本发明属于维生素制剂领域，具体涉及一种高效稳定的VB12制剂的生产方法。
背景技术：
VB12，又称钴胺素，是一类含金属元素钴的咕啉类化合物的总称，也是唯一含金属元素的维生素，主要存在于动物食品中，例如猪肝、猪心、牛肉、虾、鸡蛋、臭豆腐、酱油等。
VB12对人体有着至关重要的作用，可以促进红细胞的发育和成熟，使机体造血机能处于正常状态，预防恶性贫血；维护神经系统健康；可以增加叶酸的利用率，促进碳水化合物、脂肪和蛋白质的代谢；具有活化氨基酸的作用和促进核酸的生物合成，可促进蛋白质的合成，对婴幼儿的生长发育有重要作用；还能代谢脂肪酸，使脂肪、碳水化合物、蛋白质被身体适当运用；消除烦躁不安，集中注意力，增强记忆及平衡感等。
人体自身不能合成VB12，但每日的营养需求量为3-5μg，因此需要从食物中摄取。动物食品中的VB12形态无法被人体直接消化吸收，需要与蛋白质结合。而VB12大多情况下不稳定，其稳定性主要受到光、热、溶液pH和还原剂等因素的影响。其中，甲钴胺和腺苷钴胺对光线敏感，室温下其水溶液易转化为对光线敏感度较低的羟钴胺；在热加工过程中，VB12还存在发生分解的可能性，不同的pH和温度都会影响热分解的产物，从而导致各种VB12类似物的生成；同时，在VB12进入人体消化道后，若没有蛋白结合及保护助剂的保护，在胃酸、胃蛋白酶及胰蛋白酶的作用下，极易发生分解和损失。
技术实现要素：
针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种高效稳定的VB12制剂的生产方法，以蛋白进行配位结合，采用保护助剂及包埋技术，充分提高了VB12制剂的稳定性，同时为VB12制剂在人体胃肠道消化过程中定点高效释放提供了重要技术保证。
为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
一种VB12制剂的生产方法，其特征在于包括以下工艺步骤：
(1)VB12的制备：费氏丙酸杆菌接种至已灭菌的豆腐黄水中，添加5～20％的葡萄糖，25～35℃恒温培养箱中培养发酵24～72h，过滤得到含VB12的发酵滤液；
(2)VB12与蛋白配位结合：在发酵滤液中加入α-乳白蛋白溶液或β-乳球蛋白溶液，室温避光条件下静置1～2h，得到VB12与蛋白混合液；其中，1mg/L的VB12中加入0.25～0.75μM浓度的α-乳白蛋白或β-乳球蛋白；
(3)包埋：将保护助剂和多孔淀粉加入步骤(2)的VB12与蛋白混合液中，混匀；其中保护助剂包括脱脂奶粉、甘油和蔗糖；以VB12与蛋白混合液的质量为基准，脱脂奶粉添加量为15～25％，甘油添加量为0.5～2％，蔗糖添加量为6～10％；多孔淀粉的加入量为保护助剂的30～50％；
(4)喷雾干燥：利用喷雾干燥设备，对步骤(3)中得到的物料进行喷雾干燥，得到粉末；
(5)造粒：将步骤(4)中得到的粉末加入造粒机进行造粒；
(6)包装。
进一步地，步骤(1)中，将费氏丙酸杆菌(Propionibacterium freudenreichii，PF)按1:300的比例接种至已灭菌的豆腐黄水中，并添加豆腐黄水质量10％的葡萄糖，在30℃恒温培养箱中培养发酵48h，经多次抽滤以滤去发酵液中的残渣及沉淀物，得到含VB12的发酵滤液。
步骤(2)中，1mg/L的VB12加入0.25μM浓度的α-乳白蛋白或0.25μM浓度的β-乳球蛋白。VB12发酵滤液与蛋白溶液以1:1的体积比于包裹铝箔纸的容器中混合，室温下暗处静置1h。使VB12与蛋白进行配位结合，以提高VB12的稳定性。
优选的，步骤(3)中，采用保护助剂及多孔淀粉吸附VB12和蛋白质的结合体，其中保护助剂包括脱脂奶粉、甘油和蔗糖；以VB12与蛋白混合液的质量为基准，脱脂奶粉添加量为20％，甘油添加量为1％，蔗糖添加量为8％；多孔淀粉的加入量为保护助剂的40％。
步骤(4)喷雾干燥时，控制进风温度170℃，出风温度65℃。
步骤(5)造粒的具体步骤为：
a.下压风机，启动气缸；
b.打开排气风机，排气启动；
c.风机启动，风机转速为1000r/s；
d.加热启动，进风温度设定为55℃；
e.设置反吹系统时间：反吹1s，停顿10s。启动自动反吹；
f.开启雾化流化，启动蠕动泵；
g.设定物料温度，上温度为40℃，下温度为30℃；警报温度100℃。
步骤(6)为真空充氮包装。
本发明的VB12制剂的生产方法，主要包括VB12的制备、VB12与蛋白配位结合、包埋、喷雾干燥、造粒和包装的步骤。针对VB12容易分解的特点，首先将VB12与蛋白进行配位结合，并用保护助剂和多孔淀粉包埋，以使VB12能够相对稳定存在，易于保存，并在人体胃肠道消化过程中可定点高效释放。
α-乳白蛋白是由乳腺腺泡上皮合成的特殊蛋白质，广泛存在于哺乳动物，是必需氨基酸和支链氨基酸的极好来源；β-乳球蛋白是牛奶中主要乳清蛋白的成分，富含人体所需的各种氨基酸成分，易消化吸收。故α-乳白蛋白和β-乳球蛋白是结合VB12的最适合蛋白。
本发明针对VB12的特殊结构，以蛋白进行配位结合，采用保护助剂及包埋技术，充分提高了VB12制剂的稳定性，VB12制剂在人体胃肠道消化过程中可定点高效释放。经过大量辐照或热处理实验证明，经蛋白结合的VB12在光辐照或热处理影响下，分解率明显低于未经任何保护的对照组，说明利用蛋白结合VB12能有效地提高VB12的稳定性。
与现有技术相比，本发明具有如下优点：
(1)本发明采用VB12与蛋白配位结合的方式，最大程度的减少了VB12在外界因素影响下的损失，提高了其稳定性。
(2)本发明将包埋技术用于VB12和蛋白的结合体，在喷雾干燥、造粒和贮藏过程中均能起到明显的保护作用，并且可以达到缓慢释放的效果。
具体实施方式
以下结合实施例来进一步说明本发明。
实施例1
1)VB12的制备
将费氏丙酸杆菌(Propionibacterium freudenreichii，PF)按1:300的比例接种至已灭菌的豆腐黄水中，并添加豆腐黄水质量10％的葡萄糖，在30℃恒温培养箱中培养发酵48h，经多次抽滤以滤去发酵液中的残渣及沉淀物，得到含VB12的发酵滤液。
2)VB12与蛋白配位结合
在包裹铝箔纸的烧杯中加入VB12的发酵滤液及α-乳白蛋白，对于1mg/L的VB12可采用0.25μM浓度的α-乳白蛋白，以1:1的体积比于包裹铝箔纸的烧杯中混合，室温下暗处静置1h。
3)包埋
将保护助剂和多孔淀粉按比例加入发酵滤液中，以VB12与蛋白混合液的质量为基准，保护助剂的成分为：脱脂奶粉20％，甘油1％，蔗糖8％，多孔淀粉的加入量为保护助剂的40％。
4)喷雾干燥
利用喷雾干燥设备，对步骤3)中得到的发酵滤液进行喷雾干燥，得到粉末，控制进风温度170℃，出风温度65℃。
5)造粒
将步骤4)中得到的粉末加入造粒机进行造粒，具体步骤为：
a.下压风机，启动气缸。
b.打开排气风机，排气启动。
c.风机启动，风机转速为1000r/s。
d.加热启动，进风温度设定为55℃。
e.设置反吹系统时间：反吹1s，停顿10s。启动自动反吹。
f.开启雾化流化，启动蠕动泵。
g.设定物料温度，上温度为40℃，下温度为30℃。警报温度100℃。
6)包装
将步骤5)中得到的产品进行真空充氮包装。
实施例2
1)VB12的制备
将费氏丙酸杆菌(Propionibacterium freudenreichii，PF)按1:300的比例接种至已灭菌的豆腐黄水中，并添加豆腐黄水质量10％的葡萄糖，在30℃恒温培养箱中培养发酵48h，经多次抽滤以滤去发酵液中的残渣及沉淀物，得到含VB12的发酵滤液。
2)VB12与蛋白配位结合
在包裹铝箔纸的烧杯中加入VB12的发酵滤液及β-乳球蛋白，对于1mg/L的VB12可采用0.25μM浓度的β-乳球蛋白，以1:1的体积比于包裹铝箔纸的烧杯中混合，室温下暗处静置1h。
3)包埋
将保护助剂和多孔淀粉按比例加入发酵滤液中，以VB12与蛋白混合液的质量为基准，保护助剂的成分为：脱脂奶粉20％，甘油1％，蔗糖8％，多孔淀粉的加入量为保护助剂的40％。
4)喷雾干燥
利用喷雾干燥设备，对步骤3)中得到的发酵滤液进行喷雾干燥，得到粉末，控制进风温度170℃，出风温度65℃。
5)造粒
将步骤4)中得到的粉末加入造粒机进行造粒，具体步骤为：
a.下压风机，启动气缸。
b.打开排气风机，排气启动。
c.风机启动，风机转速为1000r/s。
d.加热启动，进风温度设定为55℃。
e.设置反吹系统时间：反吹1s，停顿10s。启动自动反吹。
f.开启雾化流化，启动蠕动泵。
g.设定物料温度，上温度为40℃，下温度为30℃。警报温度100℃。
6)包装
将步骤5)中得到的产品进行真空充氮包装。