一种植物酵素面膜的制备方法与流程

文档序号:14365389阅读:268来源:国知局
本发明涉及一种植物酵素面膜的制备方法。
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:激素脸也称激素性痤疮,属于药物性痤疮的一种,是因为间断或者是长时间的滥用激素药膏或暗含激素的美容化妆品,引起激素的毒副作用所造成的一种严重皮肤病。它有别于普通的皮肤敏感或是过敏,因其不仅严重的破坏了皮肤的正常生理结构和功能,还对患者的整个身体健康造成了影响,给治疗上也带来了很大的困扰。同名症状有面部激素依赖性皮炎、激素依赖性皮炎的叫法。市场上很多护肤品为了提高美白效果采用化学激素类勾兑而成,加入具有祛角质的有机酸类,如常用的水杨酸,美白祛痘效果就很好,但是长期使用会对皮肤角质层造成损害,引发激素脸。海藻具有治暗疮、补水、防晒、除皱功能,将海藻应用于化妆品中,在近几年形成热潮。技术实现要素:本发明所要解决的技术问题是,提供一种植物酵素面膜的制备方法,具有修复受损皮肤的功效。为了解决上述技术问题,本发明采用以下技术方案:一种植物酵素面膜的制备方法,其特征在于:将海藻提取液、乳化剂、保湿剂、滋补剂、增稠剂、珠光剂、成膜物质、香精和水按照质量比5~40:2~30:0~30:0~30:0~5:0~20:0.5~10:0~4:1~90加入到匀质机中,在温度为50~80℃,压力为2~45mpa条件下,至少匀质一次,匀质时间为10~40min,得到植物酵素面膜;所述乳化剂是聚甘油脂肪酸酯、月桂酸单甘油酯、丙二醇脂肪酸酯、山梨醇酐单棕榈酸酯、硬脂酰乳酸钠、双乙酰酒石酸单甘油酯、壬基酚聚氧乙烯醚、油酸聚氧乙烯酯、硬脂酸聚氧乙烯酯、失水山梨醇脂肪酸酯、二聚甘油、二异辛基丁二酸酯磺酸钠和脂肪酸聚氧乙烯脂中的一种或者任意比例的两种以上;所述保湿剂是甘油、果糖、丙二醇、山梨醇、聚谷氨酸、烟酰胺、聚乙二醇和木糖醇中的一种或者任意比例的两种以上;所述滋补剂是蜂蜜、水杨酸钠、超氧化物歧化酶、维他命a、β葡聚糖、维他命e、赖氨酸钠和维生素e中的一种或者任意比例的两种以上;所述增稠剂是氯化钠、羧甲基纤维素钠、明胶、海藻酸钠和干酪素中的一种或者任意比例的两种以上;所述珠光剂是珍珠粉、硬脂酸乙二醇双酯、乙二醇双硬脂酸和云母粉中的一种或者任意比例的两种以上;所述成膜物质是聚乙烯醇溶液、海藻酸钠、卡波姆、聚丙烯酰胺、丙烯酸乳液和醋酸乙烯乳液中的一种或者任意比例的两种以上;所述海藻提取液,按照以下步骤进行:1)、制备海藻破碎物:将洗净后的海藻破碎,得到海藻破碎物;2)、制备酶解海藻:将海藻破碎物和水装入搅拌罐中,在60~120℃条件下灭菌5~40min,冷却至27~45℃接入酶,酶解30~60min,海藻破碎物、水和酶的质量比5~30:70~95:0.02~1,得酶解海藻;3)、制备海藻滤液和海藻渣:将酶解海藻分离,所得滤液为海藻滤液,所得残渣为海藻渣;4)、制备海藻发酵物:将海藻渣、尿素、硫酸镁、氯化钠、磷酸二氢钾和葡萄糖按照质量比95.5:1:0.5:1:1:1加入到发酵罐中混匀,用水调至含水量为50~70%,在70~150℃条件下灭菌5~40min,冷却至27~36℃,得混合培养基,接入胶红酵母,胶红酵母和混合培养基的质量比为0.1~2:98~99.9,在温度为27~36℃,发酵罐中氧气浓度为8~21%,发酵6~144h,在温度为70~150℃条件下灭菌20~40min,冷却至20~40℃,得海藻发酵物;5)、制备海藻提取液和海藻残渣:将步骤3)得到的海藻滤液加入到步骤4)得到的海藻发酵物中搅拌混匀,得混合物,接入融冻法制备的产氨棒杆菌,混合物和融冻法制备的产氨棒杆菌的质量比为95~99.8:0.2~5,在温度为25~35℃,含氧量为1~8mg/l条件下,发酵1~6天,压滤后所得滤液即为海藻提取液;滤渣即为海藻残渣;所述海藻是浒苔、海带、马尾藻、裙带和昆布中的一种或任意比例两种以上。一种植物酵素面膜的制备方法,其特征在于:按照质量比5~40:2~30:0~30:0~30:0~5:0~20:0.5~10:0~4:1~90的海藻提取液、乳化剂、保湿剂、滋补剂、增稠剂、珠光剂、成膜物质、香精和水加入到匀质机中,在温度为50~80℃,压力为2~45mpa条件下,至少匀质一次,匀质时间为10~40min,将匀质后的混合物均匀涂布于面膜载体上,得到植物酵素面膜;所述乳化剂是聚甘油脂肪酸酯、月桂酸单甘油酯、丙二醇脂肪酸酯、山梨醇酐单棕榈酸酯、硬脂酰乳酸钠、双乙酰酒石酸单甘油酯、壬基酚聚氧乙烯醚、油酸聚氧乙烯酯、硬脂酸聚氧乙烯酯、失水山梨醇脂肪酸酯、二聚甘油、二异辛基丁二酸酯磺酸钠和脂肪酸聚氧乙烯脂中的一种或者任意比例的两种以上;所述保湿剂是甘油、果糖、丙二醇、山梨醇、聚谷氨酸、烟酰胺、聚乙二醇和木糖醇中的一种或者任意比例的两种以上;所述滋补剂是蜂蜜、水杨酸钠、超氧化物歧化酶、维他命a、β葡聚糖、维他命e、赖氨酸钠和维生素e中的一种或者任意比例的两种以上;所述增稠剂是氯化钠、羧甲基纤维素钠、明胶、海藻酸钠和干酪素中的一种或者任意比例的两种以上;所述珠光剂是珍珠粉、硬脂酸乙二醇双酯、乙二醇双硬脂酸和云母粉中的一种或者任意比例的两种以上;所述成膜物质是聚乙烯醇溶液、海藻酸钠、卡波姆、聚丙烯酰胺、丙烯酸乳液和醋酸乙烯乳液中的一种或者任意比例的两种以上;所述海藻提取液,按照以下步骤进行:1)、制备海藻破碎物:将洗净后的海藻破碎,得到海藻破碎物;2)、制备酶解海藻:将海藻破碎物和水装入搅拌罐中,在60~120℃条件下灭菌5~40min,冷却至27~45℃接入酶,酶解30~60min,海藻破碎物、水和酶的质量比5~30:70~95:0.02~1,得酶解海藻;3)、制备海藻滤液和海藻渣:将酶解海藻分离,所得滤液为海藻滤液,所得残渣为海藻渣;4)、制备海藻发酵物:将海藻渣、尿素、硫酸镁、氯化钠、磷酸二氢钾和葡萄糖按照质量比95.5:1:0.5:1:1:1加入到发酵罐中混匀,用水调至含水量为50~70%,在70~150℃条件下灭菌5~40min,冷却至27~36℃,得混合培养基,接入胶红酵母,胶红酵母和混合培养基的质量比为0.1~2:98~99.9,在温度为27~36℃,发酵罐中氧气浓度为8~21%,发酵6~144h,在温度为70~150℃条件下灭菌20~40min,冷却至20~40℃,得海藻发酵物;5)、制备海藻提取液和海藻残渣:将步骤3)得到的海藻滤液加入到步骤4)得到的海藻发酵物中搅拌混匀,得混合物,接入融冻法制备的产氨棒杆菌,混合物和融冻法制备的产氨棒杆菌的质量比为95~99.8:0.2~5,在温度为25~35℃,含氧量为1~8mg/l条件下,发酵1~6天,压滤后所得滤液即为海藻提取液;滤渣即为海藻残渣;所述海藻是浒苔、海带、马尾藻、裙带和昆布中的一种或任意比例两种以上。所述匀质机中匀质都为两次,其中第一次匀质压力为30mpa,匀质时间为20min;第二次匀质压力为4pma,匀质时间为20min。融冻法产氨棒杆菌的制备按照以下步骤进行:a)菌种的扩大再培养:将处于对数生长期的菌体作为种子,以10%的接种量接种于液体培养基中,于30℃摇床160r/min培养48h,8000r/min离心10min后,得到扩大再培养菌种;b)融冻法提高细胞的通透性:融冻法至少重复一次,其步骤为:将步骤a)得到的扩大再培养菌种放入-20℃的冰箱中,冷冻4h,取出,在室温下溶解;所述液体培养基的ph7.2~7.4,并按照以下质量比配成:牛肉浸液1.0l,蛋白胨10.0g,nacl5.0g,琼脂25.0g;其中牛肉浸液的制备方法按照以下步骤进行:瘦牛肉洗净,切碎,称取550克浸泡于1375ml水中,浸泡一夜,过滤,滤液分装后0.6kg/cm2灭菌40min。所述酶是溶菌酶和果胶酶按照质量比5:1的组合物,其中溶菌酶按照以下步骤进行:(a)向鸡蛋清或全鸡蛋液加5倍重量的水,搅匀后加入匀质机中,至少匀质一次,匀质温度为30~60℃,匀质压力为2~40mpa,匀质时间为10~40min,匀质后过滤,所得滤液为稀释液;(b)将步骤(a)得到的稀释液用截留分子量为15000~30000da的超滤膜超滤,得到稀液和浓液;(c)在步骤(b)得到的稀液中加入树脂进行吸附,所述稀液和树脂的重量比例为1:3~8,得到吸附后的树脂;(d)将步骤(c)得到的吸附后的树脂用0.001~0.5mol/l的nacl水溶液进行洗脱,得到洗脱液;(e)将步骤(d)得到的洗脱液用超滤膜超滤脱盐,得到超滤液,所述超滤膜的截留分子量为2000~10000da;(f)将步骤(e)得到的超滤液干燥后,即得到溶菌酶;所述树脂是所述树脂为阳离子交换树脂或大孔吸附树脂;阳离子交换树脂的型号为001*7、732、amberliteir-120、dowex-50、lewatit-100、diaionsk-1、allassioncs、duolitec-20、sdb-3中的一种或多种,大孔吸附树脂为ab-8、d101、d3520、x-5、nka-ii、nka-9、s-8、xda-1、h-20、h-30、h-40中的一种或多种。步骤3)所述分离包括压滤、过滤和离心分离中的一种或两种以上。步骤4)所述混合培养基至含水量为60%,胶红酵母和混合培养基的质量比为0.5:99.5,在温度为30℃,氧气浓度为12%,发酵120h,在温度为120℃条件下灭菌20min。步骤5)混合物和融冻法制备的产氨棒杆菌的质量比为98:2,在温度为28℃,含氧量为3mg/l条件下,发酵5天。所述胶红酵母和产氨棒杆菌均购自中国工业微生物菌种保藏管理中心,编号分别为cicc31192和cicc10168。发明具有以下有益技术效果:1、本发明采用溶菌酶和果胶酶对海藻进行预处理,溶菌酶使细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽,导致细胞壁破裂内容物逸出,方便后续提取。2、本发明采用好氧兼厌氧的胶红酵母在厌氧条件下发酵,可防止海藻营养成分的流失,并且厌氧发酵产生的酒精对海藻提取具有辅助作用。3、本发明采用好氧兼厌氧的产氨棒杆菌在缺氧条件下发酵,生产atp,atp是一种高能磷酸化合物,在细胞中,它能与adp的相互转化实现贮能和放能,从而保证了细胞各项生命活动的能量供应,修复受损皮肤。产氨棒杆菌的还原产物呈弱碱性,可以修复因长期使用有机酸而损害的角质层。4、通过融冻法提高产氨棒杆菌细胞的通透性,可以使产氨棒杆菌产生的atp更容易从细胞膜中渗透到细胞外,产物效果明显好于未经处理的产氨棒杆菌的产物。具体实施方式下面结合具体实例进一步说明本发明。实施例1将海藻提取液、乳化剂、保湿剂、滋补剂、增稠剂、珠光剂、成膜物质、香精和水按照质量比35:10:10:7:0.5:5:2:0.5:30加入到匀质机中,在温度为65℃条件下匀质二次,其中第一次匀质压力为30mpa,匀质时间为20min;第二次匀质压力为4pma,匀质时间为20min,得到植物酵素面膜。所述乳化剂是聚甘油脂肪酸酯、月桂酸单甘油酯和硬脂酰乳酸钠按照质量比3:2:1的组合物;所述保湿剂是甘油和果糖按照质量比2:1的组合物;所述滋补剂是蜂蜜、超氧化物歧化酶、维他命a和维生素e按照质量比1:3:1:1的组合物;所述增稠剂是海藻酸钠和氯化钠按照质量比1:2的组合物;所述成膜物质是固含量为40%的丙烯酸乳液;所述珠光剂是珍珠粉。海藻提取液的制备工艺,按照以下步骤进行:1)、制备海藻破碎物:将洗净后的新鲜海带破碎,得到海藻破碎物;2)、制备酶解海藻:将海藻破碎物和水装入搅拌罐中,在100℃条件下灭菌15min,冷却至30℃接入酶,酶解40min,海藻破碎物、水和酶的质量比20:79.94:0.06,得酶解海藻,所述酶是溶菌酶和果胶酶按照质量比5:1的组合物;3)、制备海藻滤液和海藻渣:将酶解海藻压滤分离,所得滤液为海藻滤液,所得残渣为海藻渣;4)、制备海藻发酵物:将海藻渣、尿素、硫酸镁、氯化钠、磷酸二氢钾和葡萄糖按照质量比95.5:1:0.5:1:1:1加入到发酵罐中混匀,用水调至含水量为60%,在120℃条件下灭菌20min,冷却至30℃,得混合培养基,接入胶红酵母,胶红酵母和混合培养基的质量比为0.5:99.5,在温度为30℃,发酵罐中氧气浓度为12%,发酵120h,在温度为120℃条件下灭菌20min,冷却至35℃,得海藻发酵物;5)、制备海藻提取液和海藻残渣:将步骤3)得到的海藻滤液加入到步骤4)得到的海藻发酵物中搅拌混匀,得混合物,接入融冻法制备的产氨棒杆菌,混合物和融冻法制备的产氨棒杆菌的质量比为98:2,在温度为28℃,含氧量为3mg/l条件下,发酵5天,压滤,所得滤液即为海藻提取液;滤渣即为海藻残渣;其中融冻法产氨棒杆菌的制备按照以下步骤进行:a)菌种的扩大再培养:将处于对数生长期的菌体作为种子,以10%的接种量接种于液体培养基中,于30℃摇床160r/min培养48h,8000r/min离心10min后,得到扩大再培养菌种;b)融冻法提高细胞的通透性:融冻法重复三次,其步骤为:将步骤1)得到的扩大再培养菌种放入-20℃的冰箱中,冷冻4h,取出,在室温下溶解,再次放入-20℃的冰箱中,冷冻4h,取出,在室温下溶解,再次放入-20℃的冰箱中,冷冻4h,取出,在室温下溶解;所述液体培养基的ph7.2~7.4,并按照以下质量比配成:牛肉浸液1.0l,蛋白胨10.0g,nacl5.0g,琼脂25.0g;其中牛肉浸液的制备方法按照以下步骤进行:瘦牛肉洗净,切碎,称取550克浸泡于1375ml水中,浸泡一夜,过滤,滤液分装后0.6kg/cm2灭菌40min。其中溶菌酶按照以下步骤进行:(a)向鸡蛋清或全鸡蛋液加5倍重量的水,搅匀后加入匀质机中,匀质2次,匀质温度均为40℃,匀质时间均为15min,其中第一次匀质压力为25mpa,第二次匀质压力为4mpa,匀质后过滤,所得滤液为稀释液;(b)将步骤(a)得到的稀释液用截留分子量为28000da的超滤膜超滤,得到稀液和浓液;(c)在步骤(b)得到的稀液中加入树脂进行吸附,所述稀液和树脂的重量比例为1:5,得到吸附后的树脂;(d)将步骤(c)得到的吸附后的树脂用0.003mol/l的nacl水溶液进行洗脱,得到洗脱液;(e)将步骤(d)得到的洗脱液用超滤膜超滤脱盐,得到超滤液,所述超滤膜的截留分子量为8000da;(f)将步骤(e)得到的超滤液干燥后,即得到溶菌酶。实施例2将海藻提取液、乳化剂、保湿剂、滋补剂、增稠剂、珠光剂、成膜物质、香精和水按照质量比35:10:10:7:0.5:5:2:0.5:30加入到匀质机中,在温度为65℃条件下匀质二次,其中第一次匀质压力为22mpa,匀质时间为20min;第二次匀质压力为4pma,匀质时间为20min,得到植物酵素面膜。所述乳化剂是聚甘油脂肪酸酯、月桂酸单甘油酯和硬脂酰乳酸钠按照质量比3:2:1的组合物;所述保湿剂是甘油和果糖按照质量比2:1的组合物;所述滋补剂是蜂蜜、超氧化物歧化酶、维他命a和维生素e按照质量比1:3:1:1的组合物;所述增稠剂是海藻酸钠和氯化钠按照质量比1:2的组合物;所述成膜物质是固含量为40%的丙烯酸乳液;所述珠光剂是珍珠粉。海藻提取液的制备工艺,按照以下步骤进行:1)、制备海藻破碎物:将洗净后的新鲜海带破碎,得到海藻破碎物;2)、制备酶解海藻:将海藻破碎物和水装入搅拌罐中,在100℃条件下灭菌15min,冷却至30℃接入酶,酶解40min,海藻破碎物、水和酶的质量比20:79.94:0.06,得酶解海藻,所述酶是溶菌酶和果胶酶按照质量比5:1的组合物;3)、制备海藻滤液和海藻渣:将酶解海藻压滤分离,所得滤液为海藻滤液,所得残渣为海藻渣;4)、制备海藻发酵物:将海藻渣、尿素、硫酸镁、氯化钠、磷酸二氢钾和葡萄糖按照质量比95.5:1:0.5:1:1:1加入到发酵罐中混匀,用水调至含水量为60%,在120℃条件下灭菌20min,冷却至30℃,得混合培养基,接入胶红酵母,胶红酵母和混合培养基的质量比为0.5:99.5,在温度为30℃,发酵罐中氧气浓度为12%,发酵120h,在温度为120℃条件下灭菌20min,冷却至35℃,得海藻发酵物;5)、制备海藻提取液和海藻残渣:将步骤3)得到的海藻滤液加入到步骤4)得到的海藻发酵物中搅拌混匀,得混合物,接入融冻法制备的产氨棒杆菌,混合物和融冻法制备的产氨棒杆菌的质量比为98:2,在温度为28℃,含氧量为3mg/l条件下,发酵5天,压滤,所得滤液即为海藻提取液;滤渣即为海藻残渣;其中融冻法产氨棒杆菌的制备按照以下步骤进行:a)菌种的扩大再培养:将处于对数生长期的菌体作为种子,以10%的接种量接种于液体培养基中,于30℃摇床160r/min培养48h,8000r/min离心10min后,得到扩大再培养菌种;b)融冻法提高细胞的通透性:融冻法重复三次,其步骤为:将步骤1)得到的扩大再培养菌种放入-20℃的冰箱中,冷冻4h,取出,在室温下溶解,再次放入-20℃的冰箱中,冷冻4h,取出,在室温下溶解,再次放入-20℃的冰箱中,冷冻4h,取出,在室温下溶解;所述液体培养基的ph7.2~7.4,并按照以下质量比配成:牛肉浸液1.0l,蛋白胨10.0g,nacl5.0g,琼脂25.0g;其中牛肉浸液的制备方法按照以下步骤进行:瘦牛肉洗净,切碎,称取550克浸泡于1375ml水中,浸泡一夜,过滤,滤液分装后0.6kg/cm2灭菌40min。其中溶菌酶按照以下步骤进行:(a)向鸡蛋清或全鸡蛋液加5倍重量的水,搅匀后加入匀质机中,匀质2次,匀质温度均为35℃,匀质时间均为15min,其中第一次匀质压力为25mpa,第二次匀质压力为4mpa,匀质后过滤,所得滤液为稀释液;(b)将步骤(a)得到的稀释液用截留分子量为28000da的超滤膜超滤,得到稀液和浓液;(c)在步骤(b)得到的稀液中加入树脂进行吸附,所述稀液和树脂的重量比例为1:5,得到吸附后的树脂;(d)将步骤(c)得到的吸附后的树脂用0.003mol/l的nacl水溶液进行洗脱,得到洗脱液;(e)将步骤(d)得到的洗脱液用超滤膜超滤脱盐,得到超滤液,所述超滤膜的截留分子量为8000da;(f)将步骤(e)得到的超滤液干燥后,即得到溶菌酶。实施例3将海藻提取液、乳化剂、保湿剂、滋补剂、增稠剂、珠光剂、成膜物质和水按照质量比30:5:10:10:5:0.5:2.5:37加入到匀质机中,在温度为65℃条件下匀质一次,匀质压力为25mpa,匀质时间为20min,得到植物酵素面膜。所述乳化剂是聚甘油脂肪酸酯、月桂酸单甘油酯和硬脂酰乳酸钠按照质量比3:2:1的组合物;所述保湿剂是甘油和果糖按照质量比2:1的组合物;所述滋补剂是蜂蜜、超氧化物歧化酶、维他命a和维生素e按照质量比1:3:1:1的组合物;所述增稠剂是海藻酸钠和氯化钠按照质量比1:2的组合物;所述成膜物质是固含量为40%的丙烯酸乳液;所述珠光剂是珍珠粉。海藻提取液的制备工艺,按照以下步骤进行:1)、制备海藻破碎物:将洗净后的新鲜海带破碎,得到海藻破碎物;2)、制备酶解海藻:将海藻破碎物和水装入搅拌罐中,在100℃条件下灭菌15min,冷却至30℃接入酶,酶解40min,海藻破碎物、水和酶的质量比20:79.94:0.06,得酶解海藻,所述酶是溶菌酶和果胶酶按照质量比5:1的组合物;3)、制备海藻滤液和海藻渣:将酶解海藻压滤分离,所得滤液为海藻滤液,所得残渣为海藻渣;4)、制备海藻发酵物:将海藻渣、尿素、硫酸镁、氯化钠、磷酸二氢钾和葡萄糖按照质量比95.5:1:0.5:1:1:1加入到发酵罐中混匀,用水调至含水量为60%,在120℃条件下灭菌20min,冷却至30℃,得混合培养基,接入胶红酵母,胶红酵母和混合培养基的质量比为0.5:99.5,在温度为30℃,发酵罐中氧气浓度为12%,发酵120h,在温度为120℃条件下灭菌20min,冷却至35℃,得海藻发酵物;5)、制备海藻提取液和海藻残渣:将步骤3)得到的海藻滤液加入到步骤4)得到的海藻发酵物中搅拌混匀,得混合物,接入融冻法制备的产氨棒杆菌,混合物和融冻法制备的产氨棒杆菌的质量比为98:2,在温度为28℃,含氧量为3mg/l条件下,发酵5天,压滤,所得滤液即为海藻提取液;滤渣即为海藻残渣;其中融冻法产氨棒杆菌的制备按照以下步骤进行:a)菌种的扩大再培养:将处于对数生长期的菌体作为种子,以10%的接种量接种于液体培养基中,于30℃摇床160r/min培养48h,8000r/min离心10min后,得到扩大再培养菌种;b)融冻法提高细胞的通透性:融冻法重复三次,其步骤为:将步骤1)得到的扩大再培养菌种放入-20℃的冰箱中,冷冻4h,取出,在室温下溶解,再次放入-20℃的冰箱中,冷冻4h,取出,在室温下溶解,再次放入-20℃的冰箱中,冷冻4h,取出,在室温下溶解;所述液体培养基的ph7.2~7.4,并按照以下质量比配成:牛肉浸液1.0l,蛋白胨10.0g,nacl5.0g,琼脂25.0g;其中牛肉浸液的制备方法按照以下步骤进行:瘦牛肉洗净,切碎,称取550克浸泡于1375ml水中,浸泡一夜,过滤,滤液分装后0.6kg/cm2灭菌40min。其中溶菌酶按照以下步骤进行:(a)向鸡蛋清或全鸡蛋液加5倍重量的水,搅匀后加入匀质机中,匀质2次,匀质温度均为45℃,匀质时间均为15min,其中第一次匀质压力为25mpa,第二次匀质压力为4mpa,匀质后过滤,所得滤液为稀释液;(b)将步骤(a)得到的稀释液用截留分子量为28000da的超滤膜超滤,得到稀液和浓液;(c)在步骤(b)得到的稀液中加入树脂进行吸附,所述稀液和树脂的重量比例为1:5,得到吸附后的树脂;(d)将步骤(c)得到的吸附后的树脂用0.003mol/l的nacl水溶液进行洗脱,得到洗脱液;(e)将步骤(d)得到的洗脱液用超滤膜超滤脱盐,得到超滤液,所述超滤膜的截留分子量为8000da;(f)将步骤(e)得到的超滤液干燥后,即得到溶菌酶。实施例4将海藻提取液、乳化剂、成膜物质和水按照质量比25:19:1:55加入到匀质机中,在温度为65℃条件下匀质二次,其中第一次匀质压力为25mpa,匀质时间为15min;第二次匀质压力为4pma,匀质时间为20min,得到植物酵素面膜。所述乳化剂是聚甘油脂肪酸酯、月桂酸单甘油酯和硬脂酰乳酸钠按照质量比3:2:1的组合物;所述成膜物质是固含量为40%的丙烯酸乳液。海藻提取液的制备工艺,按照以下步骤进行:1)、制备海藻破碎物:将洗净后的新鲜海带破碎,得到海藻破碎物;2)、制备酶解海藻:将海藻破碎物和水装入搅拌罐中,在100℃条件下灭菌15min,冷却至30℃接入酶,酶解40min,海藻破碎物、水和酶的质量比20:79.94:0.06,得酶解海藻,所述酶是溶菌酶和果胶酶按照质量比5:1的组合物;3)、制备海藻滤液和海藻渣:将酶解海藻压滤分离,所得滤液为海藻滤液,所得残渣为海藻渣;4)、制备海藻发酵物:将海藻渣、尿素、硫酸镁、氯化钠、磷酸二氢钾和葡萄糖按照质量比95.5:1:0.5:1:1:1加入到发酵罐中混匀,用水调至含水量为60%,在120℃条件下灭菌20min,冷却至30℃,得混合培养基,接入胶红酵母,胶红酵母和混合培养基的质量比为0.5:99.5,在温度为30℃,发酵罐中氧气浓度为12%,发酵120h,在温度为120℃条件下灭菌20min,冷却至35℃,得海藻发酵物;5)、制备海藻提取液和海藻残渣:将步骤3)得到的海藻滤液加入到步骤4)得到的海藻发酵物中搅拌混匀,得混合物,接入融冻法制备的产氨棒杆菌,混合物和融冻法制备的产氨棒杆菌的质量比为98:2,在温度为28℃,含氧量为3mg/l条件下,发酵5天,压滤,所得滤液即为海藻提取液;滤渣即为海藻残渣;其中融冻法产氨棒杆菌的制备按照以下步骤进行:a)菌种的扩大再培养:将处于对数生长期的菌体作为种子,以10%的接种量接种于液体培养基中,于30℃摇床160r/min培养48h,8000r/min离心10min后,得到扩大再培养菌种;b)融冻法提高细胞的通透性:融冻法重复三次,其步骤为:将步骤1)得到的扩大再培养菌种放入-20℃的冰箱中,冷冻4h,取出,在室温下溶解,再次放入-20℃的冰箱中,冷冻4h,取出,在室温下溶解,再次放入-20℃的冰箱中,冷冻4h,取出,在室温下溶解;所述液体培养基的ph7.2~7.4,并按照以下质量比配成:牛肉浸液1.0l,蛋白胨10.0g,nacl5.0g,琼脂25.0g;其中牛肉浸液的制备方法按照以下步骤进行:瘦牛肉洗净,切碎,称取550克浸泡于1375ml水中,浸泡一夜,过滤,滤液分装后0.6kg/cm2灭菌40min。其中溶菌酶按照以下步骤进行:(a)向鸡蛋清或全鸡蛋液加5倍重量的水,搅匀后加入匀质机中,匀质1次,匀质温度均为40℃,匀质时间为30min,匀质压力为25mpa,匀质后过滤,所得滤液为稀释液;(b)将步骤(a)得到的稀释液用截留分子量为28000da的超滤膜超滤,得到稀液和浓液;(c)在步骤(b)得到的稀液中加入树脂进行吸附,所述稀液和树脂的重量比例为1:5,得到吸附后的树脂;(d)将步骤(c)得到的吸附后的树脂用0.003mol/l的nacl水溶液进行洗脱,得到洗脱液;(e)将步骤(d)得到的洗脱液用超滤膜超滤脱盐,得到超滤液,所述超滤膜的截留分子量为8000da;(f)将步骤(e)得到的超滤液干燥后,即得到溶菌酶。实施例5将海藻提取液、乳化剂、保湿剂、滋补剂、增稠剂、珠光剂、成膜物质、香精和水按照质量比35:10:10:7:0.5:5:2:0.5:30加入到匀质机中,在温度为65℃条件下匀质二次,其中第一次匀质压力为22mpa,匀质时间为20min;第二次匀质压力为4pma,匀质时间为20min,得到植物酵素面膜。所述乳化剂是聚甘油脂肪酸酯、月桂酸单甘油酯和硬脂酰乳酸钠按照质量比3:2:1的组合物;所述保湿剂是甘油和果糖按照质量比2:1的组合物;所述滋补剂是蜂蜜、超氧化物歧化酶、维他命a和维生素e按照质量比1:3:1:1的组合物;所述增稠剂是海藻酸钠和氯化钠按照质量比1:2的组合物;所述成膜物质是固含量为40%的丙烯酸乳液;所述珠光剂是珍珠粉。海藻提取液的制备工艺,按照以下步骤进行:1)、制备海藻破碎物:将洗净后的新鲜海带破碎,得到海藻破碎物;2)、制备酶解海藻:将海藻破碎物和水装入搅拌罐中,在100℃条件下灭菌15min,冷却至30℃接入酶,酶解40min,海藻破碎物、水和酶的质量比20:79.94:0.06,得酶解海藻,所述酶是溶菌酶和果胶酶按照质量比5:1的组合物;3)、制备海藻滤液和海藻渣:将酶解海藻压滤分离,所得滤液为海藻滤液,所得残渣为海藻渣;4)、制备海藻发酵物:将海藻渣、尿素、硫酸镁、氯化钠、磷酸二氢钾和葡萄糖按照质量比95.5:1:0.5:1:1:1加入到发酵罐中混匀,用水调至含水量为60%,在120℃条件下灭菌20min,冷却至30℃,得混合培养基,接入胶红酵母,胶红酵母和混合培养基的质量比为0.5:99.5,在温度为30℃,发酵罐中氧气浓度为12%,发酵120h,在温度为120℃条件下灭菌20min,冷却至35℃,得海藻发酵物;5)、制备海藻提取液和海藻残渣:将步骤3)得到的海藻滤液加入到步骤4)得到的海藻发酵物中搅拌混匀,得混合物,接入融冻法制备的产氨棒杆菌,混合物和融冻法制备的产氨棒杆菌的质量比为98:2,在温度为28℃,含氧量为3mg/l条件下,发酵5天,压滤,所得滤液即为海藻提取液;滤渣即为海藻残渣;其中融冻法产氨棒杆菌的制备按照以下步骤进行:a)菌种的扩大再培养:将处于对数生长期的菌体作为种子,以10%的接种量接种于液体培养基中,于30℃摇床160r/min培养48h,8000r/min离心10min后,得到扩大再培养菌种;b)融冻法提高细胞的通透性:融冻法重复三次,其步骤为:将步骤1)得到的扩大再培养菌种放入-20℃的冰箱中,冷冻4h,取出,在室温下溶解,再次放入-20℃的冰箱中,冷冻4h,取出,在室温下溶解,再次放入-20℃的冰箱中,冷冻4h,取出,在室温下溶解;所述液体培养基的ph7.2~7.4,并按照以下质量比配成:牛肉浸液1.0l,蛋白胨10.0g,nacl5.0g,琼脂25.0g;其中牛肉浸液的制备方法按照以下步骤进行:瘦牛肉洗净,切碎,称取550克浸泡于1375ml水中,浸泡一夜,过滤,滤液分装后0.6kg/cm2灭菌40min。其中溶菌酶按照以下步骤进行:(a)向鸡蛋清或全鸡蛋液加5倍重量的水,搅匀后加入匀质机中,匀质3次,匀质温度均为40℃,匀质时间均为15min,其中第一次匀质压力为25mpa,第二次匀质压力为4mpa,第三次匀质压力为4mpa,匀质后过滤,所得滤液为稀释液;(b)将步骤(a)得到的稀释液用截留分子量为28000da的超滤膜超滤,得到稀液和浓液;(c)在步骤(b)得到的稀液中加入树脂进行吸附,所述稀液和树脂的重量比例为1:5,得到吸附后的树脂;(d)将步骤(c)得到的吸附后的树脂用0.003mol/l的nacl水溶液进行洗脱,得到洗脱液;(e)将步骤(d)得到的洗脱液用超滤膜超滤脱盐,得到超滤液,所述超滤膜的截留分子量为8000da;(f)将步骤(e)得到的超滤液干燥后,即得到溶菌酶。实施例6按照质量比8:10:2:80的海藻提取液、乳化剂、成膜物质和水加入到匀质机中,在温度为65℃,压力为25mpa条件下匀质一次,将匀质后的混合物均匀涂布于面膜载体上,得到植物酵素面膜;所述乳化剂是聚甘油脂肪酸酯和硬脂酰乳酸钠按照质量比3:2的组合物;所述成膜物质是卡波姆。海藻提取液的制备工艺,按照以下步骤进行:1)、制备海藻破碎物:将洗净后的新鲜海带晾干,采用粉碎机将干海带粉碎,得到海藻破碎物;2)、制备酶解海藻:将海藻破碎物和水装入搅拌罐中,在100℃条件下灭菌15min,冷却至30℃接入酶,酶解40min,海藻破碎物、水和酶的质量比20:79.94:0.06,得酶解海藻,所述酶是溶菌酶和果胶酶按照质量比5:1的组合物;3)、制备海藻滤液和海藻渣:将酶解海藻压滤分离,所得滤液为海藻滤液,所得残渣为海藻渣;4)、制备海藻发酵物:将海藻渣、尿素、硫酸镁、氯化钠、磷酸二氢钾和葡萄糖按照质量比95.5:1:0.5:1:1:1加入到发酵罐中混匀,用水调至含水量为60%,在120℃条件下灭菌20min,冷却至30℃,得混合培养基,接入胶红酵母,胶红酵母和混合培养基的质量比为0.5:99.5,在温度为30℃,发酵罐中氧气浓度为12%,发酵120h,在温度为120℃条件下灭菌20min,冷却至35℃,得海藻发酵物;5)、制备海藻提取液和海藻残渣:将步骤3)得到的海藻滤液加入到步骤4)得到的海藻发酵物中搅拌混匀,得混合物,接入融冻法制备的产氨棒杆菌,混合物和融冻法制备的产氨棒杆菌的质量比为98:2,在温度为28℃,含氧量为3mg/l条件下,发酵5天,压滤,所得滤液即为海藻提取液;滤渣即为海藻残渣;其中融冻法产氨棒杆菌的制备按照以下步骤进行:a)菌种的扩大再培养:将处于对数生长期的菌体作为种子,以10%的接种量接种于液体培养基中,于30℃摇床160r/min培养48h,8000r/min离心10min后,得到扩大再培养菌种;b)融冻法提高细胞的通透性:融冻法重复三次,其步骤为:将步骤1)得到的扩大再培养菌种放入-20℃的冰箱中,冷冻4h,取出,在室温下溶解,再次放入-20℃的冰箱中,冷冻4h,取出,在室温下溶解,再次放入-20℃的冰箱中,冷冻4h,取出,在室温下溶解;所述液体培养基的ph7.2~7.4,并按照以下质量比配成:牛肉浸液1.0l,蛋白胨10.0g,nacl5.0g,琼脂25.0g;其中牛肉浸液的制备方法按照以下步骤进行:瘦牛肉洗净,切碎,称取550克浸泡于1375ml水中,浸泡一夜,过滤,滤液分装后0.6kg/cm2灭菌40min。其中溶菌酶按照以下步骤进行:(a)向鸡蛋清或全鸡蛋液加5倍重量的水,搅匀后加入匀质机中,匀质2次,匀质温度均为40℃,匀质时间均为15min,其中第一次匀质压力为25mpa,第二次匀质压力为4mpa,匀质后过滤,所得滤液为稀释液;(b)将步骤(a)得到的稀释液用截留分子量为28000da的超滤膜超滤,得到稀液和浓液;(c)在步骤(b)得到的稀液中加入树脂进行吸附,所述稀液和树脂的重量比例为1:5,得到吸附后的树脂;(d)将步骤(c)得到的吸附后的树脂用0.003mol/l的nacl水溶液进行洗脱,得到洗脱液;(e)将步骤(d)得到的洗脱液用超滤膜超滤脱盐,得到超滤液,所述超滤膜的截留分子量为8000da;(f)将步骤(e)得到的超滤液干燥后,即得到溶菌酶。实施例7按照质量比8:10:2:80的海藻提取液、乳化剂、成膜物质和水加入到匀质机中,在温度为65℃,压力为25mpa条件下匀质一次,将匀质后的混合物均匀涂布于面膜载体上,得到植物酵素面膜;所述乳化剂是聚甘油脂肪酸酯和硬脂酰乳酸钠按照质量比3:2的组合物;所述成膜物质是卡波姆。海藻提取液的制备工艺,按照以下步骤进行:1)、制备海藻破碎物:将洗净后的新鲜海带破碎,得到海藻破碎物;2)、制备酶解海藻:将海藻破碎物和水装入搅拌罐中,在120℃条件下灭菌5min,冷却至30℃接入酶,酶解30min,海藻破碎物、水和酶的质量比15:84.7:0.3,得酶解海藻,所述酶是溶菌酶和果胶酶按照质量比5:1的组合物;3)、制备海藻滤液和海藻渣:将酶解海藻压滤分离,所得滤液为海藻滤液,所得残渣为海藻渣;4)、制备海藻发酵物:将海藻渣、尿素、硫酸镁、氯化钠、磷酸二氢钾和葡萄糖按照质量比95.5:1:0.5:1:1:1加入到发酵罐中混匀,用水调至含水量为65%,在120℃条件下灭菌20min,冷却至35℃,得混合培养基,接入胶红酵母,胶红酵母和混合培养基的质量比为0.6:99.4,在温度为30℃,发酵罐中氧气浓度为15%,发酵200h,在温度为120℃条件下灭菌20min,冷却至35℃,得海藻发酵物;5)、制备海藻提取液和海藻残渣:将步骤3)得到的海藻滤液加入到步骤4)得到的海藻发酵物中搅拌混匀,得混合物,接入融冻法制备的产氨棒杆菌,混合物和融冻法制备的产氨棒杆菌的质量比为99:1,在温度为28℃,含氧量为5mg/l条件下,发酵4天,压滤,所得滤液即为海藻提取液;滤渣即为海藻残渣;其中融冻法产氨棒杆菌的制备按照以下步骤进行:a)菌种的扩大再培养:将处于对数生长期的菌体作为种子,以10%的接种量接种于液体培养基中,于30℃摇床160r/min培养48h,8000r/min离心10min后,得到扩大再培养菌种;b)融冻法提高细胞的通透性:融冻法重复三次,其步骤为:将步骤1)得到的扩大再培养菌种放入-20℃的冰箱中,冷冻4h,取出,在室温下溶解,再次放入-20℃的冰箱中,冷冻4h,取出,在室温下溶解,再次放入-20℃的冰箱中,冷冻4h,取出,在室温下溶解;所述液体培养基的ph7.2~7.4,并按照以下质量比配成:牛肉浸液1.0l,蛋白胨10.0g,nacl5.0g,琼脂25.0g;其中牛肉浸液的制备方法按照以下步骤进行:瘦牛肉洗净,切碎,称取550克浸泡于1375ml水中,浸泡一夜,过滤,滤液分装后0.6kg/cm2灭菌40min。其中溶菌酶按照以下步骤进行:(a)向鸡蛋清或全鸡蛋液加5倍重量的水,搅匀后加入匀质机中,匀质3次,匀质温度均为40℃,匀质时间均为15min,其中第一次匀质压力为25mpa,第二次匀质压力为4mpa,第三次匀质压力为4mpa,匀质后过滤,所得滤液为稀释液;(b)将步骤(a)得到的稀释液用截留分子量为10000da的超滤膜超滤,得到稀液和浓液;(c)在步骤(b)得到的稀液中加入树脂进行吸附,所述稀液和树脂的重量比例为1:6,得到吸附后的树脂;(d)将步骤(c)得到的吸附后的树脂用0.02mol/l的nacl水溶液进行洗脱,得到洗脱液;(e)将步骤(d)得到的洗脱液用超滤膜超滤脱盐,得到含溶菌酶的超滤液,所述超滤膜的截留分子量为6000da。下面结合实验数据进一步说明本发明的有益效果:一、小白鼠试验1、急性经口毒性试验:根据化妆品卫生规范》(2007版)对本发明产品进行检验,急性经口毒性试验采用10只201g小白鼠进行试验,其中雌雄鼠各半,一次性喂养剂量为5050mg/kg,经14天观察小白鼠的被毛和皮肤、眼睛和粘膜,呼吸、循环、自主神经和中枢神经系统、肢体活动和行为出现异常情况,试验结束后对小白鼠处死做尸检,未发现小白鼠器官改变。2、急性经皮毒性试验:根据化妆品卫生规范》(2007版)对本发明产品进行检验,急性经皮毒性试验采用10只220g小白鼠进行试验,其中雌雄鼠各半,一次性试验剂量为2180mg/kg,经14天观察小白鼠的震颤、抽搐、流涎、腹泻、嗜睡和昏迷情况,见表1。表1试验结束后对小白鼠处死做尸检,未发现小白鼠器官改变。二检测:1、实验供试材料1材料与方法:1.1试验地点和实验对象:烟台某大学化学分析检测中心。1.2实验检测:测溶菌酶的活性和回收率。1.3供试材料:针对普通处理(溶菌酶的制备方法除搅拌均匀后,未经过匀质机匀质,其它制作方法与实施例1一致)、实施例1、实施例2、实施例3、实施例4和实施例5中制备的溶菌酶做效果比较。1.4试验设计:采用高效液相色谱法对样品处理。本实验除实验用处理不同外其他操作均一致。2结果与分析普通处理(搅拌均匀后,未经过匀质机匀质,其它制作方法与实施例1一致)、实施例1、实施例2、实施例3、实施例4和实施例5制备的溶菌酶处理相比,数据见表1表1回收率(%)酶活性(u/mg)普通处理72.714567实施例191.721101实施例284.719831实施例388.320790实施例491.720903实施例589.320737由表1实施例1和普通处理制备的溶菌酶相比,本发明无论是在溶菌酶回收率,还是酶活性方面都明显好于普通处理;由实施例1至实施例3制备的溶菌酶比较可以看出匀质温度对溶菌酶的回收率和活性还是有一定影响,其中实施例1采用40℃总体效果最好;由实施例1、实施例4和实施例5制备的溶菌酶比较可以看出匀质压力和次数对溶菌酶的回收率和活性也有一定影响,并非压力越大,时间越长就越好,综合比较实施例1制备的效果最佳。三、实际实验1、一般资料发明人于2015年8月~2017年8月间,选择600名志愿者使用本发明产品,其中男性、女性各300名,年龄范围为22~40岁。普遍症状是皮肤瘙痒发红、有皮屑脱落。将这600名实验者随即分为6组,每组100人,分别普通面膜(除未加入海藻提取液外,其它制作方法与实施例1一致)、对比1(除制备海藻提取液时,使用未经融冻法处理的产氨棒杆菌外,其它制作方法与实施例1一致)、对比2(除未经酶处理外,其它制作方法均与实施例1一致)、对比3(除溶菌酶制作过程中搅拌均匀后未经匀质处理外,其它制作方法均与实施例1一致)、实施例6和实施例1。2、试验方法早晚各在脸部敷一次,使用3个月。3、评判标准和评判结果3.1评判标准分为痊愈:激素脸性状消失,且一年内无复发;好转:激素脸症状减轻;无效:皮肤无变化;不良反应:涂抹后激素脸症状加重。3.2评判结果统计如表2。表26组疗效对比组别痊愈(例)好转(例)无效(例)总有效率(%)不良反应普通面膜2138515无实施例17320793无实施例652311783无对比138372575无对比227324159无对比339382377无由表2数据可以看出本发明可以明显改善激素脸,对皮肤进行修复,由实施例1和实施例6比较可以看出海藻提取液采用新鲜海带制备,对皮肤的修复效果明显好于采用其晾干物的效果;实施例1和对比1比较可以看出海藻提取液采用融冻法产氨棒杆菌,对皮肤的修复效果明显好于采用未经处理的产氨棒杆菌;实施例1和对比2的比较数据可以看出经酶处理的效果明显好于不经酶处理的;实施例1和对比3数据比较可以发现溶菌酶制备过程中仅经简单混匀效果明显不如经匀质机匀质的。当前第1页12
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