本发明涉及凤尾草总黄酮的新用途，属于医药新用途
技术领域：
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背景技术：
：凤尾蕨科植物凤尾草(pterismultifidapoir.)又名井栏边草、小叶凤尾草，我国资源丰富，并拥有上千年的应用历史。其“味淡，微苦，性寒”(《中药大辞典》)；“入肾、胃二经”、“治湿热小便不通、血淋、咽喉肿痛”(《泉州本草》)；《分类草药性》则云：“治一切热毒。消肿，清火”；《贵州民间方药集》云：“解热，利尿”；《新药志》记载它具有清热利湿，消肿解毒，凉血止血，主治淋证、痢疾等功效。凤尾草总黄酮能抑制人脑胶质瘤u251细胞迁移(刘银风等：承德医学院学报，2014，3l(2)：93-95)、对丙酸睾酮诱导的去势大鼠前列腺增生也有明显治疗作用(代光成等：中华实验外科杂志，2013，30(12)：2506-2508)。凤尾草总黄酮对心脑血管疾病也有很好的预防和治疗作用(夏玉叶等，专利公开号cn101091728a)。新近报道凤尾草总黄酮具有抗氧化作用，因而可自备新型的天然抗氧化剂(杨成东，专利公开号：cn106038617a)。公开号为cn1555869的专利申请公开了凤尾草提取物(总黄酮部位)的制备工艺及抗炎用途。但是，有关凤尾草总黄酮在降血脂或抗动脉粥样硬化方面的用途到目前为止尚未见报道。技术实现要素：本发明提供了凤尾草总黄酮的新用途，特别是在制备治疗降血脂、抗动脉粥样硬化药物中的应用。本发明所说的动脉粥样硬化(as)是一种常见的大动脉疾病，由动脉壁胆固醇代谢不平衡所致，在形成初期，内膜下的巨噬细胞和平滑肌细胞大量吞噬低密度脂蛋白(ldl)，细胞内胆固醇沉积，从而形成泡沫细胞。高脂血症是as的重要危险因素和临床表现，其中低密度脂蛋白胆固醇(ldl-c)过高、高密度脂蛋白胆固醇(hdl-c)过低及炎症反应对as的影响最为引人关注。动脉壁病灶内泡沫细胞的外迁和单核巨噬细胞的内迁是一个动态过程，如果内皮下间隙募集的单核巨噬细胞越多，而外迁的泡沫细胞越少，就会导致其大量蓄积与崩解，促进斑块形成及血管壁的恶性重构，导致严重的心脑血管临床事件。因此，研究挖掘降血脂、防治as的新药是医药行业的重点之一。本发明所说的凤尾草总黄酮为一种凤尾草提取物，其有效部位为总黄酮，换言之，也即同上述凤尾草提取物(总黄酮部位)。本发明通过诸多的研究及药物筛选试验，意外地发现上述总黄酮口服给药可明显降低血清胆固醇(tc)、甘油三酯(tg)和ldl-c含量，升高h/l比值，显著性减少主动脉内脂肪沉积和斑块面积；显著性减少斑块内胆固醇的积累。提示凤尾草总黄酮能够降低血脂，防治动脉硬化。因此，凤尾草总黄酮具有降低血脂，防治动脉硬化，能够用于制备防治高脂血症及动脉硬化的药物；而且该有效部位从天然植物中提取，具有更低的毒性。具体生物学实验研究结论包括以下方面：(1)模型组大鼠在给予高脂饲料14天后血清tg、cho和ldl-c含量较正常组明显升高，h/l比值显著降低(p<0.01)，提示造模成功。凤尾草总黄酮10和20mg/kg口服给药可明显降低脂质代谢紊乱模型大鼠血清tg、cho和ldl-c含量，升高h/l比值，对模型大鼠的髙脂血症能发挥很好的预防及治疗作用；(2)凤尾草总黄酮20mg/kg口服灌胃给药，可明显降低动脉粥样硬化大鼠血清tg、cho和ldl-c含量，升高h/l比值，抑制vd3和髙脂饲料诱导的大鼠动脉粥样硬化的形成，对vd3和髙脂饲料诱导的大鼠动脉粥样硬化病变发挥很好的预防和治疗作用。因此，凤尾草总黄酮在降低血脂、防治抗动脉粥样硬化方面具有良好的效果，可制备成应用于此方面疾病的新药。具体实施方式以下所列实施例，仅为帮助本领域技术人员更全面理解本发明，但不以任何方式限制本发明。实施例1凤尾草总黄酮的制备根据上述公开号为cn1555869专利文献实施例1的工艺来制备，即将3公斤凤尾草，用300公斤70％乙醇动态提取两次，收集提取液，真空浓缩，石油醚萃取脂溶性杂质，水液过大孔树脂柱，水液上柱达饱和后，用水及30％的乙醇洗去亲水性杂质，用50％的乙醇洗脱黄酮苷，将洗脱液干燥，用有机溶剂精制一次得凤尾草总黄酮。也可通过本发明人使用的下列工艺制备凤尾草总黄酮，制备方法为：将5公斤凤尾草以70％乙醇浸泡后渗漉，渗漉液减压浓缩后过大孔树脂(d101型，天津正天成澄清技术有限公司产品)，依次以水、30％乙醇、60％乙醇、95％乙醇洗脱，收集60％乙醇洗脱部分，减压浓缩后干燥，即得凤尾草总黄酮。实施例2凤尾草总黄酮口服给药对脂质代谢紊乱大鼠血脂的影响1.1供试品配制：将实施例1制得的总黄酮精确称量后用0.5％的cmc-na配制成终浓度分别为2mg/kg和4mg/kg混悬液。1.2阳性对照品配制：精确称取阿托伐他汀，加入0.5％cmc-na配成浓度为2mg/kg的混悬液，备用。1.3试验方法：雄性sd大鼠30只，体重170-180g，适应性喂养3天，将动物按体重分层随分为4组，每组6只。高脂饲料配比如下：猪油10％，胆固醇2％，丙基硫氧嘧啶0.2％，猪胆盐0.5％，基础饲料87.3％。表1.试验分组动物喂养高脂饲料造模(正常组除外)的同时根据分组情况给予相应的受试样品，连续14天。实验期间，每2或3天加一次高脂饲料(正常组加普通全营养饲料)。实验第15天，大鼠以12％水合氯醛麻醉(0.3ml/100g)，从第1组开始，至第5组，每组一只，循环经腹主动脉采血，离心分离血清，测定tg、cho、hdl-c、ldl-c含量并计算hdl-c与ldl-c比值。1.4统计学分析以上所有指标均以平均值±标准差表示，均数之间差异的比较用t检验。1.5试验结果：1.5.1凤尾草总黄酮对脂质代谢紊乱模型大鼠血清cho、tg的影响试验结果见表2。表2.凤尾草总黄酮对脂代谢紊乱模型大鼠血脂含量的影响(n＝6，)*p<0.05；**p<0.01，与模型组比较结果表明模型组大鼠在给予高脂饲料14天后血清tg和cho较正常组有非常明显的升高(p<0.01)。凤尾草总黄酮10mg/kg口服给药可显著降低脂质代谢紊乱模型大鼠血清tg和cho含量(p<0.05，与模型组比较)；凤尾草总黄酮20mg/kg口服给药组动物血清tg和cho含量较模型对照组非常显著降低(p<0.01)。阳性对照药阿托伐他汀10mg/kg口服给药可非常显著降低脂质紊乱模型大鼠血清cho值(p<0.01，与模型组比较)，但对模型大鼠血清tg无明显影响(p>0.05，与模型组相比)。1.5.2凤尾草总黄酮对模型大鼠高、低密度脂蛋白胆固醇含量和比值的影响实验结果见表3。表3.凤尾草总黄酮对脂代谢紊乱模型大鼠高低密度脂蛋白胆固醇含量和比值的影响(n＝6，)*p<0.05；**p<0.01，与模型组比较结果表明模型组大鼠在给予高脂饲料14天后hdl-c较正常组无明显改变(p>0.05)，但ldl-c含量较正常组明显升高，h/l比值显著降低(p<0.01)。凤尾草总黄酮10mg/kg口服给药，虽可降低模型大鼠血清ldl-c含量，升高h/l比值，但与模型对照组比较差异无统计学意义(p>0.05)，其血清hdl-c未见明显变化(p>0.05，与模型组比较)；凤尾草总黄酮20mg/kg口服给药，可显著降低模型大鼠血清ldl-c含量，升高h/l比值(p<0.05，与模型组比较)，对hdl-c无明显影响(p>0.05，与模型组比较)。阳性对照药阿托伐他汀可非常显著降低模型大鼠血清ldl-c含量(p<0.01，与模型组比较)，显著升高h/l比值(p<0.05，与模型组比较)，对hdl-c无明显影响(p>0.05，与模型组比较)。1.6结论试验结果表明模型组大鼠在给予高脂饲料14天后血清tg、cho和ldl-c含量较正常组明显升高，h/l比值显著降低(p<0.01)，提示造模成功。凤尾草总黄酮10和20mg/kg口服给药可明显降低脂质代谢紊乱模型大鼠血清tg、cho和ldl-c含量，升高h/l比值，对模型大鼠的髙脂血症能发挥很好的预防及治疗作用。实施例3凤尾草总黄酮对大鼠动脉粥样硬化的影响2.1供试品配制：将实施例1制得的总黄酮精确称量后用0.5％的cmc-na配制成终浓度为4mg/kg的混悬液，备用。2.2阳性对照品配制：精确称取辛伐他汀，加入0.5％cmc-na配成浓度为4mg/kg混悬液，备用2.3试验方法：将动物适应性饲养3天后称体重，并根据体重进行均匀分组，每组动物数10只(见表4)。表4.试验分组组别动物数喂饲饲料给药剂量(mg/kg)给药体积(ml/kg)正常组n＝8普通全营养饲料--------模型组n＝8高脂饲料0.5％cmc-na5凤尾草总黄酮n＝8高脂饲料205辛伐他汀组n＝8高脂饲料205所有动物在分组后正常饲养3天开始造模：除正常组动物外各组均肌肉注射vd3三次，每日一次，每次剂量30万iu/kg。vd3第三次注射结束后24小时开始口服给予各受试药物，给药体积均为5ml/kg，模型组和正常组给予同体积的0.5％cmc-na溶液，连续给药10周。给药期间前7周均给予正常标准饲料，第8周开始除正常组以外各组均给予高脂饲料(高脂饲料配方：含普通全营养饲料87.3％、猪油10％、胆固醇2％、猪胆盐0.5％、丙基硫氧嘧啶0.2％)，持续时间为3周。另外，第8周除正常组动物以外的各组动物再次肌肉注射vd3一次，剂量30万iu/kg。开始给药后第10周末，将动物麻醉，腹主动脉采血，测定血清tg、cho、hdl-c、ldl-c含量，取大动脉(从主动脉弓至腹主动脉分叉处)对动脉内壁斑块出现的长度和面积进行观察和统计。2.4统计学分析以上所有指标均以平均值±标准差表示均数之间差异的比较用t检验。2.5试验结果2.5.1凤尾草总黄酮对动脉粥样硬化大鼠血清脂质的影响实验结果见表5。表5.凤尾草总黄酮对动脉粥样硬化大鼠血脂的影响(n＝8，)*p<0.05；**p<0.01，与模型组比较结果表明与正常对照组相比，模型组大鼠血清tg和cho非常显著升高。凤尾草总黄酮口服灌胃20mg/kg，可非常显著降低动脉粥样硬化大鼠血清tg含量(p<0.01)；显著降低cho值(p<0.05)。阳性对照药辛伐他汀20mg/kg口服灌胃给药可显著降低动脉粥样硬化大鼠血清cho含量，对模型大鼠tg含量无明显影响(p>0.05)。2.5.2凤尾草总黄酮对动脉粥样硬化大鼠高低密度脂蛋白胆固醇含量和比值的影响实验结果见表6。表6.凤尾草总黄酮对脂代谢紊乱模型大鼠高低密度脂蛋白胆固醇含量和比值的影响(n＝8，)*p<0.05；**p<0.01，与模型组比较实验结果表明，动脉粥样硬化模型大鼠血清ldl-c含量明显升高(p<0.01，与正常组比较)；h/l比值非常显著降低(p<0.01，与正常组比较)；hdl-c未见明显变化(p>0.05，与正常组比较)。阳性药辛伐他汀20mg/kg口服灌胃给药，可非常显著降低动脉粥样硬化大鼠血清ldl-c含量(p<0.01，与模型组比较)；升高hdl-c含量和h/l比值(p<0.01，与模型组比较)。与模型组比较，凤尾草总黄酮20mg/kg口服灌胃给药可显著降低模型大鼠血清ldl-c含量(p<0.01)，升高h/l比值(p<0.01)，对hdl-c无明显影响(p>0.05)。2.5.3凤尾草总黄酮对动脉粥样硬化大鼠斑块长度和面积的影响实验结果见表7。表7.凤尾草总黄酮对动脉粥样硬化大鼠血管动脉硬化斑块的影响－斑块长度和面积(n＝8，)*p<0.05；**p<0.01，与模型组比较。实验结果表明，模型组大鼠在肌肉注射vd3和饲喂髙脂饲料后动脉明显形成动脉粥样硬化斑块，其斑块长度和面积与正常组相比差异有非常显著意义(p<0.01)。模型大鼠口服灌胃给予凤尾草总黄酮20mg/kg，仅2例出现动脉粥样硬化病变，其动脉粥样硬化斑块长度和面积较模型组相比明显降低，差异有非常显著意义(p<0.01)；阳性药辛伐他汀20mg/kg组，仅1只动物出现少量轻度动脉粥样硬化病变，该组动物动脉粥样硬化斑块长度和面积较模型组相比明显降低，差异亦具有非常显著意义(p<0.01)。2.6结论试验结果显示凤尾草总黄酮20mg/kg口服灌胃给药，可明显降低动脉粥样硬化大鼠血清tg、cho和ldl-c含量，升高h/l比值，抑制vd3和髙脂饲料诱导的大鼠动脉粥样硬化的形成，对vd3和髙脂饲料诱导的大鼠动脉粥样硬化病变发挥很好的预防及治疗作用。结论：从上述效果实施例1～2可见，凤尾草总黄酮在降低血脂、防治抗动脉粥样硬化方面具有良好的效果，可制备成应用于此方面疾病的新药。以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出：对于本
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的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。当前第1页12