本发明属于药物工业领域，涉及橙皮素衍生物5-(4-氯苯乙亚胺基)-7-o-[2-((4-氯苯乙基)胺基)-2-氧代乙基]橙皮素的医药新用途，具体涉及橙皮素衍生物5-(4-氯苯乙亚胺基)-7-o-[2-((4-氯苯乙基)胺基)-2-氧代乙基]橙皮素在治疗急性肝损伤时的用途。
背景技术：
急性肝损伤(acuteliverinjury,ali)是在多种急性肝损伤因素刺激下导致肝功能突发性异常，是引起继发性肝炎、急性肝衰竭、肝硬化、肝癌的重要始动因素，具有病因多、发病急的特点。急性肝损伤在我国的发病率呈逐年增加趋势。为预防和治疗急性肝损伤，寻找具有肝保护作用、抑制肝脏急性炎症的肝脏保护药物具有重要的开发意义。
5-(4-氯苯乙亚胺基)-7-o-[2-((4-氯苯乙基)胺基)-2-氧代乙基]橙皮素(hesperetinderivative-14，hd-14)是从芸香科植物香橙或陈皮果实皮提取的重要成分橙皮素，经过结构改造而成。据文献报道，橙皮素属于二氢黄酮类化合物呈现广泛的生物学活性，如抗炎、抗肿瘤、抗氧化及神经保护作用。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供5-(4-氯苯乙亚胺基)-7-o-[2-((4-氯苯乙基)胺基)-2-氧代乙基]橙皮素新的药物用途，具体涉及5-(4-氯苯乙亚胺基)-7-o-[2-((4-氯苯乙基)胺基)-2-氧代乙基]橙皮素在防治急性肝损伤时的用途。
本发明的技术方案如下：
一种橙皮素衍生物在防治急性肝损伤药物上的应用，其特征在于：所述的橙皮素衍生物为5-(4-氯苯乙亚胺基)-7-o-[2-((4-氯苯乙基)胺基)-2-氧代乙基]橙皮素，分子式为c34h32cl2n2o6，其化学结构式如下：
所述的5-(4-氯苯乙亚胺基)-7-o-[2-((4-氯苯乙基)胺基)-2-氧代乙基]橙皮素制备的治疗急性肝损伤药物，其特征在于：该药物由所述的5-(4-氯苯乙亚胺基)-7-o-[2-((4-氯苯乙基)胺基)-2-氧代乙基]橙皮素以及药学上可接受的辅助剂制得。
所述的利用5-(4-氯苯乙亚胺基)-7-o-[2-((4-氯苯乙基)胺基)-2-氧代乙基]橙皮素制备的治疗急性肝损伤药物，其特征在于其剂型为注射剂、片剂、丸剂、胶囊、悬浮剂或乳剂。
本发明的有益效果为：实验结果证实5-(4-氯苯乙亚胺基)-7-o-[2-((4-氯苯乙基)胺基)-2-氧代乙基]橙皮素可有效减轻急性肝损伤，保护肝功能，其作用机制与5-(4-氯苯乙亚胺基)-7-o-[2-((4-氯苯乙基)胺基)-2-氧代乙基]橙皮素降低炎症因子水平有关，应用前景广泛。
附图说明
图1为5-(4-氯苯乙亚胺基)-7-o-[2-((4-氯苯乙基)胺基)-2-氧代乙基]橙皮素(hd-14)减轻ccl4诱导的小鼠急性肝损伤模型中肝脏损伤，降低谷草转氨酶(ast)、谷丙转氨酶(alt)水平，提示其对肝功能的保护作用，与control组比较：*p<0.05,**p<0.01,***p<0.001；与ccl4组比较：#p<0.05,##p<0.01,###p<0.001；
图2为5-(4-氯苯乙亚胺基)-7-o-[2-((4-氯苯乙基)胺基)-2-氧代乙基]橙皮素(hd-14)降低ccl4诱导的小鼠急性肝损伤模型中原代kupffercells(kcs)的炎症因子水平，与control组比较：*p<0.05,**p<0.01,***p<0.001；与ccl4刺激组比较：#p<0.05,##p<0.01,###p<0.001；
图3为5-(4-氯苯乙亚胺基)-7-o-[2-((4-氯苯乙基)胺基)-2-氧代乙基]橙皮素(hd-14)抑制体外试验中lps(lipopolysaccharide)诱导的炎症因子水平，与control组比较：*p<0.05,**p<0.01,***p<0.001；与lps刺激组比较：#p<0.05,##p<0.01,###p<0.001。
具体实施方式
实施例1：5-(4-氯苯乙亚胺基)-7-o-[2-((4-氯苯乙基)胺基)-2-氧代乙基]橙皮素(hd-14)减轻ccl4诱导的小鼠急性肝损伤模型中肝脏损伤，降低谷草转氨酶、谷丙转氨酶水平，提示其对肝功能的保护作用。
c57bl/6(20-22g)小鼠适应性培养7天，进行分组：正常对照组(control)、模型组(1％ccl410ml/kg)、hd-14低剂量组low(1％ccl410ml/kg+hd-1450mg/kg)、中剂量组middle(1％ccl410ml/kg+hd-14100mg/kg)、高剂量组high(1％ccl410ml/kg+hd-14200mg/kg)、阳性对照组(水飞蓟素100mg/kg)，每组10只。小鼠持续7天预防灌胃给药低、中、高剂量的hd-14及水飞蓟素，小鼠于第7天腹腔注射1％ccl410ml/kg建立急性肝损伤模型，12h后于麻醉状态下收取血清样本和肝组织，并根据试剂盒说明书检测动物血清中谷草转氨酶和谷丙转氨酶的含量(购自南京建成生物工程研究所)，he染色检测肝脏损伤情况。
实验结果如图1中图(a)显示，正常组小鼠肝细胞排列整齐，肝组织结构完整，模型组小鼠肝小叶结构紊乱，炎性细胞局部浸润，不同浓度的hd-14给药组小鼠肝组织结构基本恢复正常，肝细胞大小趋于整齐排列，炎性细胞浸润明显减少，并呈剂量依赖性，提示hd-14具有减轻急性肝损伤时肝脏损伤的作用。图(b，c)显示，1％ccl4诱导模型组血清中alt、ast含量明显升高，而不同浓度的hd-14可有效降低模型组血清alt、ast水平，并呈剂量依赖性，提示hd-14对急性肝损伤时的肝功能具有保护作用。
实施案例2：5-(4-氯苯乙亚胺基)-7-o-[2-((4-氯苯乙基)胺基)-2-氧代乙基]橙皮素(hd-14)降低ccl4诱导的小鼠急性肝损伤模型中原代kupffercells(kcs)的炎症因子水平。
c57bl/6(20-22g)小鼠适应性培养7天，进行分组：正常对照组(control)、模型组(1％ccl410ml/kg)、hd-14低剂量组low(1％ccl410ml/kg+hd-1450mg/kg)、中剂量组middle(1％ccl410ml/kg+hd-14100mg/kg)、高剂量组high(1％ccl410ml/kg+hd-14200mg/kg)、阳性对照组(水飞蓟素100mg/kg)，每组10只。小鼠持续7天预防灌胃给药低、中、高剂量的hd-14及水飞蓟素，小鼠于第7天腹腔注射1％ccl410ml/kg建立急性肝损伤模型，12h后于麻醉状态下收取血清样本，原位灌流kupffercells，提取蛋白进行westernblot，提取rna进行real-timeq-pcr，取血清样本进行elisaassay，检测三种炎症因子tnf-α,il-1β和il-6的表达情况。
实验结果如图2中图(a)所示，westernblot结果表明5-(4-氯苯乙亚胺基)-7-o-[2-((4-氯苯乙基)胺基)-2-氧代乙基]橙皮素能明显降低小鼠急性肝损伤模型kcs中tnf-α,il-1β和il-6的蛋白水平。图(b)，real-timeq-pcr结果表明5-(4-氯苯乙亚胺基)-7-o-[2-((4-氯苯乙基)胺基)-2-氧代乙基]橙皮素能明显降低小鼠急性肝损伤模型kcs中tnf-α,il-1β和il-6的mrna水平。图(c)，elisaassay结果表明5-(4-氯苯乙亚胺基)-7-o-[2-((4-氯苯乙基)胺基)-2-氧代乙基]橙皮素能明显降低小鼠急性肝损伤模型kcs中tnf-α,il-1β和il-6的分泌。提示hd-14能明显降低ccl4诱导的小鼠急性肝损伤模型中原代kupffercells(kcs)的炎症因子的表达。
实施案例3：5-(4-氯苯乙亚胺基)-7-o-[2-((4-氯苯乙基)胺基)-2-氧代乙基]橙皮素(hd-14)抑制体外试验中lps诱导的raw264.7细胞炎症因子水平；
将raw264.7细胞接种于六孔板中，分别分为正常组(control)、模型组(lps1000ng/ml)、hd-14给药组(lps1000ng/ml+hd-141,2,4,8,16μm)，每组重复3次实验。接种密度约为0.5×105个细胞/孔，孵育12小时后，无血清培养基饥饿12小时后分别加入lps刺激及hd-14给药,继续培养24小时。收集细胞培养上清，并提取蛋白进行westernblot，提取rna进行real-timeq-pcr，取细胞培养上清进行elisaassay，检测三种炎症因子tnf-α,il-1β和il-6的表达情况。
实验结果如图3中图(a)所示，westernblot结果表明5-(4-氯苯乙亚胺基)-7-o-[2-((4-氯苯乙基)胺基)-2-氧代乙基]橙皮素能明显降低lps诱导raw264.7细胞中tnf-α,il-1β和il-6的蛋白水平。图(b)，real-timeq-pcr结果表明5-(4-氯苯乙亚胺基)-7-o-[2-((4-氯苯乙基)胺基)-2-氧代乙基]橙皮素能明显降低lps诱导raw264.7细胞中tnf-α,il-1β和il-6的mrna水平。图(c)，elisaassay结果表明5-(4-氯苯乙亚胺基)-7-o-[2-((4-氯苯乙基)胺基)-2-氧代乙基]橙皮素能明显降低lps诱导raw264.7细胞中tnf-α,il-1β和il-6的分泌。提示hd-14能明显降低lps诱导的raw264.7细胞中炎症因子的表达。