含布罗莫结构域蛋白4(BRD4)的抑制剂的制作方法

本申请要求2016年12月16日提交的序列号为62/435421的美国临时专利申请的优先权，该申请通过引用整体并入本文。关于联邦政府资助研究的声明无。序列表参考37CFR1.821-1.825要求的序列表与本申请一起以电子方式提交。序列表在此引入作为参考。
背景技术：
：布罗莫结构域是由110个氨基酸组成的高度保守基序，发现于与染色质相互作用的蛋白质中，例如组蛋白乙酰化酶、转录因子和核小体重塑复合体(Zeng和Zhou,FEBSLett.2002,513:124-8)。含布罗莫结构域蛋白4(BRD4)属于布罗莫结构域和外末端蛋白(BET)家族(BRD2、BRD3、BRD4和BRDT)，包含两个布罗莫结构域，并作为结合组蛋白中的乙酰化赖氨酸的染色质“阅读器”发挥作用(Wu等人,Mol.Cell2013,49:843-57；BelkinaandDenis,Nat.Rev.Cancer2012,12:465-77)。它是表观遗传阅读器，也是许多细胞类型中转录的关键调节因子。BRD4在调节细胞周期控制和转录延伸中起着重要作用，该转录延伸是由与P-TEFb相互作用所介导(Jang等人,Mol.Cell2005,19:523-34)。肿瘤组织中也检测到癌基因BRD4-NUT(French等人,CancerRes.2003,63:304-7)。BRD4最近被确定作为基底样乳腺癌(Shi等人,Cancercell2014,25:210-25)、NUT中线癌(NMC)、急性骨髓性白血病、多发性骨髓瘤、伯基特淋巴瘤等的癌症治疗靶点。同时，BRD4在炎症基因转录的诱导中也具有重要作用。BRD4通过与乙酰化RelA的特异性结合来与核因子κB(NF-κB)信号通路相关联，以刺激NF-κB依赖性炎症反应(Zou等人,Oncogene2014,33:2395-404)。BRD4被报道为纤维化并发症患者的潜在治疗靶点(Ding等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA2015,112:15713-8)。此外，BRD4与HIV反式激活蛋白Tat竞争对PTEFb的结合，以抑制Tat介导的HIV启动子的反式激活(Bisgrove等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA2007,104:13690-5)。BRD4抑制剂可以有效逆转潜在的艾滋病毒(Li等人,NucleicAcidsRes.2013,41:277-87)。此外，BRD4对神经元功能至关重要，并介导学习和记忆背后的转录调节。BRD4功能的丧失影响关键突触蛋白，这导致小鼠的记忆缺陷，但也降低癫痫的易感性(Korb等人,Nat.Neurosci.2015,18:1464-73)。最近，BRD4被证实为用于治疗慢性肺疾病中的与炎症耦合重塑相关的肺纤维化的体内靶标(Tian等人,AmJPhysiolLungCellMolPhysiol.2016年10月28日)。因此，靶向BRD4代表了一种针对多种不同人类疾病的新治疗方法。目前，正在研究几种不同类别的BRD4抑制剂，包括苯二氮卓类、噻吩并二氮卓类、吡啶并二氮卓类、异恶唑类、喹诺酮类、吡咯并吡咯酮类、吡咯并吡啶类、吡唑并吡啶类和吡啶并吡嗪类，据报道它们与BRD4具有中度至高度的结合亲和力(Liu等人,J.Med.Chem.2017,60(11):4533-4558；Zhang等人,Chem.Rev.2015,115:11625-68；Ghoshal等人,ExpertOpin.Ther.Pat.2016,26:505-22；GaldeanoandCiulli,FutureMed.Chem.2016)。然而，它们中的大多数是泛BET抑制剂，而不是BRD4选择性抑制剂。虽然其中一些已经发展到临床试验，例如RVX-208、I-BET762、OTX-015、TEN-010和BAY-1238097，但没有一个得到FDA的批准。2015年秋季，开始了针对患有2型糖尿病和具有低HDL的高危心血管疾病患者的RVX-208三期临床试验。RVX-208在动脉粥样硬化中的二期临床试验结果仅显示动脉粥样硬化斑块的适度改善(Nicholls等人,Cardiovasc.DrugsTher.2012,26:181-7)。BRD4抑制剂在各种临床试验中的其他适应症包括NMC、进行性淋巴瘤、急性白血病和其他血液恶性肿瘤。仍然迫切需要鉴定有效的、选择性的和更像药物的BRD4抑制剂。由于BET蛋白广泛参与转录调控，因此更具选择性的抑制剂可能有助于实现同种型和/或结构域特异性，以避免临床副作用。鉴于JQ1被报道会导致小鼠的记忆缺陷(Korb等人,Nat.Neurosci.2015,18:1464-1473)，不穿过血脑屏障(BBB)的新型有效且特异的BRD4抑制剂有望成为有益于癌症和炎症或传染病患者的治疗剂，同时显示较少的神经病学上的副作用风险。因此，仍然需要通过合成BRD4抑制剂或向有需要的对象施用BRD4抑制剂来治疗或改善肺部疾病的另外的组合物和方法。技术实现要素：气道上皮细胞中的NFκB-BRD4信号通路介导对多种病毒和病毒暴露的急性炎症反应。BRD4抑制显示出在体外完全阻断聚肌胞苷酸(poly(I:C))和/或呼吸道合胞体病毒诱导的炎症基因程序，以及在体内阻断气道炎症和中性粒细胞募集。BRD4布罗莫结构域的小分子选择性抑制剂被设计、合成，并被证明以亚微摩尔的亲和力对BRD4结构域(BD)具有特异性。本文描述的化合物可用于调节在针对病毒分子模式的急性中性粒细胞响应中起作用的细支气管NFκB-BRD4轴。某些实施方案涉及式I的化合物或其药学上可接受的盐。某些方面涉及式I的化合物，其中：L为-N＝N-或-NH(CO)NH-；R1为H或C1至C4烷基或芳基烷基；R2、R3和R5独立地为H、-OH、烷基、烷氧基、卤素、-NH2或-CF3；R4为-OH、-NH2、-CF3、-(CH2)nR6，其中n为1至4，R6为-OH或-NH2、-O(CH2)mR7，其中m为1至4，R7为-OH或-NH2；或者R4和R5任选地连接以形成具有1至3个杂原子的5至6元杂芳基。在某些方面涉及式Ia的化合物，其中L为-N＝N-且R1为H。在某些方面，R2、R3、R4和R5如上所述。在另一方面，式Ia的化合物为ZL0420。另一方面涉及式Ib的化合物，其中L为-NH(CO)NH-。在某些方面，R2、R3、R4和R5如上所述。本发明的化合物涉及式Ib的化合物，其中R1为H。在另一方面，R4为-OH；-(CH3)nR6，其中n为1至4，R6为-OH；或-O(CH3)mR7，其中m为1至4，R7为-OH。某些实施方案涉及具有以下化学式的化合物：一种命名为ZL0454的化合物或其药学上可接受的盐，其具有以下结构：某些实施方案涉及式II的化合物或其药学上可接受的盐。某些方面涉及式II的化合物，其中L2为-CH2-或-(CO)NH-；R2如上所述。R8为-OH、-OTs、烷氧基、酯、经取代或未经取代的芳基、或经取代或未经取代的3至7元杂环、或-NR18R19，其中R18和R19独立地为H、烷基；或R18和R19任选地连接以形成具有1至3个杂原子的3至6元经取代或未经取代杂环；X为C、N、或O；R9和R10独立地选自H、-OH、卤素、-CF3、烷基、羟烷基、氨基或烷基氨基，或R9和R10任选地连接以形成具有1至3个杂原子并任选地被一个或多于一个选自烷基、乙酰基和羰基的取代基取代的5至6元杂芳基或杂环。在某些方面，X取代基位于式II的2、3、4、5或6位。在另一方面，X为C。在特定方面，式II的化合物为另一实施方案涉及式II的化合物，其中L2为-CH2-和X为C，如式IIa所示。(手性中心(*)可以为R或S构型)式IIa某些方面涉及式IIa的化合物，其中R8为经取代或未经取代的吗啡啉、哌啶或苯基。在另一方面，R8为-OH或-OTs。某些实施方案涉及式II的化合物，其中R9为-CF3，R10为H，如式IIb所示。在某些方面，R8为-OH、OTs、烷氧基、酯、伯胺、仲胺、经取代或未经取代的芳基、或经取代或未经取代的3至7元杂环。某些实施方案涉及式IIc的化合物或其药学上可接受的盐。其中R2、R3和R5独立地为H、-OH、烷基、烷氧基、卤素、-NH2或-CF3；R4为-OH、-NH2、-CF3、-(CH2)nR6，其中n为1至4，R6为-OH或-NH2、-O(CH2)mR7，其中m为1至4，R7为-OH或-NH2；或R4和R5任选地连接以形成具有1至3个杂原子的5至6元杂芳基。R9和R10独立地选自H、-OH、卤素、-CF3、烷基、羟烷基、氨基或烷基氨基、或R9和R10任选地连接以形成具有1至3个杂原子并任选被一个或多于一个选自烷基、乙酰基和羰基的取代基取代的5至6元杂芳基或杂环。在某些方面，X取代基位于式IIc的2、3、4、5或6位。其他实施方案涉及式III的化合物或其药学上可接受的盐。某些方面涉及式III的化合物，其中R11、R12和R13独立地为H、-OH、卤素、烷氧基、-NH2、-CF3、-(CO)R17，其中R17为烷基、烷氧基、氨基或烷基氨基；R14为经取代或未经取代的烷基或杂烷基、或经取代或未经取代的芳基或杂芳基。某些方面涉及式III的化合物，其中R14为被以下一种或多于一种取代的C1至C4烷基：OH、烷氧基、氨基、烷基氨基或具有1至3个杂原子的未经取代的5至6元杂环。某些方面涉及式IIIa的化合物或其药学上可接受的盐。某些方面涉及式IIIa的化合物，其中R11、R12和R13独立地为H、-OH、卤素、烷氧基、-NH2、-CF3、-(CO)R17，其中R17为烷基、烷氧基、氨基或烷基氨基；R15为H、-OH、烷基或NH2；p为0至4；R16为H、-OH、烷基、烷氧基；或-NR18R19，其中R18和R19独立地为H、烷基；或R18和R19任选地连接以形成具有1至3个杂原子的3至6元经取代或未经取代的杂环。在某些方面，R15为-OH。在另一方面，p为0或1。在又一方面，R16为-NR18R19。在某些方面，式IIIa的R11、R12和R13中的至少一个为甲氧基。某些方面涉及式IIIb的化合物或其药学上可接受的盐。在该方面，参照式IIIa，R11和R13为甲氧基，R12为H，R15为OH。式IIIb某些方面涉及一种或多于一种具有以下结构的化合物：某些实施方案涉及式IVa的化合物或其药学上可接受的盐。某些方面涉及式IVa，其中A为具有1至3个杂原子的5至6元单环或双环杂芳基，且A为未经取代的或被一个或多于一个取代基R20取代，且R20为-OH、卤素、CF3、NH2、烷基、杂烷基、烷氧基或乙酰基。某些方面涉及具有以下结构的式Iva的化合物：另一实施方案涉及式IVb的化合物或其药学上可接受的盐。某些方面涉及式IVb的化合物，其中R21和R23独立地选自-OH、卤素、CF3、NH2、烷基、杂烷基、烷氧基和乙酰基；R22为H、-OH、卤素、CF3、NH2、烷基、杂烷基、烷氧基或乙酰基。某些方面涉及式IVb的化合物，其中该化合物为在本申请全文讨论本发明的其他实施方案。所讨论关于本发明的一方面的任何实施方案也可以应用于本发明的其他方面，反之亦然。这里描述的每个实施例应理解为适用于本发明所有方面的本发明的实施例。在整个申请中，术语“约”用于表示数值包括设备、用于确定该值的方法的误差的固有变化，或者研究对象之间存在的变化。术语“包括”、“具有”和“包含”是开放式连接动词。这些动词中的一个或多于一个的任何形式或变体也是开放式的。例如，任何“包含”、“具有”或“包括”一个或多于一个步骤的方法不限于仅拥有那些一个或多于一个步骤，还涵盖其他未列出的步骤。如本文所用，术语“IC50”指的是达到所获得的最大响应的50％的抑制剂量。术语半最大有效浓度(EC50)是指在某一特定暴露时间后，呈现基线和最大值之间一半响应的药物浓度。术语“抑制”、“减少”、或“防止”或这些术语的任何变体当在权利要求和/或说明书中使用时，包括为了达到预期结果的任何可测量的减少或完全的抑制。术语“或”在权利要求中的使用用于表示“和/或”，除非明确地说明是仅指选择，或选择是相互排斥的，尽管公开内容支持仅指选择和“和/或”的定义。如在本文中使用的，术语“患者”或“对象”指的是活的哺乳动物生物体，例如人类、猴子、牛、绵羊、山羊、狗、猫、小鼠、大鼠、豚鼠、或其物种。在一些实施方案中，患者或对象为灵长目动物。人类对象的非限制性实例为成人、少年、婴儿和胎儿。当在权利要求和/或说明书中与术语“包含”一起使用时，要素前面不使用数量词可以表示“一个”，但是其也符合“一个或更多个”、“至少一个”和“一个或多于一个”的意思。附图说明以下附图构成本说明书的一部分，并且包括在内以进一步说明本发明的某些方面。通过参考这些附图中的一个或多于一个并结合本文给出的说明书实施例的详细描述，可以更好地理解本发明。图1.(a)代表性BRD4抑制剂ZL0420和ZL0454的化学结构。(b)以带状表示的ZL0420与BRD4BD1的结合模式。突出显示的残基是Asn140(N140)、Tyr97(Y97)、Pro82(P82)、Trp81(W81)和Lys91(K91)。(c)以带状表示的ZL0454与BRD4BD1的结合模式。(d)以曲面形式表示的对接至BRD4BD1中的ZL0420和ZL0454的叠加。突出显示了WPF(Trp81-Pro82-Phe83)壳。Asn，天冬酰胺；Tyr，酪氨酸；Pro，脯氨酸；Trp，色氨酸；Lys，赖氨酸。图2.BRD4抑制剂的剂量响应曲线。在基于细胞的测定中显示了JQ1、MS436、RVX208、ZL0420和ZL0454抑制剂对IL-6基因表达的影响。数据显示为未处理细胞的抑制百分比。图3.BRD4抑制剂在急性DSS结肠炎的鼠模型中的结肠炎症开始期间抑制IL-6炎症反应。在C57Bl6小鼠中通过补充具有3％DSS的饮用水诱导结肠炎。每天通过腹膜内注射施用BRD4抑制剂ZL0420(I420)和ZL0454(I454)。结肠炎开始后第7天对动物实施安乐死，并从结肠黏膜中分离出RNA。使用RT-PCR分析IL-6基因的表达，并报告为相对于鼠管家基因、b-肌动蛋白mRNA的DDCt倍数差异，使用单向方差分析和图基事后检验多重比较来计算统计显著性，每组n＝4只小鼠，*＝p<0.05。图4.BRD4抑制剂减轻急性DSS结肠炎小鼠模型的结肠炎症。H&E分析，在用ZL0420(I420)或ZL0454(I454)处理的动物组中，当DSS处理的动物接受用BRD4抑制剂处理时，观察到结肠结构的部分正常化和淋巴细胞浸润的减少。图5.ZL主要化合物阻断聚肌胞苷酸诱导的气道炎症。A.支气管肺泡灌洗液中的中性粒细胞计数(BALF)。B.IL-6在BALF中的表达。右图为对照组、聚肌胞苷酸组或经ZL0420或ZL0454处理的聚肌胞苷酸的代表性H&E染色。注意到在ZL处理下中性粒细胞和IL-6显著减少。图6.雾化负载沙丁胺醇的聚合物纳米颗粒后，对乙酰胆碱诱导的豚鼠支气管痉挛的支气管保护作用(Rytting等人.ExpertOpiniononDrugDelivery,5:629-39,2008)。图7.从纳米颗粒释放药物。图8.纳米颗粒对BRD4通路的影响。图9.ZL0420纳米颗粒的体内功效。图10.负载ZL0420和负载ZL0420的纳米颗粒对聚肌胞苷酸刺激的炎症基因激活的影响。具体实施方式慢性阻塞性肺部疾病(OLD)包括慢性阻塞性肺疾病(COPD)、哮喘、囊性纤维化(CF)和支气管扩张症，且是以急性发作性代偿失调和肺功能不可阻挡地下降为特征的非常普遍的疾病。两种最流行的疾病是COPD和哮喘，COPD在美国影响着1350万人，地区年龄标准化死亡率高达50/100000，哮喘影响着2570万人，对儿科人群的影响不成比例。越来越多的证据表明TGFβ诱导的重塑在OLD的发病机制和严重程度中起着重要作用(Holgate等人,Proc.Am.Thorac.Soc.2004,1:93-8；Sagara等人,J.AllergyClin.Immunol.2002,110:249-54)。发明人进行的研究表明BRD4是TGFβ诱导的重塑的关键表观遗传调节物。如下所述，发明人发现抑制BRD4有助于恢复屏障功能、逆转先天免疫和减少气道重塑。某些实施方案涉及在支气管重塑中选择性靶向BRD4并抑制BRD4的化合物以及哮喘和慢性阻塞性肺部疾病中的先天免疫应答缺陷。使用计算机辅助的合理结构/基于片段的药物设计，已经设计和创造了几个新的BRD4抑制剂系列。其中一些化合物已经在体外(原代气道上皮细胞(hSAEC)的细胞活性和靶特异性)和体内(药代动力学、分布和功效)进行了测试。许多先进的先导分子已被确定为临床前和临床试验的优秀候选药物。这些分子可被开发为各种疾病的预防和治疗剂，包括但不限于炎性疾病(例如慢性阻塞性肺部疾病、溃疡性结肠炎和肝纤维化)、通过调节增生性瘢痕形成的烧伤管理、癌症(例如NMC、乳腺癌、结肠癌和淋巴瘤)、动脉粥样硬化、糖尿病、肥胖症、中枢神经系统障碍和传染病(例如HIV)。本文描述的研究评估了介导针对病毒模式的急性炎症反应的气道上皮细胞中的NFκB-BRD4信号通路。培养的细支气管细胞中RelA缺失阻断了病毒诱导的炎症和抗病毒基因的表达。用三苯氧胺诱导的Cre重组酶去除细支气管细胞中的RelA，该Cre重组酶由Sgpc1a/CC10启动子表达且与含有纯合RelAfl/fl的小鼠杂交。细支气管RelA的缺失阻止了响应病毒分子模式[聚肌胞苷酸]或暴露于活病毒(RSV)后的炎症细胞因子和IFN的支气管肺泡细胞因子表达。设计、合成并证明了BRD4布罗莫结构域(BD)的小分子选择性抑制剂特异性地对BRD4布罗莫结构域具有亚微摩尔亲和力。在一组实验中，BRD4抑制在体外完全阻断聚肌胞苷酸诱导的炎症基因程序，在体内阻断气道炎症和中性粒细胞募集。在第二组实验中，BRD4抑制在体内阻断RSV诱导的炎症基因程序、气道炎症和中性粒细胞募集。总之，这些数据表明细支气管NFκB-BRD4轴在病毒感染的急性中性粒细胞响应中起作用。布罗莫结构域蛋白BDR4是一种染色质重塑酶，其被认为是免疫应答最重要的调节因子之一(Filippakopoulos等人,Nature,2010,468(7327):1067-73；Xu和Vakoc,TrendsCellBiol,2014,24(11):615-16；Brown等人,MolCell,2014,56(2):219-31；Kanno等人,NatStructMolBiol,2014,21(12):1047-57)。包括BRD2、BRD3、BRD4和BRDT在内的布罗莫结构域和外末端结构域(BET)家族蛋白(Wu和Chiang,JBiolChem,2007,282(18):13141-45)含有两个布罗莫结构域(BD)(Filippakopoulos等人,Nature,2010,468(7327):1067-1073)。在广泛表达的BET家族蛋白中，BRD4是独一无二的，因为它通过其C末端尾部与β-TEFb相互作用(Bisgrove等人,PNASUSA,2007,104(34):13690-95)。此外，BRD4是一种哺乳动物布罗莫结构域蛋白，其在活细胞中优先结合乙酰化组蛋白H4(H4-KAc)(Brasier等人,JVirol,2011,85(22):11752-69；Jang等人,MolCell,2005,19(4):523-34；Yang等人,Nature,2001,414(6861):317-22)。通过H4-KAc结合，BRD4是转录延伸的关键介质，其功能是将活化的CDK9募集至启动子(Jang等人,MolCell,2005,19(4):523-34；Yang等人,Nature,2001,414(6861):317-22)。BRD4的调谐子包括式I的化合物或其药学上可接受的盐。本发明的某些方面涉及式I的化合物，其中L为-N＝N-或-NH(CO)NH-；R1为H或C1至C4烷基或芳基烷基；R2、R3和R5独立地为H、-OH、烷基、烷氧基、卤素、-NH2或-CF3；R4为-OH、-NH2、-CF3、-(CH2)nR6，其中n为1至4，R6为-OH或-NH2、-O(CH2)mR7，其中m为1至4，R7为-OH或-NH2；或者R4和R5任选地连接以形成具有1至3个杂原子的5至6元杂芳基。某些方面涉及式Ia的化合物，其中关于式I，L为-N＝N-并且R1为H。某些方面涉及具有ZL0420结构的化合物。另一方面涉及式Ib的化合物，其中对于式I，L为-NH(CO)NH-。在某些方面，R1为H。在另一方面，R4为-OH、-(CH3)nR6，其中n为1至4，R6为-OH或-O(CH3)mR7，其中m为1至4，R7为-OH。本发明的某些方面涉及具有以下结构的化合物：某些实施方案涉及化合物ZL0454或其药学上可接受的盐。某些实施方案涉及式II的化合物或其药学上可接受的盐。某些方面涉及式II化合物，其中L2是-CH2-或-(CO)NH-；R2如上所述；R8为-OH、-OTs、烷氧基、酯、经取代或未经取代的芳基、或经取代或未经取代的3至7元杂环、或-NR18R19，其中R18和R19独立地为H、烷基；或R18和R19任选地连接以形成具有1至3个杂原子的3至6元经取代或未经取代杂环；X为C、或N；R9和R10独立地选自H、-OH、卤素、-CF3、烷基、羟烷基、氨基或烷基氨基，或R9和R10任选地连接以形成具有1至3个杂原子并任选被一个或多于一个选自烷基、乙酰基和羰基的取代基取代的5至6元杂芳基或杂环。在某些方面，X取代基位于式II的2、3、4、5或6位。在另一方面，X为C。在特定方面，式II的化合物为另一实施方案涉及式II的化合物，其中L2为-CH2-，X为C，如式IIa所示。(手性中心(*)可以为R或S构型)式IIa某些方面涉及式IIa的化合物，其中R8为经取代或未经取代的：吗啡啉、哌啶或苯基。在另一方面，R8为-OH或-OTs。某些实施方案涉及式II的化合物，其中R9为-CF3，R10为H，如式IIb所示。在某些方面，R8为-OH、OTs、烷氧基、酯、伯胺、仲胺、经取代或未经取代的芳基、或经取代或未经取代的3至7元杂环。某些实施方案涉及式III的化合物或其药学上可接受的盐。某些实施方案涉及式IIc的化合物或其药学上可接受的盐。R2、R3和R5独立地为H、-OH、烷基、烷氧基、卤素、-NH2或-CF3；R4为-OH、-NH2、-CF3、-(CH2)nR6，其中n为1至4，R6为-OH或-NH2、-O(CH2)mR7，其中m为1至4，R7为-OH或-NH2；或R4和R5任选地连接以形成具有1至3个杂原子的5至6元杂芳基。R9和R10独立地选自H、-OH、卤素、-CF3、烷基、羟烷基、氨基或烷基氨基、或R9和R10任选地连接以形成具有1至3个杂原子并任选被一个或多于一个选自烷基、乙酰基和羰基的取代基取代的5至6元杂芳基或杂环。在某些方面，X取代基位于式IIc的2、3、4、5或6位。某些实施方案涉及式III的化合物或其药学上可接受的盐。某些方面涉及式III的化合物，其中R11、R12和R13独立地为H、-OH、卤素、烷氧基、-NH2、-CF3、-(CO)R17，其中R17为烷基、烷氧基、氨基或烷基氨基；R14为经取代或未经取代的烷基或杂烷基、或经取代或未经取代的芳基或杂芳基。某些方面涉及式III的化合物，其中R14为被以下一种或多于一种取代的C1至C4烷基：OH、烷氧基、氨基、烷基氨基或具有1至3个杂原子的未经取代的5至6元杂环。某些方面涉及式IIIa的化合物或其药学上可接受的盐。某些方面涉及式IIIa的化合物，其中R11、R12和R13独立地为H、-OH、卤素、烷氧基、-NH2、-CF3、-(CO)R17，其中R17为烷基、烷氧基、氨基或烷基氨基；R15为H、-OH、烷基或NH2；p为0至4；R16为H、-OH、烷基、烷氧基或-NR18R19，其中R18和R19独立地为H、烷基；或R18和R19任选地连接以形成具有1至3个杂原子的3至6元经取代或未经取代的杂环。在某些方面，R15为-OH。在另一方面，p为0或1。在又一方面，R16为-NR18R19。在某些方面，式IIIa的R11、R12和R13中的至少一个为甲氧基。某些方面涉及式IIIb的化合物或其药学上可接受的盐。在该方面，参照式IIIa，R11和R13为甲氧基，R12为H，R15为OH。式IIIb的某些方面涉及一种或多于一种具有以下结构的化合物：某些实施方案涉及式IVa的化合物或其药学上可接受的盐。某些方面涉及式IVa，其中A为具有1至3个杂原子的5至6元的单环或双环杂芳基，且A为未经取代的或被一个或多于一个取代基R20取代，且R20为-OH、卤素、CF3、NH2、烷基、杂烷基、烷氧基或乙酰基。某些方面涉及具有以下结构的式IVa化合物：另一实施方案涉及式IVb的化合物或其药学上可接受的盐。某些方面涉及式IVb的化合物，其中R21和R23独立地选自-OH、卤素、CF3、NH2、烷基、杂烷基、烷氧基和乙酰基；R22为H、-OH、卤素、CF3、NH2、烷基、杂烷基、烷氧基或乙酰基。某些方面涉及式IVb的化合物，其中该化合物为表1：已合成和经药理上筛选的代表性化合物列表。BRD4抑制剂在hSAEC中对诱导纤维化基因(包括CIG5和IL-6)的抑制作用。表2：所选化合物与BRD4BD1、BRD4BD2、BRD2BD1和BRD2BD2的结合亲和力。某些实施方案涉及表3的一种或多于一种化合物。表3：所选分子的结构。I.化学定义与这些化合物相关的各种化学定义如下。如本文所用的，“主要的一种对映异构体”是指该化合物含有至少85％的一种对映异构体，或更优选至少90％的一种对映异构体，或甚至更优选至少95％的一种对映异构体，或最优选至少99％的一种对映异构体。类似地，短语“基本上不含其它光学异构体”是指组合物含有至多5％的另一种对映异构体或非对映异构体，更优选至多2％的另一种对映异构体或非对映异构体，最优选至多1％的另一种对映异构体或非对映异构体。如本文所用的，术语“水溶性的”是指该化合物在水中至少溶解到0.010摩尔/升的程度，或者根据先前文献被分类为可溶的。如本文所用的，术语“硝基”指-NO2；术语“卤代”或“卤素”指-F、-Cl、-Br或-I；术语“巯基”指-SH；术语“氰基”指-CN；术语“叠氮基”指-N3；术语“甲硅烷基”指-SiH3；术语“-OTs”指O-对甲苯磺酰基；术语“羟基”指-OH。除非另有说明，否则术语“烷基”本身或作为另一取代基的一部分，是指直链(即无支链)或带支链的碳链，其可以是完全饱和的、单不饱和的或多不饱和的。不饱和烷基是具有一个或多于一个双键或三键的烷基。饱和烷基包括具有一个或多于一个碳碳双键(烯基)的烷基和具有一个或多于一个碳碳三键(炔基)的烷基。基团-CH3(甲基)、-CH2CH3(乙基)、-CH2CH2CH3(正丙基)、-CH(CH3)2(异丙基)、-CH2CH2CH2CH3(正丁基)、-CH(CH3)CH2CH3(仲丁基)、-CH2CH(CH3)2(异丁基)、-C(CH3)3(叔丁基)、-CH2C(CH3)3(新戊基)均为烷基的非限制性实例。除非另有说明，否则术语“杂烷基”本身或与另一术语组合时是指具有至少一个碳原子和至少一个选自O、N、S、P和Si的杂原子的直链或支链。在某些实施方案中，杂原子选自O和N。杂原子可以位于杂烷基的任何内部位置或位于烷基与分子其余部分连接的位置。最多两个杂原子可以是连续的。以下基团都是杂烷基的非限制性实例：三氟甲基、-CH2F、-CH2Cl、-CH2Br、-CH2OH、-CH2OCH3、-CH2OCH2CF3、-CH2OC(O)CH3、-CH2NH2、-CH2NHCH3、-CH2N(CH3)2、-CH2CH2Cl、-CH2CH2OH、CH2CH2OC(O)CH3、-CH2CH2NHCO2C(CH3)3、和-CH2Si(CH3)3.术语“环烷基”和“杂环基”单独或与其它术语结合时分别指“烷基”和“杂烷基”的环状形式。此外，对于杂环基，杂原子可以占据杂环与分子其余部分相连的位置。术语“芳基”是指多不饱和芳香族烃取代基。芳基可以是单环或多环的(例如，2至3个稠合在一起或共价连接的环)。术语“杂芳基”是指含有1至4个选自N、O和S的杂原子的芳基。杂芳基可以通过碳或杂原子连接到分子的其余部分。芳基和杂芳基的非限制性实例包括苯基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、四氢吡喃基、四氢呋喃基、吡咯烷基、二噻酰基、1-萘基、2-萘基、4-联苯基、1-吡咯基、2-吡咯基、3-吡咯基、3-吡唑基、2-咪唑基、4-咪唑基、吡嗪基、2-噁唑基、4-噁唑基、2-苯基-4-噁唑基、5-噁唑基、3-异噁唑基、4-异噁唑基、5-异噁唑基、2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基、2-呋喃基、3-呋喃基、2-噻吩基、3-噻吩基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-苯并噻唑基、嘌呤基、2-苯并咪唑基、5-吲哚基、1-异喹啉基、5-异喹啉基、2-喹喔啉基、5-喹喔啉基、3-喹啉基和6-喹啉基。上述每个芳基和杂芳基环体系的取代基选自下述可接受的取代基。单独或以任何组合使用的术语“芳基烷基”是指芳基，其可以是如前所定义的未经取代的或经取代的，并且通过烷基与亲本分子部分连接。本文将各种基团描述为经取代或未经取代的(即任选取代的)。任选取代的基团可包括一个或多于一个独立地选自以下的取代基：卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氧代、氨基甲酰基、经取代或未经取代的烷基、经取代或未经取代的杂烷基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、经取代或未经取代的环烷基、经取代或未经取代的杂环基、经取代或未经取代的芳基、和经取代或未经取代的杂芳基。在某些方面，任选的取代基还可以被一个或多于一个独立地选自以下的取代基取代：卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、未经取代的烷基、未经取代的杂烷基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、未经取代的环烷基、未经取代的杂环基、未经取代的芳基或未经取代的杂芳基。任选的取代基的实例包括但不限于：-OH、氧代(＝O)、-Cl、-F、Br、C1至C4烷基、苯基、苄基、-NH2、-NH(C1至C4烷基)、-N(C1至C4烷基)2、-NO2、-S(C1至C4烷基)、-SO2(C1至C4烷基)、-CO2(C1至C4烷基)和-O(C1至C4烷基)。如本文所用的，术语“酯”定义为通式EOOC；其中当包括式-COOR的基团时，E是烷基或芳基。术语“烷氧基”指具有结构-OR’的基团，其中R'是任选取代的烷基或环烷基。术语“杂烷氧基”类似地指具有结构-OR的基团，其中R是杂烷基或杂环基。术语“氨基”是指具有结构-NR'R"的基团，其中R’和R”独立地是氢或任选取代的烷基、杂烷基、环烷基或杂环基。术语“氨基”包括伯胺、仲胺和叔胺。如本文所用的，术语“氧代”是指与碳原子双键连接的氧。如本文所用的，术语“羟烷基”是指含有一至十个碳原子的羟基化直链或带支链基团，例如但不限于2-丙醇、3-丙醇等。如本文所用的，术语“烷基氨基”包括单烷基氨基和二烷基氨基，其中烷基含有1至6个碳原子，该烷基可以是直链的或带支链的。典型的实例是是甲氨基、甲基乙氨基、二乙氨基、丙氨基、二异丙氨基和己氨基。如本文所用的，术语“烷基磺酰基”是指具有式-S(O2)-R’的部分，其中R’是烷基。R'可具有特定数目的碳(例如“C1至C4烷基磺酰基”)。如本文所使用的术语“药学上可接受的盐”指对活的生物体基本上无毒的本发明的化合物的盐。一般的药学上可接受的盐包括根据本发明化合物上存在的取代基通过本发明的化合物与无机酸或有机酸、或有机碱反应而制备的那些盐。可以用于制备药学上可接受的盐的无机酸的非限制性实例包括：盐酸、磷酸、硫酸、氢溴酸、氢碘酸、亚磷酸等。可以用于制备药学上可接受的盐的有机酸的实例包括：脂肪族单羧酸或二羧酸例如草酸、碳酸、柠檬酸、琥珀酸、苯基杂原子取代的烷酸、脂肪族和芳香族硫酸等。因此，由无机酸或有机酸所制备的药学上可接受的盐包括盐酸盐、氢溴酸盐、硝酸盐、硫酸盐、焦硫酸盐、磷酸盐、单氢磷酸盐、二氢磷酸盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、氢碘酸盐、氢氟酸盐、乙酸盐、丙酸盐、甲酸盐、草酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、对甲苯磺酸盐、甲磺酸盐、马来酸盐等。还可以通过本发明的试剂与有机碱例如甲胺、乙胺、乙醇胺、赖氨酸、鸟氨酸等反应形成合适的药学上可接受的盐。药学上可接受的盐包括一些本发明化合物上存在的羧酸盐或磺酸盐基团与无机阳离子如钠、钾、铵或钙或有机阳离子例如异丙铵、三甲铵、四甲铵和咪唑鎓之间形成的盐。应该认识到形成本发明的任意盐一部分的特定阴离子或阳离子不是至关重要的，只要盐总的来说是药学上可接受的即可。药学上可接受的盐和它们的制备方法和用途的其他实施例在HandbookofPharmaceuticalSalts：Properties,SelectionandUse(2002)中提供，其通过引用并入本文。第一化合物的“异构体”是单独的化合物，其中每个分子含有与第一种化合物相同的组成原子，但这些原子在三维空间的构型不同。除非另有说明，否则本文描述的化合物也包括它们的异构体。“立体异构体”是这样的异构体：其中相同的原子与相同的其他原子结合，但这些原子在三维空间的构型不同。“对映异构体”是彼此呈镜像例如左手和右手的立体异构体。“非对映异构体”是不为对映异构体的立体异构体。预期对于本发明的任何方法或组合物，可以实施本说明书中所讨论的任何实施方案，反之亦然。此外，本发明的组合物可以用于实现本发明的方法。II.抗炎剂在本发明的某些方面，抗炎剂可以与本文所述的组合物组合使用。抗炎剂可以是甾体或非甾体抗炎剂。用于本文的甾体抗炎剂包括但不限于氟替卡松、倍氯米松、其任何药学上可接受的衍生物、及其任何组合。如本文所用的，药学上可接受的衍生物包括其任何盐、酯、烯醇醚、烯醇酯、酸、碱、溶剂化物或水合物。这些衍生物可以由本领域技术人员使用用于这种衍生化的已知方法来制备。氟替卡松-丙酸氟替卡松是一种合成的皮质类固醇。丙酸氟替卡松是白色至灰白色粉末，几乎不溶于水，易溶于二甲基亚砜和二甲基甲酰胺，微溶于甲醇和95％乙醇。在一个实施方案中，本发明的制剂可包含甾体抗炎剂(例如丙酸氟替卡松)。倍氯米松-在某些方面，甾体抗炎剂可以是二丙酸倍氯米松或其一水合物。该化合物可以是白色粉末，极微溶于水(《医师案头参考》)，极易溶于氯仿，易溶于丙酮和酒精。提供根据本发明的甾体抗炎剂可以通过例如减弱任何不需要的炎症来加强本发明的组合物和方法。用于本文的其他甾体抗炎剂的实例包括但不限于倍他米松、氟羟氢化泼尼松、地塞米松、泼尼松、莫米松、氟尼缩松和布地奈德。根据本发明的另一个方面，非甾体抗炎剂可以包括阿司匹林、水杨酸钠、对乙酰氨基酚、非那西丁、布洛芬、酮洛芬、吲哚美辛、氟比洛芬、双氯芬酸、萘普生、吡罗昔康、特布菲隆、依托度酸、萘丁美酮、替尼达普、醇芬酸、安替比林、阿米莫匹林、二吡喃酮、氨吡喃酮、苯布塔酮、氯菲酮、氧苯布塔酮、前沙区、阿扎丙宗、苄达明、布可隆、cinchopen、氯尼辛、ditrazol、依匹唑、非诺洛芬、floctafeninl、氟芬那酸、glaphenine、吲哚布洛芬、甲氯芬那酸、甲芬那酸、尼氟酸、salidifamide、舒林酸、舒洛芬、托麦汀、萘丁美酮、噻拉米特、普罗喹宗、丁苯羟酸、氟鲁咪唑、替诺立定、timegadine、氨苯砜、氨苯砜、扑炎痛、磷柳酸、fenclofenac、依托度酸、芬替酸、噻氯咪索、卡洛芬、fenbufen、奥沙普秦、噻洛芬酸、吡洛芬、feprazone、吡罗昔康、舒多昔康、伊索昔康、塞来昔布、和/或替诺昔康。III.抗病毒剂在本发明的某些方面，抗病毒剂可以与本文所述的组合物组合使用。抗病毒剂包括但不限于核苷类似物、反义RNA或单克隆抗体(参见例如Hruska等人,1980,AntimicrobialAgentsandChemotherapy17:770-75；Leaman等人,2002,Virology(NewYorkNY)292:70-77；Lai等人,2008,MolTher.16:1120-28)。本文的抗病毒剂包括但不限于合成的核糖核苷(利巴韦林)、反义寡核苷酸、干扰核酸、中和抗体、干扰素或其任何组合。如本文所用的，药学上可接受的衍生物包括其任何盐、酯、烯醇醚、烯醇酯、酸、碱、溶剂化物或水合物。核苷酸也可以包封在脂质体中以更有效地进行细胞内转移。这些化合物可以通过气溶胶或雾化法来进行全身施用。可以由本领域技术人员使用用于这种衍生化的已知方法来制备这些衍生物。利巴韦林是一种核苷类似物，对用于严重RSV和出血热感染的RNA病毒具有广谱抑制活性。已经使用靶向RSV基因组RNA的反义寡核苷酸和修饰的核酸例如吗啉代寡核苷酸来减少病毒复制。针对RSV结构蛋白产生的人源化单克隆抗体(帕利珠单抗，Synagis)已被用于预防和治疗处于RSV疾病高风险的患者。干扰素：干扰素是限制病毒复制的免疫调节激素。这些可以单独使用或与利巴韦林联合使用以增强抗病毒免疫力。IV.制剂和施用本文公开的药物组合物可以例如经由对象的呼吸系统施用。在某些方面，通过本领域已知的方法和装置使组合物存留在肺中。本文所述的治疗组合物可以在适当地与表面活性剂例如羟丙基纤维素混合的水中制备。在甘油、液态聚乙二醇和其混合物中以及在油中也可以制备分散剂。在储存和使用的常规条件下，这些制剂含有防腐剂以防止微生物的生长。在某些实施方案中，本文描述的化合物可以配制为纳米颗粒(NP)制剂以用于缓释，其由可生物降解和生物相容的聚合物制成。这种治疗制剂提供了减少剂量、降低毒性而不改变其治疗效果、保护药物不失活(由于蛋白质结合或药物代谢)、并提供长期稳定持续释放，并且对靶组织具有更高的特异性(通过分子的官能化实现)。适于吸入的药物形式包括无菌水溶液或分散剂和用于临时制备无菌可吸入溶液或分散剂的无菌粉末。在所有情况下，该形式通常是无菌的并且能够直接吸入或通过一些中间过程或装置吸入。其必须是在制造和储存的条件下稳定的，并且必须在防微生物，例如细菌和真菌的污染作用的条件下保存。载剂可以是含有以下的溶剂或分散介质：例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液态聚乙二醇等)、其合适的混合物和植物油。微生物作用的预防可以通过各种抗细菌剂和抗真菌剂，例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫汞撒等来实现。剂量的某些变化必然会发生，这取决于被治疗对象的状况和涉及暴露或潜在暴露的特定环境。负责施用的人将在任何情况下确定对于个体对象合适的剂量。此外，对于人类施用，制剂应满足FDA生物制品标准办公室或其他类似组织所要求的无菌、致热原性、一般安全性和纯度标准。无菌组合物通过以下方法来制备：在适当溶剂中将活性组分以所需量与以上列举的各种其他成分合并，如果需要的话然后进行例如过滤杀菌。通常，分散剂通过将各种无菌活性成分并入到无菌载体中来制备，该无菌载体含有基本的分散介质和来自以上列举的所需的其他成分。在用于制备无菌组合物的无菌散剂的情况下，一些制备方法为真空干燥和冷冻干燥技术，其产生一种或多于一种组分和/或活性成分和任何额外的期望成分的散剂，该额外的期望成分来自预先无菌过滤的溶液。在某些实施方案中，化合物可以与聚合物基质的表面结合、与聚合物基质直接或间接缀合、包封在聚合物基质内、由聚合物基质包围、溶解于聚合物基质中或分散在整个聚合物基质中。短语“负载到”、“负载至”、“合并到”或“包含在”中可互换使用以概括地描述化合物与颗粒的结合，而不赋予化合物在何处或如何与颗粒结合的任何进一步含义。存在于颗粒中的化合物的量(包封效率)可以为至少约10重量/重量％至高达约98重量/重量％。在一些实施方案中，包封效率可为约10重量/重量％、约15重量/重量％、约20重量/重量％、约25重量/重量％、约30重量/重量％、约35重量/重量％、约40重量/重量％、约45重量/重量％、约50重量/重量％、约55重量/重量％、约60重量/重量％、约65重量/重量％、约70重量/重量％、约75重量/重量％、约80重量/重量％、约85重量/重量％、约90重量/重量％、约95重量/重量％或约98重量/重量％。A.纳米颗粒组合物(例如经包封的化合物)包含纳米颗粒，该纳米颗粒还包含聚合物和至少一种化合物。如本文所用的，术语“颗粒”、“纳米颗粒”、“可生物降解的聚合物纳米颗粒”或纳米颗粒的缩写“NP”可指直径在10纳米(nm)、100nm、200nm、300nm、400nm、500nm至600nm、700nm、800nm、900nm、1000nm之间的颗粒，包括其间的所有值和范围，并且这些术语可以互换使用。在某些方面，NP的直径可以为50nm至150nm。本文所述的化合物可以掺入合适的颗粒(或纳米颗粒)中，以帮助将药物递送至靶细胞、增加组合物的稳定性、使组合物的潜在毒性最小化、和/或其组合。多种纳米颗粒适合于递送化合物。颗粒的大小可以影响颗粒快速穿透黏膜屏障的能力。例如，纳米颗粒可具有小粒度，以通过黏膜屏障成功递送。在一些实施方案中，纳米颗粒的直径可以为至少10nm、至少20nm、至少30nm、至少40nm、至少50、至少60nm、至少70nm、至少80nm、至少90nm、或至少100nm。在其他实施方案中，颗粒的直径可以大于约100nm。例如，纳米颗粒的直径可以为至少110nm、至少120nm、至少130nm、至少140nm、至少150nm、至少160nm、至少170nm、至少180nm、至少190nm、或至少200nm。在一个示例性实施方案中，纳米颗粒的直径可小于220nm。在其他实施方案中，颗粒的直径可以为约100nm或小于约100nm。在一些实施方案中，颗粒可具有正表面电荷或负表面电荷。例如，在纳米颗粒具有负表面电荷的某些实施方案中，表面电荷可以是至少-40毫伏(mV)、至少-35mV、至少-30mV、至少-25mV、至少-20mV、不大于-10mV、不大于-15mV、不大于-20mV、不大于-25mV、或其任何组合。在一个实例中，纳米颗粒可具有至少-30mV至不大于-10mV的负表面电荷。在其他实例中，纳米颗粒具有正表面电荷，该表面电荷可以是至少2毫伏(mV)、至少15mV、至少20mV、至少25mV、或至少30mV、不大于40mV、不大于35mV、不大于30mV、不大于25mV、或其任何组合。在一些实施方案中，颗粒的渗量可小于约1000mOsm/kg。在其他实施方案中，颗粒的渗量可小于约500mOsm/kg。例如，颗粒的渗量可为约50mOsm/kg、约100mOsm/kg、约150mOsm/kg、约200mOsm/kg、约250mOsm/kg、约300mOsm/kg、约350mOsm/kg、约400mOsm/kg、约410mOsm/kg、约420mOsm/kg、约430mOsm/kg、约440mOsm/kg、约450mOsm/kg、约460mOsm/kg、约470mOsm/kg、约480mOsm/kg、或约490mOsm/kg。在另一个实施方案中，颗粒的渗量可以为至少500mOsm/kg至不大于1000mOsm/kg。例如，颗粒的的渗量可为约500mOsm/kg、约600mOsm/kg、约700mOsm/kg、约800mOsm/kg、约900mOsm/kg、或约1000mOsm/kg。B.可生物降解的聚合物每个颗粒可包括一种或多于一种可生物降解的聚合物。包含可生物降解的聚合物的这种颗粒的实例和制备该颗粒的方法公开于专利申请公开第US2011/0236437号中，其通过引用整体并入本文。简而言之，本文所用的“聚合物”具有本领域所用的普通含义，即包括通过共价键连接的一个或多于一个重复单元(单体)的分子结构。重复单元可以全部相同，或者在一些情况下，聚合物中可存在多于一种类型的重复单元。聚合物可以是天然的(例如，生物来源的)或非天然的(例如，合成来源的)。聚合物可以是均聚物或包括两种或多于两种单体的共聚物。共聚物可以是随机的、嵌段的、或可以包括随机和嵌段序列的组合。如果聚合物中存在多于一种类型的重复单元，则称该聚合物是“共聚物”。应该理解的是，在使用聚合物的任何方面，聚合物可以是共聚物。可生物降解的聚合物能够在生理环境中例如在体内化学和/或生物降解。例如，聚合物可以是在暴露于水(例如，在对象体内)时自发水解的聚合物，或在暴露于热(例如，在42℃的温度下)时降解的聚合物。取决于所用的聚合物或共聚物，聚合物的降解可以以不同的速率发生。例如，取决于聚合物，聚合物的半衰期(50％的聚合物降解为单体和/或其它非聚合部分的时间)可以是数天或数周。例如通过酶活性或细胞机构，聚合物可以生物降解。在一些情况下，聚合物可以分解成单体和/或其他非聚合部分，细胞可以重复使用或处理该单体和/或其他非聚合部分，且其对细胞没有显著的毒性作用(例如，聚丙交酯可以水解形成乳酸，聚乙交酯可以水解形成乙醇酸等)。在一些实施方案中，可生物降解的聚合物可以是天然聚合物。在其他实施方案中，可生物降解的聚合物可以是合成聚合物。可用于制备可生物降解颗粒的天然聚合物和合成聚合物的非限制性实例可包括碳水化合物，例如藻酸盐、纤维素、聚羟基链烷酸酯、聚酰胺、聚磷腈、富马酸聚丙烯酯、聚醚、聚缩醛、聚氰基丙烯酸酯、可生物降解的聚氨酯、聚碳酸酯、聚酐、聚羟基酸、聚(原酸酯)和聚酯。聚酯的非限制性实例可包括聚合物，其包括但不限于聚己内酯；或共聚物，其包括但不限于乳酸和乙醇酸单元，例如聚(乳酸-乙醇酸)和聚(丙交酯-co-乙醇酸)，在此统称为“PLGA”；以及均聚物，其包括乙醇酸单元和乳酸单元，例如聚-L-乳酸、聚-D-乳酸、聚-D,L-乳酸、聚-L-丙交酯、聚-D-丙交酯和聚-D,L-丙交酯。在一些实施方案中，聚合物可以是PLGA。肺部/呼吸药物递送可以通过不同方法实施，包括液体喷雾器、基于气溶胶的计量剂量吸入器(MDI)、喷雾器、干粉分散装置等。如美国专利6797258；6794357；6737045；和6488953(所有这些都通过引用并入)所述的，这些方法和组合物是本领域技术人员所熟知的。根据本发明，至少一种药物组合物可以通过本领域已知的用于通过吸入施用治疗剂的各种吸入剂或鼻腔装置中的任何一种来递送。适用于针对肺部或鼻腔给药的其他装置也是本领域已知的。通常，对于肺部给药，递送至少一种药物组合物，其粒度有效地到达肺或鼻窦的下气道。适用于本发明实践的市售吸入装置的一些具体实例是TurbohalerTM(Astra)、(Glaxo)、(Glaxo)、SpirosTM吸入器(Dura)、由InhaleTherapeutics销售的装置、AERxTM(Aradigm)、喷雾器(Mallinckrodt)、喷雾器(MarquestMedicalProducts)、计量剂量吸入器(Glaxo)、粉末吸入器(Fisons)、等。所有这些吸入装置均可用于气溶胶形式的药物组合物的施用。这种气溶胶可包含溶液(水性和非水性)或固体颗粒。计量剂量吸入器通常使用气体推进剂并且在吸气期间需要驱动。参见，例如，WO98/35888和WO94/16970。干粉吸入器使用混合粉末的呼吸驱动。参见美国专利5458135和4668218；PCT公开WO97/25086、WO94/08552和WO94/06498；和欧洲申请EP0237507，其各自通过引用整体并入本文。喷雾器从溶液中产生气溶胶，而计量剂量吸入器、干粉吸入器等产生小颗粒气溶胶。用于施用的合适制剂包括但不限于鼻喷雾剂或滴鼻剂，且可包括本文所述组合物的水性或油性溶液。可以通过在压力下迫使组合物的悬浮液或溶液通过喷嘴来制备包含本文所述药物组合物的喷雾。可以选择喷嘴尺寸和配置、施加的压力和液体进料速率以获得所需的输出量和粒度。可以例如通过与毛细管或喷嘴进料相连的电场制备电喷雾。可通过喷雾器例如喷射喷雾器或超声喷雾器施用本文所述的药物组合物。通常，在喷射喷雾器中，使用压缩空气源来产生通过孔口的高速空气射流。当气体膨胀超过喷嘴时，产生低压区域，其通过连接到液体贮存器的毛细管吸取组合物。来自毛细管的液体流在离开管时被剪切成不稳定的细流和液滴，产生气溶胶。可以采用一系列配置、流速和挡板类型来实现给定喷射喷雾器的所需性能特征。在超声喷雾器中，使用高频电能来产生振动的机械能，通常采用压电换能器。该能量被传递到产生气溶胶的组合物。在计量剂量吸入器(MDI)或其它装置中，推进剂、抛射剂、组合物和任何赋形剂或其它添加剂作为与压缩气体的混合物包含在罐中。计量阀的启动将混合物释放为气溶胶。与计量剂量吸入器装置一起使用的药物组合物通常包括细碎的粉末，该细碎的粉末含有本发明组合物作为非水介质中的悬浮液，例如借助于表面活性剂悬浮在推进剂中。推进剂可以是用于此目的的任何常规材料，例如氯氟烃、氢氯氟烃、氢氟烃、或包括三氯氟甲烷、二氯二氟甲烷、二氯四氟乙醇和1,1,1,2-四氟乙烷、HFA-134a(氢氟烷烃-134a)、HFA-227(氢氟烷烃-227)的烃等。如本文所用的，“载剂”包括任何和所有溶剂、分散介质、载体、包衣、稀释剂、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗和吸收延迟剂、缓冲剂、载体溶液、悬浮液、胶体等。这种介质和用于药物活性物质的试剂的使用在本领域中是已知的。除非任何常规介质或试剂与活性成分不相容，否则考虑其用于治疗组合物中。补充的活性成分也可以掺入组合物中。短语“药学上可接受的”是指当施用于对象时不产生过敏或类似的不良反应的分子实体和组合物。含有多肽或肽作为活性成分的含水组合物的制备在本领域中是公知的。某些部分涉及治疗患有炎性病症的对象的方法，该方法包括施用有效量的BRD4抑制剂，例如本文所述的化合物。该方法可以进一步包括施用抗炎化合物。在一个特定方面，炎性病症是病毒诱导的炎性病症。病毒可以是呼吸道病毒，特别是呼吸道合胞体病毒(RSV)。该方法还可包括施用抗病毒化合物。一种治疗患有炎性肠病的对象的方法，其包括施用有效量的BRD4抑制剂，例如本文所述的化合物。炎性肠病可以是急性溃疡性结肠炎(UC)、抗TNF抵抗性UC、克罗恩病和/或克罗恩病诱导的纤维化。某些方面涉及治疗患有气道炎症的对象的方法，其包括施用有效量的BRD4抑制剂，例如本文所述的那些化合物。气道炎症与肺部疾病有关。肺病可以是慢性阻塞性肺部疾病(OLD)。在某些方面，OLD是慢性阻塞性肺疾病(COPD)、哮喘、囊性纤维化(CF)或支气管扩张。V.实施例包括以下实施例以及附图以说明本发明的优选实施方案。本领域技术人员应该理解，实施例或附图中公开的技术代表发明人发现的在本发明的实践中能够很好地起作用的技术，因此可以认为是构成其实践的优选方式。然而，根据本公开内容，本领域技术人员应当理解，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，可以对所公开的具体实施方案进行许多改变并仍然获得相同或相似的结果。实施例1A.材料和方法合成的dsRNA类似物聚肌苷酸-聚胞苷酸(将10μg/ml的聚肌胞苷酸(SigmaAldrich)和10ng/ml的TGFβ用于细胞培养基(PeproTech,RockyHill,NJ)。(+)-JQ1是可商购的。新的选择性BRD4抑制剂ZL0420和ZL0454在内部设计和合成，详细介绍在随后的讨论中。hSAEC细胞培养。在湿润的5％CO2气氛中，在小气道上皮细胞生长培养基(SAGM)(Lonza,Walkersville,MD)中培养人端粒酶永生化的小气道上皮细胞(hSAEC)。伦理声明。根据NIH实验动物护理和使用指南进行动物实验，并由德克萨斯大学医学分会(UTMB)动物护理和使用委员会(批准号1312058)批准。将小鼠圈养在无病原体的条件下，自由获取食物和水。构建RelA条件性基因敲除。描述了含有插入内含子3和9中的loxP位点的floxxed(fl)RelAfl/fl小鼠的构建(Ijaz等人，BMCDevelopmentalBiology2016,16:32)。将RelAfl/fl小鼠与在C57BL/6JN背景下具有插入分泌球蛋白家族1A成员1(Scgb1a1)基因(scgb1a1-CreERTM)3’UTR的他昔莫芬诱导的CRE的小鼠进行杂交(Rawlins等人CellStemCell.2009,4(6):525-34)。对于报告研究，将RelAfl/fl/Scgb1a1-CreERTM小鼠杂交至B6.129(Cg)-Gt(ROSA)26Sortm4(ACTB-tdTomato，-EGFP)Luo/J(JacksonLabs,stock#007676)中。使用RelAFlxF，TGCAAACAGACCTCCTTTGTCTTGA(SEQIDNO:1)和RelAFlxR，TCCTGAGACCAGACTCCTCCTCC(SEQIDNO:2)通过PCR来确定RelACKO等位基因的存在，如果存在floxxed(敲除的)等位基因，则引物提供450bp的产物，或如果存在WT等位基因，则提供270bp的产物。他莫昔芬处理。向3至4周龄小鼠腹膜内注射他莫昔芬(SigmaT5648)1mg/天，持续10天。将他莫昔芬溶于10％乙醇和90％玉米油中，以用于10mg/ml工作溶液。3周后，用聚肌胞苷酸腹膜内攻击小鼠，使其安乐死并收集组织以用于表征。聚肌胞苷酸攻击。在轻度麻醉下，经由鼻内(IN)途径对小鼠进行聚肌胞苷酸攻击(在50μLPBS中500μg/剂量)。定量实时逆转录PCR(Q-RT-PCR)。使用酸性胍酚提取(TriReagent；Sigma)提取总RNA。使用260/280nm比率通过分光光度法确认总RNA的质量。使用SuperScriptIII在20μl反应混合物中逆转录1μgRNA(Brasier等人，JVirol.2011,85(22):11752-69；Tian等人JVirol.2013,87(12):7075-92)。使用基因特异性引物和ΔΔCT方法定量基因表达的相对变化(Brasier等人JVirol.2011,85(22):11752-69；Tian等人JVirol.2013,87(12):7075-92)。显示的数据是针对亲环蛋白进行归一化的mRNA丰度的倍数变化。共聚焦免疫荧光显微术。对于免疫荧光染色，将hSAEC接种在大鼠尾胶原蛋白处理的盖玻片上并如所示进行刺激。用PBS中的4％多聚甲醛固定细胞并用0.1M氯化铵孵育10分钟。用PBS中的0.5％TritonX-100透化细胞，然后在封闭缓冲液(5％山羊血清、0.1％IGEPALCA-630、0.05％NaN3和1％BSA)中孵育并与孵育缓冲液(0.1％IGEPALCA-630、0.05％NaN3和2％BSA)中的抗RelA(SantaCruz)抗体一起4℃孵育过夜。洗涤后，将细胞用孵育缓冲液中的AlexaFluor缀合的山羊抗兔IgG(LifeTechnologies)染色1小时。在指定的情况下，细胞核用4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI，ThermofisherScientific)进行复染。使用LSM510荧光共聚焦显微镜在63X的放大倍数下观察细胞(Kalita等人BioMedResearchInternational.2013,2013:505864；Tian等人BMCGenomics.2015,16(1):529)。肺切片的免疫荧光。使用连续浓度的乙醇将来自小鼠肺的福尔马林固定、石蜡包埋的切片再水化。对于免疫组织化学(IHC)，基于来自Abcam的推荐，用抗原修复液(TE缓冲液，PH9.0)进行抗原修复。将石蜡包埋的切片在封闭缓冲液(5％山羊血清、0.1％IGEPALCA-630、0.05％NaN3和1％BSA)中封闭，然后与孵育缓冲液(0.1％IGEPALCA-630,0.05％NaN3和2％BSA)中的兔抗RelA、抗CC10或抗乙酰H3K122抗体(Abcam)一起4℃孵育过夜。正常的抗兔IgG用作染色特异性对照。洗涤后，将细胞用孵育缓冲液中的AlexaFluor488-或568-缀合的山羊抗兔IgG(LifeTechnologies)染色1小时，然后用LSM510荧光共聚焦显微镜观察，放大63倍(Kalita等人BioMedResearchInternational.2013,2013:505864；Tian等人BMCGenomics.2015,16(1):529)。评估气道炎症。在支气管肺泡灌洗液(BALF)中评估细胞到气道腔中的募集。用1mL无菌PBS(pH7.4)对肺灌流两次以获得BALF。通过台盼蓝染色50μl的BALF并使用血细胞计数器计数活细胞来测定总细胞计数。针对用Wright-Giemsa染色的细胞离心制备物(Cytospin3；ThermoShandon，Pittsburgh，Pa)进行差异细胞计数。使用光学显微镜对每个样品总共300个细胞进行计数。将福尔马林固定的肺包埋在石蜡中，切成4μm厚，并用苏木精和伊红或Masson三色对其进行染色。在NIKONEclipseTiSystem上进行显微镜检查。细胞因子Bio-Plex测定。将BALF样品离心(800×g，4℃下5分钟)，并使用Bio-PlexProTM小鼠细胞因子测定法(Bio-Rad，Hercules，CA)和重组细胞因子标准品(一式三份)对上清液中的细胞因子进行定量。在200TM系统(Bio-Rad)上进行读数。使用Bio-PlexManagerTM软件版本6.0Build617(Bio-Rad)进行数据分析。表4.所选化合物的IC50值表5.所选新化合物的IC50值BRD4抑制剂的合成和表征。(E)-6-((2-氨基-4-羟基-5-甲基苯基)二氮烯基)-3，4-二氢喹啉-2(1H)-酮(ZL0420)。在0℃(预冷却15分钟)下，在N2下，在15分钟内向在MeOH(6ml)和CH3CN(6ml)中的6-氨基-3，4-二氢喹啉-2(1H)-酮(168mg，1.04mmol)和HCl(浓缩的水溶液，416μl，6.24mmol)溶液中加入亚硝酸叔丁酯(107mg，1.04mmol)，然后在0℃下搅拌45分钟，以得到反应溶液。同时，将5-氨基-2-甲基苯酚(128mg，1.04mmol)和K2CO3(718mg，5.2mmol)溶解在MeOH(2.5ml)和H2O(18ml)中并脱气15分钟。在15分钟内向该混合物中加入之前的反应溶液，并在0℃搅拌1小时。通过TLC分析监测反应，且在反应完成后，加入10％盐酸(水溶液)，以调节pH＝1。过滤沉淀物，得到所需产物(250mg，收率81％)，为暗红色固体。HPLC纯度98.3％(tR＝16.59分钟)。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ10.25(s，1H)，7.64(s，1H)，7.59(d，J＝8.6Hz，2H)，7.36(s，1H)，6.93(d，J＝8.3Hz，1H)，6.25(s，1H)，2.95(t，J＝7.4Hz，2H)，2.47(m，2H)，2.03(s，3H).13CNMR(75MHz，DMSO-d6)δ170.64，160.39，148.35，145.73，139.21，130.98，126.96，124.67，121.85，120.73，115.83，114.51，101.07，30.75，25.31，15.66.ESI-MS(M+H)+m/z297.1.HRMS(M+H)+m/z＝297.1342(C16H17N4O2的计算值：297.1352)。(E)-4-((2-氨基-4-羟基-5-甲基苯基)二氮烯基)-N-环戊基苯磺酰胺(ZL0454)。在0℃(预冷却15分钟)下，在N2下，在15分钟内向在MeOH(3ml)和CH3CN(3ml)中的4-氨基-N-环戊基苯磺酰胺(96mg，0.4mmol)和HCl(浓缩的水溶液，160μL，2.4mmol)溶液中加入亚硝酸叔丁酯(48mg，0.4mmol)，然后在0℃下搅拌45分钟，以得到反应溶液。同时，将5-氨基-2-甲基苯酚(52mg，0.4mmol)和K2CO3(276mg，2.0mmol)溶解在MeOH(1ml)和H2O(8ml)中并脱气15分钟。在15分钟内向该混合物中加入之前的反应溶液，并在0℃搅拌1小时。通过TLC分析监测反应，且在反应完成后，加入10％盐酸，以调节pH＝1。过滤沉淀物，得到所需产物(117mg，收率78％)，为红色固体。HPLC纯度98.1％(tR＝18.38分钟)。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.03(t，J＝7.2Hz，2H)，7.85(d，J＝8.7Hz，2H)，7.68(d，J＝6.6Hz，1H)，6.42(d，J＝6.3Hz，1H)，3.42(m，1H)，2.05(s，3H)，1.65-1.48(m，4H)，1.44-1.24(m，4H).13CNMR(75MHz，DMSO-d6)δ166.55，139.65，130.75，128.27，119.99，100.15，54.95，32.90，23.27，16.10.MS(M+H)+m/z375.1.HRESI-MS(M+H)+m/z＝375.1530(C18H23N4O3S的计算值：375.1538)。在培养的hSAEC中测定EC50，测量Q-RT-PCR测定中聚肌胞苷酸诱导的FN1基因表达的抑制。时间分辨(TR)-荧光共振能量转移(TR-FRET)。使用市售的TR-FRET测定试剂盒(Caymanchemicals)对与BRD-4和BRD-2的布罗莫结构域的结合亲和力进行定量。“供体”荧光团是直接用铕(Eu3+)螯合物标记的BRD-4和BRD-2的人BD1或BD2(氨基酸49-170)。将含有靶标乙酰化赖氨酸的生物素化肽作为BRD4和BRD2的BD1或BD2的配体。别藻蓝蛋白(APC)标记的抗生物素蛋白经由生物素部分以高亲和力与肽底物结合，并作为“受体”荧光团。根据TR-FRET曲线与抑制剂浓度的对数，估计50％的抑制浓度(IC50)。表6.BRD-2和BRD-4布罗莫结构域BD1和BD2的IC50。由TR-FRET确定的亲和力(值以nM表示)。缩写：BD，布罗莫结构域。布罗莫结构域JQ1ZL420ZL454BRD4-BD1922749BRD4-BD2623232BRD2-BD178803772BRD2-BD25217361836试剂和条件：(a)DCM，室温，96％.((4-(3-(4-(三氟甲基)苯基)脲基)苯基)磺酰基)-L-脯氨酸甲酯(ZL0392)的合成。在室温下过夜搅拌5mLDCM中的((4-氨基苯基)磺酰基)-L-脯氨酸甲酯(ZL0387)(50mg，0.176mmol)和1-异氰酸基-4-(三氟甲基)苯(40mg，0.212mmol)溶液。然后将混合物直接浓缩，并通过PTLC(DCM/MeOH＝100∶1)纯化残余物，得到所需的产物(40mg，96％)，为白色固体。HPLC纯度99.9％(tR＝19.33分钟)。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ8.02(s，1H)，7.96(s，1H)，7.77(d，J＝8.8Hz，2H)，7.68-7.51(m，6H)，4.27(dd，J＝7.7Hz，5.1Hz，1H)，3.72(s，3H)，3.52(dd，J＝5.8Hz，3.5Hz，1H)，3.32-3.19(m，1H)，2.13-1.90(m，3H)，1.77(dd，J＝10.8，5.4Hz，1H).13CNMR(75MHz，CDCl3)δ173.03，152.24，143.98，141.66，129.90，128.64，126.24，126.19，119.05，119.00，60.72，52.74，48.75，30.92，24.66.ESI-MS(M+H)+m/z472.1.HRESI-MS(M+H)+m/z＝472.1166(C20H21F3N3O5S的计算值：472.1154)。试剂和条件：(a)Zn，NH4Cl，MeOH/H2O，80℃，定量.(b)2，6-二甲苯酚，甲酸叔丁酯，38％HCl(水溶液)，K2CO3，MeOH/CH3CN/H2O，0℃，40％.6-氨基-3，4-二氢喹啉-2(1H)-酮(ZL0394)的合成。将6-硝基-3，4-二氢喹啉-2(1H)-酮(1.0g，5.2mmol)溶解于40mLEtOH中，然后加入20mLH2O中的NH4Cl(2.76g，52mmol)和Zn粉(2.37g，36.4mmol)。在80℃回流1h后，过滤混合物以除去Zn粉。浓缩滤液，得到所需产物(1.8g，包括部分的NH4Cl)，为灰色固体。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.67(s，1H)，6.55(d，J＝8.2Hz，1H)，6.42-6.31(m，2H)，2.70(t，J＝7.5Hz，2H)，2.33(dd，J＝8.5Hz，6.5Hz，2H)。(E)-6-((4-羟基-3，5-二甲基苯基)二氮烯基)-3，4-二氢喹啉-2(1H)-酮(ZL0417)的合成。通过类似于用于制备化合物ZL0404的方法以40％的收率制备化合物ZL0417。得到标题化合物，为红色固体。HPLC纯度97.0％(tR＝17.82分钟)。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ10.38(s，1H)，9.01(s，1H)，7.65(s，2H)，7.50(s，2H)，7.14(s，1H)，7.00(d，J＝7.8Hz，1H)，2.98(s，2H)，2.26(s，6H)，1.94(d，J＝7.4Hz，2H).13CNMR(75MHz，DMSO-d6)δ170.80，156.82，147.74，145.42，140.83，139.31，136.59，134.42，125.29，123.40，121.35，115.92，30.60，25.19，17.17.ESI-MS(M+H)+m/z296.1.HRESI-MS(M+H)+m/z＝296.1391(C17H18N3O2的计算值：296.1399)。试剂和条件：(a)Et3N，DMF，室温，29％.合成5-氯-2-甲氧基-N-(2-氧代-1，2，3，4-四氢喹啉-6-基)苯磺酰胺(ZL0419)。向5mLDMF中的ZL0349(70mg，0.43mmol)和Et3N(87mg，0.86mmol)溶液中加入5-氯-2-甲氧基苯磺酰氯(156mg，0.65mmol)。在室温下搅拌1小时后，将混合物倒入20mL冰水中。过滤沉淀物，得到所需产物(45mg，29％)，为白色固体。HPLC纯度98.9％(tR＝16.18分钟)。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.97(s，1H)，9.85(s，1H)，7.61(s，1H)，7.24(dd，J＝10.2，6.8Hz，2H)，6.94-6.79(m，2H)，6.67(d，J＝8.4Hz，1H)，3.91(s，3H)，2.81-2.71(m，2H)，2.36(t，J＝7.5Hz，2H).13CNMR(75MHz，DMSO-d6)δ170.38，155.70，135.72，134.90，133.70，131.74，129.59，128.53，127.45，124.68，124.05，121.63，120.67，115.80，115.36，57.00，30.58，25.25.ESI-MS(M+H)+m/z367.1.HRESI-MS(M+H)+m/z＝367.0506(C16H16N2O4SCl的计算值：367.0519)。试剂和条件：(a)甲酸叔丁酯，38％HCl(水溶液)，K2CO3，MeOH/CH3CN/H2O，0℃，81％.(E)-6-((2-氨基-4-羟基-5-甲基苯基)二氮烯基)-3，4-二氢喹啉-2(1H)-酮(ZL0420)的合成。通过类似于用于制备化合物ZL0404的方法以81％的收率制备化合物ZL0420。得到标题化合物，为红色固体。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ10.40(s，1H)，7.74(d，J＝30.7Hz，3H)，7.06(s，1H)，6.66(s，1H)，3.48(s，2H)，3.02(s，2H)，2.21(s，3H).13CNMR(75MHz，DMSO-d6)δ183.78，170.69，151.88，139.55，137.00，136.70，133.96，127.59，125.52，119.44，119.00，116.24，111.71，30.44，25.22，17.70.ESI-MS(M+H)+m/z297.1.HRESI-MS(M+H)+m/z＝297.1345(C16H17N4O2的计算值：297.1352)。试剂和条件：(a)Et3N，DMF，室温，13％.4-硝基-N-(2-氧代-1，2，3，4-四氢喹啉-6-基)苯磺酰胺(ZL0421)的合成。通过类似于用于制备化合物ZL0419的方法以13％的收率制备化合物ZL0421。得到标题化合物，为黄色固体。HPLC纯度98.9％(tR＝15.60分钟)。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ10.02(s，1H)，8.36(d，J＝8.7Hz，2H)，7.94(d，J＝8.8Hz，2H)，6.89(s，1H)，6.79(s，1H)，6.69(d，J＝8.4Hz，1H)，2.78(d，J＝7.1Hz，2H)，2.37(dd，J＝8.5，6.6Hz，2H).13CNMR(75MHz，DMSO-d6)δ170.34，149.99，136.06，128.73，124.86，115.84，30.60，25.23.ESI-MS(M+H)+m/z348.1.HRESI-MS(M+H)+m/z＝348.0646(C15H14N3O5S的计算值：348.0654)。试剂和条件：(a)DIPEA，DCM，96％；(b)Zn，NH4Cl，EtOH/H2O，91％；(c)甲酸叔丁酯，38％HCl(水溶液)，K2CO3，MeOH/CH3CN/H2O，0℃，82％.N-环戊基-4-硝基苯磺酰胺(ZL0445)的合成。通过类似于用于制备化合物ZL0386的方法以96％的收率制备化合物ZL0445。得到标题化合物，为黄色固体。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ8.39(d，J＝9.0Hz，2H)，8.10(d，J＝9.0Hz，2H)，4.80(d，J＝7.4Hz，1H)，3.76-3.62(m，1H)，1.85(dd，J＝12.4，5.5Hz，2H)，1.70-1.50(m，4H)，1.40(dt，J＝11.9，5.3Hz，2H).13CNMR(75MHz，CDCl3)δ166.64，146.88，128.31，124.39，55.47，33.55，23.10。4-氨基-N-环戊基苯磺酰胺(ZL0449)的合成。通过类似于用于制备化合物ZL0387的方法以91％的收率制备化合物ZL0449。得到标题化合物，为黄色固体。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.57(d，J＝8.7Hz，2H)，6.64(d，J＝8.7Hz，2H)，5.21(d，J＝7.1Hz，1H)，4.36(s，1H)，3.46(dd，J＝13.2，6.6Hz，1H)，2.64(s，2H)，1.79-1.64(m，2H)，1.56(dd，J＝7.0，3.6Hz，2H)，1.38(ddd，J＝19.6，9.5，5.3Hz，4H).13CNMR(75MHz，CDCl3)δ150.80，129.05，128.29，128.24，114.02，54.84，33.24，33.20，23.14。(E)-N-环戊基-4-((4-羟基-3，5-二甲基苯基)二氮烯基)苯磺酰胺(ZL0453)的合成。通过类似于用于制备化合物ZL0404的方法以82％的收率制备化合物ZL0453。得到标题化合物，为红色固体。HPLC纯度98.8％(tR＝20.44分钟)。1HNMR(300MHz，MeOD)δ7.97(q，J＝8.2Hz，4H)，7.63(s，2H)，3.65-3.51(m，1H)，2.31(s，6H)，1.82-1.60(m，4H)，1.54-1.31(m，4H).13CNMR(75MHz，MeOD)δ157.74，154.91，145.77，142.12，127.74，124.75，123.84，122.30，54.85，32.66，22.82，15.38.ESI-MS(M+H)+m/z374.1.HRESI-MS(M+H)+m/z＝374.1530(C19H24N3O3S的计算值：374.1538)。试剂和条件：(a)甲酸叔丁酯，38％HCI(水溶液)，K2CO3，MeOH/CH3CN/H2O，0℃，81％.(E)-4-((2-氨基-4-羟基-5-甲基苯基)二氮烯基)-N-环戊基苯磺酰胺(ZL0454)的合成。通过类似于用于制备化合物ZL0404的方法以81％的收率制备化合物ZL0454。得到标题化合物，为红色固体。HPLC纯度98.1％(tR＝18.38分钟)。1HNMR(300MHz，DMSO)δ8.03(d，J＝7.2Hz，2H)，7.85(d，J＝8.7Hz，2H)，7.68(d，J＝6.6Hz，1H)，6.42(d，J＝6.3Hz，1H)，3.42(d，J＝6.1Hz，1H)，2.05(s，3H)，1.65-1.48(m，4H)，1.44-1.24(m，4H).13CNMR(75MHz，DMSO-d6)δ166.55，139.65，130.75，128.27，119.99，100.15，54.95，32.90，23.27，16.10.MS(M+H)+m/z375.1.HRESI-MS(M+H)+m/z＝375.1530(C18H23N4O3S的计算值：375.1538)。试剂和条件：(a)DIPEA，DCM，定量；(b)Zn，NH4Cl，EtOH/H2O，68％；(c)甲酸叔丁酯，38％HCl(水溶液)，K2CO3，MeOH/CH3CN/H2O，0℃，90％.1-((4-硝基苯基)磺酰基)吡咯烷(ZL0446)的合成。通过类似于用于制备化合物ZL0386的方法以定量的收率制备化合物ZL0446。得到标题化合物，为黄色固体。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ8.39(d，J＝8.6Hz，2H)，8.03(d，J＝8.6Hz，2H)，3.30(t，J＝6.7Hz，4H)，1.86-1.78(m，4H).13CNMR(75MHz，CDCl3)δ150.05，143.12，128.52，124.33，48.05，25.38。4-(吡咯烷-1-基磺酰基)苯胺(ZL0450)的合成。通过类似于用于制备化合物ZL0387的方法以68％的收率制备化合物ZL0450。得到标题化合物，为黄色固体。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.71-7.45(m，2H)，6.86-6.61(m，2H)，3.52(d，J＝5.6Hz，2H)，3.32-3.06(m，4H)，1.76(d，J＝1.7Hz，4H).13CNMR(75MHz，CDCl3)δ155.23，133.43，127.72，117.81，51.80，28.96。(E)-2，6-二甲基-4-((4-(吡咯烷-1-基磺酰基)苯基)二氮烯基)苯酚(ZL0451)的合成。通过类似于用于制备化合物ZL0404的方法以90％的收率制备化合物ZL0451。得到标题化合物，为红色固体。HPLC纯度98.0％(tR＝20.33分钟)。1HNMR(300MHz，MeOD)δ7.99(s，4H)，7.65(s，2H)，3.31-3.24(m，4H)，2.32(s，6H)，1.78(t，J＝6.6Hz，4H).13CNMR(75MHz，MeOD)δ157.85，155.25，145.81，137.22，128.36，124.79，123.88，122.39，47.78，24.85，15.35.MS(M+H)+m/z360.1.HRESI-MS(M+H)+m/z＝360.1373(C18H22N3O3S的计算值：360.1382)。试剂和条件：(a)甲酸叔丁酯，38％HCl(水溶液)，K2CO3，MeOH/CH3CN/H2O，℃，92％.(E)-5-氨基-2-甲基-4-((4-(吡咯烷-1-基磺酰基)苯基)二氮烯基)苯酚(ZL0452)的合成。通过类似于用于制备化合物ZL0404的方法以92％的收率制备化合物ZL0452。得到标题化合物，为黑色固体。HPLC纯度94.1％(tR＝18.08分钟)。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.05(d，J＝8.5Hz，2H)，7.84(d，J＝8.7Hz，2H)，7.75(t，J＝12.8Hz，1H)，6.38(s，1H)，3.16(t，J＝6.6Hz，4H)，2.04(s，3H)，1.65(dd，J＝8.1，5.1Hz，4H).13CNMR(75MHz，DMSO-d6)δ166.60，134.11，131.06，129.04，120.43，100.11，48.31，25.18，16.02.MS(M+H)+m/z361.1.HRESI-MS(M+H)+m/z＝361.1328(C17H21N4O3S的计算值：361.1334)。试剂和条件：(a)3-溴丙-1-烯，K2CO3，丙酮，70℃，定量；(b)1-(2-羟基-4，6-二甲氧基苯基)乙烷-1-酮，50％KOH，EtOH，室温；(c)I2，DMSO，140℃，36％；(d)Pd(PPh3)4，K2CO3，CH3OH，90℃，75％；(e)2-溴乙烷-1-醇，K2CO3，DMF，80℃，55％.4-(烯丙氧基)-3，5-二甲基苯甲醛(ZL0463)的合成。向40mL丙酮中的4-羟基-3，5-二甲基苯甲醛(1.5g，10mmol)和K2CO3(2.07g，15mmol)溶液中加入3-溴丙-1-烯(1.21g，10mmol)。在70℃下搅拌5小时后，将混合物倒入H2O中并通过EA萃取。将有机萃取物用饱和NaHCO3(水溶液)、盐水洗涤，并经无水Na2SO4干燥。蒸发所得溶液，将残余物直接用于下一步骤。(E)-3-(4-(烯丙氧基)-3，5-二甲基苯基)-1-(2-羟基-4，6-二甲氧基苯基)丙-2-烯-1-酮(ZL0464)的合成。向20mLEtOH中的ZL0463(1406mg，7.4mmol)和1-(2-羟基-4，6-二甲氧基苯基)乙烷-1-酮(1450mg，7.4mmol)溶液中加入50％KOH(829mg，14.8mmol)。在室温下过夜搅拌后，浓缩混合物并用DCM对其进行萃取。将有机萃取物用饱和NaHCO3(水溶液)、盐水洗涤，并经无水Na2SO4干燥。蒸发所得溶液，将残余物直接用于下一步骤。2-(4-(烯丙氧基)-3，5-二甲基苯基)-5，7-二甲氧基-4H-色原烯-4-酮(ZL0466)的合成。向10mLDMSO中的ZL0464(1.5g，5mmol)溶液中加入I2(130mg，0.5mmol)。在140℃下搅拌4小时后，将混合物倒入H2O中并用DCM对其进行萃取。将有机萃取物用饱和NaHCO3(水溶液)、盐水洗涤，并经无水Na2SO4干燥。蒸发所得溶液，并通过硅胶柱(DCM/CH3OH＝50∶1)纯化残余物，得到所需产物(650mg，36％)，为棕色泡沫。HPLC纯度93.4％(tR＝21.53分钟)。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.50(s，2H)，6.57(s，1H)，6.55(d，J＝2.3Hz，1H)，6.34(d，J＝2.2Hz，1H)，6.19-6.02(m，1H)，5.44(dd，J＝17.2，1.5Hz，1H)，5.28(dd，J＝10.4，1.2Hz，1H)，4.35(d，J＝5.6Hz，2H)，3.91(d，J＝9.8Hz，6H)，2.34(s，6H).13CNMR(75MHz，CDCl3)δ177.58，163.94，160.84，160.66，159.86，158.60，133.62，131.81，126.77，126.58，117.61，109.17，108.37，96.09，92.79，73.23，56.34，55.74，16.62MS(M+H)+m/z367.2.HRESI-MS(M+H)+m/z＝367.1548(C22H23O5的计算值：367.1545)。2-(4-羟基-3，5-二甲基苯基)-5，7-二甲氧基-4H-色原烯-4-酮(ZL0467)的合成。向10mLCH3OH中的ZL0466(630mg，1.72mmol)溶液中加入Pd(PPh3)4(60mg，0.05mmol)和K2CO3(949mg，6.88mmol)。在90℃下搅拌7小时后，将混合物倒入1NHCl中并用n-BuOH对其进行萃取。浓缩有机萃取物并加入DCM以产生沉淀。过滤沉淀物，得到所需产物(420mg，75％)，为黄色固体。HPLC纯度97.4％(tR＝17.96分钟)。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.64(s，2H)，6.86(d，J＝2.1Hz，1H)，6.57(s，1H)，6.49(d，J＝2.1Hz，1H)，3.90(s，3H)，3.82(s，3H)，2.25(s，6H).13CNMR(75MHz，DMSO-d6)δ176.15，164.03，160.88，160.64，159.64，157.11，126.70，125.34，121.63，108.74，106.59，96.70，93.80，56.55，49.01，17.16.MS(M+H)+m/z327.1.HRESI-MS(M+H)+m/z＝327.1234(C19H19O5的计算值：327.1232)。2-(4-(2-羟基乙氧基)-3，5-二甲基苯基)-5，7-二甲氧基-4H-色原烯-4-酮(ZL0468)的合成。通过类似于用于制备化合物ZL0458的方法以55％的收率制备化合物ZL0468。得到标题化合物，为白色固体。1HNMR(300MHz，MeOD)δ7.54(s，2H)，6.67(d，J＝2.3Hz，1H)，6.51(s，1H)，6.43(d，J＝2.2Hz，1H)，3.92(d，J＝2.2Hz，7H)，3.88(s，3H)，2.35(s，6H).MS(M+H)+m/z371.1.HRESI-MS(M+H)+m/z＝371.1483(C21H23O6的计算值：371.1495)。((4-(3-苯基脲基)苯基)磺酰基)-L-脯氨酸甲酯(ZL0495)的合成。将异氰酸苯酯(25mg，0.21mmol)和(4-(4-氨基苯基)磺酰基)-L-脯氨酸甲酯(50mg，0.176mmol)混合在一起并在室温下搅拌过夜。然后浓缩溶液并通过硅胶柱(DCM∶CH3OH＝100∶1至50∶1)纯化，以得到ZL0495(70mg，99％)，为无色油状物。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ8.01(s，1H)，7.78-7.68(m，3H)，7.55(d，J＝8.8Hz，2H)，7.40(d，J＝7.8Hz，2H)，7.28(d，J＝2.8Hz，2H)，7.05(t，J＝7.3Hz，1H)，4.24(t，J＝6.3Hz，1H)，3.71(s，3H)，3.55-3.43(m，1H)，3.22(dd，J＝11.9，4.8Hz，1H)，2.02-1.92(m，3H)，1.78-1.67(m，1H).13CNMR(75MHz，CDCl3)δ172.94，152.95，143.99，138.03，130.03，129.07，128.63，123.90，120.34，118.81，60.63，52.62，48.67，30.89，24.64。((4-(3-(4-甲氧基苯基)脲基)苯基）磺酰基)-L-脯氨酸甲酯(ZL0496)的合成。将1-异氰酸基-4-甲氧基苯(32mg，0.21mmol)和(4-(4-氨基苯基)磺酰基)-L-脯氨酸甲酯(50mg，0.176mmol)混合在一起并在室温下搅拌过夜。然后浓缩溶液并通过硅胶柱(DCM∶CH3OH＝100∶1至50∶1)纯化，以得到ZL0496(98mg，定量)，为黄色油状物。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ8.00(s，1H)，7.69(d，J＝8.8Hz，2H)，7.62(s，1H)，7.50(d，J＝8.8Hz，2H)，7.24(d，J＝8.9Hz，2H)，6.79(d，J＝9.0Hz，2H)，4.23(dd，J＝7.2，5.3Hz，1H)，3.71(d，J＝6.1Hz，6H)，3.53-3.41(m，1H)，3.27-3.15(m，1H)，1.98(tt，J＝17.2，6.4Hz，3H)，1.73(dd，J＝11.8，6.7Hz，1H).13CNMR(75MHz，CDCl3)δ172.92，156.61，153.58，143.97，130.53，130.07，128.62，123.12，118.70，114.31，60.59，55.45，52.58，48.65，30.88，24.63。1-(4-(吡咯烷-1-基磺酰基)苯基)-3-(4-(三氟甲基)苯基)脲(ZL0497)的合成。将1-异氰酸基-4-(三氟甲基)苯(50mg，0.265mmol)和4-(吡咯烷-1-基磺酰基)苯胺(50mg，0.22mmol)混合在一起并在室温下搅拌过夜。然后浓缩溶液并通过硅胶柱(DCM∶CH3OH＝100∶1至50∶1)纯化，得到ZL0497(35mg，34％)，为白色固体。1HNMR(300MHz，MeOD)δ7.69(ddd，J＝29.7，21.9，8.9Hz，8H)，3.28-3.20(m，4H)，1.81-1.72(m，4H).13CNMR(75MHz，MeOD)δ152.75，143.65，142.52，129.68，128.50，125.75，125.70，124.78，124.35，123.92，123.49，118.35，118.17，47.74，24.80。N-环戊基-4-(3-(4-(三氟甲基)苯基)脲基)苯磺酰胺(ZL0498)的合成。将1-异氰酸基-4-(三氟甲基)苯(47mg，0.25mmol)和4-氨基-N-环戊基苯磺酰胺(50mg，0.21mmol)混合在一起并在室温下搅拌过夜。然后浓缩溶液并通过硅胶柱(DCM∶CH3OH＝100∶1至50∶1)纯化，得到ZL0498(69mg，77％)，为白色固体。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.24(d，J＝2.4Hz，2H)，7.72(t，J＝5.5Hz，2H)，7.66(dd，J＝6.8，5.4Hz，6H)，7.48(d，J＝7.1Hz，1H)，3.42-3.36(m，1H)，1.56(ddd，J＝12.7，11.2，6.4Hz，4H)，1.43-1.23(m，4H).13CNMR(75MHz，DMSO-d6)δ152.53，143.55，143.30，134.81，128.24，126.56，118.59，118.35，54.86，32.91，23.28。((4-(3-(4-氟苯基)脲基)苯基)磺酰基)-L-脯氨酸甲酯(ZL0505)的合成。将1-氟-4-异氰酸苯酯(29mg，0.21mmol)和((4-氨基苯基)磺酰基)-L-脯氨酸甲酯(50mg，0.176mmol)混合在一起并在室温下搅拌过夜。然后浓缩溶液并通过硅胶柱(DCM∶CH3OH＝100∶1至50∶1)纯化，以得到ZL0505(97mg，定量)，为黄色油状物。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ8.04(s，1H)，7.78(s，1H)，7.72(d，J＝8.8Hz，2H)，7.55(d，J＝8.8Hz，2H)，7.38-7.30(m，2H)，6.95(t，J＝8.6Hz，2H)，4.24(dd，J＝7.4，5.2Hz，1H)，3.70(s，3H)，3.48(dt，J＝9.4，5.9Hz，1H)，3.28-3.15(m，1H)，1.99(qd，J＝13.0，7.7Hz，3H)，1.79-1.66(m，1H).13CNMR(75MHz，CDCl3)δ173.02，166.63，160.82，157.60，153.09，144.05，134.02，129.86，128.63，122.27，122.16，118.82，115.77，115.47，60.65，52.66，48.72，30.90，24.64。((4-(3-(3-(三氟甲基)苯基)脲基)苯基)磺酰基)-L-脯氨酸甲酯(ZL0506)的合成。将1-异氰酸基-3-(三氟甲基)苯(39mg，0.21mmol)和(4-(4-氨基苯基)磺酰基)-L-脯氨酸甲酯(50mg，0.176mmol)混合在一起并在室温下搅拌过夜。然后浓缩溶液并通过PTLC(DCM∶CH3OH＝50∶1)纯化，以得到ZL0506(101mg，定量)，为黄色油状物。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ8.11(s，1H)，8.01(s，1H)，7.75(d，J＝8.9Hz，3H)，7.63(d，J＝8.9Hz，3H)，7.38(t，J＝7.9Hz，1H)，7.27(d，J＝6.5Hz，1H)，4.25(dd，J＝7.4，5.4Hz，1H)，3.71(s，3H)，3.50(dt，J＝9.6，6.1Hz，1H)，3.29-3.17(m，1H)，2.10-1.89(m，3H)，1.80-1.66(m，1H).13CNMR(75MHz，CDCl3)δ173.09，152.56，143.99，138.96，131.01，129.83，129.49，128.62，122.80，118.98，116.32，60.72，52.71，48.75，30.89，24.62。试剂和条件：(a)(R)-(-)-环氧氯丙烷，K2CO3，丙酮，回流，24小时；(b)哌啶，K2CO3，EtOH/DMF，回流，过夜，经历两步达到18％；(c)1-甲基哌嗪，K2CO3，DMF，回流，过夜，经历两步达到20％(R)-2-(3，5-二甲基-4-(环氧乙烷-2-基甲氧基)苯基)-5，7-二甲氧基-4H-色原烯-4-酮(ZL0508)的合成。向5mL丙酮中的ZL0467(100mg，0.31mmol)溶液中加入(R)-(-)-环氧氯丙烷(285mg，3.1mmol)和K2CO3(211mg，1.53mmol)。将混合物回流24小时，然后倒入H2O中。用DCM(20mL×3)萃取溶液。将有机层用饱和NaHCO3(水溶液)、盐水洗涤，并经无水Na2SO4干燥。过滤所得溶液并浓缩，以得到粗固体。将粗产物直接用于下一步骤。(R)-2-(4-(2-羟基-3-(哌啶-1-基)丙氧基)-3，5-二甲基苯基)-5，7-二甲氧基-4H-色原烯-4-酮(ZL0513)的合成)。向在2mLEtOH和2mLDMF中的ZL0508(48mg，0.164mmol)溶液中加入哌啶(139mg，1.64mmol)和K2CO3(226mg，1.64mmol)。将混合物回流24小时，然后倒入H2O中。用DCM(20mL×3)萃取溶液。将有机层用饱和NaHCO3(水溶液)、盐水洗涤，并经无水Na2SO4干燥。过滤所得溶液并浓缩，以得到粗固体。通过PTLC(DCM∶CH3OH＝20∶1)纯化粗产物，以得到ZL0513(13mg，经历两步达到18％)，为白色固体。1HNMR(300MHz，MeOD)δ7.50(s，2H)，6.63(s，1H)，6.44(d，J＝21.6Hz，2H)，4.00-3.77(m，9H)，2.73(s，6H)，2.32(s，6H)，1.63(d，J＝43.9Hz，6H).13CNMR(75MHz，MeOD)δ178.43，164.90，161.54，160.51，159.75，158.51，131.69，126.46，126.15，107.81，106.60，95.94，92.71，74.39，66.94，61.00，55.15，54.56，24.82，23.31，15.30。(R)-2-(4-(2-羟基-3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙氧基)-3，5-二甲基苯基)-5，7-二甲氧基-4H-色原烯-4-酮的合成(ZL0516)。向5mLDMF中的ZL0508(48mg，0.164mmol)溶液中加入1-甲基哌嗪(164mg，1.64mmol)和(226mg，1.64mmol)。将混合物回流24小时，然后倒入H2O中。用DCM(20mL×3)萃取溶液。将有机层用饱和NaHCO3(水溶液)、盐水洗涤，并经无水Na2SO4干燥。过滤所得溶液并浓缩，以得到粗固体。通过PTLC(DCM∶CH3OH＝20∶1)纯化粗产物，以得到ZL0516(16mg，经历两步达到20％)，为白色固体。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.45(s，2H)，6.49(d，J＝6.4Hz，2H)，6.29(s，1H)，4.02(s，1H)，3.82(s，8H)，2.49(dd，J＝39.7，24.1Hz，10H)，2.25(d，J＝6.1Hz，9H).13CNMR(75MHz，CDCl3)δ182.49，168.36，165.44，164.67，163.88，162.29，135.69，130.78，112.62，111.68，100.18，96.80，78.13，70.60，64.26，59.94，59.68，58.62，56.59，49.31，20.23。试剂和条件：(a)LiAlH4，THF，0℃，30分钟，定量.(S)-1-(4-((2-(羟基甲基)吡咯烷-1-基)磺酰基)苯基)-3-(4-(三氟甲基)苯基)脲(ZL0556)的合成。在N2下，向4mLTHF中的ZL0392(50mg，0.1mmol)溶液中加入LiAlH4(11mg，0.3mmol)。30分钟后，将混合物倒入H2O中，并用DCM对其进行萃取。用无水Na2SO4干燥后，浓缩溶液，并用硅胶柱(DCM/CH3OH＝20/1)纯化，以得到所需产物(46mg，定量)，为白色固体。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.86(s，1H)，7.80(s，1H)，7.74(s，1H)，7.72(s，1H)，7.57(s，1H)，7.55(s，4H)，3.70(d，J＝3.3Hz，3H)，3.47(dt，J＝12.0，6.2Hz，1H)，3.36-3.16(m，2H)，1.90-1.77(m，1H)，1.74(s，1H)，1.62-1.48(m，1H).13CNMR(75MHz，CDCl3)δ152.06，143.60，141.32，129.75，128.82，126.41，126.37，126.27，119.13，118.99，65.68，61.90，50.12，28.74，24.23。试剂和条件：(a)1-甲基哌嗪，HBTU，DIEA，DCM，室温，84％；(b)Zn，NH4Cl，EtOH/H2O，回流；(c)1-异氰酸基-4-(三氟甲基)苯，DCM，室温，经历两步达到60％(S)-1-甲基-4-(((4-硝基苯基)磺酰基)脯氨酰基)哌嗪(ZL0574)的合成。按照ZL0573的方法得到ZL0574(106mg，84mg)，为黄色固体。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ8.25(d，J＝8.5Hz，2H)，8.00(d，J＝8.5Hz，2H)，4.84(dd，J＝8.1，3.2Hz，1H)，3.47(dd，J＝18.7，10.5Hz，5H)，3.32(dd，J＝13.8，8.0Hz，1H)，2.46-2.26(m，4H)，2.19-2.08(m，1H)，2.04-1.79(m，3H).13CNMR(75MHz，CDCl3)δ169.10，149.80，145.16，128.72，123.88，58.54，54.94，54.59，48.13，45.91，45.45，42.06，30.91，24.76。(S)-1-(((4-氨基苯基)磺酰基)脯氨酰基)-4-甲基哌嗪(ZL0578)的合成。按照ZL0576的方法获得ZL0578。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.61(d，J＝8.5Hz，2H)，6.67(d，J＝8.6Hz，2H)，4.61(dd，J＝7.5，4.8Hz，1H)，4.37(s，1H)，3.67(dd，J＝15.7，10.0Hz，4H)，3.37(dd，J＝10.9，6.1Hz，2H)，2.53(d，J＝23.4Hz，4H)，2.36(s，3H)，2.07-1.84(m，3H)。(R)-1-(4-((2-(4-甲基哌嗪-1-羰基)吡咯烷-1-基)磺酰基)苯基)-3-(4-(三氟甲基)苯基)脲(ZL0581)的合成。按照ZL0580的方法获得ZL0581(76mg，经历两步达到60％)。1HNMR(300MHz，MeOD)δ7.82(d，J＝8.7Hz，2H)，7.69(dd，J＝11.7，8.9Hz，4H)，7.59(d，J＝8.5Hz，2H)，4.70(dd，J＝7.9，4.7Hz，1H)，3.79-3.41(m，6H)，2.47(d，J＝20.7Hz，4H)，2.32(s，3H)，2.05(dd，J＝11.2，7.8Hz，1H)，1.94(dd，J＝12.4，6.3Hz，1H)，1.88-1.77(m，1H)，1.64(dt，J＝12.3，6.2Hz，1H).13CNMR(75MHz，MeOD)δ171.14，152.63，143.83，142.59，131.00，129.35，128.55，125.81，125.76，125.71，125.66，118.35，118.21，113.12，58.36，54.48，54.03，48.50，44.88，44.57，41.70，30.59，24.42。试剂和条件：(a)1-甲基哌嗪，HBTU，DIEA，DCM，室温，69％：(b)Zn，NH4Cl，EtOH/H2O，回流；(c)1-异氰酸基-4-(三氟甲基)苯，DCM，室温，经历两步达到17％.(S)-1-((4-硝基苯基)磺酰基)-N-(吡啶-2-基)吡咯烷-2-甲酰胺(ZL0575)的合成。按照ZL0573的方法得到ZL0575(85mg，69％)，为白色泡沫。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ9.15(s，1H)，8.36(d，J＝8.4Hz，2H)，8.28(d，J＝4.1Hz，1H)，8.11(dd，J＝14.0，8.6Hz，3H)，7.69(t，J＝7.6Hz，1H)，7.12-6.99(m，1H)，4.31(d，J＝4.8Hz，1H)，3.64(s，1H)，3.32(dd，J＝16.0，7.7Hz，1H)，2.23(d，J＝7.9Hz，1H)，1.89(t，J＝18.4Hz，2H)，1.77(dd，J＝10.7，4.2Hz，1H).13CNMR(75M【Hz，CDCl3)δ169.40，150.72，150.46，148.01，142.09，138.40，129.12，124.58，120.36，113.98，63.06，49.88，30.64，24.58。(S)-1-((4-氨基苯基)磺酰基)-N-(吡啶-2-基)吡咯烷-2-甲酰胺(ZL0579)的合成。按照ZL0576的方法获得ZL0579。(R)-N-(吡啶-2-基)-1-((4-(3-(4-(三氟甲基)苯基)脲基)苯基)磺酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(ZL0583)的合成。按照ZL0580的方法得到ZL0583(20mg，经历两步达到17％)，为白色固体。1HNMR(300MHz，MeOD)δ8.32(d，J＝4.2Hz，1H)，8.15(d，J＝8.3Hz，1H)，7.87(d，J＝8.8Hz，2H)，7.84-7.77(m，1H)，7.74(d，J＝8.8Hz，2H)，7.68(d，J＝8.7Hz，2H)，7.60(d，J＝8.8Hz，2H)，7.15(dd，J＝7.0，5.1Hz，1H)，4.32(dd，J＝7.9，4.0Hz，1H)，3.68-3.58(m，1H)，3.39-3.33(m，1H)，2.15-2.03(m，1H)，1.98-1.84(m，2H)，1.68(dd，J＝11.0，5.4Hz，1H).13CNMR(75MHz，MeOD)δ171.46，152.61，151.00，147.65，144.26，142.53，138.37，129.26，128.91，125.79，125.74，125.69，125.64，120.03，118.35，118.24，114.05，62.70，49.44，30.51，24.28。试剂和条件：(a)DCM，室温，41％.1-(2-氧代-1，2，3，4-四氢喹啉-6-基)-3-(4-(三氟甲基)苯基)脲(ZL0584)的合成。按照ZL0498的方法得到ZL0584(85mg，41％)，为白色固体。1HNMR(300MHz，DMSO-(d6)δ9.98(s，1H)，9.01(s，1H)，8.61(s，1H)，7.63(q，J＝9.0Hz，4H)，7.31(s，1H)，7.18(d，J＝7.2Hz，1H)，6.79(d，J＝8.4Hz，1H)，2.85(t，J＝7.4Hz，2H)，2.42(t，J＝7.4Hz，2H).13CNMR(75MHz，DMSO-d6)δ170.36，152.83，144.04，134.03，133.79，126.83，126.51，126.47，126.42，124.47，123.24，122.71，122.28，121.86，121.44，119.06，118.21，115.68，30.86，25.54。4-(1-((4-(三氟甲基)苯基)氨基甲酰基)哌啶-4-基)苯甲酸乙酯(ZL0587)的合成。按照ZL0498的方法得到ZL0587(63mg，72％)，为白色固体。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.01(s，1H)，7.81(d，J＝8.7Hz，2H)，7.71(d，J＝8.6Hz，2H)，7.59(d，J＝8.7Hz，2H)，7.02(d，J＝8.8Hz，2H)，4.24(q，J＝7.0Hz，2H)，3.63(d，J＝5.1Hz，4H)，3.39(s，4H)，1.29(t，J＝7.1Hz，3H).13CNMR(75MHz，DMSO-d6)δ166.13，155.01，154.09，144.78，131.14，126.88，126.14，126.10，126.05，126.00，123.28，122.36，121.94，119.43，119.18，113.94，60.36，46.95，43.75，14.76。6-(1-((4-(三氟甲基)苯基)氨基甲酰基)哌啶-4-基)烟酸乙酯(ZL0588)的合成。按照ZL0498的方法得到ZL0588(101mg，定量)，为白色固体。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.01(s，1H)，8.67(d，J＝2.0Hz，1H)，7.97(dd，J＝9.0，2.1Hz，1H)，7.71(d，J＝8.6Hz，2H)，7.59(d，J＝8.7Hz，2H)，6.91(d，J＝9.1Hz，1H)，4.26(q，J＝7.0Hz，2H)，3.73(d，J＝5.3Hz，4H)，3.61(d，J＝5.1Hz，4H)，1.29(t，J＝7.1Hz，3H).13CNMR(75MHz，DMSO-d6)δ165.50，160.66，155.02，150.63，144.77，138.50，126.04，119.44，114.65，106.30，60.53，44.33，43.72，14.70。4-(4-羟基苯基)-N-(4-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-甲酰胺(ZL0589)的合成。按照ZL0498的方法得到ZL0589(92mg，84％)，为白色固体。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.98(s，1H)，8.90(s，1H)，7.71(d，J＝8.5Hz，2H)，7.58(d，J＝8.6Hz，2H)，6.84(d，J＝8.7Hz，2H)，6.68(d，J＝8.6Hz，2H)，3.60(s，4H)，2.98(s，4H).13CNMR(75MHz，DMSO-d6)δ166.63，154.99，151.80，144.85，144.47，126.03，119.37，118.87，115.95，50.74，44.37。(S)-1-(4-((2-(吗啉代甲基)吡咯烷-1-基)磺酰基)苯基)-3-(4-(三氟甲基)苯基)脲(ZL0590)的合成。向5mLCH3CN中的(S)-(1-((4-(3-(4-(三氟甲基)苯基)脲基)苯基)磺酰基)吡咯烷-2-基)甲基4-甲基苯磺酸酯(50mg，0.1mmol)溶液中加入K2CO3(41mg，0.3mmol)。将混合物在50℃下搅拌过夜。然后将混合物倒入H2O中并用DCM对其进行萃取。将有机层用饱和NaHCO3(水溶液)、盐水洗涤，并经无水Na2SO4干燥。蒸发所得溶液，并通过PTLC(DCM/MeOH＝50∶1)纯化残余物，以得到所需的产物(29mg，57％)，为白色固体。1HNMR(300MHz，MeOD)δ7.80(d，J＝8.8Hz，2H)，7.71(d，J＝8.5Hz，2H)，7.67(d，J＝8.9Hz，2H)，7.59(d，J＝8.7Hz，2H)，3.79(d，J＝4.9Hz，1H)，3.73-3.63(m，4H)，3.38(d，J＝7.6Hz，1H)，3.24-3.14(m，1H)，2.70-2.24(m，7H)，1.84(d，J＝5.6Hz，2H)，1.66-1.48(m，2H).13CNMR(75MHz，MeOD)δ152.68，143.72，142.57，130.40，128.62，128.52，126.25，125.79，125.74，125.69，124.69，124.26，123.83，123.40，122.67，118.33，118.18，66.51，63.38，57.69，54.06，48.76，29.47，23.47。试剂和条件：(a)哌啶-4-醇，K2CO3，CH3CN，50℃，34％.(S)-1-(4-((2-((4-羟基哌啶-1-基)甲基)吡咯烷-1-基)磺酰基)苯基)-3-(4-(三氟甲基)苯基)脲的合成(ZL0491)。按照ZL0590的方法合成ZL0591(18mg，34％)，为白色固体。1HNMR(300MHz，MeOD)δ7.81(d，J＝8.7Hz，2H)，7.70(dd，J＝12.6，8.9Hz，4H)，7.60(d，J＝8.7Hz，2H)，3.78(s，1H)，3.70-3.58(m，1H)，3.37(d，J＝4.4Hz，1H)，3.25-3.14(m，1H)，3.02-2.83(m，2H)，2.69(dd，J＝12.6，3.8Hz，1H)，2.39(ddd，J＝38.3，19.0，9.8Hz，3H)，1.94-1.76(m，4H)，1.60(dd，J＝18.1，9.0Hz，4H).13CNMR(75MHz，MeOD)δ152.71，143.77，142.57，130.31，128.52，126.25，125.78，125.73，125.68，125.63，124.70，124.27，123.84，123.41，122.66，118.33，118.19，66.84，62.85，57.99，52.18，51.19，48.72，33.50，33.40，29.70，23.44。试剂和条件：(a)哌啶，K2CO3，Nal，Et3N，CH3CN，75℃，73％.(S)-1-(4-((2-(吗啉代甲基)吡咯烷-1-基)磺酰基)苯基)-3-(4-(三氟甲基)苯基)脲(ZL0742)的合成。向5mLCH3CN中的ZL0586(58mg，0.1mmol)溶液中加入K2CO3(41mg，0.3mmol)和哌啶(17mg，0.2mmol)。将混合物在50℃下搅拌过夜。无反应发生。然后加入NaI(7.5mg，0.05mmol)和两滴Et3N，并使混合物在N2下回流过夜。然后将混合物倒入H2O中并用DCM对其进行萃取。将有机层用饱和NaHCO3(水溶液)、盐水洗涤，并经无水Na2SO4干燥。蒸发所得溶液，并通过PTLC(DCM/MeOH＝50∶1)纯化残余物以得到所需产物(30mg，73％)，为黄色油状物，且回收10mgZL0586。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ8.90(s，1H)，8.73(s，1H)，7.66(s，4H)，7.60(d，J＝8.5Hz，2H)，7.49(d，J＝8.7Hz，2H)，3.75(d，J＝6.9Hz，1H)，3.39(dd，J＝6.5，3.0Hz，1H)，3.11(d，J＝7.8Hz，1H)，2.54(dtd，J＝19.9，12.7，4.5Hz，6H)，1.80(dd，J＝10.5，5.4Hz，2H)，1.66-1.51(m，6H)，1.46(d，J＝5.1Hz，2H).13CNMR(75MHz，CDCl3)δ152.50，144.13，141.96，129.30，128.59，126.20，126.15，126.10，126.05，124.97，124.53，122.43，118.75，118.62，63.71，58.03，55.48，49.33，29.75，25.62，23.88，23.78。试剂和条件：(a)DIPEA，DCM，0-25℃，79％：(b)Zn，NH4Cl，EtOH/H2O，80℃，97％；(c)1-异氰酸基-4-(三氟甲基)苯，DCM，室温，97％.((4-(3-(4-(三氟甲基)苯基)脲基)苯基)磺酰基)-D-脯氨酸乙酯(ZL0785)的合成。按照ZL0392的方法得到ZL0785(160mg，97％)，为白色泡沫。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ8.05(s，1H)，8.00(s，1H)，7.77(d，J＝8.8Hz，2H)，7.65-7.57(m，4H)，7.53(d，J＝8.8Hz，2H)，4.25(dd，J＝7.9，4.9Hz，1H)，4.15(dd，J＝14.9，7.7Hz，2H)，3.51(dt，J＝9.3，6.1Hz，1H)，3.29-3.18(m，1H)，2.08-1.92(m，3H)，1.74(dt，J＝12.4，5.7Hz，1H)，1.25(t，J＝7.1Hz，3H).13CNMR(75MHz，CDCl3)δ172.54，152.13，143.93，141.66，130.05，128.60，126.15，126.10，125.97，125.31，124.88，122.38，119.03，118.97，61.83，60.85，48.71，30.94，24.64，14.04。试剂和条件：(a)DIPEA，DCM，0-25℃，93％；(b)zn，NH4Cl，EtOH/H2O，80℃，87％；(c)1-异氰酸基-4-(三氟甲基)苯，DCM，室温，定量((2-甲氧基-4-(3-(4-(三氟甲基)苯基)脲基)苯基)磺酰基)-L-脯氨酸甲酯(ZL0789)的合成。按照ZL0392的方法得到ZL0789(150mg，定量)，为黄色固体。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ8.12(s，1H)，8.01(s，1H)，7.77(t，J＝5.5Hz，2H)，7.64(d，J＝8.6Hz，2H)，7.55(d，J＝8.8Hz，2H)，6.79(dd，J＝8.7，1.8Hz，1H)，4.65(dd，J＝8.1，4.1Hz，1H)，3.90(s，3H)，3.67(s，3H)，3.61-3.51(m，1H)，3.26-3.16(m，1H)，2.21-1.99(m，3H)，1.91-1.79(m，1H).13CNMR(75MHz，CDCl3)δ173.32，157.76，152.18，146.24，141.86，132.38，126.20，126.16，126.11，126.06，125.56，125.13，124.70，124.27，122.46，118.96，118.08，110.00，102.26，61.26，56.09，52.57，48.12，30.78，24.86。试剂和条件：(a)DIPEA，DCM，0-25℃，90％；(b)Zn，NH4Cl，EtOH/H2O，80℃，88％；(c)1-异氰酸基-4-(三氟甲基)苯，DCM，室温，66％.((3-氟-4-(3-(4-(三氟甲基)苯基)脲基)苯基)磺酰基)-L-脯氨酸甲酯(ZL0791)的合成。按照ZL0392的方法得到ZL0791(96mg，66％)，为灰白色固体。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ8.52(dd，J＝8.7，7.9Hz，1H)，8.13(s，1H)，7.94(d，J＝3.5Hz，1H)，7.64(dd，J＝9.4，6.2Hz，4H)，7.55(d，J＝8.8Hz，2H)，4.31(dd，J＝7.8，4.6Hz，1H)，3.73(s，3H)，3.54(dt，J＝9.2，6.0Hz，1H)，3.29(dt，J＝9.1，7.1Hz，1H)，2.13-1.94(m，3H)，1.82(dd，J＝11.6，6.6Hz，1H).13CNMR(75MHz，CDCl3)δ172.79，152.82，151.69，149.55，141.37，132.51，132.38，130.53，130.45，126.26，126.21，125.96，125.50，125.07，124.63，124.38，124.35，122.36，120.55，118.99，114.49，114.19，60.71，52.71，48.69，30.94，24.64。试剂和条件：(a)吡咯烷，Et3N，CH3CN，90℃，37％.(S)-1-(4-((2-(吡咯烷-1-基甲基)吡咯烷-1-基)磺酰基)苯基)-3-(4-(三氟甲基)苯基)脲(ZL0806)的合成。按照ZL0742的方法得到ZL0806(18mg，37％)，为黄色油状物。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ8.90(s，1H)，8.70(s，1H)，7.72-7.54(m，6H)，7.49(d，J＝8.5Hz，2H)，3.74(s，1H)，3.55(d，J＝14.2Hz，1H)，3.37(s，1H)，3.14(dd，J＝15.4，8.4Hz，1H)，2.81-2.69(m，5H)，1.82(s，6H)，1.62-1.47(m，2H).13CNMR(75MHz，CDCl3)δ152.48，144.11，141.92，129.35，128.60，126.20，126.15，126.10，126.05，126.02，125.43，125.00，124.56，124.13，122.42，118.73，118.58，61.24，59.05，54.98，49.23，29.76，23.93，23.44。试剂和条件：(a)HBTU，DIEA，DCM，室温，定量(S)-4-(1-((4-(3-(4-(三氟甲基)苯基)脲基)苯基)磺酰基)吡咯烷-2-甲酰胺基)苯基乙酸酯(ZL0858)的合成。按照ZL07100的方法得到ZL0858(59mg，定量)，为白色粉末。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ10.00(s，1H)，9.31(d，J＝20.4Hz，2H)，7.81(d，J＝7.9Hz，2H)，7.74-7.61(m，8H)，7.13-7.04(m，2H)，4.18(d，J＝7.3Hz，1H)，3.48(s，1H)，3.23(s，1H)，2.68(d，J＝2.0Hz，1H)，2.25(d，J＝3.3Hz，3H)，1.88(s，3H)，1.55(s，1H).13CNMR(75MHz，DMSO-d6)δ170.54，169.72，152.47，146.56，144.28，143.45，136.70，130.01，129.13，126.74，126.60，126.54，122.36，120.95，118.64，118.44，62.33，49.59，31.51，24.76，21.25。试剂和条件：(a)DIPEA，DCM，0-25℃，89％；(b)Zn，NH4Cl，EtOH/H2O，80℃，68％；(c)1-异氰酸基-4-(三氟甲基)苯，DCM，室温，39％.(S)-1-(4-((2-((氨基氧基)羰基)吡咯烷-1-基)磺酰基)苯基)-3-(4-(三氟甲基)苯基)脲(ZL0889)的合成。按照ZL0848的方法得到ZL0889(90mg，39％)，为白色固体。1HNMR(300MHz，MeOD)δ7.84(d，J＝8.9Hz，2H)，7.78-7.71(m，2H)，7.68(d，J＝8.6Hz，2H)，7.61(d，J＝8.8Hz，2H)，4.08(dd，J＝8.1，3.9Hz，1H)，3.63-3.51(m，1H)，3.30-3.20(m，1H)，2.03-1.78(m，3H)，1.71-1.57(m，1H).13CNMR(75MHz，MeOD)δ176.32，152.65，144.14，142.52，129.41，129.41，128.76，126.22，125.76，125.71，125.66，125.61，124.75，124.32，123.89，123.46，122.64，118.34，118.21，62.04，49.31，30.68，24.11。试剂和条件：(a)哌啶-4-醇，K2CO3，DMF，50℃，73％.(S)-1-(4-((2-((4-羟基哌啶-1-基)甲基)吡咯烷-1-基)磺酰基)苯基)-3-(4-(三氟甲基)苯基)脲的合成(ZL0908)。按照ZL0590的方法得到ZL0908(180mg，73％)，为白色固体。1HNMR(300MHz，MeOD)δ7.81(d，J＝8.5Hz，2H)，7.75-7.64(m，4H)，7.60(d，J＝8.6Hz，2H)，3.81-3.70(m，1H)，3.62(dt，J＝9.4，4.9Hz，1H)，3.37(dd，J＝9.6，5.7Hz，1H)，3.23-3.12(m，1H)，2.89(ddt，J＝32.7，10.4，4.5Hz，2H)，2.66(dd，J＝12.6，3.8Hz，1H)，2.47-2.16(m，3H)，1.84(p，J＝6.1，5.1Hz，4H)，1.58(q，J＝11.5，7.9Hz，4H).13CNMR(75MHz，MeOD)δ152.68，143.69，142.54，130.37，128.49，126.22，125.76，125.72，125.67，125.62，124.70，124.27，123.83，123.40，122.64，118.32，118.17，67.10，62.97，58.14，52.25，51.24，48.69，33.65，33.54，29.73，23.44。试剂和条件：(a)吗啉，K2CO3，DMF，回流，过夜，65％.(R)-2-(4-(2-羟基-3-吗啉代丙氧基)-3，5-二甲基苯基)-5，7-二甲氧基-4H-色原烯-4-酮(ZL0912)的合成。按照ZL0513的方法得到ZL0912(76mg，65％)，为白色固体。1HNMR(300MHz，MeOD)δ7.42(d，J＝3.3Hz，2H)，6.55(d，J＝2.3Hz，1H)，6.41(s，1H)，6.34(d，J＝2.4Hz，1H)，4.14(dd，J＝7.7，4.6Hz，1H)，3.88(s，3H)，3.84(s，3H)，3.80(dd，J＝4.8，3.0Hz，2H)，3.74(t，J＝4.7Hz，3H)，3.67(t，J＝4.8Hz，1H)，3.33(t，J＝1.7Hz，1H)，2.61(td，J＝8.5，7.7，4.0Hz，5H)，2.29(s，6H).13CNMR(75MHz，MeOD)δ178.26，164.73，161.32，160.41，159.60，158.52，131.61，126.34，125.96，107.76，106.51，95.84，92.64，74.30，67.35，66.46，61.02，55.10，55.04，53.98，15.31。试剂和条件：(a)吡咯烷，K2CO3，DMF，回流，过夜，27％.(R)-2-(4-(2-羟基-3-(吡咯烷-1-基)丙氧基)-3，5-二甲基苯基)-5，7-二甲氧基-4H-色原烯-4-酮(ZL0913)的合成）。按照ZL0513的方法得到ZL0913(30mg，27％)，为白色固体。1HNMR(300MHz，MeOD)δ7.49(s，2H)，6.62(d，J＝2.3Hz，1H)，6.47(s，1H)，6.39(d，J＝2.3Hz，1H)，4.15(dd，J＝8.8，4.5Hz，1H)，3.97-3.75(m，9H)，2.88(dd，J＝12.6，4.2Hz，1H)，2.74(t，J＝6.2Hz，4H)，2.32(s，6H)，1.86(p，J＝3.1Hz，4H).13CNMR(75MHz，MeOD)δ178.34，164.82，161.44，160.46，159.69，158.56，131.64，126.40，126.05，107.80，106.56，95.89，92.67，74.53，68.94，58.68，55.11，55.06，54.28，22.90，15.29。试剂和条件：(a)4，4-二氟哌啶，K2CO3，DMF，回流，过夜，60％.(R)-2-(4-(3-(4，4-二氟哌啶-1-基)-2-羟基丙氧基)-3，5-二甲基苯基)-5，7-二甲氧基-4H-色原烯-4-酮的合成(ZL0914)。按照ZL0513的方法得到ZL0914(75mg，60％)，为白色固体。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.51(s，2H)，6.60-6.52(m，2H)，6.35(d，J＝2.3Hz，1H)，4.10(dd，J＝8.9，4.6Hz，1H)，3.92(d，J＝9.6Hz，6H)，3.84(d，J＝5.6Hz，2H)，2.85-2.75(m，2H)，2.65(td，J＝8.5，5.6Hz，4H)，2.35(s，6H)，2.12-1.95(m，4H).13CNMR(75MHz，CDCl3)δ177.51，163.93，160.84，160.54，159.84，158.09，131.57，126.98，126.70，124.81，121.61，118.41，109.18，108.44，96.10，92.78，77.26，74.08，66.75，59.51，56.35，55.73，50.42，50.35，50.28，34.35，34.04，33.74，16.49。试剂和条件：(a)三光气，甲苯，120℃，过夜，41％.((4-(3-(3-氯-4-(三氟甲基)苯基)脲基)苯基)磺酰基)-L-脯氨酸甲酯(ZL0924)的合成。在N2下，向5mL甲苯中的三光气(50mg，0.17mmol)溶液中加入3-氯-4-(三氟甲基)苯胺(98mg，0.5mmol)。在120℃下搅拌2h后，加入((4-氨基苯基)磺酰基)-L-脯氨酸甲酯(50mg，0.175mmol)。然后将溶液在120℃下搅拌过夜，然后浓缩。通过PTLC纯化残余物得到ZL0924(35mg，41％)，为白色固体。1HNMR(300MHz，MeOD)δ7.91(d，J＝2.1Hz，1H)，7.85-7.79(m，2H)，7.74-7.66(m，3H)，7.49(dd，J＝8.6，2.0Hz，1H)，4.26(dd，J＝8.0，4.0Hz，1H)，3.75(s，3H)，3.54-3.43(m，1H)，3.29(d，J＝2.8Hz，1H)，2.07-1.91(m，3H)，1.73(dd，J＝7.2，5.0Hz，1H).13CNMR(75MHz，MeOD)δ173.13，152.39，143.71，143.65，132.24，130.89，128.42，128.03，127.93，127.86，127.79，127.72，124.97，121.49，121.37，121.07，120.24，118.30，116.08，60.51，51.51，48.41，30.49，24.21。试剂和条件：(a)三光气，甲苯，120℃，过夜，44％.((4-(3-(4-羟基苯基)脲基)苯基)磺酰基)-L-脯氨酸甲酯(ZL0927)的合成。按照ZL0924的方法获得ZL0927(46mg，44％)。1HNMR(300MHz，MeOD)δ7.77(d，J＝8.8Hz，2H)，7.66(d，J＝8.9Hz，2H)，7.24(d，J＝8.8Hz，2H)，6.77(d，J＝8.8Hz，2H)，4.24(dd，J＝8.0，4.1Hz，1H)，3.74(s，3H)，3.53-3.43(m，1H)，3.32-3.22(m，1H)，1.98(dddt，J＝16.3，12.1，8.2，4.3Hz，3H)，1.72(td，J＝7.1，4.8Hz，1H).13CNMR(75MHz，MeOD)δ173.14，153.80，153.62，144.37，130.13，130.05，128.38，122.06，117.92，115.02，60.50，51.49，48.42，30.48，24.21。试剂和条件：(a)三光气，甲苯，120℃，过夜，定量((4-(3-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)脲基)苯基)磺酰基)-L-脯氨酸甲酯(ZL0928)的合成。按照ZL0924的方法获得ZL0928(183mg，定量)。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ8.64(d，J＝6.7Hz，1H)，8.38-8.30(m，1H)，8.21(q，J＝12.2，10.5Hz，2H)，7.77(d，J＝8.3Hz，2H)，7.65(d，J＝8.9Hz，3H)，4.35-4.20(m，1H)，3.72(s，3H)，3.53(dt，J＝12.1，6.0Hz，1H)，3.25(q，J＝7.9Hz，1H)，2.02(dh，J＝15.2，7.7Hz，3H)，1.84-1.69(m，1H).13CNMR(75MHz，CDCl3)δ173.04，151.96，151.87，151.79，143.79，143.74，142.01，141.55，141.08，140.37，138.35，130.10，128.62，126.37，126.30，123.46，121.03，119.84，119.00，118.94，60.73，52.76，48.75，30.91，24.65。试剂和条件：(a)三光气，甲苯，120℃，过夜，30％.((4-(3-(3-甲基-4-(三氟甲基)苯基)脲基)苯基)磺酰基)-L-脯氨酸甲酯(ZL0929)的合成。按照ZL0924的方法获得ZL0929(25mg，30％)。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.98(s，1H)，7.80(s，1H)，7.74(d，J＝8.4Hz，2H)，7.65(s，1H)，7.56(dd，J＝16.6，8.4Hz，3H)，7.18(d，J＝8.3Hz，1H)，4.26(t，J＝6.4Hz，1H)，3.72(s，3H)，3.50(dt，J＝11.7，5.6Hz，1H)，3.24(q，J＝7.8Hz，1H)，2.39(s，3H)，2.00(tt，J＝13.7，6.4Hz，3H)，1.75(d，J＝15.3Hz，1H).13CNMR(75MHz，CDCl3)δ172.94，152.60，143.90，136.13，132.50，131.48，130.09，129.38，128.98，128.60，126.04，123.00，122.41，118.83，117.52，117.44，60.65，52.61，48.66，30.87，24.61，18.58。hSAEC培养和诱导间充质细胞转换。通过用人端粒酶(hTERT)和细胞周期蛋白依赖激酶(CDK)-4逆转录病毒构建体感染原代人小气道上皮细胞(hSAEC)而建立的永生化hSAEC系是从UTSW的JohnMinna博士获得的。永生化的hSAEC在SAGM小气道上皮细胞生长培养基(Lonza，Walkersville，MD)中在潮湿的5％CO2气氛中生长。聚肌胞苷酸获得自Sigma(St.Louis，MO)，并以10μg/ml的浓度用于细胞培养。JQ1购自CaymanChemical(AnnArbor，Michigan)。BRD4抑制剂对聚肌胞苷酸诱导的先天免疫应答的体外功效。将hSAEC用一系列最终浓度为0.01nM至100μM的BRD4抑制剂预处理24小时，并在细胞培养物中加入10μg/ml的聚肌胞苷酸另外4小时，然后收获细胞。首先用PBS洗涤所收获的细胞两次，并使用酸性胍酚提取法(TriReagent；Sigma)提取总RNA。通过Q-RT-PCR对总RNA进行逆转录以进行基因表达分析。将BRD4抑制剂对聚肌胞苷酸诱导的NFκB基因和ISG基因表达的抑制作用与单独的聚肌胞苷酸的抑制作用进行比较，并获得每种处理的抑制百分比。为了与化合物比较，这些BRD4抑制剂对聚肌胞苷酸诱导的先天免疫应答的体外功效以这些化合物的IC50值来表示。定量实时PCR(Q-RT-PCR)。对于基因表达分析，使用SuperScriptIII在20μl反应混合物中逆转录1μgRNA。将1μlcDNA产物以1：2稀释，并在含有10μLSYBRGreenSupermix(Bio-Rad)和各0.4μM正向和反向基因特异性引物的20μL反应混合物中扩增2μL稀释产物。将反应混合物等分到Bio-Rad96孔透明PCR板中，并将板用Bio-RadMicrosealB膜密封，然后放入PCR机中。将板在iCycler(BioRad)中于95℃下变性90秒，然后经历40个如下循环：94℃持续15秒，60℃持续60秒、和72℃持续1分钟。对PCR产物进行熔解曲线分析以确保产生单一扩增产物。使用ΔΔCt方法计算基因表达的相对变化的定量，并表示为实验样品和对照样品之间的倍数变化。基于板的时间分辨荧光能量转移(TR-FRET)测定，以确定BRD4化合物与BRD2和BRD4的布罗莫结构域的结合能力。使用基于96孔板的商业TR-FRET测定试剂盒(CaymanChemical，AnnArbor，Michigan)，使用时间分辨荧光能量转移(TR-FRET)测定，并使用两种重组BRD4BD，来测定所测试的BRD4抑制剂对BRD4布罗莫结构域(BD)的结合能力。BRD4抑制剂的一系列浓度为0.01nM纳米至100μM，持续24小时，并加入96孔板中，根据供应商的说明与其他反应组分混合，然后在室温下孵育1小时。将市售的BRD抑制剂JQ1用作阳性对照。通过在340nm处激发样品并读取620nm和670nm处的发射，在TecanM1000pro读取器中使用100μs延迟和500μs窗口，并以时间分辨格式来对板进行读取。TR-FRET比率(670nm发射/620nm发射)相对于半对数轴上的抑制剂浓度的变化图表呈现出竞争性测定的典型S形剂量-响应曲线。这些数据进一步计算出所测试的BRD4抑制剂对BRD2和BRD4的布罗莫结构域的IC50值。BRD4抑制剂对急性聚肌胞苷酸暴露诱导的气道炎症的体内功效。根据NIH实验动物护理和使用指南进行动物实验，并由德克萨斯大学医学分会(UTMB)动物护理和使用委员会(批准号1312058)批准。雄性C57BL6/J小鼠(18周龄)购自TheJacksonLaboratory(BarHarbor，ME)并在无病原体的条件下圈养，自由获取食物和水。用或不用BRD4抑制剂(50mg/kg)腹膜内(IP)途径预处理C57BL/6小鼠。24小时后，通过IP途径给小鼠额外施用BRD4抑制剂，并用50μLPBS或50μLPBS+300μg聚肌胞苷酸鼻内刺激24小时。然后，处死小鼠以获得支气管肺泡灌洗液(BALF)，并收获肺以用于组织学检测并分离出总RNA。对于组织学检查，将全肺在25cmH2O压力下用10体积/体积％中性缓冲福尔马林通过气管插管灌注，并浸入福尔马林中至少24小时。在加工成石蜡块后，将肺切成5μm切片并使用H&E染色以评估小鼠的气道炎症。BRD4抑制剂对慢性聚肌胞苷酸处理诱导的小鼠肺纤维化模型的体内功效。根据NIH实验动物护理和使用指南进行动物实验，并由德克萨斯大学医学分会(UTMB)动物护理和使用委员会(批准号1312058)批准。雄性C57BL6/J小鼠(18周龄)购自TheJacksonLaboratory(BarHarbor，ME)并在无病原体的条件下圈养，自由获取食物和水。在轻度麻醉下，每隔一天向小鼠施加重复的聚肌胞苷酸攻击，总共施用15次(在50μLPBS中的500μg/剂量)。并行地，在聚肌胞苷酸攻击之前，用或不用BRD4抑制剂(50mg/kg体重，i.p.)预处理小鼠。在最后一次聚肌胞苷酸处理后12天，处死小鼠以获得支气管肺泡灌洗液(BALF)，并收获肺以用于组织学检查并分离出总RNA。对于组织学检查，将全肺在25cmH2O压力下用10体积/体积％中性缓冲福尔马林通过气管插管灌注，并浸入福尔马林中至少24小时。在加工成石蜡块后，将肺切成5μm切片并并使用MassonTrichrome或H&E染色以评估肺中的纤维化变化。评估肺纤维化水平。使用如所述的Ashcroft评分方法对肺纤维化进行分级。简而言之，为了确定每只小鼠肺的纤维化组织病理学评分，在100倍放大倍数下分别对整个左右纵向肺切片进行评分(评分范围为0至9)，并将评分合并(总评分范围为0至18)(33)。等级2、4、6和8是根据主要的组织学变化分配的中间等级，如果在该部分中存在针对(如所述的)两个不同等级描述的特征，则说明纤维化病变的进展性质。统计分析。在寻找时间差异时进行单因素方差分析(ANOVA)，然后进行图基事后检验以确定显著性。Mann-Whitney检验用于非参数数据。进行统计分析的所有数据为平均±标准差且来自n＝3次实验。P值<0.05被认为是显著的。B.结果设计和合成BRD4抑制剂。对BRD4布罗莫结构域的晶体结构的分析表明，乙酰化赖氨酸(KAc)结合袋由保守残基Asn140和Tyr97锚定，并被疏水性WPF壳和ZA环包围。通过利用经取代的氨基酚部分作为配体的极性头部、以二氮烯作为接头并以二氢喹啉-2(1H)-酮或N-环戊基苯磺酰胺作为结合尾部以配合BRD4BD1结构域，来设计新的BRD4抑制剂ZL0420和ZL0454(图1a中所示的化学结构)。如图1b和1c中所示，利用内部Cybertroni7-4770K3.5GHz工作站与AdvancedDrugDiscoverySuite进行的对接研究表明，这两种抑制剂可以很好地以类似的结合模式与BRD4BD1对接。两种化合物都可以通过酚环的羟基直接与Asn140相互作用，并通过水分子介导与Tyr97形成氢键。此外，它们尾部上的两个分子的苯环均可以与Trp81形成T形π-π相互作用，同时二氮烯接头通过水分子介导与Lys91相互作用。这两种抑制剂被WPF壳和来自ZA环的残留物夹在中间(图1d)，从而允许配体的强相互作用以及与蛋白质的高结合亲和力。已经进行了化合物ZL0420和ZL0454在急性DSS结肠炎的鼠模型中抑制结肠炎症的体内功效(图3至图5)。在急性DSS结肠炎的鼠模型中在结肠炎症开始期间，这两种化合物显著抑制了IL-6炎症反应(图3)。当DSS处理的动物接受BRD4抑制剂ZL0420和ZL0454的处理时，观察到结肠结构的部分正常化和淋巴细胞浸润的减少(图4)。观察到，在仅溶剂处理的对照中，聚肌胞苷酸诱导了在气道支气管肺泡灌洗(BALF)中的显著的中性白细胞增多症并且增强IL-6分泌(图5A和5B)。在组织学上，聚肌胞苷酸在肺组织中产生显著的中性粒细胞浸润(图5，中间图)。通过施用JQ1、ZL0420和ZL0454化合物，几乎完全抑制所有这些反应(图5A和图5B)。实施例2某些实施方案使用包封在纳米颗粒中的新型分子抑制剂以用于局部递送(经由气溶胶或吸入器)。基于纳米颗粒的BRD4抑制剂递送的优点包括通过雾化递送纳米包封的药物至气道可以减少全身暴露和所产生的副作用。与实现相同治疗反应所需的全身(静脉注射或经口)给药水平相比，将药物递送至作用部位还可以减少总体给药剂量。此外，从纳米颗粒中持续释放治疗化合物应该增加药物的总体半衰期，这可能降低给药频率。先前报道了对于负载沙丁胺醇的聚合物纳米颗粒通过雾化进行纳米颗粒递送(Rytting等人,ExpertOpiniononDrugDelivery,5:629-39,2008)。图6显示，根据模型，从纳米颗粒释放的药物保持其药理活性，以及从纳米颗粒体外释放药物的动力学与随时间推移对麻醉豚鼠乙酰胆碱诱导的支气管痉挛的持续保护之间的一致性(n＝6，平均值±标准差)。每10分钟以9μg/kg的剂量静脉内注射乙酰胆碱；在最初10分钟后，使用SoftMistTM吸入器以6μg/kg的剂量，通过雾化水性纳米颗粒悬浮液，一次施用负载沙丁胺醇的纳米颗粒。雾化前后的纳米颗粒特征(粒度、表面电荷和载药量)没有显著差异。表7.负载BRD4抑制剂的聚合物(PLGA)纳米颗粒的表征。本发明人已经成功地将特异性BRD4抑制剂ZL0420和ZL0454包封至可生物降解的(PEG化的)纳米颗粒中并进行了功效证明。通过改进的溶剂置换法将主要化合物ZL0420和ZL0454包封至聚合物纳米颗粒中。聚合物基质由聚(乳酸-co-乙醇酸)(PLGA)组成，这是一种已获得FDA批准的可生物降解和生物相容的聚合物。评估颗粒直径、包封效率和药物释放(表7)。ZL0420化合物的包封效率要高得多，但是两种化合物的包封效率对于功效测试来说是可接受的(表7)。在体外测试药物释放。两种化合物在3h内显示出初始突然释放，然后是更久的释放阶段(图7)。首先使用培养的人小气道上皮细胞(hSAEC)进行功效测试。首先用未包封的药物或纳米颗粒制剂预处理细胞，然后暴露于先天免疫应答刺激物聚肌胞苷酸。使用Q-RT-PCR测量聚肌胞苷酸诱导的BRD4依赖性基因的mRNA表达(图8)。与聚肌胞苷酸激活BRD4依赖性基因表达的有效作用相比，未包封的药物使表达降低至小于15％(图8)。空白纳米颗粒没有抑制效果。负载ZL0420的纳米颗粒和负载ZL0454的纳米颗粒均有效抑制BRD4依赖性基因表达，甚至比未包封的药物稍微更有效。这种差异可能是由于延长的释放或更有效的摄取。此外，我们确定了纳米颗粒制剂在急性聚肌胞苷酸诱导的气道中性粒细胞炎症的小鼠模型中的体内功效。在聚肌胞苷酸攻击之前，以不同剂量(0.08mg/kg、0.4mg/kg和2mg/kg，i.n.)将包封ZL0420的纳米颗粒施用于小鼠。我们观察到聚肌胞苷酸在引入后24h在中小型气道周围诱导了严重的中性粒细胞炎症(图9C)，该炎症均被0.4mg/kg和2mg/kg剂量的包封ZL0420的纳米颗粒有效抑制。通过包封ZL0420的纳米颗粒处理来抑制聚肌胞苷酸处理的小鼠的BALF中的白细胞数量(图9A，左图)。此外，暴露于聚肌胞苷酸的PBS处理的小鼠的BALF中增加的中性粒细胞数量在用包封ZL0420的纳米颗粒处理并暴露于聚肌胞苷酸的小鼠中降低(图9A，右图)。相应地，通过包封ZL0420的纳米颗粒处理有效阻断炎性细胞因子IL6和ISG56的聚肌胞苷酸诱导的mRNA表达(图9B)。含有BRD4抑制剂化合物的纳米颗粒制剂的其他改进包括将BRD4抑制剂包封在纳米颗粒中，该纳米颗粒包含另外的生物相容性聚合物、PEG化聚(乳酸-co-乙醇酸)(PEG-PLGA)，并且包括优化纳米颗粒合成和纯化程序以增加纳米颗粒稳定性。这种新一批纳米颗粒(PLGA和PEG-PLGA纳米颗粒制剂)在人小气道上皮细胞(hSAEC)中仍显示出体外治疗功效。用这组新的稳定的负载ZL0420的纳米颗粒(PLGA纳米颗粒的Z平均颗粒直径为102nm，PEG-PLGA纳米颗粒的Z平均颗粒直径为131nm)重复对应于图8的实验，图10显示两种类型的负载聚合物药物的纳米颗粒在减少聚肌胞苷酸诱导的炎性基因活化方面优于未包封的游离药物ZL0420。当前第1页1 2 3