本发明涉及一种中药组合物，具体地说，涉及一种抗肿瘤的中药组合物及其应用。
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：恶性肿瘤又称癌症，已成为威胁人类生命的常见病、多发病，为我国城市人口死亡十大病因之首。据世界卫生组织(who)报告，全世界癌症的发病率正以每年3％的速度递增，每年因癌症而死亡人数高达600多万人。因此，加强恶性肿瘤治疗的研究，提高现有各种手段的治疗效果，探索新的治疗途径，改善癌症患者的生活质量，减少复发率，降低死亡率，是目前临床肿瘤工作者的当务之急。现代医学治疗方法主要有手术切除、放射疗法、化学疗法、免疫疗法、靶向治疗等等。手术治疗目前仍为大多数肿瘤治疗首选，但只适用于临床分期为早中期的肿瘤患者，对晚期已发生转移的肿瘤患者，只能采用化疗、放疗等姑息性治疗手段，这些治疗的特点是在杀伤肿瘤细胞的同时对正常组织细胞也有一定的损伤，毒副反应严重者可能导致患者治疗终止；免疫方法为肿瘤治疗开辟了一条新途径，但目前疗效及适应症尚在摸索中。中医认为恶性肿瘤是表现于局部的全身性疾病，它的发生、发展是一个缓慢、渐进的过程，是机体内环境失调后的局部表现。并认为肿瘤的发生与痰、瘀关系密切。早在《神农本草经》中，已有“胸中痰结留饮痰癖”之类的记载，认为“凡人上、中、下有块者，多是痰”，又言“癌瘤者，非阴阳正气所结肿，乃五脏瘀血浊气痰滞而成”，“自气成积，自积成痰，痰夹瘀血，遂成窠囊”。说明肿瘤形成乃为痰瘀互结。针对“痰瘀”这一病因，采用的祛瘀化痰散结的方法为传统的肿瘤治疗大法之一。但中医学在消除局部致病因素的同时，更重视调动和提高人体自身的抗癌机能，扶助正气。因此，上千年来中医对肿瘤已有了相当的认识，除做了较为细致的临症观察外，还积累了很多治疗方药。因此，从传统中医药中寻找和开发组方精炼、疗效确切、安全有效的新中药制剂对于肿瘤的防治具有重要的临床和科学价值。中国专利文献cn200810079458.5，公开日2009.02.11，公开了一种具有预防和治疗双重功能的治疗恶性肿瘤的药物，该药物由黄芪、党参、金银花、蒲公英、柴胡、黄芩、白芍、九节菖蒲、三棱、天南星、半夏、白花蛇舌草、三七山、豆根、莪术药物组成，对各类癌细胞的生长具有抑制和杀伤灭功作用。中国专利文献cn201410430909.0，公开日2014.11.19，公开了一种治疗恶性肿瘤的中药组合物，由下述重量份的原料制成的：天花粉5-12份、三棱1-3份、莪术1-3份、桃仁3-5份、红花3-5份、制马钱子1-2份、土元1-3份、全蝎2-5份、蜈蚣1-3份、半夏3-5份、天南星1-2份、乳香3-5份、苏木3-8份、牛膝5-8份、山楂5-8份、党参8-12份、黄芪10-20份，该中药方剂具有补气活血，祛瘀解毒，化痰散结消肿的功效，对于脾虚血瘀痰浊型恶性肿瘤的治疗具有疗效明显、标本兼治、毒副作用小等优点。然而，中医理论博大精深，中药方剂配伍方法众多，药材之间的配伍关系更是微妙，因此中医学者对于方剂都会有自己独到的体会，并加以重新配伍，以期提高疗效。此外，当中药方剂应用于临床上，还要兼顾其制备难易、原料成本等多种因素。因此研制疗效好、成本低、便于制备的中药制剂具有更广阔的市场前景。技术实现要素：本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种抗肿瘤的中药组合物。本发明的再一的目的是，提供所述中药组合物的用途。本发明的另一的目的是，提供所述中药组合物的制备方法。为实现上述第一个目的，本发明采取的技术方案是：一种抗肿瘤的中药组合物，其由下列重量份的原料药制成：三棱9-15份、莪术9-15份、制半夏15-20份、制天南星15-20份、黄芪15-30份、白术15-30份。优选地，其由下列重量份的原料药制成：三棱10-12份、莪术10-12份、制半夏16-18份、制天南星16-18份、黄芪20-25份、白术20-25份。更优选地，其由下列重量份的原料药制成：三棱10份、莪术10份、制半夏18份、制天南星18份、黄芪20份、白术20份。作为本发明的一种具体实施方式，所述的中药组合物的剂型是合剂、颗粒剂、胶囊剂或片剂。优选地，所述的中药组合物制备方法包括以下步骤：a)中药提取：取三棱、莪术及白术，适当粉碎后置提取容器中，加入3味药材重量6-10倍量的蒸馏水，采用水蒸气蒸馏法回流提取4-8小时，收集挥发油；将粉碎处理的黄芪、制天南星、制半夏加入提取容器中，再加入该3味药材总重量6-10倍量的蒸馏水，搅拌均匀，煎煮2-3次，每次加水量均为药材总重量的6-10倍，每次0.5-1.5小时，合并煎煮液，浓缩，干燥，称重，得到浸膏；b)制备挥发油包合物：取相当于挥发油重量6-10倍量的挥发油包合材料，加入适量蒸馏水，在40-60℃下配制成饱和水溶液，不断搅拌下缓慢加入挥发油的无水乙醇稀释液，搅拌1-3小时，放置于2-8℃冰箱12-24小时，取出抽滤，用30-60℃石油醚洗涤沉淀，干燥，称重，得到挥发油包合物。为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是：如上任一所述的中药组合物在制备抗肿瘤药物中的应用。作为本发明的一个优选例，所述的肿瘤为胃癌、肝癌、肠癌、胰腺癌、胆囊癌或食管癌。为实现上述第三个目的，本发明采取的技术方案是：如上任一所述的中药组合物的制备方法，所述的制备方法包括以下步骤：a)中药提取：取三棱、莪术及白术，适当粉碎后置提取容器中，加入3味药材重量6-10倍量的蒸馏水，采用水蒸气蒸馏法回流提取4-8小时，收集挥发油；将粉碎处理的黄芪、制天南星、制半夏加入提取容器中，再加入该3味药材总重量6-10倍量的蒸馏水，搅拌均匀，煎煮2-3次，每次加水量均为药材总重量的6-10倍，每次0.5-1.5小时，合并煎煮液，浓缩，干燥，称重，得到浸膏；b)制备挥发油包合物：取相当于挥发油重量6-10倍量的挥发油包合材料，加入适量蒸馏水，在40-60℃下配制成饱和水溶液，不断搅拌下缓慢加入挥发油的无水乙醇稀释液，搅拌1-3小时，放置于2-8℃冰箱12-24小时，取出抽滤，用30-60℃石油醚洗涤沉淀，干燥，称重，得到挥发油包合物。优选地，所述的挥发油包合材料选自羟丙基-β-环糊精和/或β-环糊精。本文中，所述制半夏为半夏的炮制加工品，制法：取净半夏，大小分开，用水浸泡至内无干心，取出；另取甘草适量，加水煎煮二次，合并煎液，倒入用适量水制成的石灰液中，搅匀，加入上述已浸透的半夏，浸泡，每日搅拌1～2次，并保持浸液ph值12以上，至剖面黄色均匀，口尝微有麻舌感时，取出，洗净，阴干或烘干，即得，其中每100kg净半夏，用甘草15kg、生石灰10kg。所述制天南星为天南星的炮制加工品，制法：取净天南星，按大小分别用水浸泡，每日换水2～3次，如起白沫时，换水后加白矾(每100kg天南星，加白矾2kg)，泡一日后，再进行换水，至切开口尝微有麻舌感时取出。将生姜片、白矾置锅内加适量水煮沸后，倒入天南星共煮至无干心时取出，除去姜片，晾至四至六成干，切薄片，干燥，其中每100kg天南星，用生姜、白矾各12.5kg。本发明优点在于：1、本发明的中药组合物作用机理为：三棱、莪术为君，三棱味苦、平，功善破血中之气，破血的力量优于破气，《开宝本草》载“主老癖癥瘕结块”；莪术味苦、辛、温，具有消瘀消肿之效，《图经本草》载“今医家治积聚诸气为最要之药”。制半夏、制天南星为臣，制半夏味辛、温，具有燥湿化痰，消痞散结的功效，制天南星味苦辛、温，具有燥湿化痰，消肿散结的功效。黄芪、白术为佐使，黄芪味甘性微温，归肺、脾经，补气固表、托疮生肌；白术味苦甘温，归脾、胃经，补气健脾、燥湿利水，《珍珠囊》载“除湿益气，和中补阳”，共奏益气扶正之效。以上诸药合用具有祛瘀消癥、化痰软坚、扶正健脾益气等功效。动物实验表明，本发明中药组合物能够显著抑制裸鼠mkn-45胃腺癌移植瘤生长，下调裸鼠胃癌组织中pcna和egfr表达，改变walker-256腹水瘤模型大鼠肿瘤微环境，对肿瘤能起到很好的治疗作用。2、本发明中药组合物药味数较少，便于制备，原材料丰富易得，成本低。具体实施方式下面对本发明提供的具体实施方式作详细说明。实施例1本发明中药组合物的制备(一)各原料药重量份配比为：三棱9份、莪术9份、制半夏15份、制天南星15份、黄芪15份、白术15份。制备步骤如下：a)中药提取：取三棱、莪术及白术，适当粉碎后置提取容器中，加入3味药材重量6倍量的蒸馏水，采用水蒸气蒸馏法回流提取8小时，收集挥发油；将粉碎处理的黄芪、制天南星、制半夏加入提取容器中，再加入该3味药材总重量6倍量的蒸馏水，搅拌均匀，煎煮3次，每次加水量均为药材总重量的6倍，每次1.5小时，合并煎煮液，浓缩，干燥，称重，得到浸膏；b)制备挥发油包合物：取相当于挥发油重量6倍量的挥发油包合材料羟丙基-β-环糊精，加入适量蒸馏水，在60℃下配制成饱和水溶液，不断搅拌下缓慢加入挥发油的无水乙醇稀释液，搅拌1小时，放置于8℃冰箱12小时，取出抽滤，用30℃石油醚洗涤沉淀，干燥，称重，得到挥发油包合物；c)在上述步骤a)和b)所得的浸膏、挥发油包合物中加入常规药用辅料，制备成胶囊剂、颗粒剂、片剂或合剂。实施例2本发明中药组合物的制备(二)各原料药重量份配比为：三棱9份、莪术9份、制半夏20份、制天南星20份、黄芪15份、白术15份。制备步骤如下：a)中药提取：取三棱、莪术及白术，适当粉碎后置提取容器中，加入3味药材重量10倍量的蒸馏水，采用水蒸气蒸馏法回流提取4小时，收集挥发油；将粉碎处理的黄芪、制天南星、制半夏加入提取容器中，再加入该3味药材总重量10倍量的蒸馏水，搅拌均匀，煎煮2次，每次加水量均为药材总重量的10倍，每次0.5小时，合并煎煮液，浓缩，干燥，称重，得到浸膏；b)制备挥发油包合物：取相当于挥发油重量10倍量的挥发油包合材料β-环糊精，加入适量蒸馏水，在40℃下配制成饱和水溶液，不断搅拌下缓慢加入挥发油的无水乙醇稀释液，搅拌3小时，放置于2℃冰箱12小时，取出抽滤，用30℃石油醚洗涤沉淀，干燥，称重，得到挥发油包合物；c)在上述步骤a)和b)所得的浸膏、挥发油包合物中加入常规药用辅料，制备成胶囊剂、颗粒剂、片剂或合剂。实施例3本发明中药组合物的制备(三)各原料药重量份配比为：三棱9份、莪术9份、制半夏15份、制天南星15份、黄芪30份、白术30份。制备步骤如下：a)中药提取：取三棱、莪术及白术，适当粉碎后置提取容器中，加入3味药材重量8倍量的蒸馏水，采用水蒸气蒸馏法回流提取5小时，收集挥发油；将粉碎处理的黄芪、制天南星、制半夏加入提取容器中，再加入该3味药材总重量8倍量的蒸馏水，搅拌均匀，煎煮2次，每次加水量均为药材总重量的8倍，每次1小时，合并煎煮液，浓缩，干燥，称重，得到浸膏；b)制备挥发油包合物：取相当于挥发油重量8倍量的挥发油包合材料羟丙基-β-环糊精和β-环糊精，加入适量蒸馏水，在50℃下配制成饱和水溶液，不断搅拌下缓慢加入挥发油的无水乙醇稀释液，搅拌2小时，放置于4℃冰箱18小时，取出抽滤，用50℃石油醚洗涤沉淀，干燥，称重，得到挥发油包合物；c)在上述步骤a)和b)所得的浸膏、挥发油包合物中加入常规药用辅料，制备成胶囊剂、颗粒剂、片剂或合剂。实施例4本发明中药组合物的制备(四)各原料药重量份配比为：三棱9份、莪术9份、制半夏20份、制天南星20份、黄芪30份、白术30份。制备步骤如下：a)中药提取：取三棱、莪术及白术，适当粉碎后置提取容器中，加入3味药材重量6倍量的蒸馏水，采用水蒸气蒸馏法回流提取8小时，收集挥发油；将粉碎处理的黄芪、制天南星、制半夏加入提取容器中，再加入该3味药材总重量6倍量的蒸馏水，搅拌均匀，煎煮3次，每次加水量均为药材总重量的6倍，每次1.5小时，合并煎煮液，浓缩，干燥，称重，得到浸膏；b)制备挥发油包合物：取相当于挥发油重量6倍量的挥发油包合材料羟丙基-β-环糊精，加入适量蒸馏水，在60℃下配制成饱和水溶液，不断搅拌下缓慢加入挥发油的无水乙醇稀释液，搅拌1小时，放置于8℃冰箱12小时，取出抽滤，用30℃石油醚洗涤沉淀，干燥，称重，得到挥发油包合物；c)在上述步骤a)和b)所得的浸膏、挥发油包合物中加入常规药用辅料，制备成胶囊剂、颗粒剂、片剂或合剂。实施例5本发明中药组合物的制备(五)各原料药重量份配比为：三棱15份、莪术15份、制半夏15份、制天南星15份、黄芪15份、白术15份。制备步骤如下：a)中药提取：取三棱、莪术及白术，适当粉碎后置提取容器中，加入3味药材重量10倍量的蒸馏水，采用水蒸气蒸馏法回流提取4小时，收集挥发油；将粉碎处理的黄芪、制天南星、制半夏加入提取容器中，再加入该3味药材总重量10倍量的蒸馏水，搅拌均匀，煎煮2次，每次加水量均为药材总重量的10倍，每次0.5小时，合并煎煮液，浓缩，干燥，称重，得到浸膏；b)制备挥发油包合物：取相当于挥发油重量10倍量的挥发油包合材料β-环糊精，加入适量蒸馏水，在40℃下配制成饱和水溶液，不断搅拌下缓慢加入挥发油的无水乙醇稀释液，搅拌3小时，放置于2℃冰箱12小时，取出抽滤，用30℃石油醚洗涤沉淀，干燥，称重，得到挥发油包合物；c)在上述步骤a)和b)所得的浸膏、挥发油包合物中加入常规药用辅料，制备成胶囊剂、颗粒剂、片剂或合剂。实施例6本发明中药组合物的制备(六)各原料药重量份配比为：三棱15份、莪术15份、制半夏20份、制天南星20份、黄芪15份、白术15份。制备步骤如下：a)中药提取：取三棱、莪术及白术，适当粉碎后置提取容器中，加入3味药材重量8倍量的蒸馏水，采用水蒸气蒸馏法回流提取5小时，收集挥发油；将粉碎处理的黄芪、制天南星、制半夏加入提取容器中，再加入该3味药材总重量8倍量的蒸馏水，搅拌均匀，煎煮2次，每次加水量均为药材总重量的8倍，每次1小时，合并煎煮液，浓缩，干燥，称重，得到浸膏；b)制备挥发油包合物：取相当于挥发油重量8倍量的挥发油包合材料羟丙基-β-环糊精和β-环糊精，加入适量蒸馏水，在50℃下配制成饱和水溶液，不断搅拌下缓慢加入挥发油的无水乙醇稀释液，搅拌2小时，放置于4℃冰箱18小时，取出抽滤，用50℃石油醚洗涤沉淀，干燥，称重，得到挥发油包合物；c)在上述步骤a)和b)所得的浸膏、挥发油包合物中加入常规药用辅料，制备成胶囊剂、颗粒剂、片剂或合剂。实施例7本发明中药组合物的制备(七)各原料药重量份配比为：三棱15份、莪术15份、制半夏20份、制天南星20份、黄芪30份、白术30份。制备步骤如下：a)中药提取：取三棱、莪术及白术，适当粉碎后置提取容器中，加入3味药材重量6倍量的蒸馏水，采用水蒸气蒸馏法回流提取8小时，收集挥发油；将粉碎处理的黄芪、制天南星、制半夏加入提取容器中，再加入该3味药材总重量6倍量的蒸馏水，搅拌均匀，煎煮3次，每次加水量均为药材总重量的6倍，每次1.5小时，合并煎煮液，浓缩，干燥，称重，得到浸膏；b)制备挥发油包合物：取相当于挥发油重量6倍量的挥发油包合材料羟丙基-β-环糊精，加入适量蒸馏水，在60℃下配制成饱和水溶液，不断搅拌下缓慢加入挥发油的无水乙醇稀释液，搅拌1小时，放置于8℃冰箱12小时，取出抽滤，用30℃石油醚洗涤沉淀，干燥，称重，得到挥发油包合物；c)在上述步骤a)和b)所得的浸膏、挥发油包合物中加入常规药用辅料，制备成胶囊剂、颗粒剂、片剂或合剂。实施例8本发明中药组合物的制备(八)各原料药重量份配比为：三棱15份、莪术15份、制半夏15份、制天南星15份、黄芪30份、白术30份。制备步骤如下：a)中药提取：取三棱、莪术及白术，适当粉碎后置提取容器中，加入3味药材重量10倍量的蒸馏水，采用水蒸气蒸馏法回流提取4小时，收集挥发油；将粉碎处理的黄芪、制天南星、制半夏加入提取容器中，再加入该3味药材总重量10倍量的蒸馏水，搅拌均匀，煎煮2次，每次加水量均为药材总重量的10倍，每次0.5小时，合并煎煮液，浓缩，干燥，称重，得到浸膏；b)制备挥发油包合物：取相当于挥发油重量10倍量的挥发油包合材料β-环糊精，加入适量蒸馏水，在40℃下配制成饱和水溶液，不断搅拌下缓慢加入挥发油的无水乙醇稀释液，搅拌3小时，放置于2℃冰箱12小时，取出抽滤，用30℃石油醚洗涤沉淀，干燥，称重，得到挥发油包合物；c)在上述步骤a)和b)所得的浸膏、挥发油包合物中加入常规药用辅料，制备成胶囊剂、颗粒剂、片剂或合剂。实施例9本发明中药组合物的制备(九)各原料药重量份配比为：三棱10份、莪术10份、制半夏18份、制天南星18份、黄芪20份、白术20份。制备步骤如下：a)中药提取：取三棱、莪术及白术，适当粉碎后置提取容器中，加入3味药材重量8倍量的蒸馏水，采用水蒸气蒸馏法回流提取5小时，收集挥发油；将粉碎处理的黄芪、制天南星、制半夏加入提取容器中，再加入该3味药材总重量8倍量的蒸馏水，搅拌均匀，煎煮2次，每次加水量均为药材总重量的8倍，每次1小时，合并煎煮液，浓缩，干燥，称重，得到浸膏；b)制备挥发油包合物：取相当于挥发油重量8倍量的挥发油包合材料羟丙基-β-环糊精和β-环糊精，加入适量蒸馏水，在50℃下配制成饱和水溶液，不断搅拌下缓慢加入挥发油的无水乙醇稀释液，搅拌2小时，放置于4℃冰箱18小时，取出抽滤，用50℃石油醚洗涤沉淀，干燥，称重，得到挥发油包合物；c)在上述步骤a)和b)所得的浸膏、挥发油包合物中加入常规药用辅料，制备成胶囊剂、颗粒剂、片剂或合剂。实施例10对人胃癌mkn-45裸鼠移植瘤大小及pcna和egfr表达的影响一、实验方法1.药物制备：本发明中药：制备步骤如下：a)中药提取：取三棱100g、莪术100g及白术200g，适当粉碎后置提取容器中，加入3味药材重量8倍量的蒸馏水，采用水蒸气蒸馏法回流提取5小时，收集挥发油；将粉碎处理的黄芪200g、制天南星180g、制半夏180g加入提取容器中，再加入该3味药材总重量8倍量的蒸馏水，搅拌均匀，煎煮2次，每次加水量均为药材总重量的8倍，每次1小时，合并煎煮液，浓缩，干燥，称重，得到浸膏；b)制备挥发油包合物：取相当于挥发油重量8倍量的挥发油包合材料β-环糊精，加入适量蒸馏水，在50℃下配制成饱和水溶液，不断搅拌下缓慢加入挥发油的无水乙醇稀释液，搅拌2小时，放置于4℃冰箱18小时，取出抽滤，用50℃石油醚洗涤沉淀，干燥，称重，得到挥发油包合物；c)在上述步骤a)和b)所得的浸膏、挥发油包合物中加入β-环糊精，混匀，干燥，粉碎成细粉，加乙醇适量制粒，干燥，制成1000g。对照中药一：制备步骤如下：a)取全蝎100g、蜈蚣100g、制天南星180g、制半夏180g加入提取容器中，再加入该4味药材总重量8倍量的蒸馏水，搅拌均匀，煎煮2次，每次加水量均为药材总重量的8倍，每次1小时，合并煎煮液，浓缩，干燥，称重，得到浸膏；b)在上述步骤a)所得的浸膏中加入β-环糊精，混匀，干燥，粉碎成细粉，加乙醇适量制粒，干燥，制成1000g。对照中药二：制备步骤如下：a)中药提取：取白术200g，适当粉碎后置提取容器中，加入药材重量8倍量的蒸馏水，采用水蒸气蒸馏法回流提取5小时，收集挥发油；将粉碎处理的全蝎100g、蜈蚣100g、黄芪200g、制天南星180g、制半夏180g加入提取容器中，再加入该5味药材总重量8倍量的蒸馏水，搅拌均匀，煎煮2次，每次加水量均为药材总重量的8倍，每次1小时，合并煎煮液，浓缩，干燥，称重，得到浸膏；b)制备挥发油包合物：取相当于挥发油重量8倍量的挥发油包合材料β-环糊精，加入适量蒸馏水，在50℃下配制成饱和水溶液，不断搅拌下缓慢加入挥发油的无水乙醇稀释液，搅拌2小时，放置于4℃冰箱18小时，取出抽滤，用50℃石油醚洗涤沉淀，干燥，称重，得到挥发油包合物；c)在上述步骤a)和b)所得的浸膏、挥发油包合物中加入β-环糊精，混匀，干燥，粉碎成细粉，加乙醇适量制粒，干燥，制成1000g。对照中药三：制备步骤如下：a)中药提取：取黄芪150g、党参150g、金银花150g、蒲公英30g、柴胡30g、黄芩30g、白芍120g、九节菖蒲30g、三棱90g、天南星90g、半夏90g、白花蛇舌草300g、三七30g、山豆根90g、莪术90g加入提取容器中，再加入该15味药材总重量8倍量的蒸馏水，搅拌均匀，煎煮2次，每次加水量均为药材总重量的8倍，每次1小时，合并煎煮液，浓缩，干燥，称重，得到浸膏；b)在上述步骤a)所得的浸膏中加入β-环糊精，混匀，干燥，粉碎成细粉，加乙醇适量制粒，干燥，制成1000g。阳性对照药：5-氟尿嘧啶(fluorouracil，5-fu)10ml，0.25g。2.制备接种细胞悬液：无菌操作，体外培养mkn-45细胞生长密集时，0.05％胰蛋白酶和0.02％乙二胺四乙酸(ethylenediaminetet-raaceticacid，edta)消化1～2min，倾出消化液，加入无血清1640液洗涤，离心，用无血清1640液配成接种细胞，浓度为2×106/l。用相差显微镜观察呈均匀的单细胞悬液。3.皮下接种：无菌操作，消毒皮肤，取lml注射器，抽吸出0.4ml细胞悬液，接种在裸鼠右前肢根部皮下。裸小鼠皮下移植传代，取传代后14d左右的裸小鼠，无菌操作，从腋部皮下剥取肿瘤组织，剔除纤维包膜，切开，选取生长良好、呈淡红色、鱼肉状瘤组织，切成1mm×1mm×1mm小块，置于生理盐水中备用。裸鼠称质量后以75mg/kg氯胺酮腹腔注射麻醉，沿上腹正中线切开约1cm，将备好的肿瘤组织块植入。术后逐日观察肿瘤生长情况，以小鼠腹部出现可触及的包块作为成瘤标志，观察小鼠一般活动及营养状态等变化。4.实验动物分组及用药：将接种后的babl/c裸鼠随机分为6组，分别为治疗组、中药一对照组、中药二对照组、中药三对照组、化疗组及荷瘤对照组，每组各15只，无特定病原菌(specificpathogenfree，spf)条件下分笼饲养于层流架内。给药如下：治疗组：于接种后次日开始每只裸鼠灌服本发明中药颗粒纯水溶解液，给予生药9.2g/kg体质量，1次/d，连续灌胃6周。中药一对照组：于接种后次日开始每只裸鼠灌服对照中药一颗粒纯水溶解液，给予生药9.2g/kg体质量，1次/d，连续灌胃6周。中药二对照组：于接种后次日开始每只裸鼠灌服对照中药二颗粒纯水溶解液，给予生药9.2g/kg体质量，1次/d，连续灌胃6周。中药三对照组：于接种后次日开始每只裸鼠灌服对照中药三颗粒纯水溶解液，给予生药9.2g/kg体质量，1次/d，连续灌胃6周。化疗组：5-fu以生理盐水稀释成7.5mg/ml，按60mg/kg腹腔注射，1次/周，连续用药3周。荷瘤对照组：于接种后次日开始每只裸鼠灌服生理盐水，1次/d，连续灌胃6周。5.移植瘤生长、小鼠活动及营养状况观察：接种后观察小鼠活动、进食及营养情况。6周后拉颈处死裸鼠，从腋部皮下完整剥取肿瘤组织，剔除纤维包膜，于电子天平上称取瘤质量。运用公式抑瘤率(％)＝(对照组治疗后平均瘤质量－用药组治疗后平均瘤质量)/对照组治疗后平均瘤质量×100计算抑瘤率。完成观察及称取质量的瘤组织用中性福尔马林固定，石蜡包埋，5μm连续切片。6.移植瘤组织pcna、egfr的测定：sp法，苏木素-伊红染色，石蜡切片脱蜡至水，微波修复抗原。每张切片滴加一抗(鼠抗人pcna、egfr)1滴，4℃冰箱过夜，pbs冲洗3次后滴加生物素化二抗，每张切片上加1滴抗生物素蛋白链菌素-过氧化物酶溶液，3,3'-二氨基及联苯胺底物显色10min，二甲苯透明，中性树胶封闭。pcna染色阳性物质呈棕黄色，颗粒状，位于胃癌细胞核内，在×200油镜下，随机计数200个以上的细胞作为分析基数，计数标记pcna指数，即被标记细胞在一细胞群中所占的百分率。egfr阳性染色大多位于胞浆及胞膜上，个别位于胞核上，为棕黄色颗粒，按染色深度和阳性细胞所占比例分别计分。(1)染色深度：0分，无着色；1分，浅着色；2分，深着色。(2)阳性细胞比例：0分，无着色；1分，着色≤1/3；2分，1/3<着色≤2/3；3分，着色>2/3。两项结果相加>3分为阳性。二、实验结果1.对裸鼠mkn-45胃腺癌生长的影响荷瘤对照组在mkn-45人胃腺癌接种于裸鼠皮下后13d左右，腹部开始触及结节型肿块，以后逐渐增大；其余各组均晚于对照组触及肿块。6周后处死裸鼠，称取瘤质量，计算抑瘤率，各组移植瘤瘤质量及抑瘤率统计结果见表1。结果表明，各给药组治疗后瘤质量与荷瘤对照组比较，差异均有统计学意义(p<0.05)；治疗组瘤质量与中药一对照组、中药二对照组、中药三对照组分别比较，差异均有统计学意义(p<0.05)，与化疗组比较，差异无统计学意义(p>0.05)。表1各组移植瘤瘤质量及抑瘤率2.瘤组织中pcna、egfr表达各组瘤组织中pcna阳性表达率统计结果见表2。结果表明，各给药组的pcna阳性表达率均显著低于荷瘤对照组(p<0.05)，提示用药后细胞增殖活跃度均明显下降；治疗组pcna阳性表达率与中药一对照组、中药二对照组、中药三对照组分别比较，差异均有统计学意义(p<0.05)，与化疗组比较，差异无统计学意义(p>0.05)。表2各组瘤组织中pcna阳性表达组别n阳性表达率(％)荷瘤对照组1567.94±18.66治疗组1410.74±2.59中药一对照组1532.76±8.80中药二对照组1329.44±6.26中药三对照组1551.30±10.475-fu1510.78±2.45各组瘤组织中egfr阳性率统计结果见表2。结果表明，各给药组的egfr阳性率均显著低于荷瘤对照组(p<0.05)；治疗组egfr阳性率与中药一对照组、中药二对照组、中药三对照组分别比较，差异均有统计学意义(p<0.05)，与化疗组比较，差异无统计学意义(p>0.05)。表3各组瘤组织中egfr阳性表达组别n阳性阴性阳性率(％)荷瘤对照组1513286.67治疗组1441028.57中药一对照组158753.33中药二对照组137653.85中药三对照组1510566.675-fu1541126.67以上结果表明，本发明的中药组合物能够显著抑制裸鼠mkn-45胃腺癌移植瘤生长，下调裸鼠胃癌组织中pcna和egfr表达。实施例11对walker-256大鼠胃种植瘤的抑制作用一、实验方法1.大鼠胃种植瘤模型建立首先建立大鼠walker-256腹水瘤模型，然后用无菌注射器抽取腹腔积液接种于大鼠右侧腋窝皮下，7d后见右侧腋皮下长出实体瘤。胃种植瘤：取上述皮下实体瘤组织，将其洗尽并剪成约0.5mm×0.5mm大小的组织块，wistar大鼠麻醉后开腹，将瘤组织块接种于胃壁浆膜层，并滴入ob生物胶粘合固定。所有大鼠记录每日进食、饮水状况，每3d称重，观察其精神、活动状况、皮毛润泽度变化。2.实验分组及干预40只大鼠，36只于胃部接种瘤块，其余4只不接种的大鼠为正常对照组，种植瘤块的wistar大鼠随机分为三组，每组12只：治疗组：给予本发明中药颗粒(制备方法同实施例10)纯水溶解液(相当于生药55g/kg体质量)，于造模后次日立即给药，每日灌胃，连续给药21d。中药对照组：给予对照中药二颗粒(制备方法同实施例10)纯水溶解液(相当于生药55g/kg体质量)，于造模后次日立即给药，每日灌胃，连续给药21d。模型对照组：给予生理盐水约3ml/只，于造模后次日立即给药，每日灌胃，连续给药21d。正常对照组每日仅正常饮食饲养。所有大鼠同等spf条件下饲养。3.组织标本取样21d后拉颈处死所有大鼠，开腹，观察腹腔内肉眼可见变化，腹水及脏器转移情况，剥离取各组胃新鲜瘤组织(未种植瘤大鼠胃组织一片)。取出的组织块福尔马林固定准备制备石蜡切片(厚5μm)，免疫组化检测。4.免疫组化法检测胃种植瘤及胃组织标本中cd34、α-sma、fapα蛋白表达采用免疫组化法进行检测。cd34(+)的纤维母细胞在消化道中主要分布于粘膜层及浆膜层，cd34表达在纤维母细胞膜上；fapα选择性表达于恶性肿瘤基质中肿瘤相关成纤维细胞中，主要表达在膜和间质；α-sma是用来鉴定肿瘤相关成纤维细胞最主要的标志物，主要表达在细胞膜上，呈现棕黄色至棕黑色判为阳性。每张片子随机采集5个视野，显微镜拍照，采用imagej2x软件采集的5个视野阳性染色部位的积分光密度值/5个视野的阳性面积，计算5个视野的平均光密度值即为其表达量。二、实验结果大鼠胃种植瘤及胃组织中cd34、α-sma、fapα的表达统计结果见表4。结果表明，其余各组大鼠cd34表达水平均明显低于正常对照组大鼠(p<0.05)，fapα和α-sma的表达则明显高于正常对照组(p＜0.05)；治疗组和中药对照组大鼠的cd34表达水平均明显高于模型对照组大鼠(p<0.05)，fapα和α-sma的表达则明显低于模型对照组(p＜0.05)；治疗组大鼠的cd34表达水平明显高于中药对照组大鼠(p<0.05)，fapα和α-sma的表达则明显低于中药对照组(p＜0.05)。表4各组大鼠胃种植瘤及胃组织中cd34、α-sma、fapα的表达组别标本数cd34α-smafapα正常对照组4809.52±11.68647.85±20.46620.73±10.29模型对照组12598.22±17.36834.49±28.62883.01±18.54中药对照组12680.15±22.47753.16±19.53771.19±20.66治疗组12741.40±27.39691.40±11.75704.85±23.87以上结果表明，本发明的中药组合物能够改变肿瘤微环境，因此能抑制肿瘤生长。以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本
技术领域：
的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。当前第1页12