方案中，水以约60％至约95％，或约75％至约95％的量存在。另选地，可将本发明的组合物配制成干粉、口香糖、膜、半固体、固体或液体浓缩物形式。在此类实施方案中，例如，就液体浓缩物或粉末状制剂而言，在必要时添加适量的水，或者可用本领域已知的标准蒸发方法除去水以制备干粉形式的组合物。脱水的或冻干的形式对储存和运输有利。
在一些实施方案中，醇可被加入到组合物中。在本发明中可使用由式r3-oh表示的多种醇中的任一种，其中r3为具有2至6个碳的烷基基团。合适的式r3-oh的醇的示例包括乙醇；正丙醇、异丙醇；丁醇；戊醇；己醇，以及它们中两种或更多种的组合等。在某些实施方案中，醇是乙醇或包含乙醇。
在一些实施方案中，醇可以以总组合物的约10.0％v/v或更多，或总组合物的约10.0％至约35.0％v/v，或总组合物的约15.0％至约30.0％v/v的量存在于组合物中，并且可为总组合物的约20.0％至约25.0％v/v。
在一些实施方案中，组合物可包含含量降低的醇。术语“含量降低的”醇是指按总组合物的体积计，约10％v/v或更低、或约5％v/v或更低、或约1.0％v/v或更低、或约0.1％v/v或更低的r3-oh醇的量。在某些实施方案中，本发明的组合物不含r3-oh醇。
本发明的组合物的ph优选地小于7。在某些实施方案中，组合物的ph为约3至小于7，或约3.5至小于7，或约3.5至约6.5，或约3.5至约5.5，或约3.5至约5。
如本领域技术人员将认识到的，组合物的ph可使用缓冲剂来调整或实现，该缓冲剂的量可以有效地提供ph低于7的组合物。组合物可任选地包含至少一种ph调节剂，在本文中有用的调节剂包括降低ph的酸化剂，提高ph的碱化剂，以及将ph控制在所需范围内的缓冲剂。例如，可以包含一种或多种选自酸化剂、碱化剂和缓冲剂的化合物以提供约2至约7的ph，或在各种实施方案中提供约3至约6或约4至约5的ph。可以使用任何口服可接受的ph调节剂，包括但不限于羧酸和磺酸、酸盐(例如柠檬酸一钠、柠檬酸二钠、苹果酸一钠等)、碱金属氢氧化物诸如氢氧化钠、硼酸盐、硅酸盐、咪唑以及它们的混合物。一种或多种ph调节剂任选以有效地将组合物维持在口服可接受的ph范围内的总量存在。在某些实施方案中，无机酸可以用作被加入到组合物中的缓冲剂。
在某些实施方案中，有机酸可以用作被加入到组合物中的缓冲剂。适用于本发明组合物的有机酸包括但不限于抗坏血酸、山梨酸、柠檬酸、乙醇酸、乳酸和乙酸、苯甲酸、水杨酸、邻苯二甲酸、苯酚磺酸以及它们的混合物，任选地，有机酸选自由苯甲酸、山梨酸、柠檬酸以及它们的混合物组成的组，或者任选地，有机酸为苯甲酸。
通常，酸性缓冲剂的量在组合物的约0.001％(或约0.001％w/v)至约5.0％(或约5.0％w/v)之间。在某些实施方案中，有机酸缓冲剂以组合物的0.001％(或约0.001％w/v)至1.0％w/v(或约1.0％w/v)，或在约0.100％(或约0.100％w/v)至约1.0％(或约1.0％w/v)之间的量存在。
本发明的组合物还可包含在其中的多种任选成分中的任一种，该成分包括但不限于油性组分、活性成分、附加的表面活性剂、湿润剂、溶剂、风味剂、甜味剂、着色剂、防腐剂、ph调整剂、ph缓冲剂等。
在本发明的组合物中可以使用多种油性组分中的任一种。油性组分可以包含任一种或多种油，或其它水不溶性或基本上不溶于水的材料，这意味着其在25℃下的水中的溶解度按重量计小于约1％，或任选地小于约0.1％。在某些实施方案中，本发明的油性组分包含至少一种精油、至少一种风味油或它们中两种或更多种的组合，基本上由或由至少一种精油、至少一种风味油或它们中两种或更多种的组合组成，该至少一种精油即为通常含有挥发性化合物的植物来源的天然或合成(或它们的组合)浓缩疏水性材料。合适的精油、风味油及其用量的示例如下所述。在某些实施方案中，组合物包含约0.05％w/w或更高、约0.1％w/w或更高、或者约0.2％w/w或更高的油性组分的油性组分总量。
在某些实施方案中，本发明的组合物包含精油。精油是挥发性芳香油，其可为合成的或可通过蒸馏、压榨或提取来源于植物，并且通常携带获得它的植物的气味或风味。可用的精油可提供防腐活性。这些精油中的一些还充当风味剂。可用的精油包括但不限于柠檬醛(citra)、百里酚、薄荷醇、水杨酸甲酯(冬青油)、桉树脑、香芹酚、樟脑、茴香脑、香芹酮、丁子香酚、异丁子香酚、柠檬烯、奥辛(osimen)、正癸醇、香茅醛、a-salpineol、乙酸甲酯、乙酸香茅酯、甲基丁子香酚、桉油醇、芳樟醇、乙内酯醇、safrola香草醛、留兰香油、薄荷油、柠檬油、橙油、鼠尾草油、迷迭香油、肉桂油、甜椒油、月桂油、雪松叶油、龙胆油、马鞭草烯酮、茴香油、桂花油、苯甲醛、香柠檬油、苦杏仁、氯代百里酚、肉桂醛、香茅油、丁香油、煤焦油、桉树油、愈创木酚、诸如扁柏油酚的托酚酮衍生物、薰衣草油、芥子油、苯酚、水杨酸苯酯、松油、松针油、黄樟油、穗薰衣草油、苏合香、百里香油、妥卢香脂、松节油、丁香油以及它们的组合。
在某些实施方案中，精油选自由百里酚((ch3)2chc6h3(ch3)oh，也称为异丙基间甲酚)、桉树脑(c10h18o，也称为桉油醇)、薄荷醇(ch3c6h9(c3h7)oh，也称为六氢化百里酚)、水杨酸甲酯(c6h4ohcooch3，也称为冬青油)，这些化合物中的每一种的异构体，以及它们中两种或更多种的组合组成的组。在一些实施方案中，本发明的组合物含有百里酚。在一些实施方案中，本发明的组合物含有薄荷醇。在一些实施方案中，组合物含有所有四种这些精油。
在某些实施方案中，百草酚以组合物的约0.0001％至约0.6％w/v，或约0.005％至约0.07％w/v的量采用。在某些实施方案中，桉树脑可以组合物的约0.0001％至约0.51w/v，或约0.0085％至约0.10％w/v的量采用。在某些实施方案中，薄荷醇以组合物的约0.0001％至约0.25％w/v，或约0.0035％至约0.05％w/v的量采用。在某些实施方案中，水杨酸甲酯以组合物的约0.0001％至约0.28％w/v，或约0.004％至约0.07％w/v的量采用。在某些实施方案中，所公开的组合物中存在的所有此类精油的总量可为组合物的约0.0004％至约1.64％w/v，或约0.0165％至约0.49％w/v。
在某些实施方案中，提供氟化物的化合物可存在于本发明的漱口液组合物中。这些化合物可微溶于水或可完全溶于水，并且其特征在于其在水中释放氟离子或含氟离子的能力。典型的提供氟化物的化合物是无机氟化盐诸如可溶性碱金属盐、碱土金属盐和重金属盐，例如氟化钠、氟化钾、氟化铵、氟化铜、氟化锌、氟化锡、氟化亚锡、氟化钡、六氟硅酸钠、六氟硅酸铵、氟锆酸钠、单氟磷酸钠、单氟磷酸铝和二氟磷酸铝以及氟化焦磷酸钠钙。还可使用氟化胺类，诸如n'-十八烷基三亚甲基二胺-n,n,n'-三(2-乙醇)-二氢氟化物和9-十八烯胺-氢氟化物。在某些实施方案中，提供氟化物的化合物通常以足以释放按组合物的重量计至多约5％、或约0.001％至约2％、或约0.005％至约1.5％的氟化物的量存在。
在某些实施方案中，可以将灵敏度降低剂，诸如组合物的约0.1％至约5.0％w/v的量的硝酸盐和草酸盐的钾盐并入本发明中。其它钾释放化合物也是可行的(例如kcl)。高浓度的磷酸钙还可提供某些额外的灵敏度减轻效果。这些试剂据信通过在牙齿表面上形成封闭表面的矿物沉积或通过为牙齿内的神经提供钾以使神经去极化来发挥作用。关于合适的灵敏度降低剂的更详细的讨论可以参见授予hodosh的us2006/0013778和授予markowitz等人的美国专利6,416,745，所述专利全文均以引用方式并入本文。
在某些实施方案中，具有抗牙结石益处的化合物(例如各种羧酸盐、聚天冬氨酸等)可以并入本发明中。也可用作抗牙结石剂的是阴离子聚合物型聚羧酸盐。此类材料是本领域所熟知的，以它们的游离酸形式或者部分中和的或优选完全中和的水溶性碱金属(例如钾，优选钠)盐或铵盐的形式使用。优选的是分子量(m.w.)为约30,000至约1,000,000的马来酸酐或马来酸与另一种可聚合的烯键式不饱和单体(优选甲基乙烯基醚(甲氧基乙烯))的按重量计1:4至4:1的共聚物。这些共聚物可例如作为gaf化学公司(gafchemicalscorporation)的gantrez25an139(m.w.500,000)、an119(m.w.25,000)和优选地s-97药品等级(m.w.70,000)得到。
附加的抗牙结石剂可选自由以下项组成的组：多磷酸酯(包括焦磷酸酯)及其盐，聚氨基丙磺酸(amps)及其盐；聚烯烃磺酸酯及其盐；聚乙烯基磷酸酯及其盐；聚烯烃磷酸酯及其盐；二膦酸酯及其盐；膦酰基烷基羧酸及其盐；聚膦酸酯及其盐；聚乙烯基膦酸酯及其盐；聚烯烃膦酸酯及其盐；多肽；及其混合物；羧基取代的聚合物；以及它们的混合物。在一个实施方案中，所述盐是碱金属盐或铵盐。多磷酸盐通常以其全部或部分中和的水溶性碱金属盐，诸如钾、钠、铵盐以及它们的混合物形式采用。无机多磷酸盐包括三聚磷酸碱金属(例如钠)盐、四聚磷酸碱金属盐、二元酸二烷基金属(例如二钠)盐、一元酸三烷基金属(例如三钠)盐、磷酸氢钾、磷酸氢钠和六偏磷酸碱金属(例如钠)盐以及它们的混合物。大于四聚磷酸盐的多磷酸盐通常作为无定形玻璃状材料存在。在一个实施方案中，多磷酸盐是由fmc公司(fmccorporation)制造的多磷酸盐，其商业上称为sodaphos(n≈6)、hexaphos(n≈13)和glassh(n≈21，六偏磷酸钠)以及它们的混合物。可用于本发明的焦磷酸盐包括焦磷酸碱金属盐、焦磷酸二钾、焦磷酸三钾和焦磷酸钾或焦磷酸钠、二碱金属焦磷酸盐、四碱金属焦磷酸盐以及它们的混合物。在一个实施方案中，焦磷酸盐选自由焦磷酸三钠、焦磷酸二氢二钠(na2h2p2o7)、焦磷酸二钾、焦磷酸四钠(na4p2o7)、焦磷酸四钾(k4p2o7)以及它们的混合物组成的组。聚烯烃磺酸盐包括其中烯烃基团含有2个或更多个碳原子的那些，及其盐。聚烯烃膦酸酯包括其中烯烃基团含有2个或更多个碳原子的那些。聚乙烯基膦酸酯包括聚乙烯基膦酸。二膦酸酯及其盐包括：氮杂环烷-2,2-二膦酸及其盐、氮杂环烷-2,2-二膦酸的离子及其盐、氮杂环己烷-2,2-二膦酸、氮杂环戊烷-2,2-二膦酸、n-甲基-氮杂环戊烷-2,3-二膦酸、ehdp(乙烷-1-羟基-1,1,-二膦酸)、ahp(氮杂环庚烷-2,2-二膦酸)、乙烷-1-氨基-1,1-二膦酸酯、二氯甲烷-二膦酸酯等。膦酰烷基羧酸或其碱金属盐包括ppta(膦酰丙烷三羧酸)、pbta(膦酰丁烷-1,2,4-三羧酸)，各自为酸或碱金属盐。聚烯烃磷酸酯包括其中烯烃基团含有2个或更多个碳原子的那些。多肽包括聚天冬氨酸和聚谷氨酸。
在某些实施方案中，可添加锌盐诸如氯化锌、醋酸锌或柠檬酸锌作为“消毒清洁”感觉的收敛剂、作为呼吸保护增强剂或作为抗牙结石剂，用量为组合物的约0.0025％w/v至约0.75％w/v。
在本发明中可以使用多种附加的表面活性剂中的任一种。合适的表面活性剂可包括阴离子、非离子、阳离子、两性、两性离子表面活性剂，以及它们中两种或更多种的组合。合适的表面活性剂的示例被公开，例如在授予fevola等人的美国专利7,417,020，其全文以引用方式并入本文。
在某些实施方案中，本发明的组合物包含非离子表面活性剂。本领域技术人员将认识到，各种一种或多种非离子表面活性剂中的任一种包括但不限于通过烯化氧基团(亲水性质)与脂族或烷基-芳族性质的有机疏水性化合物的缩合产生的化合物。合适的非离子表面活性剂的示例包括但不限于烷基多葡糖苷；烷基葡萄糖胺，嵌段共聚物诸如环氧乙烷和环氧丙烷共聚物，例如泊洛沙姆；乙氧基化的氢化蓖麻油，例如可以商品名croduret(新泽西州爱迪生的禾大公司(crodainc.,edison,nj))商购获得；烷基聚环氧乙烷，例如聚山梨醇酯，和/或；脂肪醇乙氧基化物；烷基酚的聚环氧乙烷缩合物；衍生自环氧乙烷与环氧丙烷和乙二胺的反应产物的缩合的产物；脂肪醇的环氧乙烷缩合物；长链叔胺氧化物；长链叔膦氧化物；长链二烷基亚砜；以及它们的混合物。
示例性的非离子表面活性剂选自称为聚(氧乙烯)-聚(氧丙烯)嵌段共聚物的组。此类共聚物在商业上已知为泊洛沙姆，并且以具有不同含量的环氧乙烷的广泛范围的结构和分子量制备。这些非离子泊洛沙姆是无毒的并且作为直接食品添加剂是可接受的。它们稳定且容易分散在水性体系中，并且与各种制剂和口服制备剂的其它成分相容。这些表面活性剂应具有介于约10和约30之间，并且优选地介于约10和约25之间的hlb(亲水-亲脂平衡)。举例来说，可用于本发明的非离子表面活性剂包括认定为泊洛沙姆105、泊洛沙姆108、泊洛沙姆124、泊洛沙姆184、泊洛沙姆185、泊洛沙姆188、泊洛沙姆215、泊洛沙姆217、泊洛沙姆234、泊洛沙姆235、泊洛沙姆237、泊洛沙姆238、泊洛沙姆284、泊洛沙姆288、泊洛沙姆333、泊洛沙姆334、泊洛沙姆335、泊洛沙姆338、泊洛沙姆407以及它们中两种或更多种的组合的泊洛沙姆。在某些优选的实施方案中，组合物包含泊洛沙姆407。
在某些实施方案中，受本发明权利要求保护的组合物包含小于约9％的非离子表面活性剂，小于5％、或小于1.5％、或小于1％、或小于0.8、小于0.5％、小于0.4％、或小于.3％的非离子表面活性剂。在某些实施方案中，本发明的组合物不含非离子表面活性剂。
在某些实施方案中，本发明的组合物还含有至少一种烷基硫酸盐表面活性剂。在某些实施方案中，合适的烷基硫酸盐表面活性剂包括但不限于用合适的碱性盐诸如碳酸钠或氢氧化钠以及它们的混合物中和的硫酸化的c8至c18偶数碳链长度的醇，任选硫酸化的c10至c16偶数碳链长度的醇，使得烷基硫酸盐表面活性剂具有偶数c8至c18，任选地c10至c16链长。在某些实施方案中，烷基硫酸盐选自由月桂基硫酸钠、十六烷基硫酸盐以及它们的混合物组成的组。在某些实施方案中，使用可商购获得的烷基硫酸盐混合物。可商购获得的月桂基硫酸钠(sls)中根据烷基链长度来划分的烷基磺酸盐的典型百分比如下：
在某些实施方案中，烷基硫酸盐表面活性剂以组合物的约0.001％至约6.0％w/v，或任选地约0.1％至约0.5％w/v存在于组合物中。
另一种合适的表面活性剂是选自由肌氨酸盐表面活性剂、羟乙基磺酸盐表面活性剂和牛磺酸盐表面活性剂组成的组的表面活性剂。优选用于本文的是这些表面活性剂的碱金属或铵盐，诸如以下的钠盐和钾盐：月桂酰肌氨酸盐、肉豆蔻酰肌氨酸盐、棕榈酰肌氨酸盐、硬脂酰肌氨酸盐和油酰肌氨酸盐。肌氨酸盐表面活性剂可以按总组合物的重量计约0.1％至约2.5％，或约0.5％至约2％存在于本发明的组合物中。
可用于本发明的两性离子合成表面活性剂包括脂族季铵、膦和锍化合物的衍生物，其中脂族基团可为直链或支链的，并且其中脂族取代基之一含有约8至18个碳原子，并且一者含有阴离子水增溶性基团，例如羧基、磺酸根、硫酸根、磷酸根或膦酸根。
可用于本发明的两性表面活性剂包括但不限于脂族仲胺和叔胺的衍生物，其中脂族基团可为直链或支链的，并且其中脂族取代基之一含有约8至约18个碳原子，并且一者含有阴离子水增溶性基团，例如羧酸根、磺酸根、硫酸根、磷酸根或膦酸根。合适的两性表面活性剂的示例包括但不限于烷基亚氨基-二丙酸盐、烷基两性甘氨酸盐(一甘氨酸盐或二甘氨酸盐)、烷基两性丙酸盐(一丙酸盐或二丙酸盐)、烷基两性醋酸盐(一醋酸盐或二醋酸盐)、n-烷基3-氨基丙酸、烷基聚氨基羧酸盐、磷酰化的咪唑啉、烷基甜菜碱、烷基酰胺基甜菜碱、烷基酰胺丙基甜菜碱、烷基磺基甜菜碱、烷基酰胺基磺基甜菜碱以及它们的混合物。在某些实施方案中，两性表面活性剂选自由烷基酰胺丙基甜菜碱、两性乙酸盐诸如sodiumauroamphoacetate及它们的混合物组成的组。也可采用任何上述表面活性剂的混合物。阴离子表面活性剂、非离子表面活性剂和两性表面活性剂的更详细的描述可参见授予lennon的美国专利7,087,650；授予martin等人的美国专利7,084,104；授予sekiguchi等人的美国专利5,190,747；和授予gieske等人的美国专利4,051,234，这些专利中的每个全文以引用方式并入本文。
在某些实施方案中，受本发明权利要求保护的组合物包含小于约9％的两性表面活性剂，小于5％或小于1.5％、或小于1％、或小于0.8、小于0.5％、小于0.4％或小于.3％的两性表面活性剂。在某些实施方案中，本发明的组合物不含两性表面活性剂。
可将附加的表面活性剂与烷基硫酸盐表面活性剂一起加入以帮助精油的溶解，前提条件是此类表面活性剂不会影响精油的生物利用率。合适的示例包括附加的阴离子表面活性剂、非离子表面活性剂、两性表面活性剂以及它们的混合物。然而，在某些实施方案中，用于本发明的漱口液的总表面活性剂浓度(包括单独的或与其它表面活性剂组合的烷基硫酸盐表面活性剂)不应超过或应为按组合物的重量计约9％或更少，任选地，总表面活性剂浓度应为约5％或更少，任选地约1％或更少，任选地约0.5％或更少w/w％的活性表面活性剂。
在某些实施方案中，也将糖醇(湿润剂)添加到本发明的口腔组合物中。一种或多种糖醇溶剂可选自常规用于口腔用产物和可摄入产物中的那些多羟基官能团化合物。在某些实施方案中，一种或多种糖醇应该是一种或多种非代谢性和非发酵性糖醇。在具体的实施方案中，糖醇包括但不限于山梨糖醇、甘油、木糖醇、甘露糖醇、麦芽糖醇、肌醇、蒜糖醇、阿卓糖醇、卫矛醇、半乳糖醇、葡萄糖醇、己糖醇、艾杜糖醇、戊糖醇、核糖醇、赤藓醇以及它们的混合物。任选地，糖醇选自由山梨糖醇和木糖醇或它们的混合物组成的组。在一些实施方案中，糖醇是山梨糖醇。在某些实施方案中，添加用于有效帮助漱口液或其它成分分散或溶解的一种或多种糖醇的总量应不超过总组合物的约50％w/v。或者，糖醇的总量应不超过总组合物的约30％w/v。或者，糖醇的总量应不超过总组合物的25％w/v。糖醇的量可为总组合物的约1.0％至约24％w/v，或约1.5％至约22％w/v，或约2.5％至约20％w/v。
在某些实施方案中，将多元醇溶剂添加到组合物中。多元醇溶剂包含多元醇或多羟基醇，所述多元醇或多羟基醇选自由多羟基烷烃(诸如丙二醇、甘油、丁二醇、己二醇、1,3-丙二醇)；多羟基烷烃酯(二丙二醇、乙氧基二甘醇)；聚亚烷基二醇(诸如聚乙二醇、聚丙二醇)以及它们的混合物组成的组。在某些实施方案中，多元醇溶剂可以组合物的0％至约40％w/v，或约0.5％至约20％w/v，或约1.0％至约10％w/v的量存在。
在某些实施方案中，本发明的组合物具有约11或更低的ph。在一些实施方案中，组合物具有约3至约7、或约3.5至约6.5、或约3.5至约5.0的ph。
如本领域技术人员将认识到的，组合物的ph可以使用缓冲剂来调整或维持，该缓冲剂的量可以有效地为组合物提供处于11或低于11的ph。组合物可任选地包含至少一种ph调节剂，在本文中有用的调节剂包括降低ph的酸化剂，提高ph的碱化剂，以及将ph维持在所需范围内的缓冲剂。例如，可以包括一种或多种选自酸化剂、碱化剂和缓冲剂的化合物以提供约2至约7的ph，或在各种实施方案中提供约3至约6或约4至约5的ph。可以使用任何口服可接受的ph调节剂，包括但不限于盐酸、羧酸和磺酸、酸盐(例如柠檬酸一钠、柠檬酸二钠、苹果酸一钠等)、碱金属氢氧化物诸如氢氧化钠、硼酸盐、硅酸盐、咪唑以及它们的混合物。一种或多种ph调节剂任选以有效地将组合物维持在口服可接受的ph范围内的总量存在。在某些实施方案中，无机酸可以用作添加到组合物中的缓冲剂。
在某些实施方案中，有机酸可以用作被加入到组合物中的缓冲剂。适用于本发明组合物的有机酸包括但不限于抗坏血酸、山梨酸、柠檬酸、乙醇酸、乳酸和乙酸、苯甲酸、水杨酸、邻苯二甲酸、苯酚磺酸以及它们的混合物，任选地，有机酸选自由苯甲酸、山梨酸、柠檬酸以及它们的混合物组成的组，或者任选地，有机酸为苯甲酸。
通常缓冲化合物的量为组合物的约0.001％至约20.0％。在某些实施方案中，有机酸缓冲剂以组合物的约0.001％至约10％w/v，或组合物的约0.01％至约1％的量存在。
在某些实施方案中，可添加附加的现有技术的漱口水和漱口液中的常规组分。然而某些含醇漱口液具有约7.0的ph，降低醇水平可需要添加酸性防腐剂，诸如山梨酸或苯甲酸，这降低了ph水平。那么需要缓冲剂体系来控制组合物的ph处于最佳水平。这一般是通过添加弱酸及其盐或弱碱及其盐来实现的。在一些实施方案中，发现可用的体系是用量为组合物的0.01％(或约0.01％w/v)至1.0％w/v(或约1.0％w/v)的苯甲酸钠和苯甲酸，以及用量为组合物的0.001％(或约0.001％w/v)至1.0％w/v(或约1.0％w/v)的柠檬酸钠和柠檬酸、用量为按组合物的重量计0.01％(或约0.01％)至1.0％(或约1.0％)的磷酸和磷酸钠/钾。在某些实施方案中，将缓冲剂以可维持ph处于3.0(或约3.0)至8.0(或约8.0)、任选3.5(或约3.5)至6.5(或约6.5)、任选3.5(或约3.5)至5.0(或约5.0)的水平的量掺入。
附加的缓冲剂包括碱金属氢氧化物、氢氧化铵、有机铵化合物、碳酸盐、倍半碳酸盐、硼酸盐、硅酸盐、磷酸盐、咪唑及它们的混合物。特定缓冲剂包括磷酸一钠、磷酸三钠、氢氧化钠、氢氧化钾、碱金属碳酸盐、碳酸钠、咪唑、焦磷酸盐、葡糖酸钠、乳酸钠、柠檬酸和柠檬酸钠。
为了更好的味道，甜味剂诸如天冬甜素、糖精钠(糖精)、三氯蔗糖、甜菊糖、乙酰舒泛钾等可以约0.0001％w/v至约1.0％w/v的量添加。在某些优选实施方案中，甜味剂包含三氯蔗糖。
在某些实施方案中，组合物还包含风味剂或调味剂以调节或放大组合物的味道，或者减少或掩盖诸如百里酚的成分的尖锐的“刺激”或“灼烧”。可掺入的合适的风味剂包括但不限于风味油，诸如茴香油、茴香脑、苄醇、留兰香油、柑橘油、香草醛等。可以掺入其它风味剂诸如柑橘油、香草醛等以提供进一步的味道变化。在这些实施方案中，添加到组合物中的风味油的量可为总组合物的约0.001％至约5％w/v，或约0.01％至约0.3％w/v。取决于所需的具体味道和口感，所采用的具体风味剂或调味剂以及其它改善味道的成分将有所变化。本领域的技术人员可选择和定制这些类型的成分来提供所需的结果。
在某些实施方案中，可使用可接受地认可的食品染料来为本发明的组合物提供令人愉快的颜色。这些可选自但不限于一系列可接受的食品染料。适用于该目的的染料包括fd&c黄色5号、fd&c黄色10号、fd&c蓝色1号和fd&c绿色3号。添加了常规量的这些物质，通常各量为组合物的约0.00001％w/v至约0.0008％w/v，或约0.000035％w/v至约0.0005％w/v。
本发明的液体或漱口液组合物可使用其它常规的成分，包括本领域已知和使用的那些。此类成分的示例包括增稠剂、助悬剂和软化剂。可用于本发明组合物中的增稠剂和悬浮剂可参见授予pullen等人的美国专利5,328,682，其全部内容全文以引用方式并入本文。在某些实施方案中，可将这些物质以组合物的约0.1％w/v至约0.6％w/v、或约0.5％w/v的量掺入。
在一些实施方案中，抗微生物防腐剂可被添加到组合物中。可使用的一些抗微生物防腐剂包括但不限于阳离子抗菌剂，诸如苯甲酸钠、聚季铵盐聚阳离子聚合物(即聚季铵盐-42：聚[氧乙烯(二甲基亚氨基)乙烯(二甲基亚氨基)二氯乙烯])、季铵盐或季铵化合物、对羟基苯甲酸酯(即对羟基苯甲酸酯或对羟基苯甲酸的酯)、羟基苯乙酮、1,2-己二醇、辛乙二醇、氯己定、双胍啶、海克替啶、苯扎氯铵、溴化度米芬、氯化十六烷基吡啶(cpc)、氯化十四烷基吡啶(tpc)、氯化n-十四烷基-4-乙基吡啶(tdepc)、奥替尼啶、双双胍、锌或亚锡离子剂、葡萄柚提取物以及它们的混合物。其它抗菌和抗微生物剂包括但不限于：5-氯-2-(2,4-二氯苯氧基)-苯酚，通常称为三氯生；8-羟基喹啉及其盐、铜ii化合物，包括但不限于氯化铜(ii)、硫酸铜(ii)、乙酸铜(ii)、氟化铜(ii)和氢氧化铜(ii)；邻苯二甲酸及其盐，包括但不限于在美国专利4,994,262中公开的那些，包括邻苯二甲酸镁一钾；血根碱；水杨酰苯胺；碘；磺酰胺类；酚类；地莫匹醇、辛哌醇和其它哌啶子基衍生物；烟酸制备剂；制霉菌素；苹果提取物；百里香油；百里酚；抗生素诸如奥格门汀、阿莫西林、四环素、多西环素、米诺环素、甲硝唑、新霉素、卡那霉素、氯化十六烷基吡啶和克林霉素；上述类似物和盐类；水杨酸甲酯；过氧化氢；亚氯酸金属盐；吡咯烷酮乙基椰油酰精氨酸酯；月桂酰乙基精氨酸一氯水合物；以及所有上述的混合物。在另一个实施方案中，组合物包含酚类抗微生物化合物以及它们的混合物。抗微生物组分的含量可为按口腔护理组合物的重量计约0.001％至约20％。在另一个实施方案中，抗微生物剂通常占本发明的口腔护理组合物的约0.1重量％至约5重量％。
其它抗菌剂可为碱性氨基酸和盐。其它实施方案可包含精氨酸。
在某些实施方案中，组合物可包括美白剂、氧化剂、抗炎剂、螯合剂、研磨剂、它们的组合等。
美白剂可作为活性物质包含在本发明的组合物中。适于美白的活性物质选自由碱金属和碱土金属过氧化物、金属亚氯酸盐、多磷酸盐、包括单和四水合物的过硼酸盐、过磷酸盐、过碳酸盐、过氧酸和过硫酸盐(诸如过硫酸铵、过硫酸钾、过硫酸钠和过硫酸锂)以及它们的组合组成的组。合适的过氧化物化合物包括过氧化氢、过氧化脲素、过氧化钙、过氧化脲、过氧化镁、过氧化锌、过氧化锶以及它们的混合物。在一个实施方案中，过氧化物化合物是过氧化脲。合适的金属亚氯酸盐包括亚氯酸钙、亚氯酸钡、亚氯酸镁、亚氯酸锂、亚氯酸钠和亚氯酸钾。附加的美白活性物质可为次氯酸盐或二氧化氯。在一个实施方案中，亚氯酸盐为亚氯酸钠。在另一个实施方案中，过碳酸盐为过碳酸钠。在一个实施方案中，过硫酸盐为过硫酸氢钾。这些物质的含量分别取决于分子能够提供漂白污渍的可用氧或氯。按口腔护理组合物的重量计，在一个实施方案中，美白剂可以以约0.01％至约40％的含量存在，在另一个实施方案中以约0.1％至约20％的含量存在，在另一个实施方案中以约0.5％至约10％的含量存在，在另一个实施方案中以约4％至约7％含量存在。
本发明的组合物可含有氧化剂诸如过氧化物源。过氧化物源可包含过氧化氢、过氧化钙、过氧化脲或它们的混合物。在一些实施方案中，过氧化物源是过氧化氢。其它过氧化物活性物质可包括当与水混合时产生过氧化氢的那些，诸如过碳酸盐，例如过碳酸钠。在某些实施方案中，过氧化物源可与亚锡离子源处于相同的相。按口腔组合物的重量计，在一些实施方案中，组合物包含约0.01％至约20％的过氧化物源，在其它实施方案中约0.1％至约5％，在某些实施方案中约0.2％至约3％，并且在另一个实施方案中约0.3％至约2.0％的过氧化物源。过氧化物源可被提供为络合或包封的游离离子、盐。希望在组合物中的过氧化物是稳定的。如通过循环污渍测试或其它相关方法测量的，过氧化物可提供减少的污渍。
抗炎剂也可存在于本发明的组合物中。此类试剂可包括但不限于非甾族抗炎(nsaid)试剂昔康、水杨酸酯、丙酸、乙酸和灭酸酯类。此类nsaid包括但不限于酮咯酸、氟比洛芬、布洛芬、萘普生、吲哚美辛、双氯芬酸、依托度酸、吲哚美辛、舒林酸、托美汀、酮洛芬、非诺洛芬、吡罗昔康、萘丁美酮、阿司匹林、二氟苯水杨酸、甲氯芬那酸、甲芬那酸、羟基保泰松、保泰松和对乙酰氨基酚。nsaid诸如酮咯酸的用途在美国专利5,626,838中受权利要求保护。其中公开了通过向口腔或口咽局部施用有效量的nsaid来预防和/或治疗口腔或口咽的原发性和复发性鳞状细胞癌的方法。合适的甾族抗炎剂包括皮质类固醇，诸如氟西泮和氢化可的松。
本发明的组合物可任选地含有螯合剂(也称为螯合物或多价螯合剂)，其中许多也具有抗牙结石活性或牙齿亲和活性。在口腔护理产品中使用螯合剂有利于其复合诸如在细菌的细胞壁中存在的钙的能力。螯合剂还可通过从钙桥中除去钙来破坏牙斑，这有助于保持该生物质完整性。螯合剂还具有与金属离子复合的能力，并且从而有助于预防金属离子对产品的稳定性或外观的不利影响。离子诸如铁或铜的螯合有助于延迟成品的氧化变质。此外，螯合剂原则上还可通过结合到牙齿表面从而使发色体或发色团移位来除去污渍。这些螯合剂的保持还可预防由于牙齿表面上发色体的结合位点的破坏而引起的污渍发生。因此，螯合剂可有助于减轻污渍和改善清洁。由于熔融二氧化硅和磨料以机械机制清洁，螯合剂可有助于改善清洁，同时螯合剂可有助于提供化学清洁。因为熔融二氧化硅是良好的机械清洁剂，所以可除去更多的污渍，因此可希望螯合剂保持、悬浮或与污渍复合，因此不能使牙齿表面再着色。另外，螯合剂可涂覆牙齿的表面以有助于预防新的污渍。可希望将螯合剂被添加到含有阳离子抗菌剂的制剂中。可希望将螯合剂添加到含亚锡的制剂中。螯合剂能够有助于使亚锡稳定且保持较高量的生物可利用的亚锡。螯合剂可用于ph高于约4.0的亚锡制剂中。在一些制剂中，与沉淀二氧化硅相比，亚锡可在不需要螯合剂的情况下稳定，因为亚锡在熔融二氧化硅的情况下更稳定。
合适的螯合剂包括可溶性磷酸盐化合物，诸如植酸盐和具有两个或多个磷酸根基团的直链多磷酸盐，其中包括三聚磷酸盐、四聚磷酸盐和六偏磷酸盐等。优选的多磷酸盐是磷酸根基团数目n平均为约6至约21的那些，诸如商业上称为sodaphos(n≈6)、hexaphos(n≈13)和glassh(n≈21)的那些。除了或代替多磷酸盐，可使用其它多磷酸化的化合物，特别是多磷酸化肌醇化合物诸如植酸、肌醇五(磷酸二氢酯)；肌醇四(磷酸二氢酯)、肌醇三(磷酸二氢酯)以及它们的碱金属、碱土金属或铵盐。本文优选植酸(也称为肌醇1,2,3,4,5,6-六(磷酸二氢酯)或肌醇六磷酸)及其碱金属、碱土金属或铵盐。在本文中，术语“植酸盐”包括植酸及其盐以及其它多磷酸化肌醇化合物。组合物中螯合剂的量将取决于所使用的螯合剂并且通常将为至少约0.1％至约20％，优选约0.5％至约10％，并且更优选约1.0％至约7％。
因其结合、溶解和运输钙的能力而在本文可用的其它磷酸酯化合物为上述可用作牙齿亲和剂的表面活性有机磷酸酯化合物，包括有机磷酸单酯、有机磷酸二酯或有机磷酸三酯。
具有用于控制牙斑、牙结石和污渍的螯合性质的其它合适试剂包括在授予widder等人的美国专利3,678,154，授予white,jr的美国专利5,338,537以及授予zerby等人的美国专利5,451,401中描述的聚膦酸酯；在授予francis的美国专利3,737,533中描述的羰基二膦酸酯；在1989年7月11日授予pyrz等人的美国专利4,847,070和在1987年4月28日授予benedict等人的美国专利4,661,341中描述的丙烯酸聚合物或共聚物；在1988年10月4日公布的授予pera的美国专利4,775,525中的藻酸钠；在gb741,315、wo99/12517和授予pink等人的美国专利5,538,714中所述的聚乙烯吡咯烷酮；以及在授予venema等人的美国专利5,670,138以及在授予狮王公司(lioncorporation)的日本公布2000-063250中所述的乙烯吡咯烷酮与羧酸酯的共聚物。
适用于本发明的其它螯合剂是阴离子聚合物型聚羧酸酯。此类材料是本领域所熟知的，以它们的游离酸形式或者部分中和的或优选完全中和的水溶性碱金属(例如钾，优选钠)盐或铵盐的形式采用。示例为分子量(m.w.)为约30,000至约1,000,000的马来酸酐或马来酸与另一种可聚合的烯键式不饱和单体(优选甲基乙烯基醚(甲氧基乙烯))的1:4至4:1的共聚物。这些共聚物可例如作为gaf化学公司(gafchemicalscorporation)的
用于本发明的合适研磨剂可包括但不限于：珍珠岩、二氧化硅诸如砂或石英、研磨玻璃、碳化硅、钛铁矿(fetio3)、氧化锆、硅酸锆、黄玉、tio2、沉淀的石灰、白垩、浮石粉、沸石、滑石、高岭土、硅藻土、氧化铝、硅酸盐、正磷酸锌、碳酸氢钠(小苏打)、塑料颗粒、氧化铝、水合氧化铝、碳酸钙、焦磷酸钙以及它们的混合物。二氧化硅研磨剂可为包括硅藻土的天然无定形二氧化硅；或合成无定形二氧化硅诸如沉淀二氧化硅；或硅胶，诸如二氧化硅干凝胶；或它们的混合物。
通常，根据本领域熟知的技术，适用于本发明组合物的研磨剂的量将根据经验确定以提供可接受的清洁和抛光水平。在一个实施方案中，本发明的组合物包含研磨剂。在一个实施方案中，组合物包含二氧化硅研磨剂。在一个实施方案中，二氧化硅研磨剂以.001wt.％至30wt.％的量存在。在一个实施方案中，二氧化硅研磨剂以1wt.％至15wt.％的量存在。在一个实施方案中，二氧化硅研磨剂以4wt.％至10wt.％的量存在。
其它可用的口腔护理活性物质和/或非活性成分及其进一步的示例可见于授予majeti等人的美国专利6,682,722和授予nair等人的美国专利6,121,315，上述文献中的每个全文以引用方式并入本文。
本发明的组合物可以根据本文所公开和本领域已知的多种方法中的任一种来制备。一般来讲，所述组合物的制备方式可为：在合适的容器内将所需组分组合，然后在任何本领域熟知的常规混合装置诸如机械搅拌螺旋桨、桨等中，将它们在环境条件下混合。
本发明的化合物和组合物可用于治疗哺乳动物身体的多种方法中，特别是用于破坏口腔表面上的生物膜。根据某些实施方案，本发明包括通过使包含生物膜的表面与本发明的组合物接触来破坏表面上的生物膜。在某些实施方案中，本发明包括通过使包含生物膜的表面与本发明的组合物接触来从表面除去生物膜。在某些实施方案中，本发明包括通过使该表面与本发明的组合物接触来减少表面细菌附着。
可使口腔的任何合适的表面根据本发明的方法接触，该表面包括一个或多个选自由一个或多个牙齿的表面、牙龈的表面、它们中两种或更多种的组合等组成的组的表面。
在上述方法的每种方法中，受权利要求保护的方法的组合物可以通过多种方法中的任一种方法引入待接触的表面。在某些实施方案中，将组合物引入口腔中并由使用者作为漱口水或漱口液施用于该表面。在某些实施方案中，将组合物引入口腔并在用于清洁牙齿的制品(例如牙刷)上作为牙膏施用于表面。本发明的组合物可进一步通过口引入并作为凝胶、锭剂、可溶性条带等施用于表面。
此外，本发明方法的接触步骤可包括使表面与组合物接触任何合适量的时间。在某些实施方案中，接触步骤包括使表面接触少于30秒。在某些实施方案中，接触步骤包括使表面与组合物接触30秒或更多，例如约30秒、约40秒、约1分钟或大于1分钟。
实施例
实施例1：化合物的生物膜预防性能
如表1中所示的制剂a1j1通过将以下九种化合物之一溶解在含有乙醇和苯甲酸缓冲剂的水性溶液中而制成：反式顺式-乌头酸、琥珀酸、腺苷、奎尼酸、肌苷、莽草酸、尿苷、草酸或表儿茶素。在如下所述的生物膜预防测定中测试了九种制剂中的每一种。
通过将盖浸没在作为处理溶液的制剂中，将制剂用于处理薄膜涂覆的羟磷灰石钉盖。然后从处理溶液中取出钉盖，并且用人类全唾液接种过夜，以便生成混合菌种唾液来源的生物膜。在每个钉盖上生长的生物膜的量通过使用生物发光反应测量atp来量化，并且与暴露于苯甲酸/乙醇溶液阴性对照(样品j)的钉盖上生长的生物膜的量比较。结果报告为logrlu，其中较低值对应于较少生物膜。所得的logrlu在表1中报告。
表1：九种组分的配方。
实施例2：探索琥珀酸/反式乌头酸的不同比率和浓度范围。
将琥珀酸和反式乌头酸配制成全口漱口液制剂，并且它们的浓度和比率系统地变化。每种制剂的量和材料在表2至表5示出。制备含有琥珀酸、反式乌头酸以及琥珀酸和反式乌头酸两者的共混物的制剂。在表3至6所示制剂中使用的琥珀酸加反式乌头酸的总浓度分别为10.5mm、21mm、42mm和63mm，即，在0.12％w/w和1.1％w/w之间。这些制剂通过将水溶性组分(包括琥珀酸、反式乌头酸、泊洛沙姆407、月桂基硫酸钠、苯甲酸钠、糖精、三氯蔗糖、山梨糖醇和fd&c绿色3号)溶于水中来制备。将所有非水溶性组分(包括薄荷醇、百里酚、桉树脑、水杨酸甲酯、风味剂和苯甲酸)单独地溶解在丙二醇中。然后将丙二醇溶液添加到水性溶液中并混合。
表2：发现琥珀酸(sa)和反式乌头酸(taa)混合物的协同作用的制剂。sa和taa的总浓度为10.5mm，按重量计0.12％至0.18％或0.15％+/-0.03％。
表3：发现琥珀酸(sa)和反式乌头酸(taa)混合物的协同作用的制剂。sa和taa的总浓度为21mm，0.25％至0.37％w/w。
表4：发现琥珀酸(sa)和反式乌头酸(taa)混合物的协同作用的制剂。sa和taa的总浓度为42mm，0.50％至0.73％w/w。
表5：发现琥珀酸(sa)和反式乌头酸(taa)混合物的协同作用的制剂。sa和taa的总浓度为63mm，0.74％至1.10％w/w。
使用两种方法来测试制剂的有效性。第一种是“借助预处理测定方法的多处理静态生物膜”，而第二种是“预防测定方法”。测试方法描述如下。
借助预处理测定方法的多处理静态生物膜
使用常规混合技术如上所述地制备制剂。制剂的ph值均为约ph4.2。将聚苯乙烯钉板(96个钉，每组n＝8)暴露于唾液三十分钟，以在温度35℃下在每个钉上形成薄膜。然后，对于每种制剂，在室温下使用设定为500rpm的轨道振荡器用制剂预处理八个钉(n＝8)10分钟。作为阴性对照，用无菌水预处理八个钉(n＝8)10分钟。接下来，在35℃的温度下，在这些聚苯乙烯钉板上生长24小时的唾液生物膜。然后，在室温下使用设定为500rpm的轨道式振荡器，借助与用于预处理相同的制剂将钉(n＝8)再次处理30秒。再次处理每天施加两次，持续两天，共进行6次处理，包括预处理。
所有处理完成后，将来自每个钉的生物膜中和并冲洗。使用具有431mp4-00微孔板喇叭阻尼器和0.5:1反向增益增强器(康涅狄格州纽敦的q-sonica公司(q-sonica，newtown，ct))的q-sonicaq700超声波液体处理器通过超声处理收获生物膜。使用celsisrapiddetectionrapiscreen试剂盒(伊利诺伊州芝加哥的celsis国际公共有限公司(celsisinternationalplc,chicago,il))，用celsisluminex裂解细菌，并且然后使用由伯托技术公司(德国维尔德巴特)(bertholdtechnologies(wildbad，germany))提供的生物发光标记物celcisluminate和centrolb960microplateluminometer测量来自裂解细菌的三磷酸腺苷(atp)。数据以logrlu(相对光单位)报告，其中降低的logrlu指示残留在生物膜底物上的活细菌较少。
预防测定方法
使用常规混合技术如上所述地制备制剂。制剂的ph值均为约ph4.2。将羟磷灰石涂覆的聚苯乙烯钉板(96个钉，每组n＝8)暴露于唾液一分钟，以在35℃的温度下形成薄膜。然后，对于每种制剂，在室温下使用设定为500rpm的轨道振荡器用制剂预处理八个钉(n＝8)10分钟。作为阴性对照，用无菌水预处理八个钉(n＝8)10分钟。接下来，在35℃的温度下，在这些聚苯乙烯钉板上生长16小时的唾液生物膜。
所有处理完成后，将来自每个钉的生物膜中和并冲洗。使用具有431mp4-00微孔板喇叭阻尼器和0.5:1反向增益增强器(康涅狄格州纽敦的q-sonica公司(q-sonica，newtown，ct))的q-sonicaq700超声波液体处理器通过超声处理收获生物膜。使用celsisrapiddetectionrapiscreen试剂盒(伊利诺伊州芝加哥的celsis国际公共有限公司(celsisinternationalplc,chicago,il))，用celsisluminex裂解细菌，并且然后使用由伯托技术公司(德国维尔德巴特)(bertholdtechnologies(wildbad，germany))提供的生物发光标记物celcisluminate和centrolb960microplateluminometer测量来自裂解细菌的三磷酸腺苷(atp)。数据以logrlu(相对光单位)报告，其中降低的logrlu指示残留在生物膜底物上的活细菌较少。
对于每种制剂的“借助预处理测定方法的多处理静态生物膜”和“预防测定方法”的结果总结在表6中。
图1和图2是对于含有上表3所示的琥珀酸(sa)和反式乌头酸(taa)的制剂a21至l21在多次处理(与水相比)后的生物膜除去百分比与细菌附着(与水相比)减少百分比的曲线图。图上的虚线是sa和taa的共混物的直线预期的结果。附图示出，当琥珀酸和反式乌头酸以在0.9:1和14.1:1(琥珀酸：反式乌头酸)之间的比率组合时，结果令人惊讶地偏离预期结果。
表6示出，当对于表中的其它浓度的组合酸性材料的琥珀酸和反式乌头酸的共混物进行检查距预期结果的距离时，相同的令人惊讶的结果。
表6：对于含有琥珀酸(sa)和反式乌头酸(taa)的制剂的多处理和预防测试的总结结果。
表6(续)
实施例3：化合物的生物膜预防性能
制备并在生物膜预防测定中测试如表7所示的制剂a2至j2。在体外静态多处理混合菌种生物膜测定中测试制剂。在生物膜生长之前，用每种制剂对薄膜涂覆的钉盖进行预处理。然后，经处理的钉盖用人全唾液接种24小时，以便使混合菌种唾液来源的生物膜生长。该生物膜在60小时内每天用每种制剂处理两次，共5次30秒处理。结果报告为logrlu并且示出在表7中，其中较低值对应于较少生物膜。然后，将结果用于创建轮廓表面，以随着不同浓度琥珀酸和反式乌头酸最大化活性。还配制并测试了由含有标准精油的漱口液构成的阳性对照组(样品j2)。
表7：发现saa和taa化合物协同作用的制剂。
注意：无菌水对照组具有7.39的logrlu。
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