本发明属于兽药技术领域，涉及一种防治仔猪腹泻的药物，具体涉及一种用于防治断奶仔猪腹泻的药物组合物及其制备方法和应用。
背景技术：
仔猪腹泻是一种典型的多因素性疾病，引起仔猪腹泻的病原种类繁多，病性复杂，常由多种病原混合感染。长期以来仔猪腹泻是引起仔猪生长受阻和仔猪高死亡率的重要原因，仔猪腹泻的防治一直是一个引人注目的世界性问题。引起仔猪腹泻的病因归纳为非传染性腹泻与传染性腹泻两大类。仔猪非传染性腹泻常因仔猪消化机能不全、日粮抗原过敏、营养因子缺乏、饲养管理和应激因素导致仔猪抵抗力降低而出现腹泻。传染性腹泻包括细菌性和病毒性腹泻，多由致病性大肠杆菌、猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒及猪轮状病毒引起。而目前防治仔猪腹泻，主要采取综合防治措施，在良好饲养管理的基础上，针对性疫苗和敏感药物的正确选用是防治仔猪腹泻的技术关键。细菌性腹泻的综合防治技术，主要从饲养卫生管理、疫苗预防和药物防治三方面采取综合防治措施。因病毒性腹泻没有特效药物，目前主要通过加强饲养管理和疫苗预防加以防治，此外，对症疗法、口服微生态制剂，选用敏感抗菌素等防止细菌继发感染均可作为降低病毒性腹泻的辅助手段。因此，选择对病原体敏感、特异性高、抑菌效果强、稳定性好的新型药物显得尤为重要，是今后养猪业健康发展的一个重要研发方向。
由于仔猪腹泻通常发生于断乳后（28日龄）的仔猪，因此，养殖者更倾向于在易感日龄内使用针对性强、生物利用度高、安全性强的药物，通过便捷的口服途径进行预防与治疗，以此弥补疫苗注射存在的使用不便、副作用大、工艺复杂、半衰期短、保存不便等不足之处。
技术实现要素：
为了解决现有技术中存在的问题，本发明提供了一种用于防治断奶仔猪腹泻药物组合物的制备方法和应用。该药物组合物由特异性卵黄抗体IgY、益生菌、中药复方组合物及卵黄粉组成。
本发明的药物组合物的作用机理是：
靶向给药系统能使药物浓集定位于病变组织、器官、细胞或细胞内结构，由此进行的靶向治疗可使治疗部位的药物浓度明显提高，从而减少用药量，减少药物对全身的毒副作用，并使治疗费用降低。特异性卵黄抗体IgY主要是应用抗原抗体反应的原理来构建靶向药物，特异性追踪肠道内致腹泻常见病原体，通过被动免疫途径定向杀灭致病微生物，降低感染程度，具有靶向性强、无毒副作用、不产生耐药性等特点。同时利用以抑菌抗菌、清利湿热、利湿止泻为原则组方的中药组合物，对病原体进一步抗菌消炎，并兼具提高仔猪免疫力及抗病力的功效，且刺激性小、低毒无残留、不易产生耐药性，安全性较高。益生酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)含有极丰富的蛋白质，其培养物富含维生素、矿物质、消化酶、促生长因子，以及肽、多种必需氨基酸和必需脂肪酸，是继动物蛋白和植物蛋白后的另一类重要蛋白质来源。这些特殊营养成分可刺激免疫系统的防御能力，减少肠内有毒物质的产生，对机体免疫功能具有促进作用，故酵母菌及其发酵产品可作为优质的饲料添加剂，有一定的开发应用价值。通过充分发挥上述药物之间的协同作用，以达到针对多种致病源的防治作用，降低仔猪腹泻发病率和死亡率，提高养殖效益。本发明的药物组合物效果优于单纯抗生素治疗或单纯益生菌产品，以及单纯的卵黄抗体IgY产品，在预防及治疗仔猪腹泻方面具有较好的靶向治疗及药效持续时间长的作用特点，且不产生耐药性、无毒副作用、无残留，易于产品规模化且生产成本较低。
本发明的第一个目的是提供一种用于防治断奶仔猪腹泻的药物组合物，所述药物组合物由以下各组分组成：抗E.Coli-IgY卵黄抗体干粉、抗TGE-PED-PoRV-IgY卵黄抗体干粉、中药复方提取液干粉、卵黄粉和益生酵母菌干粉；
所述中药复方提取液干粉由以下质量份数的各组分制备而成：苦参10-30份、地榆10-30份、黄连10-20份、黄柏10-20份、五倍子10-20份、蒲公英10-20份、地锦草10-20份、鱼腥草5-15份、仙鹤草5-15份、马齿苋5-15份、车前草5-15份、杠板归2-15份、蓍草2-15份、甘草5-15份。
作为优选，所述中药复方提取液干粉由以下质量份数的各组分制备而成：苦参15份、地榆15份、黄连12份、黄柏12份、五倍子12份、蒲公英15份、地锦草10份、鱼腥草10份、仙鹤草12份、马齿苋12份、车前草10份、杠板归8份、蓍草6份、甘草6份。
作为优选，在所述药物组合物中，所述益生酵母菌干粉的为0.5×108--5.0×108CFU/g；所述抗E.Coli-IgY卵黄抗体干粉、抗TGE-PED-PoRV-IgY卵黄抗体干粉、中药复方提取液干粉和卵黄粉的质量百分比之和为100%，其中，抗E.Coli-IgY卵黄抗体干粉2.5-10 %，抗TGE-PED-PoRV-IgY卵黄抗体干粉2.5-10 %，中药复方提取液干粉60-90 %，卵黄粉5-30%；
作为优选，所述抗E.Coli-IgY卵黄抗体干粉为5%，抗TGE-PED-PoRV-IgY卵黄抗体干粉为5%，中药复方提取液干粉为70%，卵黄粉为20%。
作为优选，所述益生酵母菌干粉是由酿酒酵母制备而成，菌含量为1.0-2.0×109CFU/g。
作为优选，所述抗E.Coli-IgY卵黄抗体干粉的制备方法为：采用大肠杆菌菌体蛋白抗原免疫物对健康产蛋鸡进行免疫，收集鸡蛋，采用水稀释法-冷冻法分离特异性卵黄抗体IgY，上清液即为抗E.Coli-IgY卵黄抗体，将上清液冷冻干燥后，得到抗E.Coli-IgY卵黄抗体干粉。
作为优选，所述抗TGE-PED-PoRV-IgY卵黄抗体干粉的制备方法为：将猪传染性胃肠炎-猪流行性腹泻-猪轮状病毒G5型三联活疫苗免疫健康产蛋鸡，收集鸡蛋，采用水稀释法-冷冻法分离特异性卵黄抗体IgY，上清液即为抗TGE-PED-PoRV-IgY卵黄抗体，将上清液冷冻干燥后，得到抗TGE-PED-PoRV-IgY卵黄抗体干粉。
作为优选，所述卵黄粉由抗E.Coli-IgY抗体源的固态卵黄粉和抗TGE-PED-PoRV-IgY抗体源的固态卵黄粉等重量份混合而成；
所述抗E.Coli-IgY抗体源的固态卵黄粉的制备方法为：采用大肠杆菌菌体蛋白抗原免疫物对健康产蛋鸡进行免疫），收集鸡蛋，采用水稀释法-冷冻法分离，将卵黄沉淀物喷雾干燥，得到抗E.Coli-IgY抗体源的固态卵黄粉；
所述抗TGE-PED-PoRV-IgY抗体源的固态卵黄粉的制备方法为：将猪传染性胃肠炎-猪流行性腹泻-猪轮状病毒G5型三联活疫苗免疫健康产蛋鸡，收集鸡蛋，采用水稀释法-冷冻法分离，将卵黄沉淀物喷雾干燥，得到抗TGE-PED-PoRV-IgY抗体源的固态卵黄粉。
作为优选，所述中药复方提取液干粉的制备方法为：将配方量的各组分粉碎后，加3-10倍水煎煮3次，每次1-4小时，合并滤液，真空减压浓缩，浓缩液喷雾干燥，得到中药复方提取液干粉。
本发明的第二个目的是提供上述药物组合物的制备方法，先将抗E.Coli-IgY卵黄抗体干粉与抗TGE-PED-PoRV-IgY卵黄抗体干粉进行等重量份混合，再将混合后的卵黄抗体干粉与中药复方提取液干粉和卵黄粉按照配方量混合，并加入益生酵母菌干粉进行混合，即制成药物组合物。
本发明的第三个目的是提供上述药物组合物在制备防治断奶仔猪腹泻的药物或饲料添加剂中的应用。
制备药物时，按照现有技术中的制剂方法操作即可，可以加入本领域常用的辅料。比如可以将药物直接加入适量水，让仔猪饮用即可。
本发明的有益效果为：
（1）本发明制备的药物组合物通过将卵黄抗体IgY与益生菌和中药复方组合物进行配比、偶联，可通过特异性卵黄抗体IgY定向捕捉仔猪腹泻致病源，制备出针对细菌、病毒的兽用靶向治疗药物。其次，中药复方有效组分除具有抗菌消炎、清利湿热、利湿止泻的优点外，还兼具提高腹泻仔猪免疫力及抗病能力的特点，且刺激性小、低毒无残留、不易产生耐药性，安全性高。益生酵母菌可刺激仔猪免疫系统的防御能力，减少肠道内有毒物质的产生，对机体免疫功能具有促进作用。因此，本发明的药物组合物对细菌、病毒引起的仔猪腹泻具有良好的靶向治疗和预防作用，具有预防保健和疾病治疗的双重效果。
（2）制备的特异性卵黄抗体IgY，具有良好的靶向治疗作用，可通过被动免疫途径特异性地、定向杀灭导致仔猪腹泻的大肠杆菌，可用于临床防治由大肠杆菌引起的仔猪腹泻，愈后腹泻仔猪不再复发，并兼具性质稳定、特异性强、无残留、无抗药性等优势。同时，能够特异性的中和猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻和猪轮状病毒，临床上可用于治疗由猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻及猪轮状病毒单独感染或混合感染导致的病毒性仔猪腹泻。使用本发明中制备的药物组合物不仅可以治愈易感染上述致病源的断乳仔猪，同时对同群未感染上述病原的断乳仔猪使用可以使其获得被动免疫。
（3）本发明制备的药物组合物，可避免以往注射疫苗费时费力（如在疫病高发、频发时需多次使用才可达到效果）、应急反应强烈、疫苗制备工艺过程复杂导致生产费用增加、鸡蛋中诸多营养成分被破坏而导致资源浪费等问题。使用本发明制备的药物组合物有助于恢复肠道内有益菌群，可以显著提高猪群生产性能，具有较好的促生长作用。本发明制备的药物组合物具有使用方便、成本低廉、保存期长等优点，使用后见效快，无毒副作用，不会导致耐药菌毒株的出现，极大地降低了因注射使用造成的疫病传播以及各种严重应激反应，适宜大规模推广。
（4）本发明公开的药物组合物，由特异性卵黄抗体IgY、益生菌、中药复方组合物有效组分及卵黄抗体IgY副产品——卵黄粉组成，营养成分高，适口性较好，可制备成任何一种便于腹泻仔猪应用的口服制剂类型，可制备成散剂形式用于兽医临床饮水给药或饲料拌服给药，或制备成饲料添加剂用于防治断奶仔猪腹泻。
本发明的中药组合物根据中兽医药和现代中医药学理论，以抗菌抑菌、清热燥湿、清肠止泻为原则，按照一定的重量份组方而成，所述中药组合物包括苦参、地榆、黄连、黄柏、五倍子、蒲公英、地锦草、鱼腥草、仙鹤草、马齿苋、车前草、杠板归、蓍草和甘草，各单味中药的药理作用具体如下：
苦参：拉丁学名Sophora flavescens var. flavescens。性味：味苦，性寒。入心、肝、肾、大小肠、膀胱经。功能主治：清热燥湿，祛风杀虫。主湿热泻痢，肠风便血，黄疸，小便不利，水肿，带下，疥癣，麻风，皮肤瘙痒，湿毒疮疡。苦参煎剂对金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌等有较强的抑菌作用，对堇色毛癣菌、同心性毛癣菌、许兰毛癣菌、奥杜盎小芽孢癣菌等有抑制作用。
地榆：拉丁学名Sanguisorba officinalis L.，药物属性：苦、酸、涩，微寒。归肝、大肠经。功能主治：凉血止血，泻火解毒。体外实验证明： 地榆 100%的煎液对伤寒杆菌、脑膜炎双球菌、福氏痢疾杆菌、宋内痢疾杆菌、乙型溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎双球菌、白喉杆菌、大肠杆菌、枯草杆菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌、绿脓杆菌、霍乱弧菌及人型结核杆菌均有不同程度的抑制作用。对某些真菌亦有不同程度的抑制作用．煎剂在0.50 mg/mL时对亚洲甲型流感病毒有效。
黄连：拉丁学名Coptis chinensis Franch，性味：苦、寒、无毒。归心、脾、胃、肝、胆、大肠经。功能主治：清热燥湿，泻火解毒。体外对金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、肺炎球菌、脑膜炎双球菌、痢疾杆菌、炭疽杆菌等具有较好的抗菌作用，亦具有较好的抗病毒作用，如抑制流感病毒、乙肝病毒等，体外还可抑制阿米巴原虫、阴道滴虫、锥虫等原虫。
黄柏：拉丁学名Cortex Phellodendri Chinensis，性味：苦、寒。归肾经、膀胱经、大肠经。功能主治：清热解毒，清热燥湿。主治湿热痢疾、泄泻、黄疸等。体外试验对金黄色葡萄球菌、肺炎球菌、白喉杆菌、草绿色链球菌、痢疾杆菌（宋内氏除外）、溶血性链球菌、脑膜炎球菌、霍乱弧菌、炭疽杆菌均有效或有较强的抑制作用；对枯草杆菌、百日咳杆菌、破伤风杆菌亦有抑制作用。
五倍子：拉丁学名Rhus chinensis Mill.，性味归经：味酸、涩，性寒，归肺、大肠、肾经。功效：敛肺，止汗，涩肠，固精，止血，解毒。主治：肺虚久咳，自汗盗汗，久痢久泻，各种出血等。五倍子煎剂对金黄色葡萄球菌、弗氏痢疾杆菌、猪霍乱杆菌及大肠杆菌均有抑制作用。本品能透入肠壁组织，抑制肠管平滑肌蠕动而有止泻作用。
蒲公英：拉丁学名 Herba Taraxaci。性味：甘、微苦、寒。功能主治：清热解毒，消肿散结。主治：对乳痈肿痛、疮黄疔毒有良效。对金黄色葡萄球菌和溶血性链球菌有较强的杀菌作用，对绿脓杆菌、变形杆菌、痢疾杆菌等有一定的杀菌作用。
地锦草：拉丁学名Euphorbia humifusa Willd、Euphorbia maculata L.。性味：辛、平。归肺、肝、胃、大肠、膀胱经。功效：清热利湿，消肿解毒，凉血止血。体外实验表明：全草具有很强的抗菌作用，抗菌谱亦很广，且地锦草鲜汁、煎剂以及水煎浓缩乙醇提取液对于多种致病性球菌及杆菌均有明显抑菌作用。
鱼腥草：拉丁学名Houttuynia cordata Thunb.，味辛，性寒凉，归肺、膀胱、大肠经。能清热解毒、消肿疗疮、利尿除湿、清热止痢、健胃消食，用治实热、热毒、湿邪、疾热为患的肺痈、疮疡肿毒、痔疮便血、脾胃积热等。现代药理实验表明，本品具有抗菌、抗病毒、提高机体免疫力、利尿等作用。其次，对各种微生物（尤其是酵母菌和霉菌）均有抑制作用，对溶血性的链球菌、金黄色葡萄球菌、流感杆菌、卡他球菌、肺炎球菌有明显的抑制作用，对大肠杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌也有作用。
仙鹤草：拉丁学名Agrimonia pilosa Ldb.，性微温，味辛涩，温，无毒。归肺、肝、脾经。该品涩敛之性，能涩肠止泻止痢，因该品药性平和，兼能补虚，又能止血，故对于血痢及久病泻痢尤为适宜。仙鹤草的热水或乙醇浸液在试管内对枯草杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、福氏痢疾杆菌及伤寒杆菌等均有抑制作用。
马齿苋：拉丁学名Portulaca oleracea L.，性味归经：性寒，味甘酸，入心、肝、脾、大肠经。功效主治：清热解毒，利水去湿，散血消肿，除尘杀菌，消炎止痛，止血凉血。主治痢疾，肠炎，肾炎，产后子宫出血，便血，乳腺炎等病症。其乙醇提取物对大肠杆菌、变形杆菌、痢疾杆菌、伤寒、副伤寒杆菌有高度的抑制作用。对金黄色葡萄球菌、真菌如奥杜盎小芽胞癣菌、结核杆菌也有不同程度的抑制作用。对绿脓杆菌有轻度抑制作用。实验表明，在试管内（1：4）对痢疾杆菌有杀菌作用。煎剂在18.75-37.5 mg/mL浓度时， 对志贺、宋内、斯氏及费氏痢疾杆菌均有抑制作用。
车前草：拉丁学名Plantago asiatica，性味：甘、淡，性微寒。归经：归肺经、肝经、肾经、膀胱经。功能：清热利尿，渗湿止泻，明目，祛痰。主治：主小便不利，淋浊带下，水肿胀满，暑湿泻痢，目赤障翳，痰热咳喘。车前水浸剂对多种致病菌，如金黄色葡萄球菌、宋内痢疾杆菌、大肠杆菌、绿脓杆菌及伤寒杆菌亦有不同程度的抑制作用。
杠板归：拉丁学名Polygonum perfoliatum L.，酸，凉，有小毒。为清热解毒、利尿消肿、止痛之药。主治水肿，黄疸，泄泻，疟疾，顿咳，湿疹，疥癣。本品煎剂对志贺、斯密茨、福氏和宋内痢疾杆菌的抗菌效价分别为1:512，1:128，1:64，1:15。此外，本品煎剂对金黄色葡萄球菌、乙型链球菌、炭疽杆菌、白喉杆菌、枯草杆菌、伤寒杆菌、绿脓杆菌及流感嗜血杆菌等也有较强抗菌作用。
蓍草：学名Achillea sibirca。性味：苦、辛，性平温，小毒。归心、肝、肾经。功效：祛风止痛、活血止痛，清热解毒。主治疮黄肿毒、乳痈、咽喉肿痛、跌打损伤、毒蛇咬伤等。10 %鲜草醇溶性部分用平板纸片法，可见对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌及福氏痢疾杆菌有高度的抑制作用。
甘草：拉丁学名Glycyrrhiza uralensis Fisch。味甘甜，性平和，入十二经。生用偏凉，可泻火解毒、缓急止痛；炙用偏温，能散表寒、补中益气。主要用于脾胃虚弱之腹胀纳呆，乏力，能缓解腹中拘挛性疼痛。此外，甘草还善于调和药性，缓急定痛，解百药之毒，减轻药物对机体的毒副作用或对胃肠道的刺激，通过加入甘草能起到补气中和，调和各组分的作用。
组方原则：根据中兽医对腹泻的辩证分型和论治，仔猪腹泻大多为感受外邪，饮食所伤，脏腑虚衰及功能失调引起，其外因与湿盛的关系最为明显，内因与脾胃有关。因此中兽医以温中散寒、扶脾健胃、清热解毒、渗湿固涩、行中宽气、益气止泻、健脾消食为治疗原则。其中苦参、地榆、黄连、黄柏清热燥湿、发散表邪、泻火收敛，佐以解毒、抗炎；五倍子、蒲公英、地锦草、马齿苋清热止痢、渗湿止泻、清热解毒；鱼腥草、仙鹤草、车前草、杠板归、蓍草的涩敛之性，有助于清利湿热、涩肠止泻、健脾消食，佐以清热解毒、抗菌消炎及补虚；甘草具有泻火解毒、缓急止痛、补中益气、调和诸药的作用。全方配伍严谨，可抗菌消炎、清热止泻、健脾益气、和胃消食，增强断乳仔猪的免疫力，提高治愈率，无耐药性，有效控制仔猪腹泻病的发生。
本发明通过将卵黄抗体IgY、益生菌及中药复方提取液进行偶联、组合，制备出协同作用于细菌性和病毒性仔猪腹泻病源（包括细菌和病毒）的高生物利用度兽用靶向治疗药物，中药复方提取液有助于提高药物抗菌抑菌作用、提高腹泻仔猪免疫力及抗病能力，益生酵母菌和卵黄粉的营养成分可刺激免疫系统的防御能力，减少肠内有毒物质的产生，对机体免疫功能具有促进作用，可作为优质的饲料添加剂，有一定的开发应用价值。本发明提供的一种用于防治仔断乳猪腹泻药物组合物的制备方法，选材方便、提取效率高、成本相对较低，易于形成规模化生产。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为市售。本发明所用到的各种中药原料药都可从医药商店或试剂公司购买得到，其规格符合国家或行业标准即可。
实施例1特异性抗E.Coli-IgY、抗TGE-PED-PoRV-IgY卵黄抗体及相应的卵黄粉的制备
（1） 制备不同种类高免疫原性的免疫抗原及免疫方案
① 所述免疫原为大肠杆菌菌体蛋白抗原免疫物
选取大肠杆菌（E.coli，O157:K88，CVCC1489，购自中国兽医微生物菌种保藏管理中心）。主要致病菌的培养优选为以血琼脂斜面培养基进行传代，37 ℃培养24 h，染色镜检无杂菌，得到纯种。将主要致病菌接种于LB肉汤培养基（内含5-10 %犊牛血清及1-2 %的葡萄糖）中进行扩大培养，置37 ℃恒温振荡培养箱中(150-200 r/min)，培养24 h，离心收集细菌细胞。
菌体浓缩蛋白抗原免疫物的制备：将菌沉淀按照每克湿菌加入3 mL pH 7.0的PBS缓冲液的比例，漂洗2-3 次。按每克湿菌加入 5 mL细胞裂解液（商品名：细菌细胞蛋白裂解液，购自上海生工生物工程股份有限公司）的比例，混悬细菌细胞，20-37 ℃温育10-20 min，同时轻轻摇动。细菌细胞破碎后的匀浆液用超声波粉碎仪超声破碎（超声时间 5s，间歇时间 10 s，超声 20 min，功率 400 W），10000 rpm冷冻离心10 min，弃去细菌碎片沉淀，上清即为含有目的蛋白的粗提物。取上清， 18300 rpm冷冻离心30 min。弃上清，沉淀用0.5 %十二烷基肌氨酸钠悬浮，4 ℃作用1 h， 18300 rpm冷冻离心30 min。弃上清，沉淀用双蒸水混悬，用改良Bradford法测定目的菌体蛋白浓度，将其浓度调节到1.0 mg/mL。
将制备的菌体蛋白抗原与等体积的弗氏完全佐剂混合，利用超声波粉碎仪反复乳化3-4 次（每次乳化10-15 s，置4 ℃冰箱，间隔1 min），直至完全乳化抗原和佐剂混合物，即制得抗原免疫物。
免疫方案：制定多次交替的免疫程序，选择具有高免应答能力的健康产蛋鸡(180日龄)，采用肌肉、皮下多点注射式途径，免疫间隔设定为10日、免疫3次（基础免疫1次、加强免疫2次）、免疫接种剂量为0.50 mg的免疫方案。首免1周后，收集免疫鸡产下的蛋为样品，采用ELISA法测定抗体效价，当卵黄抗体IgY抗体效价大于1: 2000-3000，即高免鸡蛋，备用。
② 所述免疫原为传染性胃肠炎-猪流行性腹泻-猪轮状病毒
采用猪传染性胃肠炎（TGE）-猪流行性腹泻（PED）-猪轮状病毒（PoRV）（G5型）三联活疫苗，由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所维科生物技术开发公司生产，兽药生字（2015）080011097。
免疫方案：用无菌生理盐水将活疫苗进行稀释0.5 mL/头份，采用肌肉注射途径。选择180日龄的健康高产蛋鸡，首次免疫，活疫苗肌注0.5 mL；间隔10 d，活疫苗进行第2次加强免疫，肌注1 mL；间隔20 d，使用活疫苗进行第3次加强免疫，肌注1 mL。第3次免疫后采用琼脂扩散法进行抗体监测，血清抗体效价大于1:32时，收集高免鸡蛋，备用。
（2）采用水稀释法-冷冻法分离特异性卵黄抗体IgY
将高免鸡蛋用碘酒和酒精棉球进行消毒处理，分离蛋黄和蛋清，刺破蛋黄膜，收集无膜蛋黄液并计量体积。取卵黄液 + 去离子水以1:：6-10 的比例混合(v/v，每个鸡蛋的卵黄液平均按15 mL计)，pH 值调至5.0-6.0，-20 ℃过夜（约8-10 h）。4 ℃解冻，对析出的脱脂上清液及卵黄沉淀分别进行高速冷冻离心，合并的上清液即为制得的特异性卵黄抗体IgY粗提液，合并的卵黄沉淀物即为卵黄磷脂等营养成分。
将特异性卵黄抗体IgY粗提液（上清液）进行冷冻干燥，分别得到固态抗E.Coli-IgY卵黄抗体干粉和抗TGE-PED-PoRV-IgY卵黄抗体干粉，备用。将卵黄沉淀物分别喷雾干燥，制备抗E.Coli-IgY抗体源的固态卵黄粉和抗TGE-PED-PoRV-IgY抗体源的固态卵黄粉，备用。
实施例2 益生酵母菌干粉的制备，步骤如下：
（1）培养基的配制：
液体培养基：成分包括葡萄糖50 g·L-1、酵母浸膏2.0 g·L-1、麦芽汁120 mL/L、MgSO4 0.5 g·L-1、FeSO4 0.1 g·L-1、尿素1.0 g·L-1。调整pH至6.0，121℃，灭菌30 min，分装至锥形瓶，备用。
斜面与平板培养基（g·L-1）：成分包括葡萄糖50 g·L-1、酵母浸膏2.0 g·L-1、麦芽汁120 mL/L、MgSO4 0.5 g·L-1、FeSO4 0.1 g·L-1、尿素1.0 g·L-1、琼脂20 g·L-1。调整pH至6.0，121℃，灭菌20 min，倾注平板，备用。
（2）酵母菌培养：
酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae，购自中国兽医微生物菌种保藏管理中心，为饲料酵母，菌株编号2.1011），将菌种从斜面贮种中挑出一环生长较为丰满的酵母菌菌苔，接于50 mL的液体培养基中，置30℃恒温培养，约24 h左右，即可发至对数期，此时摇匀菌液，将其转接到100 mL的液体培养基中，相同条件下培养24 h，即得复壮酵母。
转接、扩大培养：将复壮酵母接入液体培养基，30℃，40 r/min摇床培养，观察。菌种扩大传代培养的接种量控制在6-10 %，装液量小于60 %以保证溶氧量，培养温度30℃，转速40 r/min恒温摇床培养以增加通气量，液体培养基的pH值6.0，糖浓度5 %，酵母浸膏浓度2.0 g·L-1。控制菌含量以9.0×108 CFU/mL为宜（3.0麦氏比浊管浓度）。
（3）制备酵母菌冻干菌粉：
菌种离心浓缩（4℃，5000 rpm条件下，离心8-10 min），收集湿菌体。在湿菌体中分别加入基础冻干保护剂和蛋白稳定剂（以下均为质量百分比：3-5 %甘油、5-10 %脱脂奶粉、10-15%蔗糖或甘露醇、10-15 %的β-环糊精或阿拉伯胶），混匀，调整菌悬液的pH值至5.2左右，平衡时间为60 min。-20 ℃预冻12 h，真空冷冻干燥24 h，得到益生酵母菌干粉，控制菌含量以1.0-2.0×109 CFU/g为宜，真空密封存储，备用。
实施例3 中药复方提取液干粉的制备方法，其中各单味中药的配比如下：
中药组合物由以下重量份的各组分组成：
苦参10-30份、地榆10-30份、黄连10-20份、黄柏10-20份、五倍子10-20份、蒲公英10-20份、地锦草10-20份、鱼腥草5-15份、仙鹤草5-15份、马齿苋5-15份、车前草5-15份、杠板归2-15份、蓍草2-15份、甘草5-15份。
中药复方提取液干粉的制备方法为：
（1）将各单味中药经超微粉粉碎机粉碎，过100-120目筛；
（2）将步骤（1）中得到的各超微粉单味中药按配方量组方、混合，加3-10倍质量的无离子水冷浸30-60 分钟，煎煮3次，每次煎煮1-3小时，过滤去渣，合并煎煮的滤液，在0.09MPa 和50-70 ℃的条件下，真空减压浓缩，浓缩液喷雾干燥，即得中药复方提取液干粉。
优选地，是将步骤（1）中得到的各超微粉单味中药按配方量组方、混合，加7-10倍质量的无离子水冷浸30-60 分钟，煎煮2-3小时，过滤后，再在滤渣中加入3-6倍质量的无离子水煎煮两次，每次煎煮1-2小时，将三次煎煮的药液合并，在0.09MPa 和50-70 ℃的条件下，真空减压浓缩，浓缩液喷雾干燥，即得中药复方提取液干粉。
以下为几个较优配方及制备方法：
（1）中药复方提取液1号的组分配比（单位：g）：苦参15、地榆15、黄连15、黄柏15、五倍子15、蒲公英15、地锦草15、鱼腥草10、仙鹤草10、马齿苋10、车前草10、杠板归8、蓍草8、甘草10份。
中药复方提取液1号干粉的制备方法为：
（1）将各单味中药经超微粉粉碎机粉碎，过100目筛；
（2）将步骤（1）中得到的各超微粉单味中药按配方量组方、混合，加8倍质量的无离子水冷浸40分钟，煎煮2 h，煎煮液过滤；然后在滤渣中加入3倍质量的无离子水，煎煮1 h，煎煮液过滤；滤渣再加入3倍质量的无离子水，煎煮1 h，煎煮液过滤。合并上述3 次的煎煮过滤液，在0.09MPa 和60℃的条件下，真空减压浓缩，浓缩液喷雾干燥，即得中药复方提取液干粉。
（2）中药复方提取液2号的组分配比（单位：g）：苦参10、地榆10、黄连10、黄柏10、五倍子10、蒲公英10、地锦草10、鱼腥草5、仙鹤草5、马齿苋5、车前草5、杠板归2、蓍草2、甘草5。
中药复方提取液2号干粉的制备方法为：
（1）将各单味中药经超微粉粉碎机粉碎，过120目筛；
（2）将步骤（1）中得到的各超微粉单味中药按配方量组方、混合，加7倍质量的无离子水冷浸30分钟，煎煮2h，煎煮液过滤；然后在滤渣中加入3倍质量的无离子水，煎煮2 h，煎煮液过滤；滤渣再加入3倍质量的无离子水，煎煮1 h，煎煮液过滤。合并上述3 次的煎煮过滤液，在0.09MPa 和50℃的条件下，真空减压浓缩，浓缩液喷雾干燥，即得中药复方提取液干粉。
（3）中药复方提取液3号的组分配比（单位：g）：苦参30、地榆30、黄连20、黄柏20、五倍子20、蒲公英20、地锦草20、鱼腥草15、仙鹤草15、马齿苋15、车前草15、杠板归15、蓍草15、甘草15。
中药复方提取液3号干粉的制备方法为：
（1）将各单味中药经超微粉粉碎机粉碎，过110目筛；
（2）将步骤（1）中得到的各超微粉单味中药按配方量组方、混合，加9倍质量的无离子水冷浸60分钟，煎煮3h，煎煮液过滤；然后在滤渣中加入5倍质量的无离子水，煎煮1.5 h，煎煮液过滤；滤渣再加入4倍质量的无离子水，煎煮1.5h，煎煮液过滤。合并上述3 次的煎煮过滤液，在0.09MPa 和55℃的条件下，真空减压浓缩，浓缩液喷雾干燥，即得中药复方提取液干粉。
（4）中药复方提取液4号的组分配比（单位：g）：苦参20、地榆20、黄连15、黄柏15、五倍子15、蒲公英15、地锦草15、鱼腥草15、仙鹤草15、马齿苋15、车前草15、杠板归10、蓍草10、甘草10。
中药复方提取液4号干粉的制备方法为：
（1）将各单味中药经超微粉粉碎机粉碎，过110目筛；
（2）将步骤（1）中得到的各超微粉单味中药按配方量组方、混合，加9倍质量的无离子水冷浸50分钟，煎煮3h，煎煮液过滤；然后在滤渣中加入4倍质量的无离子水，煎煮2 h，煎煮液过滤；滤渣再加入3倍质量的无离子水，煎煮2h，煎煮液过滤。合并上述3 次的煎煮过滤液，在0.09MPa 和65℃的条件下，真空减压浓缩，浓缩液喷雾干燥，即得中药复方提取液干粉。
（5）中药复方提取液5号的组分配比（单位：g）：苦参25、地榆25、黄连15、黄柏15、五倍子10、蒲公英10、地锦草10、鱼腥草10、仙鹤草10、马齿苋10、车前草10、杠板归5、蓍草5、甘草5。
中药复方提取液5号干粉的制备方法为：
（1）将各单味中药经超微粉粉碎机粉碎，过100目筛；
（2）将步骤（1）中得到的各超微粉单味中药按配方量组方、混合，加10倍质量的无离子水冷浸60分钟，煎煮2h，煎煮液过滤；然后在滤渣中加入6倍质量的无离子水，煎煮1 h，煎煮液过滤；滤渣再加入4倍质量的无离子水，煎煮1h，煎煮液过滤。合并上述3 次的煎煮过滤液，在0.09MPa 和70℃的条件下，真空减压浓缩，浓缩液喷雾干燥，即得中药复方提取液干粉。
（6）中药复方提取液6号的组分配比（单位：g）：苦参15、地榆15、黄连12、黄柏12、五倍子12、蒲公英15、地锦草10、鱼腥草10、仙鹤草12、马齿苋12、车前草10、杠板归8、蓍草6、甘草6。
中药复方提取液6号干粉的制备方法为：
（1）将各单味中药经超微粉粉碎机粉碎，过120目筛；
（2）将步骤（1）中得到的各超微粉单味中药按配方量组方、混合，加10倍质量的无离子水冷浸60分钟，煎煮2h，煎煮液过滤；然后在滤渣中加入5倍质量的无离子水，煎煮1 h，煎煮液过滤；滤渣再加入5倍质量的无离子水，煎煮1h，煎煮液过滤。合并上述3 次的煎煮过滤液，在0.09MPa 和70℃的条件下，真空减压浓缩，浓缩液喷雾干燥，即得中药复方提取液干粉。
实施例4 药物组合物散剂的制备方法，步骤如下：
本发明的药物组合物包括以下各组分：
抗E.Coli-IgY卵黄抗体干粉 2.5-10wt %，抗TGE-PED-PoRV-IgY卵黄抗体干粉 2.5-10 wt %，中药复方提取液干粉60-90 wt %，卵黄粉5-30 wt %，益生酵母菌干粉0.5×108--5.0×108 CFU/g；其中，抗E.Coli-IgY卵黄抗体干粉、抗TGE-PED-PoRV-IgY卵黄抗体干粉、中药复方提取液干粉和卵黄粉的质量百分比和为100%。
其中，抗E.Coli-IgY卵黄抗体，抗TGE-PED-PoRV-IgY卵黄抗体和卵黄粉按照实施例1中的方法制备。
卵黄粉由抗E.Coli-IgY抗体源的固态卵黄粉和抗TGE-PED-PoRV-IgY抗体源的固态卵黄粉组成，两者的质量比为1:1。
中药复方提取液干粉按照实施例3中的方法制备。
益生酵母菌干粉按照实施例2中的方法制备。
本发明的药物组合物的制备方法为：
先将抗E.Coli-IgY卵黄抗体干粉与抗TGE-PED-PoRV-IgY卵黄抗体干粉进行等重量份混合，再将混合后的卵黄抗体干粉与中药复方提取液干粉和卵黄粉按照配方量混合，并加入益生酵母菌干粉（添加数量为0.5×108--5.0×108 CFU/g）进行混合，即制成药物组合物散剂。
以下为几个较优配方及制备方法：
（1）药物组合物1号：由以下各组分制备而成：
抗E.Coli-IgY卵黄抗体干粉10 wt%，抗TGE-PED-PoRV-IgY卵黄抗体干粉10 wt%，中药复方提取液1号干粉70 wt%，卵黄粉10 wt%；益生酵母菌干粉5.0×108 CFU/g。
（2）药物组合物2号：由以下各组分制备而成：
抗E.Coli-IgY卵黄抗体干粉2.5 wt%，抗TGE-PED-PoRV-IgY卵黄抗体干粉2.5 wt%，中药复方提取液2号干粉65 wt%，卵黄粉30 wt%；益生酵母菌干粉2.0×108 CFU/g。
（3）药物组合物3号：由以下各组分制备而成：
抗E.Coli-IgY卵黄抗体干粉5 wt%，抗TGE-PED-PoRV-IgY卵黄抗体干粉5 wt%，中药复方提取液3号干粉85 wt%，卵黄粉5 wt%；益生酵母菌干粉1.0×108 CFU/g。
（4）药物组合物4号：由以下各组分制备而成：
抗E.Coli-IgY卵黄抗体干粉6 wt%，抗TGE-PED-PoRV-IgY卵黄抗体干粉6 wt%，中药复方提取液4号干粉73 wt%，卵黄粉15 wt%，益生酵母菌干粉3.0×108 CFU/g。
（5）药物组合物5号：由以下各组分制备而成：
抗E.Coli-IgY卵黄抗体干粉8 wt%，抗TGE-PED-PoRV-IgY卵黄抗体干粉8 wt%，中药复方提取液5号干粉64 wt%，卵黄粉20 wt%，益生酵母菌干粉4.0×108 CFU/g。
（6）药物组合物6号：由以下各组分制备而成：
抗E.Coli-IgY卵黄抗体干粉5 wt%，抗TGE-PED-PoRV-IgY卵黄抗体干粉5 wt%，中药复方提取液6号干粉70 wt%，卵黄粉20 wt%，益生酵母菌干粉5.0×108 CFU/g。
上述较优配方的制备方法为：
先将抗E.Coli-IgY卵黄抗体干粉与抗TGE-PED-PoRV-IgY卵黄抗体干粉进行等重量份混合，再将混合后的卵黄抗体干粉与中药复方提取液干粉和卵黄粉按照配方量混合，并加入配方量的益生酵母菌干粉进行混合，即制成药物组合物散剂。
当上述药物组合物散剂作为饲料添加剂时，药物组合物散剂在断奶仔猪基础日粮中的添加量为10--30 %（w/v，饮水服用时为质量/体积百分比。w/w，饲料拌服及作为饲料添加剂时为质量/质量百分比）。
本发明的药物组合物可在防治仔猪腹泻疾病中加以应用，特别可用于制备防治断奶仔猪腹泻的药物，使用时，可将药物组合物散剂拌料混饲，或饮水后通过消化道给药。使用方法：饮水给药或饲料拌服给药。用量：200 g/L（w/v，饮水），200 g/kg（w/w，饲料拌服及饲料添加剂），2 次/d，5 d为1个疗程。
实施例5 本发明的药物组合物的性能试验研究
经实验，以本发明实施例4的方法制备得到的药物组合物均具有良好的稳定性、安全性、无毒性。以本发明实施例3的方法制备得到的中药复方提取液均具有良好的体外抑菌性能，能够很好的抑制大肠埃希菌、乙型副伤寒沙门菌、变形杆菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌、化脓性链球菌、停乳链球菌、枯草芽孢杆菌等，其中以中药复方提取液6号的抑菌性能最佳；在临床疗效试验时，本发明实施例4的方法制备得到的药物组合物对断奶仔猪腹泻均具有很好的疗效，其中以药物组合物6号的疗效最佳。以下给出中药复方提取液6号、药物组合物6号的效果试验。
实验1 本发明的中药复方提取液干粉的抑菌试验
1 材料与方法
采用试管二倍稀释法联合琼脂平板法测定中药的MIC值，通过管碟法（采用牛津杯加注药液的体外抑菌法）分别观察药物的抑菌活性强度。稀释液为MH 肉汤，菌种培养采用哥伦比亚血平板。
受试药物：中药复方提取液1号干粉、5号干粉及6号干粉，按照实施例3所示方法制备。
选取中药提取液1号干粉、5号干粉及6号干粉，称取适量药物干粉，并用纯化水配制成混悬液，分别制备1号、5号及6号药物原液（浓度均为500 mg/mL），于121 ℃高压灭菌15 min，置4 ℃冰箱保存，备用。
对照药：双黄连粉针剂，哈药集团中药二厂生产，国药准字Z10940044，规格600 mg/支，药物原液配制浓度为600 mg/mL。
试验菌株：大肠埃希菌（E. coli) [CMCC(B) 44102]、乙型副伤寒沙门菌（Salmonella paratyphi B）[CMCC（B）50094]、变形杆菌(Proteusbacillus vulgaris) [CMCC(B) 49027]、绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa) [CICC10419]、金黄色葡萄球菌（S. aureus) [CMCC(B) 26003]、化脓性链球菌 (S. pyogenes) [ATCC19615]、停乳链球菌(S. dysgalactiae)[ATCC 35666]、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) [CMCC(B) 63501]，分别购自中国普通微生物菌种保藏管理中心和中国工业微生物菌种保藏与管理中心，具有ATCC官方授权。
1.1 体外抑菌试验
1.1.1 试管二倍稀释法联合琼脂平板法
接种菌量的准备：取各菌（细菌）的肉汤培养物，按10倍稀释法，用0.9%无菌生理盐水溶液，制备浓度相当于0.5麦氏标准比浊管的供试菌悬液，再用MH 肉汤稀释至含菌量为1×107 CFU /mL，备用。
试管法稀释药物原液的步骤：试验组和对照组的稀释方法相同。取22支5 mL无菌离心管，试验组11支，对照组11支，编号。每组除1# 管外，其余各管（2#管至11#管）均加入2 mL 的 MH肉汤（用于细菌，链球菌采用加入2 %小牛血清的MH 肉汤），在1# 管、2# 管中分别加入2 mL灭菌药物原液，则1# 管为抗菌药物原液。混匀2# 管的药物药液与营养肉汤，吸出2 mL加入3#管，依次类推，倍比稀释到10# 管，从10# 管吸出2 mL弃去，试验组的11# 管为不含药物的生长对照。对照组的1# 管只加入2 mL药液、不加MH肉汤和细菌，为药液对照。对照组的11# 管只加入2 mL MH肉汤，不加药液和细菌，为空白对照。
接种 试验组1#管至11#管，每管依次加入100 μL稀释的菌液，对照组11支管，不加稀释的菌液。置于37 ℃恒温培养箱中孵育18-24 h。
结果初步判定：试验组各管分别与对照组相同药物浓度的各管进行对比。若试管内混浊，说明有细菌生长；若试管内澄清透明，说明无细菌生长。无细菌生长而含药液浓度最低者，即为该种药物对多种细菌及真菌的最低抑菌浓度MIC。
转种 将试验组和对照组各管内中药与细菌的培养物，划线接种到血平板，置于37 ℃恒温培养箱中孵育18-24 h。
结果判定 观察血平板上有无细菌生长，血平板上无细菌生长的对应试管，即为受试药物对该菌的最低抑菌浓度（MIC）。各菌重复3次，求平均值。
1.1.2 管碟法：
培养基平板的制备：水解酪蛋白琼脂培养基（pH 7.2-7.4）按商品说明书进行配制。121 ℃灭菌15 min，待温度降至50～60 ℃左右，倾注无菌平皿，使琼脂厚度为4 mm。链球菌使用含5 %脱纤维绵羊血（v/v）的MH琼脂平板。MH琼脂平板使用前应置35 ℃孵育30 min，使其表面干燥。
牛津杯加注药液法：将制备的菌液用灭菌生理盐水稀释至最佳涂布浓度，用灭菌棉签蘸取菌液，将多余的菌液沿管壁挤出，然后均匀涂布至MH琼脂平板，共3次，每次旋转平板60°，最后沿平板内缘涂抹一周，以取得均匀接种。平板加盖置放于超净工作台内，干燥至少3 min，不超过15 min。将灭菌牛津杯在酒精灯上微灼，在每个琼脂平板表面上等距离放置4只牛津杯，并在每只牛津杯中加入受试药液200 μL（药物浓度均选取500 mg/mL）。在牛津杯上覆盖2张灭菌滤纸（以防培养时水珠掉下影响实验结果），合盖，平皿平置，于37℃恒温培养箱中孵育20～24 h。
结果判定：抑菌环直径小于10 mm，为无抑菌作用；介于在10～15 mm，为抑菌作用较弱；介于在15～20 mm，为中等强度抑菌作用；大于20 mm，为具有较强抑菌作用。
2 结果与分析
通过预实验初步确定，中药提取液1号、5号、6号干粉均具有良好的抑菌效果，中药提取液6号干粉的药物原液较1号干粉、5号干粉具有最强抑菌效果，故正式试验选取中药提取液6号干粉的药物原液进行试验。试验结果见表 1。
表 1 中药提取液干粉6号的最小抑菌浓度(MIC)及抗菌活性
3 结 论
中药提取物6号干粉对畜禽常见致病菌均有抑菌作用，其中对链球菌属和金黄色葡萄球菌的抑菌效果较强，MIC值介于15.6-31.25 mg/mL，对一般致病性肠杆菌亦具有较好的的抑菌作用，MIC值在31.25-62.5 mg/mL左右，对强致病性肠杆菌具有中等强度抑菌作用。较之双黄连药物，两者MIC值相差不大，对常见病原菌均具有中强度抑菌作用，抑菌效果较理想。
管碟法结果与MIC值相一致，在药物浓度500 mg/mL的情况下，中药提取物6号干粉对链球菌属及金黄色葡萄球菌具有较好的抑菌效果和杀菌作用，抑菌环直径介于22.0-26.0 mm范围；对常见肠杆菌具有中等强度的抑菌活性，抑菌环直径介于16.0-21.0 mm之间。较之双黄连药物，中药提取物6号干粉的抑菌圈直径及抑菌效果均强于对照药，故对肠道细菌性腹泻有治疗作用。
实验2 本发明的药物组合物的急性毒性试验
1 材料与方法
试验药品：药物组合物散剂，按照本发明实施例4方法制备，其中的中药复方提取物为中药复方提取液6号干粉，药物组合物的配方为药物组合物6号。
试验动物：昆明系清洁级小鼠60只，小鼠体重18 g-22 g，雌雄各半，雌性小鼠未产未孕。饲养条件：试验清洁级颗粒鼠粮（苏饲审（2008）01008），室内温度22±2 ℃，相对湿度为30 %～60 %，自由采食与饮水。连续观察1周，临床健康即可用于试验，试验期间按常规饲养。
2 急性毒性试验
将健康小鼠随机分成5个剂量组和1个对照组，组间剂量比设为1:1.2。每组10只，雌雄各半，并对每只小鼠进行称重。灌胃前8 h、灌胃后4 h禁食，但可自由饮水。
各药物剂量组根据小鼠体质量，按照1.20、1.44、1.72、2.07、2.49 g/kg的药物剂量计算给药量，以等浓度口服液经口灌喂给药，每日最大灌胃量不超过1.0 mL/只。对照组灌服生理盐水。试验期间所有小鼠自由采食与饮水。
观察指标：给药后3 h内，每隔30 min观察1次小鼠的健康状况、中毒表现及死亡过程，包括采食饮水、行为及反应、自主活动、呼吸急促或放缓状态、被毛松散度、症状起始时间和持续时间、死亡等情况；之后，每隔2 h观察1次；2 d后，每天观察6次，连续观察7 d，统计死亡率。
3 结果与分析
给药灌胃后，中、高剂量组小鼠（1.72、2.07、2.49 g/kg剂量组）出现精神沉郁、活动量减少的现象，未见其他明显的异常反应。灌胃后第2 d，1.20、1.44、1.72 g/kg剂量组小鼠饮食、饮水量均有一定程度的增加，活动增多，精神状态良好，未出现异常反应。灌胃后第3-7 d，2.07 g/kg剂量组小鼠精神状态逐渐恢复，食欲良好，未出现毒性反应，而2.49 g/kg药物剂量组小鼠，精神欠佳，至试验结束出现1例死亡小鼠，死亡小鼠剖检检查结果显示，脏器无实质性异常变化，胃壁有黑色区域，未见明显出血、淤血。
4 结论
结果表明，采用改良寇氏法计算药物组合物的LD50为3637.10 mg/kg，95 %置信区间为：3248.6--4135.6 mg/kg。依照《兽药试验技术规范汇编》中急性毒性试验规定，在外源化学物急性毒性分级标准中，小鼠一次经口 LD50在 500～5000 mg/kg范围内，即可认为该药物基本无毒。
实验3 本发明的药物组合物腹泻仔猪的免疫防治效果及生产性能的观察
1 材料与方法
1.1 试验材料
试验药品：药物组合物散剂，按照本发明实施例4方法制备，其中的中药复方提取物为中药复方提取液6号干粉，药物组合物的配方为药物组合物6号。
试验动物：兰州市榆中和平镇兰州种猪场新生断乳仔猪。
1.2 试验方法
1.2.1 试验动物及分组
试验选取28日龄断奶的三元[杜×(大×长)]杂交仔猪36头，平均初始体重为5.22±0.89 kg，采用2处理3重复双因子设计，2处理分别为药物组和对照组，每个处理组3个重复，每个重复6头仔猪。
1.2.2 饲养管理
所有参试仔猪均打耳号标记，每个重复仔猪饲养于一栏，自由采食、自由饮水，免疫消毒程序按猪场常规方法进行。仔猪21日龄起观察其临床症状，无异常临床症状者于28日龄开始试验。用量与用法：对照组饲喂基础日粮，药物组在此基础上按200 g/kg剂量，拌料混饲，2 次/d，连用3 d，连续观察14天。
1.3 观察测定指标
每日观察猪只的精神、采食、饮水、粪便及活动情况，腹泻程度以腹泻开始时间、持续时间和腹泻指数来反应。记录每个重复仔猪每日总腹泻头数，并单独记录腹泻呈水样头数，统计腹泻发生率和严重腹泻发生率。试验开始及结束前每周进行个体称重、结料，以每个重复为单位计算平均日增重。记录耗粮量，以每个重复为单位计算平均料重比。
2 结果与分析
2.1 对断乳仔猪腹泻的免疫防治效果（见表2）
表2 不同处理组对断奶仔猪腹泻率的影响
2.2 对断乳仔猪生产性能的影响（见表3）
表3 不同处理组对断奶仔猪生产性能的影响
注： 表中数据采用平均数±标准误（X±SE）表示，与对照组相比，＊＊表示差异极显著，p＜0.01，＊表示差异显著，p＜0.05。
3 结论
3.1 较之对照组，该药物组合物可显著降低断奶仔猪的腹泻率、严重腹泻率和死亡率，其中腹泻率下降27.80百分点，且3个重复组内均无严重水样腹泻和病猪死亡状况发生，因此，本发明的药物组合物可提高断乳仔猪的存活率，对缓解及防治断乳仔猪腹泻的具有明显临床效果。
3.2 该药物组合物显著提高断奶仔猪的日增重（p＜0.01）、日采食量（p＜0.01），降低料重比（p＜0.05），促进断奶仔猪生长，有助于改善仔猪生产性能，具有较好的提高断乳仔猪生长速率的趋势及较好的阶段增重优势，在预防仔猪消化道疾病方面有良好防治效果。
实验4 本发明的药物组合物对临床型腹泻仔猪的治疗试验
1 材料与方法
1.1 试验材料
试验药品：药物组合物散剂，按照本发明实施例4方法制备，其中的中药复方提取物为中药复方提取液6号干粉，药物组合物的配方为药物组合物6号。
试验动物：兰州市周边大中型种猪场、个体养猪场、榆中和平镇兰州种猪场断乳腹泻仔猪，个别仔猪呈严重水样腹泻症状。
1.2 临床腹泻仔猪治疗试验
1.2.1 治疗方案
药物用法与剂量：剂量为200 g/kg，拌料混饲，每天投药2 次，连服3天，5 天为1个疗程，连续观察10 d。
1.2.2 治愈判定标准：腹泻症状停止且随后排出粪便正常，仔猪食欲恢复正常，且精神状态、饮水等活动情况均正常。
2 疗效观察结果
共计治疗腹泻仔猪160头，2日治愈38头，占23.75 %；3日治愈77头，占48.13 %；4日治愈36头，占22.50 %。 9头严重腹泻仔猪（占5.63 %），在头一个疗程结束后，未完全恢复，至第二个疗程结束时，基本恢复正常。服药治疗期间腹泻仔猪未对药物产生毒副作用，后期的流行病学疗效追踪调查结果显示，愈后仔猪无腹泻复发情况发生。
整个疗效观察期间未发生腹泻仔猪死亡现象。
3 结论与分析
本发明的药物组合物由特异性卵黄抗体、益生菌、中药复方提取物及卵黄粉组成。临床常见的仔猪腹泻其严重程度与大肠杆菌、致腹泻病毒的增殖及增殖程度成正比例关系。试验结果表明，该药物组合物中的卵黄抗体IgY可定向杀灭致病病原体，降低感染程度，预后不易复发，说明其还具有良好的同群免疫保护效果。同时，中药复方有效组分对病原体亦具有良好的抑菌杀灭作用，并兼具提高仔猪免疫力及抗病力的功效。其中的益生酵母菌通过调节肠道内微生物菌群的平衡，可提高仔猪的非特异性抗感染能力，卵黄粉亦具有较高的营养价值，对有效防治仔猪腹泻、提高断乳仔猪存活率和生产性能具有至关重要的作用。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。