表皮和真皮构成人类皮肤的两个主要层，其具有一些重要的功能，例如防止水分流失，形成防护屏障和提供结构支撑。然而，众所周知，皮肤老化在真皮水平和表皮水平都引发深度变化，从而导致胶原纤维更新减少和含有这种胶原纤维的细胞外基质解体。
胶原纤维是真皮细胞外基质的主要组分，它们在这里提供结构支撑。由于皮肤老化引起的真皮胶原纤维网络劣化因此导致细胞外基质网络减少，从而导致一些不想要的皮肤状况，例如不受控制的水分损失、弹性和紧致度损失以及毛孔尺寸增加。
为了维持完整的胶原纤维网络，因此，持续需要能够上调已知参与胶原纤维成熟的那些基因(例如ADAMTS2、PLOD3、LOXL和PCOLCE)的物质。
出乎意料地，已经发现某些含脯氨酸的二肽能够上调所有上述参与胶原成熟的基因，因此特别适用于改善皮肤紧致度、回弹性、质地和弹性以及减小皮肤毛孔尺寸和增加皮肤保湿。
因此，本发明的第一个目标涉及式(I)的化合物或其美容上可接受的盐用于恢复、强化和增加胶原纤维完整性、增加皮肤弹性和/或回弹性、改善皮肤保湿和/或皮肤紧实度，和/或减小皮肤毛孔尺寸的用途，
其中
n代表0、1或2，
R1和R4彼此独立地选自H、C1-C6烷基、脒基或四-C1-C6-烷基脒鎓(alkylamidinium)组成的组，
R2是H或C1-C6-烷基，或者R1和R2与它们所连接的残基一起形成5元至7元饱和环，
R3选自C1-C6烷基、芳基C1-C6烷基和杂芳基C1-C6烷基，且
R5为H或者，当n为1时为NH2，或者R5和R1与它们所连接的残基一起形成5元至7元饱和环。
在另一个目标中，本发明涉及用于恢复、强化和增加胶原纤维的完整性，以及增加皮肤弹性和/或回弹性，改善皮肤紧实度和/或皮肤保湿，和/或减小皮肤毛孔尺寸的方法，所述方法包括：将有效量的包含至少一种式(I)的化合物的美容组合物局部施用到需要此类处理的人的合适皮肤区域，并任选地评价效果。
在一个具体的实施方式中，本发明还涉及具有本文给出的所有优选和限定的式(I)的化合物用于上调参与胶原纤维成熟的基因(例如特别是ADAMTS2、PLOD3、LOXL和PCOLCE)的用途，并涉及具有本文给出的所有优选和限定的式(I)的化合物用于预防或处理与降低的ADAMTS2、PLOD3、LOXL和/或PCOLCE活性相关的或能够通过提高ADAMTS2、PLOD3、LOXL和PCOLCE活性来预防或缓解的疾病或病症的(医学)用途。
美容组合物中至少一种式(I)的化合物的(总)量基于所述组合物的总重量优选地选自0.5ppm至5000ppm的范围，优选2.5ppm至250ppm的范围，最优选25ppm至100ppm的范围。
术语“有效量”是指获得生理效果所必需的量。可以通过一个应用剂量或通过重复应用来实现所述生理效果。当然，所施用的剂量可以因已知的因素而异并能够由本领域技术人员调节，所述因素例如包含至少一种式(I)的化合物的特定组合物的生理学特性及其施用模式和途径；接受者的年龄、健康状况和体重；症状的性质和程度；并存处理的种类；处理频率；和所期望的效果。优选地，待应用到皮肤的美容组合物的量选自0.1-3mg/cm2皮肤的范围，例如优选0.1-2mg/cm2皮肤的范围，最优选0.5-2mg/cm2皮肤的范围。在一个优选的实施方式中，每天施用一次或两次所述美容组合物。
在本文中使用时，术语“C1-C6烷基”是指无支链C1-C6烷基或分支的C3-C6烷基，例如甲基、乙基、正丙基、1-甲基乙基、正丁基、1-甲基丙基、2-甲基丙基、1,1-二甲基乙基、正戊基、1-甲基丁基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、正己基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、1-甲基戊基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基、3,3-二甲基丁基、1-乙基丁基、2-乙基丁基、1,1,2-三甲基丙基、1,2,2-三甲基丙基、1-乙基-1-甲基丙基和1-乙基-2-甲基丙基。
在本文中使用时，术语“芳基C1-C6烷基”是指–C1-C6烷基-芳基，其中术语“芳基”有例如苯基、茚满基或萘基。
在本文中使用时，术语“杂芳基C1-C6烷基”是指–C1-C6烷基-杂芳基，其中术语“杂芳基”是指含有一个或多个杂原子(即N、O或S)的5元或6元芳族环；这些杂芳环可以与其他芳族体系稠合。
R1和R2或者R1和R5可与它们所连接的残基一起形成的5元至7元饱和环的实例有吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、氮杂基、恶唑烷基、噻唑烷基和1,2,3,4-四氢喹啉基。
容易理解，本发明涵盖以下形式的式(I)的化合物，其作为光学纯的异构体，例如作为纯的对映异构体或立体异构体，以及不同异构体的混合物，例如作为外消旋物或非对映异构体的混合物。
术语“或其美容上可接受的盐”是指酸加成盐形式(例如氯化物、乙酸盐或三氟乙酸盐形式)的式(I)的化合物。或者，所述盐可以通过与碱金属碱或碱土金属碱的反应形成，从而产生各自的碱金属盐或碱土金属盐，例如特别是各自的锂盐、钠盐、钾盐、镁盐或钙盐。
在本发明的所有实施方式中，最优选的是乙酸盐或三氟乙酸盐形式的式(I)的化合物。本领域技术人员容易制备这类盐。
在本发明的所有实施方式中，R1、R4和R5优选为H。
在本发明的所有实施方式中，R2优选为H和甲基，最优选为H。
在本发明的所有实施方式中，R3优选为芳基C1-C6烷基，最优选苄基。
在本发明的所有实施方式中，n优选为0或1，最优选为1。
在本发明的所有实施方式中，最优选的是式(I)的化合物，其中R1、R2、R4和R5是H，R3是苄基且n为1。
式(I)的化合物可以如例如US 2009/0111731中所公开进行制备。
在本发明所有实施方式中，特别有利的是具有序列H-(β-Ala)-Pro-Dab-NH-苄基的二肽，特别是其二乙酸酯形式。该化合物又名二肽二氨基丁酰基苄基酰胺二乙酸酯(INCI)[CAS 823202-99-9]，可以从DSM Nutritional products Ltd.作为-AKE商购获得。
容易理解，如果没有另外说明，本文中的用途应特指旨在美化皮肤的美容、非治疗用途，优选通过将根据本发明的化合物局部应用到皮肤，优选经由美容组合物来应用。
术语“美容组合物”是指用于处理、护理或改善皮肤和/或头皮外观的组合物。特别有利的美容组合物是皮肤护理制品。
根据本发明的美容组合物优选用于局部应用，其应被理解为外部应用到角质物质，例如特别是皮肤。
由于根据本发明的组合物旨在用于局部应用，因此它们包含生理学上可接受的介质，即与角质物质(例如皮肤、粘膜和角质纤维)相容的介质。特别地，生理上可接受的介质是美容上可接受的载体。
在本文中使用时，术语“美容上可接受的载体”是指与角质物质相容的生理上可接受的介质。合适的载体在本领域中是公知的，并且基于最终用途应用来选择。优选地，本发明的载体适合应用到皮肤(例如，遮光剂、霜、乳、洗剂、面膜、精华、水分散体、粉底、霜、凝霜或凝胶等)。这种载体对于本领域普通技术人员而言是公知的，可以包括适合应用到皮肤的一种或多种相容的液体或固体填充剂稀释剂、赋形剂、添加剂或载剂。载体的确切量取决于本领域普通技术人员会归类为不同于载体的任何其他任选成分(例如，其它活性组分)和式(I)的化合物的水平。本发明的组合物优选包含以组合物的重量计约75％至约99.999％、更优选约85％至约99.99％、还更优选90％至约99％、最优选约93％至约98％的载体。
本发明的美容组合物可被配制成多种产品类型，包括霜、蜡状物、糊剂、洗剂、乳、摩丝、凝胶、油、化妆水(tonics)和喷雾剂。式(I)的化合物优选被配制成洗剂、霜、凝胶和化妆水。这些产品形式可用于许多应用，包括但不限于手部和身体洗剂、面部保湿剂、抗老化制品、彩妆(make-ups)包括粉底，等等。配制这些产品所需的任何附加组分因产品类型而异，并且可由本领域技术人员常规选择。
如果将本发明的组合物配制成气雾剂并作为喷涂产品应用到皮肤上，则向组合物中加入推进剂。
可以通过本领域的常规方法来制备根据本发明的美容组合物，例如通过将具有本文给出的所有限定和优选的式(I)的化合物与与美容上可接受的载体混合。本发明的美容组合物(包括载体)可以包含其它常规的美容佐剂和添加剂，例如防腐剂/抗氧化剂，脂肪物质/油，水，有机溶剂，硅酮，增稠剂，软化剂，乳化剂，消泡剂，美学组分例如香料，表面活性剂，填充剂，阴离子聚合物、阳离子聚合物、非离子聚合物或两性聚合物或其混合物，推进剂，酸化剂或碱化剂，染料，着色剂/染色剂，研磨剂，吸收剂，螯合剂(chelating agents)和/或螯合分散剂(sequestering agents)，精油，皮肤感觉剂(skin sensates)，收敛剂，颜料或通常配制到这种组合物中的任何其他成分。
依照本发明，根据本发明的美容组合物还可以包含美容组合物中常规使用的其它美容活性成分。示例性的活性成分包括亮肤剂；UV-过滤剂，用于处理色素沉着过度的试剂；预防或减轻炎症的试剂；紧致剂、保湿剂、舒缓剂和/或活力剂(energizing agent)以及改善弹性和皮肤屏障的试剂。
适用于本发明美容组合物中的皮肤护理行业中常用的美容赋形剂、稀释剂、佐剂、添加剂以及活性成分的实例例如描述于可通过在线INFO BASE(http://online.personalcarecouncil.org/jsp/Home.jsp)访问的个人护理产品委员会Personal Care Product Council(http://www.personalcarecouncil.org/)的国际化妆品原料字典和手册(International Cosmetic Ingredient Dictionary&Handbook by)，但不限于此。
基于期望的产品形式和应用，本领域技术人员可以容易地确定活性成分以及美容赋形剂、稀释剂、助剂、添加剂等的必需量。可以视情况将额外的成分加入到油相中、水相中或者分别加入。
本文中可用的美容活性成分在一些情况下能够提供多于一种益处或通过多于一种作用模式发挥作用。
当然，本领域技术人员应小心地选择上述任选的附加成分、助剂、稀释剂和添加剂和/或其量，使得与根据本发明的组合内在相关的有利性质不受或基本上不受所设想的一种或多种添加的不利影响。
根据本发明的美容组合物可以是在溶剂或脂肪物质中的悬浮物或分散体的形式，或者其形式可以是乳剂或微乳剂(特别是水包油(O/W)或油包水(W/O)型，水包硅酮(Si/W)或硅酮包水(W/Si)型，PIT-乳剂，多重乳剂(例如油包水包油(O/W/O)或水包油包水(W/O/W)型)，皮克林乳剂(pickering emulsion)，水凝胶，醇凝胶，脂质凝胶，单相溶液或多相溶液或泡状分散体或其它常用形式，还可以通过笔、作为面膜或喷雾来应用。
如果美容组合物是乳剂，例如特别是O/W、W/O、Si/W、W/Si、O/W/O、W/O/W多重乳剂或者皮克林乳剂，那么基于美容组合物的总重量，这种美容乳剂中存在的油相的量优选为至少10重量％，例如10-60重量％的范围、优选15-50重量％的范围、最优选15-40重量％的范围。
在一个实施方式中，根据本发明的美容组合物有利地为水包油(O/W)乳剂的形式，其包含在O/W乳化剂的存在下分散在水相中的油相。这种O/W乳剂的制备是本领域技术人员公知的。
如果根据本发明的美容组合物是O/W乳剂，那么其有利地含有至少一种的O/W-乳化剂或Si/W-乳化剂，其选自甘油基硬脂酸酯柠檬酸酯、甘油基硬脂酸酯SE(自乳化)、硬脂酸，硬脂酸的盐，聚甘油基-3-甲基葡萄糖二硬脂酸酯。其他合适的乳化剂为磷酸酯及其盐，如鲸蜡醇磷酸酯(例如，来自DSM Nutritional Products Ltd.的A)、二乙醇胺鲸蜡醇磷酸酯(例如来自DSM Nutritional Products Ltd.的DEA)、鲸蜡醇磷酸酯钾(例如来自DSM Nutritional Products Ltd.的)、鲸蜡硬脂醇硫酸酯钠、甘油油酸酯磷酸酯钠、氢化植物油甘油酯类磷酸酯和其混合物。其他合适的乳化剂为失水山梨醇油酸酯、失水山梨醇倍半油酸酯、失水山梨醇异硬脂酸酯、失水山梨醇三油酸酯、鲸蜡硬脂基葡糖苷、月桂基葡糖苷、癸基葡糖苷、硬脂酰谷氨酸钠、蔗糖多硬脂酸酯和水合聚异丁烯。此外，一种或多种合成聚合物可被用作乳化剂。例如，PVP二十碳烯共聚物、丙烯酸酯/C10-30烷基丙烯酸酯交联聚合物及其混合物。
基于美容组合物的总重量，至少一种O/W乳化剂、Si/W乳化剂的用量优选分别为0.5-10重量％的范围，特别是0.5-6重量％的范围，例如更特别是0.5-5重量％的范围，例如最特别是1-4重量％的范围。
待用于根据本发明的美容组合物中的特别合适的O/W乳化剂包括磷酸酯乳化剂，例如有利地8-10烷基乙基磷酸酯、C9-15烷基磷酸酯、鲸蜡硬脂醇聚醚-2磷酸酯、鲸蜡硬脂醇聚醚-5磷酸酯、鲸蜡醇聚醚-8磷酸酯、鲸蜡醇聚醚-10磷酸酯、鲸蜡醇磷酸酯、C6-10链烷醇聚醚-4磷酸酯、C12-15链烷醇聚醚-2磷酸酯、C12-15链烷醇聚醚-3磷酸酯、DEA-鲸蜡硬脂醇聚醚-2磷酸酯、DEA-鲸蜡醇磷酸酯、DEA-油醇聚醚-3磷酸酯、鲸蜡醇磷酸酯钾、癸醇聚醚-4磷酸酯、癸醇聚醚-6磷酸酯和三月桂醇聚醚-4磷酸酯。
待用于根据本发明的美容组合物中的一种特别合适的O/W乳化剂为鲸蜡醇磷酸酯，例如优选地鲸蜡醇磷酸酯钾，例如，其可在DSM Nutritional Products Ltd Kaiseraugst以商品名K商购获得。
另一类特别合适的O/W乳化剂是从橄榄油衍生的非离子型自乳化体系，例如以商品名OLIVEM 1000出售的(INCI名)鲸蜡硬脂醇橄榄油酸酯和失水山梨醇橄榄油酸酯(化学组成：橄榄油脂肪酸的失水山梨醇酯和鲸蜡硬脂酯)。
在一个具体的实施方式中，本发明涉及具有本文给出的所有限定和优选的O/W乳剂形式的美容组合物，其包含在O/W乳化剂的存在下分散在水相中的油相，其中所述O/W乳化剂是鲸蜡醇磷酸酯钾。这种O/W乳剂中油相的量优选为至少10重量％，更优选为10-60重量％的范围，最优选为15-50重量％的范围，例如15-40重量％的范围。
根据本发明的美容组合物通常具有3至10范围内的pH，优选4至8范围内的pH，最优选4至7.5范围内的pH。可以根据需要用合适的酸或碱根据本领域的标准方法容易地调节pH，所述酸例如柠檬酸，所述碱例如氢氧化钠(例如作为水溶液)、三乙醇胺(TEA Care)、氨基丁三醇(Trizma Base)和氨甲基丙醇(AMP-Ultra PC 2000)。
提供以下实施例以进一步说明本发明的组合物和效果。这些实施例只是说明性的，并不意图以任何方式限制本发明的范围。
实验部分
1.基因
PLOD3：该酶催化胶原样肽中赖氨酰残基的羟基化。所产生的羟基赖氨酰基团是胶原中碳水化合物的附着位点，因此对于分子间交联的稳定性至关重要。
LOXL2：该基因编码催化胶原中交联形成的第一步的赖氨酰氧化酶基因家族的成员。
ADAMTS2负责加工数种类型的原胶原蛋白。具体而言，该酶从原胶原的一端剪下短氨基酸链。该剪切步骤对于胶原分子正常发挥作用和组装到原纤维外侧细胞中是必需的。
PCOLCE：该基因编码糖蛋白，所述糖蛋白在由细胞分泌后结合I型前胶原并驱动I型前胶原的酶切割，以产生成熟的三重螺旋的高度结构化的原纤维。
2.材料和方法
基因表达分析
将来自63岁女性供体的第7代正常人类真皮成纤维细胞在含有2mM L-谷氨酰胺、50U/ml青霉素-50ug/ml链霉素和10％FCS的DMEM中，于37℃在5％CO2气氛中培养。在1％FCS中平衡细胞24小时后，分别加入在生长培养基中(2:1)稀释至浓度为0.01％的肽H-(β-Ala)-Pro-Dab-NH-苄基[CAS 823202-99-9]或N-棕榈酰-Gly-His-Lys[147732-56-7]/N-棕榈酰-Gly-Gln-Pro-Arg[221227-05-0]，并将细胞孵育另外24小时。孵育结束时，将细胞在PBS中洗涤并立即冷冻在-80℃下。使用NucleoSpin RNA Plus试剂盒(Ma-cherey-Nagel)，根据供应商的说明提取总RNA。使用Transcriptor逆转录酶(Roche)，通过逆转录总RNA来合成cDNA。在LightCycler装置(Roche Molecular Systems Inc.)上根据制造商的说明进行PCR。使用Microsoft Excel分析原始数据。
3.临床研究
利用40-55岁的白人女性志愿者进行双盲平行组研究。30名志愿者(平均年龄为46+/-1岁)接受安慰剂制剂，29名志愿者(平均年龄为48+/-1岁)接受含-AKE的真实(verum)制剂。将安慰剂和真实制剂分别每天两次应用到脸，持续28天。在研究结束时，拍摄照片用于毛孔的计算分析：用Color face拍摄整张脸(90°)的照片用于毛孔尺寸分析。此外，志愿者填写了调查问卷。
表1：安慰剂/真实制剂
4.结果
4.1基因表达研究
表2：基因表达检测的结果
*参照肽(MATRIXYLTM3000)
从表1可以看出：H-(β-Ala)-Pro-Dab-NH-苄基)显著上调了参与胶原纤维成熟的基因，而Matrixyl3000仅上调了LOXL2和少得多的PLOD3。
4.2额头上的毛孔
表3：毛孔的计算分析结果
从表2可以看出：通过用包含根据本发明的式(I)的化合物的组合物进行处理，毛孔尺寸显著减小。
4.3调查问卷的结果
表4：调查问卷的结果
从表4可以看出：志愿者观察到了显著的保湿效果以及可感知的毛孔尺寸减小。