本发明涉及一种植物提取物，具体涉及一种火龙果茎提取物。同时本发明还涉及一种所述火龙果茎提取物的制备方法及其在化妆品中的应用。
背景技术：
过敏也称变态反应，是过敏体质人群接触过敏源后所产生的免疫反应。皮肤过敏是常见的皮肤问题之一，而近年来，随着饮食结构的变化、大气污染、生活和工作压力的增大，过敏患者急剧增加。皮肤敏感已经成为了影响人类健康的社会问题。据不完全统计，全球自我感觉敏感性肌肤的人群越来越多，其中男性占39％，女性占61％。由于其原因复杂，病情反复发作，是医学和化妆品领域所要解决的重要课题。目前采用的抗过敏成分多数效果不明确且有一定的副作用，其中皮质类固醇类皮肤用药易引起皮肤变薄和色素沉着。因此，一般的抗敏成分在化妆品中的应用受到限制，天然植物抗敏活性成分的出现填补了这方面的空白，受到市场和消费者的青睐。
火龙果是仙人掌科、量天尺属植物，其茎粗壮，深绿色，一般具3棱，棱扁，边缘呈波浪状。火龙果茎含有丰富的植物多糖，钾、镁、钙三种元素含量很高，并且含有多种植物甾醇等有效成分，具有保持皮肤表面水份、促进皮肤新陈代谢、抑制皮肤炎症等功效，其提取物可以作为化妆品原料应用于配方之中。中国专利201410786777.5公开了一种火龙果果茎保湿液及其制备方法，该方法中提取火龙果茎汁提取物时使用的溶剂为乙醇溶液。乙醇溶液作为提取时的溶剂，得到的大部分为醇溶物质。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种具有保湿抗敏功效的火龙果茎提取物的制备方法。
本发明所提供的火龙果茎提取物是按照包括下述步骤的方法制备得到的。
（a）将火龙果茎清洗干净、去刺切段，用去离子水清洗其表面后，加入去离子水经胶体磨粉碎，然后加入抗氧化剂及用去离子水稀释后的果胶酶或者纤维素酶，在一定搅拌速度与反应温度下搅拌一定时间进行提取。
其中所述的火龙果茎为火龙果的扁圆四棱形多汁茎，所述火龙果茎的产地为广西，购于钦州高丰农业有限公司；所述果胶酶或纤维素酶购于诺维信(中国)生物技术有限公司，优选果胶酶，果胶酶型号为xxl；所述抗氧化剂的用量为火龙果茎质量的0.03%。
（b）灭酶，冷却，粗过滤，精滤。
（c）脱色，冷却，过滤，滤液灭菌防腐，得到火龙果茎提取物。
其中利用活性炭进行脱色；利用苯氧乙醇液体或pe9010作防腐剂，pe9010购于德国舒美公司，所述防腐剂用量为火龙果茎提取物质量的0.8%。
果胶是存在于初生细胞壁和细胞间质中一类高分子多糖，起着“粘合”细胞的作用，当其降解时，会导致细胞分离。果胶酶能够瓦解植物细胞的细胞壁，使细胞内的有效成分如火龙果多糖等成分更快的溶出，提高提取率；还可以起到澄清作用，降低粘度，使提取物澄清透亮。而纤维素酶是降解纤维素的一组酶系的总称，植物细胞壁的主要成分是纤维素，经过纤维素的酶解，使细胞壁更易破坏，有效成分更易溶出。乙醇溶液作为溶剂提取时，多糖和蛋白等成分溶出率低，并且提取物中主要为醇溶性物质。而通过保湿和抗过敏实验，验证了水溶性物质为其主要功效成分，因此，火龙果茎榨汁后，加入果胶酶或纤维素酶进行酶解，可大大提高火龙果茎的提取率和有效成分的溶出率。而这些有效成分含量的增加能产生更好的抗过敏保湿效果。
优选的，步骤（a）中所述的火龙果茎与去离子水的质量比为1:6-20，所述抗氧化剂为d-抗坏血酸钠，所述果胶酶或者纤维素酶与去离子水按1:50-80的质量比进行稀释，所述果胶酶或者纤维素酶用量为所述火龙果茎质量的0.06-0.15%，所述搅拌速度为50-100r/min，所述反应温度为40-60℃，所述反应时间为60-120min。
优选的，步骤（b）中所述灭酶条件为灭酶温度70-100℃，灭酶时间15-30min；所述冷却步骤的终温度为20-50℃；所述粗过滤所用纱布目数为60-200目；所述精滤所用滤板孔径为1-10μm。
优选的，步骤（c）中所述脱色条件为反应温度70-90℃，反应时间20-60min，加入活性炭的量为经步骤（b）得到的过滤后的火龙果茎提取物质量的0.5-2%；所述冷却步骤的终温度为20-50℃；所述过滤所用滤板孔径为0.1-1μm，所述灭菌条件为灭菌温度85-95℃，灭菌时间为20-40min。
优选的，步骤（a）中所述的火龙果茎与去离子水的质量比为1:10，所述抗氧化剂为d-抗坏血酸钠，所述果胶酶或者纤维素酶与去离子水按1:60的质量比进行稀释，所述果胶酶或者纤维素酶用量为所述火龙果茎质量的0.1%，所述搅拌速度为60r/min，所述反应温度为50℃，所述反应时间为90min。
优选的，步骤（b）中所述灭酶条件为灭酶温度85℃，灭酶时间20min；所述冷却步骤的终温度为30℃；所述粗过滤所用纱布目数为200目；所述精滤所用滤板孔径为10μm。
优选的，步骤（c）中所述脱色条件为反应温度80℃，反应时间30min，加入活性炭的量为经步骤（b）得到的过滤后的火龙果茎提取物质量的1.0%；所述冷却步骤的终温度为30℃；所述过滤所用滤板孔径为0.2-0.45μm，所述灭菌条件为灭菌温度90℃，灭菌时间为30min。
本发明的另一个目的是提供利用上述火龙果茎提取物的制备方法制备得到的火龙果茎提取物。
优选的，所述火龙果茎提取物中的有效成分含花青素、维生素c、植物甾醇、植物多糖、植物性白蛋白及水溶性膳食纤维。其中花青素是一种强力的抗氧化剂，能够清除过剩的自由基，保护细胞不被自由基破坏，从而抑制炎症和过敏，且能增进皮肤的光滑度，美颜肌肤；维生素c具有美白皮肤防黑斑、增加胶原蛋白、调整皮肤纹理的功效；植物甾醇对皮肤具有很高的渗透性，可有效保持皮肤表面水份，促进皮肤新陈代谢、抑制皮肤炎症，同时具有抗氧化功能，可防日晒红斑、皮肤老化；植物多糖的分子结构具有锁水、吸水特性，可较好的对皮肤进行保湿，提高皮肤的屏障功能；植物白蛋白具有一定的抗氧化、抗自由基、抗衰老功效，能缓解过敏症状，增强皮肤屏障功能，这些有效成分协同作用，赋予了火龙果茎提取物较好的抗敏保湿功效。更优选的，所述花青素的含量为0.40-0.60mg/ml、维生素c的含量为0.08-0.20mg/ml、植物甾醇的含量为0.06-0.16mg/ml、植物多糖的含量为2.5-4.0mg/ml。
本发明的又一个目的是提供所述的火龙果茎提取物在制备化妆品中的应用。
优选的，提供所述的火龙果茎提取物在制备具有保湿抗敏功效的化妆品中的应用。
与现有技术相比，本发明提供的制备火龙果茎提取物的方法，其提取分离操作简便，有效活性成分提取率高且最终制备出的产品纯度较高，产品质量有很大的提高。火龙果茎提取物具有抗炎、抗菌，润泽肌肤、美白保湿，促进伤口愈合，增强毛细血管循环等多种功效。经过试验测试表明，利用本发明提供的制备方法制备得到的提取物可作为保湿抗敏剂，可在制备化妆品中，尤其是在制备具有保湿抗敏功效的化妆品中广泛应用。
现有技术采用乙醇作为溶剂进行提取，得到的大部分为醇溶物质，与本发明所得到的提取物中有效成分区别较大。本发明通过果胶酶或纤维素酶的酶解作用，大大提高了火龙果茎的提取率和有效成分的溶出率，有效成分含量的提高使得保湿抗敏功效更显著。
附图说明
图1为本发明提供的火龙果茎提取物的生产工艺流程图。
图2为本发明提供的火龙果茎提取物对透明质酸酶活性抑制率实验。
图3为本发明提供的火龙果茎提取物人体皮肤过敏试验。
图4为本发明提供的火龙果茎提取物人体水分含量变化率试验结果图。
图5为本发明提供的火龙果茎提取物人体水分散失率试验结果图。
具体实施方式
下面结合具体实施例，对本发明做进一步描述。
实施例1：火龙果茎提取物的制备。
（a）称取清洗干净、去刺后的火龙果茎10kg，用去离子水清洗其表面置于胶体磨中，胶体磨稍微加去离子水磨碎之后，加入与火龙果茎质量比为6的去离子水；加入火龙果茎重0.03%的d-抗坏血酸钠，加入火龙果茎重0.06%的纤维素酶，其中纤维素酶与去离子水按1:50的质量比进行稀释；于反应温度为40℃、搅拌速度为50r/min的速度搅拌提取120min；（b）升温到70℃搅拌30min进行灭菌；停止加热，水循环冷却到20℃，使用60目纱布粗滤；取滤液，使用滤板孔径为1μm的滤板精滤；（c）加入得到的过滤后的火龙果茎提取物质量的0.5%的活性炭，于反应温度为70℃的条件下搅拌20min；停止加热，水循环冷却到20℃，使用滤板孔径为0.1μm的滤板过滤；测定ph值、固含量、电导率，测定结果为：ph值为4.7～6.2、固含量为0.55～1.1%、电导率为550～1010μs/cm2；之后于85℃下保温20min，灭菌；水浴降温至室温，加入火龙果茎提取物质量的0.8%的苯氧乙醇液体防腐剂，得到最终的火龙果茎提取物。
实施例2：火龙果茎提取物的制备。
（a）称取清洗干净、去刺后的火龙果茎10kg，用去离子水清洗其表面置于胶体磨中，胶体磨稍微加去离子水磨碎之后，加入与火龙果茎质量比为20的去离子水；加入火龙果茎重0.03%的d-抗坏血酸钠，加入火龙果茎重0.15%的果胶酶，果胶酶与去离子水按1:60的质量比进行稀释；于反应温度为60℃、搅拌速度为100r/min的速度搅拌提取60min；（b）升温到100℃搅拌15min进行灭菌；停止加热，水循环冷却到50℃，使用150目纱布粗滤；取滤液，使用滤板孔径为8μm的滤板精滤；（c）加入得到的过滤后的火龙果茎提取物质量的2.0%的活性炭，于反应温度为90℃的条件下搅拌60min；停止加热，水循环冷却到50℃，使用滤板孔径为1μm的滤板过滤；测定ph值、固含量、电导率，测定结果为：ph值为4.6～6.3、固含量为0.59～0.98%、电导率为530～1000μs/cm2；之后于95℃下保温40min，灭菌；水浴降温至室温，加入火龙果茎提取物质量的0.8%的苯氧乙醇液体防腐剂，得到最终的火龙果茎提取物。
实施例3：火龙果茎提取物的制备。
（a）称取清洗干净、去刺后的火龙果茎10kg，用去离子水清洗其表面置于胶体磨中，胶体磨稍微加去离子水磨碎之后，加入与火龙果茎质量比为13的去离子水；加入火龙果茎重0.03%的d-抗坏血酸钠，加入火龙果茎重0.08%的纤维素酶，其中纤维素酶与去离子水按1:70的质量比进行稀释；于反应温度为45℃、搅拌速度为80r/min的速度搅拌提取80min；（b）升温到80℃搅拌25min进行灭菌；停止加热，水循环冷却到40℃，使用100目纱布粗滤；取滤液，使用滤板孔径为5μm的滤板精滤；（c）加入得到的过滤后的火龙果茎提取物质量的1.5%的活性炭，于反应温度为85℃的条件下搅拌40min；停止加热，水循环冷却到40℃，使用滤板孔径为0.2μm的滤板过滤；测定ph值、固含量、电导率，测定结果为：ph值为4.5～6.0、固含量为0.6～1.05%、电导率为500～1000μs/cm2；之后于88℃下保温35min，灭菌；水浴降温至室温，加入火龙果茎提取物质量的0.8%的苯氧乙醇液体防腐剂，得到最终的火龙果茎提取物。
实施例4：火龙果茎提取物的制备。
（a）称取清洗干净、去刺后的火龙果茎10kg，用去离子水清洗其表面置于胶体磨中，胶体磨稍微加去离子水磨碎之后，加入与火龙果茎质量比为10的去离子水；加入火龙果茎重0.03%的d-抗坏血酸钠，加入火龙果茎重0.1%的果胶酶，其中果胶酶与去离子水按1:80的质量比进行稀释；于反应温度为50℃、搅拌速度为60r/min的速度搅拌提取90min；（b）升温到85℃搅拌20min进行灭菌；停止加热，水循环冷却到30℃，使用200目纱布粗滤；取滤液，使用滤板孔径为10μm的滤板精滤；（c）加入得到的过滤后的火龙果茎提取物质量的1%的活性炭，于反应温度为80℃的条件下搅拌30min；停止加热，水循环冷却到30℃，使用滤板孔径为0.45μm的滤板过滤；测定ph值、固含量、电导率，测定结果为：ph值为4.5～5.8、固含量为0.7～1.0%、电导率为500～1000μs/cm2；之后于90℃下保温30min，灭菌；水浴降温至室温，加入火龙果茎提取物质量的0.8%的苯氧乙醇液体防腐剂，得到最终的火龙果茎提取物。
实施例5：火龙果茎提取物的制备。
（a）称取清洗干净、去刺后的火龙果茎10kg，用去离子水清洗其表面置于胶体磨中，胶体磨稍微加去离子水磨碎之后，加入与火龙果茎质量比为17的去离子水；加入火龙果茎重0.03%的d-抗坏血酸钠，加入火龙果茎重0.12%的纤维素酶，其中纤维素酶与去离子水按1:65的质量比进行稀释；于反应温度为55℃、搅拌速度为90r/min的速度搅拌提取100min；（b）升温到90℃搅拌18min进行灭菌；停止加热，水循环冷却到35℃，使用180目纱布粗滤；取滤液，使用滤板孔径为7μm的滤板精滤；（c）加入得到的过滤后的火龙果茎提取物质量的1.8%的活性炭，于反应温度为75℃的条件下搅拌50min；停止加热，水循环冷却到35℃，使用滤板孔径为0.35μm的滤板过滤；测定ph值、固含量、电导率，测定结果为：ph值为5.0～6.5、固含量为0.65～0.95%、电导率为520～1000μs/cm2；之后于92℃下保温25min，灭菌；水浴降温至室温，加入火龙果茎提取物质量的0.8%的苯氧乙醇液体防腐剂，得到最终的火龙果茎提取物。
实施例6：火龙果茎提取物的制备。
（a）称取清洗干净、去刺后的火龙果茎10kg，用去离子水清洗其表面置于胶体磨中，胶体磨稍微加去离子水磨碎之后，加入与火龙果茎质量比为9的去离子水；加入火龙果茎重0.03%的d-抗坏血酸钠，加入火龙果茎重0.12%的果胶酶，其中果胶酶与去离子水按1:55的质量比进行稀释；于反应温度为53℃、搅拌速度为70r/min的速度搅拌提取70min；（b）升温到75℃搅拌27min进行灭菌；停止加热，水循环冷却到25℃，使用80目纱布粗滤；取滤液，使用滤板孔径为4μm的滤板精滤；（c）加入得到的过滤后的火龙果茎提取物质量的0.8%的活性炭，于反应温度为82℃的条件下搅拌35min；停止加热，水循环冷却到25℃，使用滤板孔径为0.3μm的滤板过滤；测定ph值、固含量、电导率，测定结果为：ph值为4.8～6.4、固含量为0.62～0.99%、电导率为500～1000μs/cm2；之后于87℃下保温28min，灭菌；水浴降温至室温，加入火龙果茎提取物质量的0.8%的苯氧乙醇液体防腐剂，得到最终的火龙果茎提取物。
实施例7：火龙果茎提取物有效成分的测定。
取实施例4中制备得到的火龙果茎提取物为例，对其进行有效成分的测定，测定结果如下：采用铁盐催化比色法，测定实施例4中制备得到的火龙果茎提取物中花青素含量为0.52mg/ml；采用碘量法，测定实施例4中制备得到的火龙果茎提取物中维生素c含量为0.186mg/ml；利用liebermann-burchard显色法，测定实施例4中制备得到的火龙果茎提取物中植物甾醇含量为0.12mg/ml；利用苯酚硫酸法，测定实施例4中制备得到的火龙果茎提取物中多糖含量为3.54mg/ml。
实施例8：抑制透明质酸酶活性实验。
研究表明透明质酸酶与炎症、过敏密切相关，能够酶解体内的透明质酸，使其变为低分子量的酸性刺激源，诱导机体产生敏感症状。本方法采用透明质酸酶体外抑制实验测定火龙果茎提取物对透明质酸酶活性抑制效果，实验浓度分别采用1.0%、2.0%、5.0%、8.0%、10.0%（火龙果茎提取物在体系中的质量百分比）。
实验所需溶液的配制：
醋酸缓冲溶液：量取1.155ml冰乙酸稀释至100ml混匀，取其中4.8ml为a溶液；称取2.72g乙酸钠结晶，加水溶解定容至100ml混匀，取其中45.2ml为b溶液；混合a、b溶液，以水定容至100ml，混匀。
透明质酸酶溶液：称取10mg透明质酸酶于烧杯中，加入4ml醋酸缓冲溶液。
透明质酸钠溶液：称取5mg透明质酸钠于烧杯中，加入10ml醋酸缓冲溶液。
埃尔利希试剂(ehrlichreagent)：称取0.8g对-二甲氨基苯甲醛，溶于15ml浓盐酸和15ml无水乙醇中。
乙酰丙酮溶液：取3.5ml乙酰丙酮，溶于50ml1.0mol/l的碳酸钠溶液中，此溶液在用前配制。
实验步骤：
取0.25mmol/l的cacl2溶液0.1ml和透明质酸酶溶液0.5ml，37℃保温培养20min；加入不同浓度实施例4制备的火龙果茎提取物0.5ml，继续37℃保温培养20min；加入0.5ml透明质酸钠液37℃保温30min，常温放置5min；加入0.1ml0.4mol/lnaoh溶液和0.5ml乙酰丙酮溶液，置于沸水浴中加热15min，立即用冰水冷却5min；加入埃尔利希试剂1.0ml，并用3.0ml无水乙醇进行稀释，放置显色20min，用分光光度计测定其吸光度值。
样品对透明质酸酶抑制率的计算公式：
透明质酸酶抑制率（%）=
其中，a1为参比溶液吸光值，用去离子水代替实施例4所得试样；a2为参比空白溶液吸光值，用去离子水代替实施例4所得试样，用醋酸缓冲溶液代替透明质酸酶和透明质酸钠溶液；b1为试样溶液吸光值；b2为试样空白溶液吸光值，用醋酸缓冲溶液代替透明质酸酶和透明质酸钠溶液。
实验时，先对试样进行450-700nm范围的波长扫描，确定最大吸收波长，在最大吸收波长处进行测定。
实施例4中得到的火龙果茎提取物，其透明质酸酶抑制率结果见图2。如图2所示，随着火龙果茎提取物浓度的增加，其对透明质酸酶活性的抑制效果逐渐增强。说明实施例4得到的火龙果茎提取物能够有效抑制透明质酸酶活性，从而起到良好的抗敏作用。
实施例9：人体敏感试验。
选取20位志愿者，男女各半，实验前，将志愿者左、右前臂分别用清水清洗干净，静坐在温度为20-22℃，相对湿度为50-60%的环境下，受试者未擦用任何化妆品的情况下进行皮肤敏感实验。
将受试者左前臂涂抹上述实施例1制备的火龙果茎提取物，每半小时涂抹一次，共涂抹6次，涂抹面积为3×3cm2，右前臂作为空白对照不涂抹任何产品。然后将受试者的左、右前臂分别涂抹质量百分含量为5%的十二烷基硫酸钠溶液（sds）。观察受试者手臂的反应，致敏率统计结果如图3所示。从图中可以看出，涂抹上述实施例4制备的火龙果提取物后，再涂抹刺激物，左前臂的刺痛感和红肿现象不明显，致敏率大大降低。而作为空白对照的右前臂对刺激物的刺激反应强烈，涂抹刺激物0.5h后皮肤内红肿现象明显，并伴有刺痛感发生，空白对照致敏率高。说明上述实施例4制备的火龙果茎提取物具有良好的抗敏功效。
实施例10：人体保湿实验。
人体保湿实验，由特定实验人群组成受试群体，测试受试者使用化妆品（以及化妆品功效成分）前后皮肤水分以及水分散失的变化，从而确定化妆品（或功效成分）的保湿功效。
实验方法：选年龄段在15岁到60岁志愿者，男女各15名。
（1）选择受试者左、右手臂依次循环标记：受试区域样品组和空白对照区域；
（2）技术人员使用皮肤含水量测试仪corneometercm825、水分经皮肤散失测试仪tewametertm300测量，取平均值，记为空白值。
（3）在受试者经清水清洗过的实验部位涂抹送检样品。
（4）受试者在连续使用化妆品一小时、两小时、四小时后，由技术人员使用皮肤含水量测试仪corneometercm825、水分经皮肤散失测试仪tewametertm300测量5次，取平均值。
（5）统计测得的数值，分析其皮肤水分含量和水分散失变化规律。
受试者皮肤表面的平均水份含量和平均水份散失的百分比随时间的变化曲线如图4和图5所示。结果表明，上述实施例4制备的火龙果茎提取物具有良好的长效保湿效果。也表明它具有良好的增强皮肤屏障功能的特性。
通过保湿和抗过敏实验验证了，水溶性物质为起保湿抗过敏功效的主要有效成分，因此本发明是一种提取率高、保湿抗过敏有效成分含量高的提取方法。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。