使用依维莫司(everolimus)、达托里昔布(dactolisib)或二者增强免疫反应的方法与流程
本申请主张2016年11月23日提出申请的美国临时专利申请第62/425,766号、2017年3月24日提出申请的美国临时专利申请第62/476,160号和2017年10月24日提出申请的美国临时专利申请第62/576,511号的优先权权益，所述临时专利申请中之每一者的内容以引用方式并入本文中。
本发明涉及(a)rad001或其医药上可接受的盐；(b)bez235或其医药上可接受的盐；或(c)其组合，其用于同时、分开或依序用于促进和/或增强个体的免疫反应；包含此组合的医药组合物；促进和/或增强个体的免疫反应的方法，其包含向有需要的个体给予所述rad001或bez235或组合；其用于制备用于促进和/或增强个体的免疫反应的药剂的用途；和其商业包装。
背景技术：
mtor是在进化上保守的丝氨酸/苏氨酸激酶，其在整合呈生长因子、氨基酸和能量形式的环境因素方面起中心作用。在免疫系统的研究中，mtor由于其在感测和整合来自免疫微环境的因素中的作用而正成为免疫功能的关键性调控剂。随着对细胞代谢作为免疫细胞功能的重要调控者的更多了解，正在证明mtor为免疫功能与代谢之间的至关重要的联系。mtor具有引导适应性免疫反应的能力，例如促进t细胞、b细胞和抗原呈递细胞的分化、活化和功能。
技术实现要素：
在一方面中，本发明涉及一种方法，其包含向患者给予以下各项的步骤：(a)低剂量的rad001或其医药上可接受的盐；(b)低剂量的bez235或其医药上可接受的盐；或(c)其组合，其中较未给予rad001或其医药上可接受的盐、bez235或其医药上可接受的盐或其组合的患者，所述患者经历较少由感染所致的疾病。
在另一方面中，本发明涉及(a)rad001或其医药上可接受的盐；(b)bez235或其医药上可接受的盐；或(c)其组合，其用于同时、分开或依序用于促进和/或增强个体的免疫反应。
在一方面中，本发明提供医药组合物，其包含(a)rad001或其医药上可接受的盐；(b)bez235或其医药上可接受的盐；或(c)其组合。在一些实施例中，bez235或其医药上可接受的盐有效地促进和/或增强个体的免疫反应，例如先天性免疫。在一些实施例中，组合对促进和/或增强个体的免疫反应联合地治疗有效。
在一方面中，本发明提供促进和/或增强个体的免疫反应的方法，其包含向有需要的个体给予(a)rad001或其医药上可接受的盐；(b)bez235或其医药上可接受的盐；或(c)其组合，其量有效地促进和/或增强所述免疫反应。
在一方面中，本发明还提供治疗年龄相关病状的方法，其包含向有需要的个体给予有效量的(a)rad001或其医药上可接受的盐；(b)bez235或其医药上可接受的盐；或(c)其组合以治疗所述年龄相关病状。
在一方面中，本发明提供(a)rad001或其医药上可接受的盐；(b)bez235或其医药上可接受的盐；或(c)其组合的用途，其用于促进和/或增强个体的免疫反应，且用于制备用于促进和/或增强免疫反应的药剂。
在一方面中，本发明提供(a)rad001或其医药上可接受的盐；(b)bez235或其医药上可接受的盐；或(c)其组合的用途，其用于治疗个体的年龄相关病状。
在一方面中，本发明提供商业包装，其包含以下各项作为活性成分：(a)rad001或其医药上可接受的盐；(b)bez235或其医药上可接受的盐；或(c)其组合，以及关于其同时、分开或依序用于促进和/或增强个体的免疫反应的说明书。
在一方面中，本发明提供商业包装，其包含(a)rad001或其医药上可接受的盐和关于同时、分开或依序与(b)bez235或其医药上可接受的盐用于促进和/或增强个体的免疫反应的说明书。
附图说明
图1显示相对于安慰剂同类群组，在经rad001和/或bez235处理的同类群组中针对流行性感冒疫苗株的抗体效价增加。所示为相对于安慰剂同类群组，在经rad001和/或bez235处理的同类群组中针对3种流行性感冒疫苗株(a/h1n1[a/加利福尼亚(california)/7/2009]、a/h3n2[a/德克萨斯(texas)/50/2012]或b[b/马萨诸塞(massachusetts)/2/2012])中的每一者几何平均效价(gmt)的增加比率(疫苗接种后4周/基线)。黑色粗线指示相对于安慰剂，gmt增加1.2倍，此为3种流行性感冒疫苗株中的2种为符合研究的主要终点所需。星号指示相对于安慰剂，gmt的增加超过1.0的机率为100％。
图2显示bez235在单独或与rad001组合时在个体经研究药物治疗的6周期间降低呼吸道感染的发病率和严重程度。bez235在单独或与rad001组合时在个体经研究药物治疗的6周期间降低呼吸道感染的发病率和严重程度。(上图)显示个体经研究药物治疗的6周期间每一同类群组中报告患有一或多种呼吸道感染的个体百分比。(下图)显示个体经研究药物治疗的6周期间经历中等严重程度的呼吸道感染的个体百分比。本研究中无个体经历评价为严重的呼吸道感染。每一柱条顶部上的数字指示相对于安慰剂的百分比变化。
图3显示bez235和rad001+bez235使得免疫系统和干扰素诱导的基因表达上调，但安慰剂治疗则不。显示在6周的研究药物治疗之前相对于之后的全血中基因表达变化的路径富集分析。此分析揭示在bez235单一疗法和bez235+rad001组合同类群组中与免疫系统和干扰素信号传导相关的路径高度显著富集，但在安慰剂同类群组中则不。x轴指示每一路径中的基因表达的平均log2倍数变化。y轴指示路径上调的p值的-log10，其中大于6的值指示统计学显著性，其中庞费洛尼(bonferroni)错误发现率小于0.05。每一点代表特定的生物学路径。
图4显示bez235在10mg以上的剂量下具有不可接受的高pk变异性。显示剂量(mg)对auclast。每一点代表每一同类群组中的每一个别患者在投用的第1天或第8天的bez235auclast。
图5显示bez235在单独或与rad001组合时上调细胞外基质重塑蛋白。
具体实施方式
在一方面中，本发明涉及(a)rad001或其医药上可接受的盐；(b)bez235或其医药上可接受的盐；或(c)其组合。在另一方面中，本发明提供促进和/或增强个体的免疫反应的方法，其包含通过同时、分开或依序给予向所述个体给予有效量的(a)rad001或其医药上可接受的盐；(b)bez235或其医药上可接受的盐；或(c)其组合。
除非另有明确说明，否则本文中所使用的一般术语定义为以下含义：
除非另有说明，否则术语“包含(comprising)”和“包括(including)”在本文中是以其开放性且非限制性的意义使用。
除非本文中另有指示或上下文明显矛盾，否则在阐述本发明的上下文(尤其在下文权利要求书的上下文)中的术语“一(a和an)”和“所述(the)”和类似指示物均应解释为涵盖单数和复数二者。如果化合物、盐和诸如此类以复数形式使用，则此还意指单一化合物、盐或诸如此类。
术语“组合”或“医药组合”在本文中定义为涉及用于组合给予的呈一种剂量单位形式的固定组合、非固定组合或多个部分的试剂盒，其中rad001或其医药上可接受的盐和bez235或其医药上可接受的盐可同时独立地给予或在时间间隔内分开给予，所述时间间隔容许所述组合配偶体显示协作(例如协同)效应。
术语“固定组合”意指将活性成分或治疗剂(例如rad001和bez235)以单一实体或剂型的形式同时给予患者。
术语“非固定组合”意指将活性成分或治疗剂(例如rad001和bez235)作为分开实体或剂型皆同时、并行或依序(无具体时间限制)给予患者，其中此给予在有需要的个体(例如，哺乳动物或人类)的体内提供所述两种化合物的治疗有效含量。
术语“医药组合物”在本文中定义为涉及欲给予个体(例如，哺乳动物或人类)以治疗影响所述个体的具体疾病或病状的含有至少一种治疗剂的混合物或溶液。
术语“医药上可接受”在本文中定义为涉及在合理的医学判断范围内适于与个体(例如，哺乳动物或人类)的组织接触，无过度毒性、刺激性、过敏反应和其它问题并发症，与合理益处/风险比相称的所述化合物、生物剂、材料、组合物和/或剂型。
如本文中所使用的术语“组合给予”定义为涵盖向单一个体(例如，哺乳动物或人类)给予所选择的治疗剂，且打算包括其中所述药剂无需以相同给予途经或同时给予的治疗方案。
如本文中所使用的术语“治疗(treating或treatment)”包含减轻、减少或缓解个体的至少一种症状或影响疾病、病状和/或病症进展延迟的治疗。举例来说，治疗可为降低病症的一或若干种症状或完全根除病症。在本发明的含义内，术语“治疗”还表示阻止、延迟发作(即，疾病的临床表现前的时期)和/或降低疾病发生或恶化的风险。
如本文中所使用的术语“联合治疗活性”或“联合治疗效应”意指治疗剂可分开(以按时间顺序交错的方式，例如以顺序特定方式)给与，使得待治疗的温血动物(例如，人类)仍显示相互作用(例如协同相互作用(联合治疗效应))。无论何种情形均尤其可通过跟踪血液浓度来测定，此显示所述两种治疗剂至少在某些时间间隔期间均存在于待治疗人类的血液中。
治疗剂的“有效量”、“医药上有效量”或“治疗有效量”为免疫反应的促进和/或增强足以提供相对于基线临床上可观察到的征象和症状的可观察到的改良的量。
如本文中所使用的术语“协同效应”涉及两种药剂(例如(a)rad001或其医药上可接受的盐和(b)bez235或其医药上可接受的盐)产生效应(例如促进和/或增强个体的免疫反应)的作用，所述效应大于所给予每一药物自身的效应的简单相加。可使用(例如)适宜方法计算协同效应，所述方法为(例如)s形emax方程(霍尔福德n.h.g.(holford,n.h.g.)及施耐纳l.b.(scheiner,l.b.)，临床药物动力学(clin.pharmacokinet.)6:429-453(1981))、洛艾维加性方程(equationofloeweadditivity)(洛艾维s.及穆伊思切克(muischnek,h.)，实验病理学药理学文献(arch.exp.patholpharmacol.)114:313-326(1926))及中值效应方程(周t.c.(chou,t.c.)及特拉蕾p.(talalay,p.)，酶调节进展(adv.enzymeregul.)22:27-55(1984))。可将上文所提及的每一方程应用于实验数据以产生相应图表来帮助评价药物组合的效应。与以上所提及的方程相关的相应图表分别为浓度-效应曲线、等效线图曲线和组合指数曲线。
如本文中所使用的术语“个体”或“患者”包括动物，其能够促进和/或增强免疫反应和/或患有年龄相关病状。个体的实例包括哺乳动物，例如人类、狗、牛、马、猪、绵羊、山羊、猫、小鼠、兔、大鼠和转基因非人类动物。在一些实施例中，个体为人类，例如罹患年龄相关病状、处于罹患年龄相关病状风险或潜在可能罹患年龄相关病状的人类。
术语“约”或“大约”应具有在既定值或范围的10％内、例如在5％内的含义。
在免疫反应的情形下，术语“促进”或“增强”涉及免疫反应的增加，尤其例如免疫细胞靶向和/或杀死癌细胞、靶向和/或杀死病原体和受病原体感染的细胞的能力以及疫苗接种后保护性免疫增加。在一些实施例中，保护性免疫涉及存在足够的免疫反应(例如抗体效价)以保护免于表达相同抗原的病原体的后续感染或保护免于新的病原体的感染。
术语“免疫衰老(immunosenescence或immunosenescent)”涉及免疫功能降低，从而导致(例如)尤其对癌症、疫苗接种、传染性病原体的免疫反应受损。其涉及宿主对感染的反应能力和尤其因疫苗接种所产生的长期免疫记忆二者。此免疫缺失普遍存在，且发现于长寿命和短寿命物种二者中，其随物种年龄相对于预期寿命而非时序时间而变化。其视为老年人发病率和死亡率频率增加的主要促成因素。免疫衰老并非随机的恶化现象，而是其似乎反向地重复进化模式，且受免疫衰老影响的大部分参数似乎处于遗传控制之下。有时还可将免疫衰老设想为不可避免地暴露于各种抗原(例如病毒和细菌)的连续攻击的结果。
免疫衰老是导致许多病理上显著的健康问题(例如，在老年群体中)的多因素病状。诸如造血干细胞的功能下降、pd1+淋巴细胞增加、吞噬细胞、巨噬细胞、树突细胞、单核细胞、t细胞、b细胞和nk细胞的功能下降和先天性细胞介导的免疫或体液性免疫下降的年龄依赖性生物学变化促成免疫衰老的发生。在一方面中，可通过测量免疫细胞中的端粒长度来测量个体的免疫衰老(例如，参见us5,741,677)。免疫衰老还可通过在个体中记录以下各项来测定：原始cd4和/或cd8t细胞低于正常的数量、早期祖b细胞和前b细胞的减少、t和b细胞库的减少、表达pd1的t细胞数量的增加(例如pd-1阴性t细胞的低于正常的数量)、cd8+cd28negt细胞的增加、cd57+和/或klrg1+cd8+t细胞的增加、lag-3阳性t细胞数量的增加、t细胞表面糖蛋白的变化、抗体糖基化的变化、细胞内或在免疫细胞的表面上所表达蛋白质的糖基化的变化、表达icos、ctla-4、tim-3和/或lag-3的cd4t细胞的增加或衰老个体中对疫苗接种的反应降低。
术语“受损的免疫反应”涉及其中个体尤其对(例如)癌症、疫苗接种、病原体感染不具有适当免疫反应的状态。在一些实施例中，预测具有受损的免疫反应的个体在预防性疫苗接种后未获得保护性抗体效价值，或其中个体在治疗性疫苗接种后细胞介导的免疫或疾病负担不下降。如果个体的先天性免疫反应基因的表达受损，则所述个体还可具有受损的免疫反应。如果个体为已知具有降低的免疫功能或具有降低的免疫功能史的群体成员，例如老年人、经历化学疗法治疗的个体、无脾个体、免疫受损个体或患有hiv/aids的个体，则所述个体还可具有受损的免疫反应。本文中所阐述的方法容许通过给予低的增强免疫剂量的mtor抑制剂(例如，别位mtor抑制剂(例如rad001))来治疗受损的免疫反应。
术语“低的增强免疫剂量”在与mtor抑制剂(例如别位mtor抑制剂，例如rad001或雷帕霉素(rapamycin)，或催化性mtor抑制剂)结合使用时涉及部分地但非完全抑制mtor活性的mtor抑制剂的剂量，例如如通过抑制p70s6激酶活性所测量。例如通过抑制p70s6激酶评估mtor活性的方法论述于本文中。所述剂量不足以产生完全免疫阻抑，但足以增强免疫反应。在实施例中，低的增强免疫剂量的mtor抑制剂会使pd-1阳性t细胞的数量或百分比降低和/或使pd-1阴性t细胞的数量或百分比增加或使pd-1阴性t细胞/pd-1阳性t细胞的比率增加。在实施例中，低的增强免疫剂量的mtor抑制剂会使原始t细胞的数量增加。在实施例中，低的增强免疫剂量的mtor抑制剂会产生以下中的一或多者：
血细胞中干扰素诱导的基因表达增加
表达标记物lag-3、ctla-4、icos或tim-3的t细胞百分比降低；
以下标记物中的一或多者在(例如)记忆t细胞(例如，记忆t细胞前体)上的表达增加：cd62l高、cd127高、cd27+和bcl2；
klrg1或cd57在(例如)原始或记忆t细胞(例如，记忆t细胞前体)上的表达降低；且
记忆t细胞前体的数量增加，所述记忆t细胞前体是例如具有以下特征中的任一者或所述特征的组合的细胞：cd62l高增加、cd127高增加、cd27+增加、klrg1降低和bcl2增加；
其中例如与未经治疗的个体相比，上文所阐述的任一变化例如至少瞬时出现。
在实施例中，mtor抑制剂的剂量与以下程度的mtor抑制相关或提供以下程度的mtor抑制：至少5％但不超过90％、至少10％但不超过90％、至少15％但不超过90％、至少20％但不超过90％、至少30％但不超过90％、至少40％但不超过90％、至少50％但不超过90％、至少60％但不超过90％或至少70％但不超过90％。
在实施例中，mtor抑制剂的剂量与以下程度的mtor抑制相关或提供以下程度的mtor抑制：至少5％但不超过80％、至少10％但不超过80％、至少15％但不超过80％、至少20％但不超过80％、至少30％但不超过80％、至少40％但不超过80％、至少50％但不超过80％或至少60％但不超过80％。
在实施例中，mtor抑制剂的剂量与以下程度的mtor抑制相关或提供以下程度的mtor抑制：至少5％但不超过70％、至少10％但不超过70％、至少15％但不超过70％、至少20％但不超过70％、至少30％但不超过70％、至少40％但不超过70％或至少50％但不超过70％。
在实施例中，mtor抑制剂的剂量与以下程度的mtor抑制相关或提供以下程度的mtor抑制：至少5％但不超过60％、至少10％但不超过60％、至少15％但不超过60％、至少20％但不超过60％、至少30％但不超过60％或至少40％但不超过60％。
在实施例中，mtor抑制剂的剂量与以下程度的mtor抑制相关或提供以下程度的mtor抑制：至少5％但不超过50％、至少10％但不超过50％、至少15％但不超过50％、至少20％但不超过50％、至少30％但不超过50％或至少40％但不超过50％。
在实施例中，mtor抑制剂的剂量与以下程度的mtor抑制相关或提供以下程度的mtor抑制：至少5％但不超过40％、至少10％但不超过40％、至少15％但不超过40％、至少20％但不超过40％、至少30％但不超过40％或至少35％但不超过40％。
在实施例中，mtor抑制剂的剂量与以下程度的mtor抑制相关或提供以下程度的mtor抑制：至少5％但不超过30％、至少10％但不超过30％、至少15％但不超过30％、至少20％但不超过30％或至少25％但不超过30％。
在实施例中，mtor抑制剂的剂量与以下程度的mtor抑制相关或提供以下程度的mtor抑制：至少1％、2％、3％、4或5％但不超过20％、至少1％、2％、3％、4％或5％但不超过30％、至少1％、2％、3％、4％或5％但不超过35％、至少1％、2％、3％、4％或5％但不超过40％或至少1％、2％、3％、4％或5％但不超过45％。
在实施例中，mtor抑制剂的剂量与以下程度的mtor抑制相关或提供以下程度的mtor抑制：至少1％、2％、3％、4％或5％但不超过90％。
如本文中所论述，mtor抑制的程度可表示为p70s6k抑制的程度，例如mtor抑制的程度可通过p70s6k活性的降低量、例如通过p70s6k底物的磷酸化降低来确定。mtor抑制的水平可通过本文中所阐述的方法来评估，例如通过布雷(boulay)分析。
在免疫反应的情形下，术语“促进”或“增强”涉及免疫反应的增加，尤其例如免疫细胞靶向和/或杀死癌细胞、靶向和/或杀死病原体和受病原体感染的细胞的能力以及疫苗接种后保护性免疫增加。在一些实施例中，保护性免疫涉及存在足够的免疫反应(例如抗体效价)以保护免于表达相同抗原的病原体的后续感染。
mtor抑制剂
如本文中所使用，术语“mtor抑制剂”涉及抑制细胞中的mtor激酶的化合物或配体或其医药上可接受的盐。在实施例中，mtor抑制剂为别位抑制剂。在实施例中，mtor抑制剂为催化性抑制剂。
别位mtor抑制剂包括中性三环化合物雷帕霉素(西罗莫司(sirolimus))；雷帕霉素相关化合物，其为与雷帕霉素具有结构和功能相似性的化合物，包括(例如)抑制mtor活性的雷帕霉素衍生物、雷帕霉素类似物(还称为雷帕霉素类似物(rapalog))和其它巨环内酯化合物。
雷帕霉素是由吸水链霉菌(streptomyceshygroscopicus)产生的已知巨环内酯抗生素，其具有式a中所显示的结构。
例如参见麦卡尔平j.b.(mcalpine,j.b.)等人，抗生素期刊(j.antibiotics)(1991)44:688；施雷伯s.l.(schreiber,s.l.)等人，美国化学学会期刊(j.am.chem.soc.)(1991)113:7433；美国专利第3,929,992号。针对雷帕霉素提出各种编号方案。为避免混淆，当在本文中命名特定雷帕霉素类似物时，关于雷帕霉素的名称是使用式a的编号方案给出。
可用于本发明中的雷帕霉素类似物为(例如)o-取代类似物，其中雷帕霉素的环己基环上的羟基由or1替代，其中r1为羟基烷基、羟基烷氧基烷基、酰基氨基烷基或氨基烷基；例如rad001，还称为依维莫司(everolimus)，如us5,665,772和wo94/09010中所阐述，所述专利的内容以引用的方式并入。其它适宜雷帕霉素类似物包括在26或28位置处经取代者。雷帕霉素类似物可为上文所提及类似物的差向异构物，具体来说在位置40、28或26中经取代的类似物的差向异构物，且可任选地进一步氢化，例如如us6,015,815、wo95/14023和wo99/15530中所阐述，所述专利的内容以引用的方式并入，例如abt578(还称为咗他莫司(zotarolimus))或us7,091,213、wo98/02441和wo01/14387中所阐述的雷帕霉素类似物，所述专利的内容以引用的方式并入，例如ap23573，还称为瑞达福罗莫司(ridaforolimus)。
来自us5,665,772的适用于本发明的雷帕霉素类似物的实例包括(但不限于)40-o-苄基-雷帕霉素、40-o-(4’-羟基甲基)苄基-雷帕霉素、40-o-[4’-(1,2-二羟基乙基)]苄基-雷帕霉素、40-o-烯丙基-雷帕霉素、40-o-[3’-(2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4(s)-基)-丙-2’-烯-1’-基]-雷帕霉素、(2’e,4’s)-40-o-(4’,5’-二羟基戊-2’-烯-1’-基)-雷帕霉素、40-o-(2-羟基)乙氧基羰基甲基-雷帕霉素、40-o-(2-羟基)乙基-雷帕霉素、40-o-(3-羟基)丙基-雷帕霉素、40-o-(6-羟基)己基-雷帕霉素、40-o-[2-(2-羟基)乙氧基]乙基-雷帕霉素、40-o-[(3s)-2,2-二甲基二氧戊环-3-基]甲基-雷帕霉素、40-o-[(2s)-2,3-二羟基丙-1-基]-雷帕霉素、40-o-(2-乙酰氧基)乙基-雷帕霉素、40-o-(2-烟酰基氧基)乙基-雷帕霉素、40-o-[2-(n-吗啉基)乙酰氧基]乙基-雷帕霉素、40-o-(2-n-咪唑基乙酰氧基)乙基-雷帕霉素、40-o-[2-(n-甲基-n’-哌嗪基)乙酰氧基]乙基-雷帕霉素、39-o-脱甲基-39,40-o,o-亚乙基-雷帕霉素、(26r)-26-二氢-40-o-(2-羟基)乙基-雷帕霉素、40-o-(2-氨基乙基)-雷帕霉素、40-o-(2-乙酰氨基乙基)-雷帕霉素、40-o-(2-烟碱酰氨基乙基)-雷帕霉素、40-o-(2-(n-甲基-咪唑并-2’-基乙氧基甲酰氨基(carbethoxamido))乙基)-雷帕霉素、40-o-(2-乙氧基羰基氨基乙基)-雷帕霉素、40-o-(2-甲苯基磺酰氨基乙基)-雷帕霉素和40-o-[2-(4’,5’-二羰乙氧基-1’,2’,3’-三唑-1’-基)-乙基]-雷帕霉素。
可用于本发明中的其它雷帕霉素类似物是其中雷帕霉素的环己基环上的羟基和/或28位置处的羟基经羟基酯基团替代的类似物，例如于usre44,768中发现的雷帕霉素类似物，例如替西罗莫司(temsirolimus)。
可用于本发明中的其它雷帕霉素类似物包括以下所述：其中16位置处的甲氧基经另一取代基、例如(任选地经羟基取代)炔基氧基、苄基、邻甲氧基苄基或氯苄基替代和/或其中39位置处的甲氧基与39碳一起缺失，以使得雷帕霉素的环己基环变成缺少39位甲氧基的环戊基环；例如如wo95/16691和wo96/41807中所阐述，所述专利的内容以引用的方式并入。所述类似物可进一步经修饰，使得雷帕霉素的40位置处的羟基经烷基化和/或32-羰基经还原。
来自wo95/16691的雷帕霉素类似物包括(但不限于)16-脱甲氧基-16-(戊-2-炔基)氧基-雷帕霉素、16-脱甲氧基-16-(丁-2-炔基)氧基-雷帕霉素、16-脱甲氧基-16-(炔丙基)氧基-雷帕霉素、16-脱甲氧基-16-(4-羟基-丁-2-炔基)氧基-雷帕霉素、16-脱甲氧基-16-苄基氧基-40-o-(2-羟基乙基)-雷帕霉素、16-脱甲氧基-16-苄基氧基-雷帕霉素、16-脱甲氧基-16-邻甲氧基苄基-雷帕霉素、16-脱甲氧基-40-o-(2-甲氧基乙基)-16-戊-2-炔基)氧基-雷帕霉素、39-脱甲氧基-40-脱氧-39-甲酰基-42-脱甲-雷帕霉素、39-脱甲氧基-40-脱氧-39-羟基甲基-42-脱甲-雷帕霉素、39-脱甲氧基-40-脱氧-39-羧基-42-脱甲-雷帕霉素、39-脱甲氧基-40-脱氧-39-(4-甲基-哌嗪-1-基)羰基-42-脱甲-雷帕霉素、39-脱甲氧基-40-脱氧-39-(吗啉-4-基)羰基-42-脱甲-雷帕霉素、39-脱甲氧基-40-脱氧-39-[n-甲基、n-(2-吡啶-2-基-乙基)]胺甲酰基-42-脱甲-雷帕霉素和39-脱甲氧基-40-脱氧-39-(对甲苯磺酰基亚肼基甲基)-42-脱甲-雷帕霉素。
来自wo96/41807的雷帕霉素类似物包括(但不限于)32-脱氧代基-雷帕霉素、16-o-戊-2-炔基-32-脱氧代基-雷帕霉素、16-o-戊-2-炔基-32-脱氧代基-40-o-(2-羟基-乙基)-雷帕霉素、16-o-戊-2-炔基-32-(s)-二氢-40-o-(2-羟基乙基)-雷帕霉素、32(s)-二氢-40-o-(2-甲氧基)乙基-雷帕霉素和32(s)-二氢-40-o-(2-羟基乙基)-雷帕霉素。
另一适宜雷帕霉素类似物是如us2005/0101624中所阐述的优米莫司(umirolimus)，所述专利的内容以引用的方式并入。
在哺乳动物细胞中，雷帕霉素(mtor)激酶的靶标作为描述为mtorc1复合体或mtorc2复合体的多蛋白复合体存在，其感测营养物和能量的可用性并整合来自生长因子和应力信号传导的输入。mtorc1复合体对别位mtor抑制剂(例如雷帕霉素)敏感，是由mtor、gβl和mtor的调控性相关蛋白质(raptor)构成，且结合到肽基-脯氨酰基异构酶fkbp12蛋白(fk506结合蛋白1a，12kda)。相比之下，mtorc2复合体是由mtor、gβl和mtor的雷帕霉素不敏感伴侣蛋白(rictor)构成，且在活体外不结合到fkbp12蛋白。
已显示mtorc1复合体参与蛋白质转译控制，其作为生长因子及营养物敏感装置用于生长和增殖调控。mtorc1通过两种关键下游底物来调控蛋白质转译：p70s6激酶，其进而使核糖体蛋白质p70s6磷酸化，和真核转译起始因子4e结合蛋白1(4ebp1)，其在调节eif4e调控的帽依赖性(cap-dependent)转译中起关键作用。mtorc1复合体调控因应细胞的能量和营养物稳态的细胞生长，且mtorc1在众多种人类癌症中普遍失调。mtorc2的功能涉及通过使akt磷酸化来调控细胞存活和调节肌动蛋白细胞骨架动力学。
mtorc1复合体对别位mtor抑制剂(例如雷帕霉素和衍生物)敏感，在很大程度上是由于雷帕霉素的作用模式所致，所述作用模式涉及与fkbp12形成细胞内复合体并结合到mtor的fkbp12-雷帕霉素结合(frb)结构域。此导致mtorc1的构形变化，据信所述构形变化改变并弱化与其支架蛋白raptor的相互作用，进而阻碍底物(例如p70s6k1)接近mtor和磷酸化。雷帕霉素和雷帕霉素类似物(rapalogue，例如rad001)因抑制与良性和恶性增殖病症二者相关的mtor超活化已获得临床相关性。
rad001(还称为依维莫司
依维莫司是经fda批准用于治疗晚期肾癌的药物且在肿瘤学中的若干其它iii期临床试验中处于研究中。临床前研究已显示，依维莫司能够同时在活体外和活体内抑制众多种肿瘤细胞系的增殖，此大概是通过阻抑雷帕霉素敏感性mtorc1功能所致。作为雷帕霉素的衍生物，依维莫司是高效抑制mtorc1功能的一部分(即p70s6激酶(p70s6k)和下游p70s6k底物p70s6)的别位mtor抑制剂。诸如依维莫司(和其它雷帕霉素类似物)的别位mtor抑制剂对抑制mtorc2路径或其产生的akt信号传导的活化具有极少效应或不具效应。别位mtor抑制剂的其它实例包括西罗莫司(雷帕霉素，ay-22989)、40-[3-羟基-2-(羟基甲基)-2-甲基丙酸酯]-雷帕霉素(还称为替西罗莫司或cci-779)和瑞达福罗莫司(ap-23573/mk-8669)。别位mtor抑制剂的其它实例包括咗他莫司(abt578)和优米莫司。
替代地或另外地，已发现催化性atp竞争性mtor抑制剂直接靶向mtor激酶结构域且靶向mtorc1和mtorc2二者。这些化合物还是较所述别位mtor抑制剂(如雷帕霉素)更完全的mtorc1抑制剂，这是因为其调节抗雷帕霉素mtorc1输出，例如4ebp1-t37/46磷酸化和帽依赖性转译。
bez235为催化性mtor抑制剂，具有化学名称2-甲基-2-[4-(3-甲基-2-氧代基-8-喹啉-3-基-2,3-二氢-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-苯基]-丙腈和以下化学结构
bez235还可以其单甲苯磺酸盐形式使用。bez235的合成阐述于wo2006/122806中，其内容以引用的方式并入本文中。
作为催化性mtor抑制剂，bez235能够停止mtorc1复合体的完整功能，包括雷帕霉素敏感(p70s6k的磷酸化和后续p70s6的磷酸化)和雷帕霉素不敏感(4ebp1的磷酸化)功能二者。根据所使用的药物浓度，bez235具有微分效应，其中在极低浓度(小于或等于10nmol/l)下mtorc1抑制占优，在低浓度(小于200nmol/l)下mtorc1和mtorc2抑制占优，但在相对较高的浓度(大约500nmol/l)下则具有双重pi3k/mtor抑制。
通过代码、通用名或商品名来标识的活性成分的结构可从标准纲要“默克索引(themerckindex)”的现行版本或从(例如)国际专利(例如ims世界公开案)的数据库获得。其相应内容以引用的方式并入本文中。
在一些实施例中，本发明提供组合，其包含(a)rad001或其医药上可接受的盐，和(b)bez235或其医药上可接受的盐，其用于同时、分开或依序用于增强或促进个体的免疫反应。
在一些实施例中，rad001呈中性形式。在一些实施例中，bez235为单甲苯磺酸盐。在一些实施例中，rad001是以0.01-0.2mg的剂量范围、例如0.1mg给予。在一些实施例中，bez235是以1-20mg的剂量范围、例如10mg给予。
在一些实施例中，所述化合物或其组合呈立即释放剂型。在一些实施例中，所述化合物或其组合每周给予一次。在一些实施例中，所述化合物或其组合每天给予一次。
在一些实施例中，个体为免疫受损。在一些实施例中，个体为hiv+或患有aids。在一些实施例中，个体患有传染病。
在一些实施例中，个体具有受损的免疫反应。在一些实施例中，个体为免疫衰老。在一些实施例中，个体患有年龄相关病状，例如免疫衰老。
在本发明的一个实施例中，本发明提供医药组合物，其包含(a)rad001或其医药上可接受的盐；(b)bez235或其医药上可接受的盐；或(c)其组合以及至少一种医药上可接受的载剂。
治疗方法
在一方面中，本发明提供一种方法，其包含向患者给予以下各项的步骤：(a)低剂量的rad001或其医药上可接受的盐；(b)低剂量的bez235或其医药上可接受的盐；或(c)其组合，其中较未给予rad001或其医药上可接受的盐、bez235或其医药上可接受的盐或其组合的患者，所述患者经历较少的由感染所致的疾病。
在一些实施例中，患者的先天性免疫增强。
在一些实施例中，抗原特异性免疫未增强。
在一些实施例中，至少一种干扰素诱导基因(isg)上调。
在一些实施例中，感染为尿道感染。
在一些实施例中，感染为牙齿或牙龈的感染。
在一些实施例中，感染为呼吸道感染。
在一些实施例中，感染为病毒性感染。
在一些实施例中，患者为老年人。
在一些实施例中，患者至少65岁。
在一些实施例中，患者至少75岁。
在一些实施例中，患者至少85岁。
在一些实施例中，将低剂量的rad001或其医药上可接受的盐、低剂量的bez235或其医药上可接受的盐或其组合给予患者长达约连续6周；长达约连续8周；长达约连续10周；长达约连续12周；长达约连续16周；长达约连续20周；长达约连续6个月；长达约1年；或作为长期治疗的一部分(无期限)。
在一些实施例中，将低剂量的bez235或其医药上可接受的盐给予患者长达约连续3周；长达约连续6周；长达约连续8周；长达约连续10周；长达约连续12周；长达约连续16周；长达约连续20周；长达约连续24周；或长达约连续6个月。
在一些实施例中，在给予rad001或其医药上可接受的盐、bez235或其医药上可接受的盐或其组合之后约1天直到约1年，患者继续经历较少由感染所致的疾病。
在一些实施例中，在给予rad001或其医药上可接受的盐、bez235或其医药上可接受的盐或其组合之后至少1个月且直到约1年，患者继续经历较少由感染所致的疾病。
在一些实施例中，在给予rad001或其医药上可接受的盐、bez235或其医药上可接受的盐或其组合之后至少3个月且直到约1年，患者继续经历较少由感染所致的疾病。
在一些实施例中，在给予rad001或其医药上可接受的盐、bez235或其医药上可接受的盐或其组合之后至少6个月，患者继续经历较少由感染所致的疾病。
在一些实施例中，向患者给予低剂量的bez235或其医药上可接受的盐作为单一疗法。
在一些实施例中，向患者给予低剂量的rad001或其医药上可接受的盐作为单一疗法。
在一些实施例中，向患者给予低剂量的rad001或其医药上可接受的盐和低剂量的bez235或其医药上可接受的盐二者作为组合疗法。
在一些实施例中，接受低剂量的bez235或其医药上可接受的盐的患者的药物动力学auc变异性低于接受较高剂量的bez235或其医药上可接受的盐的患者。
在一些实施例中，rad001或其医药上可接受的盐呈中性形式。
在一些实施例中，bez235或其医药上可接受的盐为单甲苯磺酸盐。
在一些实施例中，方法包含给予0.01-0.2mg的rad001或其医药上可接受的盐。
在一些实施例中，方法包含给予1-50mg的bez235或其医药上可接受的盐。
在一些实施例中，个体为免疫受损。
在一些实施例中，个体具有受损的免疫反应。
在一些实施例中，个体为免疫衰老。
在一方面中，本发明提供上调至少一种干扰素诱导基因(isg)的方法，其包含向患者给予(a)低剂量的rad001或其医药上可接受的盐；(b)低剂量的bez235或其医药上可接受的盐；或(c)其组合。
在一方面中，本发明提供上调至少一种参与细胞外基质重塑的蛋白质的方法，其包含向患者给予(a)低剂量的rad001或其医药上可接受的盐；(b)低剂量的bez235或其医药上可接受的盐；或(c)其组合。
在一些实施例中，在治疗至少1天、约1周、约3周、约4周、约5周、约6周、约8周、约10周、约12周、约16周、约20周、约24周或约6个月后，参与细胞外基质重塑的蛋白质显著上调。
在一些实施例中，本发明提供治疗与异常细胞外基质重塑相关的疾病或病状的方法，其包含向患者给予(a)低剂量的rad001或其医药上可接受的盐；(b)低剂量的bez235或其医药上可接受的盐；或(c)其组合。
在一些实施例中，所述与异常细胞外基质重塑相关的疾病或病状选自心脏衰竭(例如射血分数保留性心脏衰竭)、慢性肾衰竭、肾小球肾病、皮肤老化、nash、肝纤维化/硬化、肺纤维化(包括特发性肺纤维化)、衰老相关的肌腱功能障碍/变硬、关节炎(包括骨关节炎)、肌少症、骨髓纤维化、骨髓发育不良、衰老相关的血脑障壁功能障碍、糖尿病性肾病变、动脉粥样硬化或伤口愈合。
在一些实施例中，本发明提供促进或增强个体的免疫反应的方法，其包含向所述个体给予(a)rad001或其医药上可接受的盐；(b)bez235或其医药上可接受的盐；或(c)其组合，其量对促进或增强免疫反应治疗有效或联合地治疗有效。
在一些实施例中，本发明提供治疗个体的年龄相关病状的方法，其包含向所述个体给予(a)rad001或其医药上可接受的盐；(b)bez235或其医药上可接受的盐；或(c)其组合，其量对治疗、预防或改善年龄相关病状(例如免疫衰老)治疗有效或联合地治疗有效。
在一些实施例中，本发明提供(a)rad001或其医药上可接受的盐；(b)bez235或其医药上可接受的盐；或(c)其组合的用途，其用于制备用于促进或增强免疫反应的药剂。
在一些实施例中，本发明提供(a)rad001或其医药上可接受的盐；(b)bez235或其医药上可接受的盐；或(c)其组合的用途，其用于制备用于治疗年龄相关病状(例如免疫衰老)的药剂。
在一些实施例中，本发明提供商业包装，其包含rad001或其医药上可接受的盐，和关于同时、分开或依序与bez235或其医药上可接受的盐用于促进或增强免疫反应的说明书。
在一些实施例中，本发明提供商业包装，其包含rad001或其医药上可接受的盐，和关于同时、分开或依序与bez235或其医药上可接受的盐用于治疗年龄相关病状的说明书。
在一些实施例中，使用组合的益处在于，在组合使用时，可使用较低剂量的(a)rad001或其医药上可接受的盐；和(b)bez235或其医药上可接受的盐，例如，不仅剂量需求通常较小，且应用频率还较低，或展现使用较大剂量或仅使用组合配偶体的一者时所观察到副作用的发生率减少。此符合待治疗患者的期望和需要。
通过已确立的测试模型可显示，给予(a)rad001或其医药上可接受的盐；(b)bez235或其医药上可接受的盐；或(c)其组合产生本文之前所阐释的有益效应。所属领域技术人员完全能够选择相关测试模型来证明所述有益效应。化合物或组合的药理学活性可(例如)在如业内所已知或如下文所阐述的临床研究或活体内或活体外测试程序中展示。
在一方面中，本发明提供医药组合物，其包含对促进和/或增强个体的免疫反应联合地治疗有效的量的(a)rad001或其医药上可接受的盐；和(b)bez235或其医药上可接受的盐。在此组合物中，组合配偶体(a)和(b)是通过任何适宜途径以单一调配物或单位剂型给予。所述单位剂型还可为固定组合。
在另一方面中，本发明提供医药组合物，其分开包含对促进和/或增强个体的免疫反应联合地治疗有效的量的(a)rad001或其医药上可接受的盐；和(b)bez235或其医药上可接受的盐，其以并行但分开的方式给予或以依序方式给予。
包含(a)rad001或其医药上可接受的盐；和(b)bez235或其医药上可接受的盐的用于分开给予组合配偶体或用于以固定组合(即单一盖伦制剂(galenical)组合物)给予的医药组合物可以业内已知的方式来制备，且是适于经肠(例如经口或经直肠)和/或非经肠给予个体且包含治疗有效量的至少一种单独的组合配偶体(例如如上文所指示)或与一或多种医药上可接受的载剂组合者。
新颖医药组合物可含有约0.1％到约99.9％(例如约1％到约60％)的活性成分。
在一些实施例中，根据先前实施例中的任一实施例，个体至少65岁。
在一些实施例中，个体患有郁血性心脏衰竭。
在一些实施例中，个体患有糖尿病。
在一些实施例中，个体患有慢性肾衰竭。
在一些实施例中，个体为现时吸烟者。
在一些实施例中，个体患有copd。
慢性阻塞性肺病(copd)是一种肺部疾病，其特征在于肺部气流慢性阻塞，其干扰正常呼吸且不完全可逆。较熟悉的术语“慢性支气管炎”和“肺气肿”不再使用，但现已纳入copd诊断中。copd不仅仅是“吸烟者咳嗽”，且为诊断不足、威胁生命的肺部疾病。copd诊断是由称为肺活量测定法的简单测试来确认，所述测试测量人可呼吸的深度和空气可进入肺和从肺出去的速度。任何具有咳嗽、咳痰(sputumproduction)或呼吸困难(呼吸困难或费力)的症状和/或具有暴露于所述疾病的风险因素史的患者均应考虑所述诊断。在不能利用肺活量测定法的情形下，应使用所有可用的工具进行copd诊断。临床症状和征象(例如异常呼吸短促和强制呼气时间增加)可用于辅助诊断。低峰流量与copd一致，但可能并非copd所特有，这是因为其可由其它肺部疾病和由测试期间差的表现所引起。慢性咳嗽和咳痰往往在气流受限发生之前多年产生，但并非所有患有咳嗽和咳痰的个体均会继续发展为copd。
在一些实施例中，个体居住在护理院设施中。
在一些实施例中，个体居住在辅助生活设施中。
在一些实施例中，个体居住在专业护理设施中。
在一些实施例中，个体居住在康复设施中。
在一些实施例中，个体需要协助进行一或多种日常生活活动。
日常生活活动(adl)是人们往往每天都会做而无需协助的常规活动。有六种基本的adl：进食、沐浴、穿衣、如厕、移动(走路)和大小便控制。个体进行adl的能力对于确定何种类型的长期护理(例如养老院护理或家庭护理)和覆盖个体需求(即医疗保险、医疗补助或长期护理保险)是重要的。
adl(日常生活活动)：人在日常生活中所通常做的事情，包括人为自我照护所进行的任何日常活动，例如烹饪、饮食、沐浴、穿衣、打扮、工作、家政和休闲。进行adl的能力或无能力可用作许多病症中有能力/失能的极实际的测量。
在一些实施例中，个体患有运动失能。
运动失能或运动受损涉及一个人使用其一或多个肢体的能力受损，或走路、抓握或抬举物体所需的力量减少。可利用轮椅、拐杖或步行器的使用来帮助运动。运动受损可由多种因素引起，例如衰老相关的肌少症、疾病、事故或先天性病症，且可为肌肉、神经肌肉或矫形外科损伤的结果。
用于经肠或非经肠给予的包含所揭示化合物或组合(包括固定组合或非固定组合)的医药组合物是(例如)呈单位剂型者，例如糖衣片剂、片剂、胶囊或栓剂或安瓿。如果未另外指示，否则这些医药组合物是以业内已知的方式来制备，例如通过各种常规混合、粉碎、造粒、糖包衣、溶解、冻干工艺或所属领域技术人员容易明了的制作技术来制备。应了解，每一剂型的个别剂量内所含的组合配偶体的单位含量本身无需构成有效量，这是因为必需有效量可通过给予复数个剂量单位来达成。应进一步了解，用于非经肠给予的组合配偶体的单位含量可含有较高剂量量的组合配偶体，其在给予之前稀释到有效剂量量。
含有药剂组合或药剂组合的个别药剂的单位剂型可呈包封于胶囊(例如明胶胶囊)内的微片剂形式。为此，可使用用于医药调配物中的明胶胶囊，例如称为capsugeltm的硬明胶胶囊(可从辉瑞公司(pfizer)获得)。
本发明的单位剂型可任选地进一步包含用于医药的其它常规载剂或赋形剂。所述载剂的实例包括(但不限于)崩解剂、粘合剂、润滑剂、助流剂、稳定剂和填充剂、稀释剂、着色剂、矫味剂和防腐剂。所属领域技术人员可根据剂型的具体所需性质通过常规实验且在无任何过重负担下选择上文所提及载剂中的一或多者。所使用的每一载剂的量可在业内常规范围内有所变化。以下均以引用的方式并入本文中的参考文献揭示用于调配口服剂型的技术和赋形剂。参见医药赋形剂手册(thehandbookofpharmaceuticalexcipients)，第4版，罗韦(rowe)等人编辑，美国医药协会(americanpharmaceuticalsassociation)(2003)；及雷明顿(remington)：药学科学与实践(thescienceandpracticeofpharmacy)，第20版，真纳罗(gennaro)编辑，利平科特威廉姆斯与威尔金斯公司(lippincottwilliams&wilkins)(2003)。
这些任选其它常规载剂可通过在熔融造粒之前或期间将一或多种常规载剂纳入初始混合物中或通过将一或多种常规载剂与颗粒组合于口服剂型中来纳入口服剂型中。在后一实施例中，经组合混合物可经进一步掺和，例如通过v形掺和器掺和，且随后压缩或模制成片剂(例如单片片剂)，通过胶囊囊封，或填充到药囊中。
医药上可接受的崩解剂的实例包括(但不限于)淀粉；粘土；纤维素；海藻酸盐；树胶；交联聚合物，例如交联聚乙烯基吡咯烷酮或交聚维酮(crospovidone)(例如来自国际特种产品公司(internationalspecialtyproducts)(韦恩(wayne)，nj)的polyplasdonexltm)；交联羧甲基纤维素钠或交联羧甲纤维素钠(例如，来自fmc的ac-di-soltm)；和交联羧甲基纤维素钙；大豆多糖；和瓜尔胶(guargum)。崩解剂可以组合物的约0重量％到约10重量％的量存在。在一个实施例中，崩解剂以组合物的约0.1重量％到约5重量％的量存在。
医药上可接受的粘合剂的实例包括(但不限于)淀粉；纤维素和其衍生物，例如微晶纤维素，例如，来自fmc(费城(philadelphia)，pa)的avicelphtm、来自多维化学公司(dowchemicalcorp.)(米德兰(midland)，mi)的羟丙基纤维素、羟乙基纤维素和羟丙基甲基纤维素methoceltm；蔗糖；右旋糖；玉米糖浆；多糖；和明胶。粘合剂可以组合物的约0重量％到约50重量％(例如，2重量％到20重量％)的量存在。
医药上可接受的润滑剂和医药上可接受的助流剂的实例包括(但不限于)胶体二氧化硅、三硅酸镁、淀粉、滑石、磷酸三钙、硬脂酸镁、硬脂酸铝、硬脂酸钙、碳酸镁、氧化镁、聚乙二醇、粉状纤维素和微晶纤维素。润滑剂可以组合物的约0重量％到约10重量％的量存在。在一个实施例中，润滑剂可以组合物的约0.1重量％到约1.5重量％的量存在。助流剂可以约0.1重量％到约10重量％的量存在。
医药上可接受的填充剂和医药上可接受的稀释剂的实例包括(但不限于)粉糖(confectioner’ssugar)、可压缩糖、葡聚糖结合剂、糊精、右旋糖、乳糖、甘露醇、微晶纤维素、粉状纤维素、山梨醇、蔗糖和滑石。填充剂和/或稀释剂可(例如)以组合物的约0重量％到约80重量％的量存在。
产生功效而无毒性的一或多种治疗剂的最佳比率、个别和组合剂量以及浓度是基于治疗剂对靶向位点的可用性的动力学，且是使用所属领域技术人员所已知的方法来确定。
根据本发明，治疗有效量的(a)rad001或其医药上可接受的盐；(b)bez235或其医药上可接受的盐；或(c)其组合中的每一者可同时或依序且以任何顺序来给予，且所述组分可分开或作为固定组合来给予。举例来说，在一方面中，本发明提供预防或治疗感染或年龄相关疾病的方法，其根据本发明可包含同时或以任何顺序依序以联合治疗有效量、在一些实施例中以协同有效量(例如，以对应于本文中所阐述量的每日或间歇剂量)(i)给予呈游离形式或医药上可接受的盐形式的第一药剂(a)和(ii)给予呈游离形式或医药上可接受的盐形式的药剂(b)。个别治疗剂可在疗程期间在不同时间分开给予或以分开或单一组合形式并行给予。此外，术语“给予”还涵盖使用治疗剂的前药，所述前药于活体内转化成治疗剂。因此，本发明应理解为涵盖所有所述同时或交替治疗的方案且术语“给予”应相应地理解。
每一治疗剂或其组合的有效剂量可根据所采用的具体治疗剂或医药组合物、给予模式、所治疗的病状和所治疗病状的严重程度有所变化。因此，剂量方案是根据多种因素(包括给予途径和患者的肾和肝功能)来选择。所属领域的临床医师或医师可容易地确定缓解、对抗或阻止所述病状进展所需单一活性成分的有效量并开出处方。
在其中组合使用两种治疗剂的实施例中，各治疗剂的有效剂量可要求一种治疗剂的给予较组合中的另一治疗剂更频繁。因此，为容许适当投用，经包装的医药产品可含有一或多种含有化合物的组合的剂型，和一或多种含有治疗剂的组合中的一者但无所述组合的其它治疗剂的剂型。
当治疗剂的组合、例如(a)rad001或其医药上可接受的盐；和(b)bez235或其医药上可接受的盐的组合是以如作为单一药物销售的形式施加时，如果本文中未另外提及，则其剂量和给予模式可根据相应销售药物的包装插页上所提供的信息而定。
在一些实施例中，rad001(例如其游离形式)是以每日和/或每周约0.01mg到约1mg范围内的剂量经口给予。在一些实施例中，rad001、具体来说其游离形式的剂量是以每日0.1mg的剂量经口给予成人。
在一些实施例中，bez235或其医药上可接受的盐(例如其对甲苯磺酸盐)是以每日约1mg到约20mg或每日和/或每周约1mg到约50mg范围内的剂量经口给予。在一些实施例中，bez235或其医药上可接受的盐(例如其对甲苯磺酸盐)的剂量是以每日约10mg的剂量给予(例如经口)成人，例如65岁或更年长的人。在一些实施例中，bez235或其医药上可接受的盐的剂量为约2mg到约19mg、约3mg到约17mg、约4mg到约16mg、约5mg到约15mg、约6mg到约14mg、约7mg到约13mg、约8mg到约12mg或约9mg到约11mg。在一些实施例中，bez235或其医药上可接受的盐的剂量为约1mg、约2mg、约3mg、约4mg、约5mg、约6mg、约7mg、约8mg、约9mg、约10mg、约11mg、约12mg、约13mg、约14mg、约15mg、约16mg、约17mg、约18mg、约19mg、约20mg、约25mg、约30mg、约35mg、约40mg、约45mg或约50mg。在一些实施例中，bez235是作为其对甲苯磺酸盐经口给予。在一些实施例中，bez235或其医药上可接受的盐是每天两次、每天一次、每两天一次、每三天一次、每四天一次、每五天一次、每六天一次、一周一次、每两周一次、每三周一次、每四周一次、一月一次、每两个月一次、每三个月一次、每四个月一次、每六个月一次或每年一次给予。
可根据经验使用已知方法针对每一个体确定每一治疗剂用于促进和/或增强个体的免疫反应和/或治疗个体的年龄相关病状的最佳剂量，且此将取决于多种因素，包括(但不限于)疾病进展的程度；个体的年龄、体重、总体健康状况、性别和饮食；给予时间和途径；和个体正在服用的其它药剂。最佳剂量可使用业内所熟知的常规测试和程序来确定。
可与载剂材料组合以产生单一剂型的每一治疗剂的量将根据所治疗个体和具体给予模式而有所变化。在一些实施例中，含有如本文中所阐述的治疗剂组合的单位剂型将含有通常在单独给予所述治疗剂时所给予量的所述组合的每一药剂。
剂量频率可根据所使用的治疗剂和待治疗的具体病状而有所变化。一般来说，优选使用足以提供有效疗法的最低剂量。通常可使用适于所治疗病状的分析来监测患者的治疗有效性，所述分析应为所属领域技术人员所熟悉。
在一方面中，本发明提供促进和/或增强个体的免疫反应的方法，其包含向有需要的个体给予(a)rad001或其医药上可接受的盐；(b)bez235或其医药上可接受的盐；或(c)其组合，其量对促进和/或增强个体的免疫反应治疗有效或联合地治疗有效。
在另一方面中，本发明提供治疗个体的年龄相关病状的方法，其包含向有需要的个体给予一定量的(a)rad001或其医药上可接受的盐；(b)bez235或其医药上可接受的盐；或(c)其组合，其量对治疗年龄相关病状(例如免疫衰老)治疗有效或联合地治疗有效。
在另一方面中，本发明提供促进和/或增强个体的免疫反应的方法，其包含向有需要的个体给予bez235或其医药上可接受的盐，其量治疗有效地促进和/或增强个体的免疫反应(例如先天性免疫反应)。
在另一方面中，本发明提供治疗个体的年龄相关病状的方法，其包含向有需要的个体给予一定量的bez235或其医药上可接受的盐，其量对治疗年龄相关病状(例如免疫衰老)治疗有效。
在另一方面中，本发明提供(a)rad001或其医药上可接受的盐；(b)bez235或其医药上可接受的盐；或(c)其组合的用途，其用于增强和/或促进免疫反应和/或用于制备用于增强和/或促进免疫反应的药剂。
在另一方面中，本发明提供(a)rad001或其医药上可接受的盐；(b)bez235或其医药上可接受的盐；或(c)其组合的用途，其用于治疗年龄相关病状和/或用于制备用于治疗年龄相关病状(例如免疫衰老)的药剂。
在另一方面中，本发明提供bez235或其医药上可接受的盐的用途，其用于增强和/或促进免疫反应和/或用于制备用于增强和/或促进免疫反应(例如先天性免疫反应)的药剂。
在另一方面中，本发明提供bez235或其医药上可接受的盐的用途，其用于治疗年龄相关病状和/或用于制备用于治疗年龄相关病状(例如免疫衰老)的药剂。
在一方面中，本发明提供商业包装，其包含以下各项作为活性成分：(a)rad001或其医药上可接受的盐；(b)bez235或其医药上可接受的盐；或(c)其组合，以及关于其同时、分开或依序用于增强和/或治疗免疫反应的说明书。
在另一方面中，本发明提供商业包装，其包含以下各项作为活性成分：(a)rad001或其医药上可接受的盐；(b)bez235或其医药上可接受的盐；或(c)其组合，以及关于其同时、分开或依序用于治疗年龄相关病状(例如免疫衰老)的说明书。
在一方面中，本发明提供商业包装，其包含rad001或其医药上可接受的盐，以及关于同时、分开或依序与bez235或其医药上可接受的盐用于增强和/或促进免疫反应的说明书。
在另一方面中，本发明提供商业包装，其包含rad001或其医药上可接受的盐，以及关于同时、分开或依序与bez235或其医药上可接受的盐用于治疗年龄相关病状(例如免疫衰老)的说明书。
在另一方面中，本发明提供商业包装，其包含bez235或其医药上可接受的盐，以及关于同时、分开或依序与rad001或其医药上可接受的盐用于增强和/或促进免疫反应(例如先天性免疫反应)的说明书。
在另一方面中，本发明提供商业包装，其包含bez235或其医药上可接受的盐，以及关于同时、分开或依序与rad001或其医药上可接受的盐用于治疗年龄相关病状(例如免疫衰老)的说明书。
在另一方面中，本发明提供商业包装，其包含bez235或其医药上可接受的盐，以及关于用于增强和/或促进免疫反应(例如先天性免疫反应)的说明书。
在另一方面中，本发明提供商业包装，其包含bez235或其医药上可接受的盐，以及关于用于治疗年龄相关病状(例如免疫衰老)的说明书。
致病性感染
在另一方面中，本文中所提供的方法可用于治疗或预防个体中由病原体所致的感染。在一些实施例中，个体为免疫缺陷个体。在一些实施例中，个体为免疫衰老。在一些实施例中，病原体为病毒性病原体，例如诸如以下的病毒性病原体：hiv、引发脑膜炎的病毒、引发脑炎的病毒、a型肝炎、b型肝炎、c型肝炎、狂犬病病毒、脊髓灰白质炎病毒、流行性感冒病毒、副流行性感冒病毒、腺病毒、鼻病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒、风疹、百日咳、乳头瘤病毒、黄热病毒、呼吸道融合病毒、小病毒、诺瓦克病毒(norwalkvirus)、屈公病病毒(chikungunyavirus)、出血热病毒、包括伊波拉病毒(ebolavirus)、登革热病毒(denguevirus)、兹卡病毒(zikavirus)，和疱疹病毒，例如，水痘、巨细胞病毒和艾司坦-巴尔病毒(epstein-barrvirus)。在一些实施例中，感染为病毒性感染，例如慢性病毒性感染。在一些实施例中，慢性病毒性感染选自a型肝炎、b型肝炎、c型肝炎、艾司坦-巴尔病毒、hiv、巨细胞病毒、1型单纯疱疹病毒、2型单纯疱疹病毒、人类乳头瘤病毒、腺病毒和卡波西氏肉瘤(kaposi’ssarcoma)相关的疱疹病毒。在一些实施例中，慢性病毒性感染包含hiv。
举例来说，里希特菲尔德(lichterfeld)和同事观察到hiv特异性cd8+t细胞显示降低的端粒长度，且在抑制pd-1后端粒长度和端粒酶活性增加(例如，参见希特菲尔德，m等人，(2008)血液(blood)112(9):3679-3687)。在另一实例中，pd-1在c型肝炎(hvc)特异性cd8+细胞毒性t淋巴细胞中显著上调(例如，参见戈尔登-梅森l(golden-mason,l)(2007)，病毒学期刊(j.virol.)81(17):9249-9258)。
在一些实施例中，病毒性感染包含病毒性呼吸道感染。在一些实施例中，病毒性呼吸道感染为病毒性上呼吸道感染。在一些实施例中，病毒性呼吸道感染为病毒性下呼吸道感染。在一些实施例中，病毒性呼吸道感染是由以下所引起：鼻病毒、冠状病毒、流行性感冒病毒、呼吸道融合病毒(rsv)、腺病毒、间质肺炎病毒、肠病毒、博卡病毒(bocavirus)、副粘液病毒和/或副流行性感冒病毒。在一些实施例中，病毒性呼吸道感染为肺炎。在一些实施例中，病毒性呼吸道感染包括肺脓疡。在一些实施例中，病毒性呼吸道感染包括支气管炎。
在一些实施例中，病原体为细菌性病原体，尤其例如选自以下的细菌性病原体：脑膜炎球菌属(meningococcus)、嗜血杆菌属(haemophilus)、肺炎球菌属(pneumococcus)、葡萄球菌属(staphylococcus)、链球菌属(streptococcus)、奈瑟菌属(neisseria)、莫拉菌属(moraxella)、大肠杆菌(escherichiacoli)、克雷伯氏菌属(klebsiella)、假单胞菌属(pseudomonas)、肠杆菌属(enterobacter)、变形杆菌属(proteus)、沙雷氏菌属(serratia)、军团菌属(legionella)、沙门杆菌属(salmonella)、志贺杆菌属(shigella)、不动杆菌属(acinetobacter)、李氏菌属(listeria)、披衣菌属(chlamydia)和分枝杆菌属(mycobacterium)。
在一些实施例中，病原体为寄生虫性病原体，例如，弓虫属(toxoplasma)、利士曼原虫属(leishmania)和疟疾、克氏锥虫(t.cruzii)、蠕虫(helminth)(例如住血吸虫属(schistosoma))。
在一些实施例中，病原体为酵母或真菌病原体，例如念珠菌属(candida)、隐球菌属(cryptococcus)、球孢子菌属(coccidioides)、芽生菌属(blastomyces)、曲菌属(aspergillus)或毛霉菌属(mucormycetes)。
衰老和其它病症
在另一方面中，本文中所提供的方法可用于治疗个体的衰老。如本文中所使用，术语“衰老”打算包括所有类型的衰老。在一些实施例中，衰老包含免疫缺失，例如免疫衰老。免疫衰老包括随着年龄增长对感染的免疫反应降低，且源自t细胞谱系中的胸腺退化，导致t细胞产生和输出减少(例如，参见岛谷k(shimatani,k)等人，(2009)pnas106(37):15807-15812)。在一些实施例中，存在由pd-1的持续表达所定义的真正年龄依赖性cd4+或cd8+t细胞群体的群体增加，其抑制t细胞对抗原的反应(例如，参见岛谷k等人，(2009)pnas106(37):15807-15812；努涅斯c(nunes,c)等人，(2012)临床癌症研究(clinicalcancerresearch)18(3):678-687)。在一些实施例中，衰老包含细胞衰老，其中细胞不再分裂。在一些实施例中，年龄相关的免疫衰老包含由造血干细胞产生的天然淋巴细胞减少(陈(chen)，科学信号(sciencesignalling)，ra75,2009)。细胞衰老与每一细胞分裂时发生的端粒逐渐缩短或p16的细胞内表达相关。在一些实施例中，衰老包含嗜中性细胞、淋巴细胞、nk细胞、巨噬细胞和/或树突细胞的功能的年龄相关性降低(例如，参见博拉斯基d(boraschid)等人，(2013)科学转化医学(scitranslmed)5(185):ps8；库玛尔r(kumarr)和伯内斯ea(burnsea).(2008)疫苗专家评述(expertrev.vaccines)7(4):467-479。
例示
以下实例说明上文所阐述的本发明；然而，其并不打算以任何方式限制本发明的范围。本发明的医药化合物、组合和组合物的有益效应还可通过相关领域技术人员已知的其它测试模型来测定。
实例1：支持以下主张的数据：bez235不增强抗原特异性免疫，但会通过通过上调干扰素诱导的基因(isg)来增强先天性免疫而降低感染率
总共264名≥65岁的无不稳定医学病状的老年人志愿者入选随机化双盲安慰剂对照试验。将个体随机分配到接受安慰剂或四种口服mtor抑制剂投用方案中的一者：每日0.5mgrad001，每日0.1mgrad001，每日10mgbez235或每日0.1mgrad001和10mgbez235的组合。利用研究药物将个体治疗6周，且在2周无药物间隔之后，给予2014年的季节性流行性感冒疫苗(
仅低剂量rad001(每日0.1mg)和bez235(每日10mg)的组合符合本研究的主要终点，且使得3/3个流行性感冒疫苗株中的流行性感冒gmt比率出现统计学上显著大于1.2倍的增加(图1)。rad001单一疗法(每日0.1mg或0.5mg)使得仅1/3的流行性感冒疫苗株中的流行性感冒gmt比率的增加统计学上显著大于1.2倍。bez235单一疗法并未使得对3种流行性感冒疫苗株中的任一者的流行性感冒gmt比率增加。这些结果表明，低剂量的别位(rad001)和催化性(bez235)mtor抑制剂的组合较rad001或bez235单一疗法在流行性感冒疫苗接种反应方面产生较大的改良。
作为免疫功能的额外评价，每一治疗组中的总体感染率是通过以下方式来评价：使个体在日志中记录在起始研究药物治疗后一年期间，其所经历的任何感染，研究人员在每次研究就诊时审查所述日志。相对于安慰剂，在rad0010.1mg+10mgbez235组合和在bez235单一疗法治疗组中的个体中，每人每年的感染数显著减少(表1)。另外，bez235单一疗法和rad001+bez235治疗组中的尿道感染(表2)和牙齿和牙龈感染(表3)率低于安慰剂组或rad001单一疗法治疗组。
表1：bez235在单独或与rad001组合时在研究药物给予后一年内与感染率的显著下降相关
研究药物给予后一年内的感染率/人
*p＝0.015；**p＝0.003
表2：bez235在单独或与rad001组合时在研究药物给予后一年内与患有尿道感染的个体百分比的下降相关
在研究药物给予后一年期间患有尿道感染的个体百分比
表3：bez235在单独或与rad001组合时在研究药物给予后一年内与牙齿或牙龈感染率的下降相关
研究药物给予后一年内每人的牙齿或牙龈感染数
还检查个体在经研究药物治疗的6周期间的感染率。在研究药物治疗的6周期间所发生的主要感染为呼吸道感染。在个体经研究药物治疗的6周期间，bez235和rad001+bez235二者均使得呼吸道感染的发病率和严重程度降低(图2)。
为探索低剂量bez235单一疗法的组合或rad001+bez235组合疗法降低老年人的感染率的可能机制，在基线时和在安慰剂、bez235或rad001+bez235治疗6周后自个体获得的全血中执行rnaseq基因表达剖析。全血的rnaseq分析揭示与干扰素信号传导相关的路径的高度显著富集(图3)。在所富集路径中表达上调最高的一些基因包括1型干扰素诱导的基因(isg)的子组，其在对病毒的免疫反应中起关键作用(表4)(2)。这些发现表明，通过低剂量bez235和/或bez235+rad001组合疗法上调免疫系统和干扰素诱导的基因的子组增强免疫功能且由此降低老年人的感染率。
通过rnaseq的基因表达剖析
将外周静脉血样品收集到paxgene血液rna管中。从paxgene收集的血液纯化总rna，且使用安捷伦(agilent)2100生物分析仪(安捷伦技术公司(agilenttechnologies)，圣克拉拉(santaclara)，ca,usa)评价经分离rna的质量和产率。使用具有利伯-紫罗球蛋白(ribo-zeroglobin)的鲁米那(illumina)truseq链式总rna试剂盒从rna制备rna-seq库。此试剂盒一步完成核糖体rna和球蛋白mrna的去除。使用鲁米那hiseq2500平台以双末端模式来读取2×76个碱基对(bp)的长度对所获得的库进行定序。使用制造商的软件处理来自所述仪器的图像以产生fastq序列文件。
通过在fastq文件上运行fastqc(0.10版)来评价读取质量。定序读数显示优良质量，对于所有碱基位置，平均费力德得分(phredscore)均高于30。将每个样品平均100百万个76bp双末端读数定位到智人(homosapiens)基因组(grch38版)上，且使用refsequcsc进行人类基因和转录物注释。使用内部基因量化途径来测定定位到每一基因的计数数目(舒尔雷s.(schuierer,s.)及罗玛g.(roma,g.)外显子量化途径(eqp)：从rna-seq数据量化基因、外显子和接点表现的综合方式(theexonquantificationpipeline(eqp):acomprehensiveapproachtothequantificationofgene,exonandjunctionexpressionfromrna-seqdata.)，核酸研究(nucleicacidsresearch)(2016))。平均来说，总读数的88％定位到基因组或转录物，且经比对读数的30％定位到表达序列。将具有少于8百万个表达读数的样品以及三个展示链失衡的样品从进一步分析移除。
rnaseq差异基因表达分析
在任何治疗/时间条件下平均表达每百万少于一个计数的任何基因视为检测不到的，且从进一步分析移除。然后使用位于利马包(limmapackage)中的沃姆归一化程序(voomnormalizationprocedure)在r统计学计算软件(v3.1.3)中对剩余基因的计数数据进行归一化(罗cw(law,cw)、陈y(chen,y)、史w(shi,w)和史麦斯gk(smyth,gk)(2014)。沃姆：用于rna-seq读取计数的精确权重解锁线性模型分析工具(voom:precisionweightsunlocklinearmodelanalysistoolsforrna-seqreadcounts.)基因组生物学(genomebiology)15,r29.)。
在评估数据的技术质量时，使用r中的普尔科姆函数(prcompfunction)执行主要组分分析。此分析指示，第一主要组分反映样品处理的多个方面(rna提取批次、mrna的产率等)。因此，纳入此主要组分的值作为对后续分析中的技术变量的调整。
对于每一基因来说，使用sasv9.3软件将以下线性混合模型拟合到经沃姆归一化的表达数据，针对相关共变量(年龄、性别和bmi)以及pc1进行调整。
procmixeddata＝exprsdataanovaf；
classsubjiddaytrtgender；
modellog2exprs＝daytrtday*trtpc1agegenderbmi/solution
ddfm＝kenwardroger；
repeatedday/type＝unsubject＝subjid；
bygene；
其中log2exprs涉及经voom归一化的表达量度；day涉及取样(投用前或投用后)的时间点；trt涉及个体的治疗组；pc1涉及所述样品的pc1值；age涉及个体的年龄；gender涉及个体的性别；bmi涉及个体的身体质量指数；且subjid涉及个体的id。使用sas估算语句来获得差异表达倍数变化和p值。此分析产生每一治疗臂(bez、rad+bez和安慰剂)的基因表达反应特性。这些基因表达特性是由每一治疗的治疗后对治疗前的倍数变化和p值组成。
rnaseq基因表达路径富集分析
对于此分析，寻找在每一治疗反应特性内的所界定生物学路径中基因的上调或下调偏斜。典型路径(c2.cp.v5.0.entrez.gmt)是自典型特性数据库(http://software.broadinstitute.org/gsea/msigdb/)下载。特性的定义是如“rnaseq差异表达分析(rnaseqdifferentialexpressionanalysis)”部分中所阐述。对于每一路径和治疗反应特性，如先前所阐述执行加权ks测试(萨勃拉曼尼亚(subramanian)等人，基因组富集分析(genesetenrichmentanalysis)：诠释宽基因组表达特征的基于知识的方法(aknowledge-basedapproachforinterpretinggenome-wideexpressionprofiles.)，美国国家科学院院刊(proc.nat.acad.sci.)，第102卷，第43期，15545-155502005)，且在图3中所得-log10(p值)绘制为随路径中的基因的平均倍数变化而变。
rnaseq基因表达-上调基因的指定
如果使用离群值检测的杜凯(tukey)法，基因的倍数变化经测定为离群值，则视所述基因上调。特定来说，上调基因符合以下准则：log2(fc治疗后对治疗前)大于q3+1.5*(q3-q1)，其中q3为每一治疗的log2(fc)的上(即第三)四分位数且q1为下(即第一)四分位数。
表4：bez235单一疗法和bez235+rad001组合疗法同类群组中的上调路径基因
bez235单一疗法并不改良对流行性感冒疫苗接种的反应但却降低感染率的发现是完全意外的。流行性感冒疫苗接种反应是抗原特异性适应性免疫的读出。因此，这些发现表明，不像rad001，bez235并不改良对特定抗原的免疫反应。相反，bez235以及bez235+rad001的组合可通过经由上调isg表达改良对多种病原体的非抗原特异性先天性免疫反应来降低感染率。
实例2：对于改良老年人的疫苗接种反应(衰老相关的终点)，rad001+bez235可具有比rad001或bez235单一疗法要高的功效，这是因为较单一疗法，所述组合产生更具选择性和完全的torc1抑制
衰老可能是由于包括mtor路径在内的一组离散细胞信号传导路径的扰动造成。mtor通过两种复合体进行信号传导：torc1和torc2。mtor抑制对临床前物种衰老的许多有益效应可由torc1的抑制介导(3,4)。相比之下，torc2抑制与高血糖症、高胆固醇血症和雄性小鼠的寿命减少相关(4,5)。另外，数种长寿动物模型具有增加而非减少的torc2活性(6)。因此，torc1特异性抑制对于治疗人类衰老相关的病状(例如免疫功能下降)可最佳。雷帕霉素类似物(例如rad001)是一类别位mtor抑制剂，其始终仅抑制torc1复合体下游的s6k节点(7)。例如在每日投用10mgbez235(大约10-20nm)的老年个体血清中所达成的低浓度的bez235还始终仅抑制torc1下游的s6k节点(8)。在较高剂量下，bez235完全抑制torc1，但还抑制torc2(8,9)。然而，低剂量的催化性抑制剂与低剂量的rad001的组合协同抑制torc1下游的大多数(如果非全部)节点，而不抑制torc2活性(8,10)。本发明的临床发现表明，与低剂量rad001或bez235单一疗法相比，利用低剂量rad001和bez235的组合所达成的更完全且更具选择性的torc1抑制与老年个体的流行性感冒疫苗反应得到更好地增强相关。对于其它衰老相关的病状，由于低剂量rad001和bez235的组合的更完全且更具选择性的torc1抑制，所述组合还可具有优于rad001和/或bez235单一疗法的功效。
实例3：通过低水平上调干扰素诱导的基因(isg)的子组，bez235或bez235+rad001可用于安全地增强老年人的免疫功能并降低感染率
在bez235单一疗法或rad001+bez235组合治疗之后，全血中isg上调幅度较小(1-9％)。isg表达的低水平增加可足以增强老年人的免疫功能并降低感染率，同时避免经干扰素治疗的isg诱导增加极多的患者发生不期望的不良事件(11)。因此，据信，低水平isg诱导避免经干扰素疗法治疗的患者中与高程度isg诱导相关的安全性和耐受性问题。
实例4：bez235或bez235+rad001的6周疗程使得在药物中断之后免疫功能持续改良
不管在治疗6周之后研究药物中断的事实，bez235单一疗法和rad001+bez235的组合使得一年内的总体感染率显著降低。结果表明，mtor抑制剂疗法可使得在药物中断之后免疫功能持续改良数月。还已显示mtor抑制剂雷帕霉素的短疗程延长小鼠的寿命，此支持短暂mtor抑制的有益效应在药物中断之后持续数月的观点(12,13)。
实例5：bez235的pk变异性可通过低剂量给予来减轻
bez235是开发为针对肿瘤学适应症的双重pi3k-mtor催化性抑制剂。然而，用于肿瘤学适应症的高剂量的bez235(直到每日1200mg的最大耐受剂量)与不可接受的高患者间变异性(auctau,ss百分比变动系数(％cv)＝113％)相关。pk变异性可部分地归因于bez235在ph3以上的低溶解性。然而，每日10mgbez235的患者间变异性时可接受的(auclast,ss％cv＝39％)，此可能是由于低剂量的bez235能够在胃的低ph下完全吸收。图4中显示每日10mg以上剂量增加bez235的pk变异性。
实例6：bez235在单独或与rad001组合时可通过上调细胞外基质重塑蛋白而具有广泛的抗衰老效应
细胞外基质重塑是一组不同抗衰老干预的共同潜在机制(14)。这些发现表明，细胞外基质缺乏更新促进衰老，且促进细胞外基质重塑的药剂可对衰老相关的病状具有有益效应。血清蛋白质体学表明，bez235单一疗法或bez235+rad001组合疗法促进细胞外基质重塑。在基线时或在经安慰剂、每日10mgbez235或每日10mgbez235+每日0.1mgrad001的组合治疗6周之后从老年个体获得血清样品。6周的bez235单一疗法或bez235+rad001的组合二者使得参与细胞外基质分解/重塑的蛋白质的表达高度显著上调(bez235的neglog10p值为14.34，且bez235+rad001组合为13.32)，但安慰剂则不(图5)。这些发现表明，bez235单一疗法或bez235+rad001的组合可通过刺激细胞外基质的重塑而具有广泛的抗衰老效应。bez235单一疗法或bez235+rad001的组合可尤其有效地治疗衰老相关的病状，所述病状与组织的细胞外基质中的衰老相关的异常有关，包括心脏衰竭、慢性肾衰竭和皮肤老化。
实例7：bez235在单独或与rad001组合时可降低老年个体的呼吸道感染(rti)。
在美国，在85岁和以上的人中，肺炎和流行性感冒是第5大引起死亡的原因(国家生命统计学报告，死亡，2014、2016的最终数据(nationalvitalstatisticsreport,deaths,finaldatafor2014,2016))。此外，呼吸道病毒(目前对其无有效治疗)引起此群体中的大部分社区获得性肺炎(杰恩(jain)等人，2015)。另外，在美国，在≥85岁的人中，每年有7％因rti去急诊室(哥特(goto)等人，2016)。最后，因rti的住院增加≥85岁的个体进入护理院的风险。在美国，85-95岁的人中仅10％居住在护理院，但≥85岁的住院个体中有36％出院到护理院(2010年美国老年群体人口普查简报，国家卫生统计中心数据简报2015(theolderpopulation2010uscensusbriefs,nationalcenterforhealthstatisticsdatabrief2015))。
对于≥65岁伴有诸如慢性阻塞性肺病(copd)、气喘、慢性支气管炎、2型糖尿病(t2dm)、郁血性心脏衰竭(chf)和现时吸烟的潜在风险因素的老年个体来说，rti的预防还是未满足的医学需要。举例来说，rti是copd和气喘恶化的最常见原因(尼克尔森(nicholson)等人，bmj,2003；塞西(sethi)等人，2008)。rti还是16％的患有郁血性心脏衰竭的住院患者的潜在原因(秦(chin)和高曼(goldman)，1997)。患有t2dm的患者下呼吸道感染的风险还增加(穆勒(muller)等人，2005)，且具有增加的因肺炎而住院的风险(科努姆(kornum)等人，2008)。现时吸烟还增加发生社区获得性肺炎的风险(艾美罗(almirall)等人，1999)。最后，先前患有肺炎的老年个体肺炎复发的风险增加(赫德兰(hedlund)等人，1992)。
因此，本研究的目的是评估单独的bez235或与rad001组合以支持用于进一步研发的剂量选择，从而降低处于rti相关的发病率或死亡率风险增加的老年个体的rti发生率的功效、耐受性和安全性。
本发明将测定低剂量mtor抑制剂是否降低高风险老年群体中rti的发生率和严重程度，所述老年群体是界定为年龄≥85岁或年龄≥65岁的现时吸烟者、患有潜在copd、气喘、慢性支气管炎、chf和/或t2dm和/或在过去的12个月内曾因rti住院或去急诊室的群体。
目标和相关终点
表5.目标和相关终点
研究设计
此为一项24周随机化、盲化、安慰剂对照、平行组、剂量发现2阶段适应性设计研究，以评价与安慰剂相比，两种剂量的bez235在单独或与rad001组合时在无不稳定医学病状的老年个体中的安全性、耐受性和功效。如果个体呼吸道感染的风险增加，则可纳入所述个体，如通过≥85岁或≥65岁且为现时吸烟者或患有潜在copd、气喘、慢性支气管炎、t2dm或chf和/或在过去一年中曾因rti住院或在急诊室中进行评估所界定。本研究将由6周筛选期、4周导入期、16周治疗期和8周随访期构成。
研究期：对于每一个体，本研究的总计划持续时间是从随机化到最后一次追踪访视至多24周(图3-1)；研究治疗进行16周。
筛选期：在筛选就诊(在基线/随机化之前最多6周)期间，将基于纳入/排除准则来评价个体参与试验的合格性。
导入期：在导入期(在基线/随机化之前最多4周)期间，在筛选就诊期间符合合格性准则的个体将入选本研究，且将进入诊所并经历手握力测试和6分钟步行测试(6mwt)，以便使所述个体熟悉此测试并由此降低在基线就诊时的测试变异性。在6mwt之前和之后个体还将进行呼吸困难问卷。另外，在导入期期间，个体将经历基线超声波心动描记术以评价心脏功能。
盲化治疗期：第1部分(在南半球或北半球进行)
治疗期(16周)：在基线就诊(第3次就诊)时，将以1:1:1的比率将合格个体随机化到3个治疗组中的1组
(1)每日5mgbez235
(2)每日10mgbez235
(3)每日匹配安慰剂
个体将用研究药物治疗16周。每一治疗组将招募大约56名个体，总计有大约168名个体入选。假定有大约10％的退出率，此使得大约150名个体完成本研究的第1部分(每一臂中大约50名个体)。如果退出率高于10％，则替补者可入选。
在基线就诊时，个体将经历临床评估且抽血进行基线安全性评价、east(ige含量)和生物标记物评价。尚未接受其季节性流行性感冒疫苗的个体将抽血测定流行性感冒效价。个体在基线就诊时还将经历握力、6mwt且在6mwt之前和之后完成呼吸困难问卷。然后将在诊所里给予个体其第一剂研究药物，并使个体将研究药物带回家。还使个体在基线就诊后将日志带回家。将指导个体在日志中记录每天在家给予的研究药剂胶囊的时间和次数。还将指导个体在日志中记录就诊之间所出现的任何感染症状。最后，还将使个体将较短的威斯康辛上呼吸道症状调查(wurss-21)带回家，如果其发生上呼吸道感染的症状，则将指导其每日填写直到其症状消退为止。
在个体服用研究药物1周之后，个体与站点之间应该打电话以确认第一周的研究药物耐受性良好。如果在第一周的研究药物治疗期间不耐受研究药物，则研究人员可在与restorbio医疗监测者讨论之后中断研究药物。
假如研究药物继续耐受良好，则将利用研究药物治疗个体16周，在此期间其将在前8周内每2周(第2周、第4周、第6周和第8周就诊)返回诊所，且然后在最后8周内每4周(第12周和第16周就诊)进行临床评估并抽血以进行安全性评价。还将在第4周、第6周和第8周就诊时抽血以进行pk评价。将在基线时和在第6周、第16周和第24周就诊时抽血以进行生物标记物评价。在研究期间站点将通过电话或在现场就诊时每周两次联络个体以确认个体按指示服用研究药物且研究药物继续耐受良好。站点还将在每次联络期间进行呼吸道感染问卷，并通知发生2种或更多种呼吸道感染症状或1种或多种非呼吸道感染症状的个体尽快前来进行未排定的就诊以便可由研究人员对其进行评估。
研究人员将对因感染症状前来站点进行未排定就诊的个体进行评估，所述研究人员将如研究操作手册(studyoperationsmanual)中所阐述在感染研究人员工作单(infectioninvestigatorworksheet)中捕获感染的相关征象和症状。具有rti症状的个体将在诊所采集鼻咽拭子。如果个体不能或不愿返回站点进行未排定的就诊，则研究人员可给个体打电话且通过电话来完成感染研究人员工作单，且在个体前来进行其下次就诊时获得鼻咽拭子。针对所有感染将提供适当医疗照护。需要额外医疗照护的个体应转介到其健康照护提供者或医院(如果指示)。
在研究期间接受季节性流行性感冒疫苗作为其日常健康照护的一部分的个体在其流行性感冒疫苗接种之后大约4周将被邀请返回站点以进行未排定的就诊以抽血测定流行性感冒效价。
在16周的研究药物治疗之后，将对个体进行采血以用于安全性实验室和生物标记物评价，且在第16周就诊时将经历重复握力评价、6mwt和在6mwt之前和之后完成呼吸困难问卷。在完成16周的研究药物治疗之后，个体还将进行重复超声波心动图。
治疗后随访期(8周)：在其最后一剂研究药物之后，将对所有个体随访8周，在此期间其将被告知继续在其日志中记录所发生的任何感染。站点将继续每周两次给个体打电话且进行每周两次联络用于呼吸道症状问卷。将通知发生2种或更多种呼吸道感染症状或1种或多种非呼吸道感染症状的个体尽快前来进行未排定的就诊以便可如上文所阐述由研究人员对其进行评估。具有呼吸道感染症状的个体将取鼻咽拭子以用于呼吸道病毒pcr。其它细节提供于研究操作手册中。
在第24周研究就诊结束时，个体将经历完整的体检并进行采血以用于安全性实验室和生物标记物评价，且将经历重复握力评价、6mwt且将在6mwt之前和之后完成呼吸困难问卷。
在第24周就诊时或之后，研究人员将审查个体的医疗记录以确定是否发生未在研究数据库中捕获到的其它感染。关于未捕获到的感染的信息将记录在适当研究人员感染工作单(investigatorinfectionworksheet)上。
发生视为与研究药物相关且在随访期结束时未得以解决或稳定化的医学上重要的实验室异常或医学上重要的ae的患者将超出所计划的治疗后随访期进行随访，直到这些事件得以解决或稳定化为止。如果在研究完成时，这些事件未得以解决，则应在数据库中将其捕获为“正在进行中”。
期中分析(ia)：当第1部分中随机化的至少120名个体已完成第16周就诊时，将执行ia。知情的数据监测委员会(datamonitoringcommittee，dmc)将审查ia结果并就本研究提出建议。在期中分析时可能的决定为：
-是否因徒劳无益而停止研究bez235单一疗法投用臂，或在第2部分中继续使用1或2个bez235治疗臂；
-是否基于第1部分期间的呼吸道感染率来调整研究；
-是否基于来自第1部分的安全性数据和呼吸道感染率数据改变治疗的持续时间；和/或
-是否需要额外pk取样和/或pk取样方案是否可简化。
第2部分(在与第1部分相反的半球进行)：在第2部分中，在筛选就诊期间符合合格性准则的310名到430名之间的个体将入选本研究。这些个体将随机化到安慰剂、0剂、1剂或2剂来自第1部分的bez235和5mg或10mgbez235+rad0010.1mg。在第2部分中的筛选期、导入期、治疗期和治疗后随访期期间将应用与第1部分中者相同的程序。
图3-1研究设计：
表1.第1部分
表2.第2部分
研究设计的原理：本研究设计为以无偏方式获得功效、耐受性和安全性数据且确定所研究药物的剂量-反应特征的标准随机化、盲化安慰剂对照、平行组研究。纳入导入期以获得基线超声波心动图和使个体熟悉6mwt和手握力评价。第1部分和第2部分中的16周治疗视为足以使得每一半球中的冬季感冒和流感季节期间的rti临床上有意义降低。最后8周的研究将提供关于个体在中断研究药物治疗之后rti的降低是否持续的信息。将在第4周、第6周和第8周就诊时获得所有个体的pk样品，以在研究药物达到稳定状态水平时能够表征pk。
研究群体：来自由诺华(novartis)进行的两个先前临床试验(crad002x2202和cbez235y2201)的数据表明，利用低剂量的bez235和/或rad001治疗≥65岁的老年个体6周是安全的且降低rti的发生率。bez235在单独或与rad001组合时的风险/益处可对处于rti相关的发病率和死亡率风险增加的老年个体是最有利的。因此，在本研究中，将招募视为处于rti相关的发病率和死亡率风险增加的老年个体，如通过具有以下条件中的一者所界定：
-年龄>＝85
-年龄>＝65岁，患有：
-气喘
-copdgoldi类或ii类
ο支气管扩张剂后预计fev1/fvc<0.70且fev1≥50％
-慢性支气管炎
-t2dm
-chf纽约心脏学会(chfnewyorkheartassociation)功能分类i-ii
ο无症状或轻微症状(呼吸短促和/或心绞痛)和在平常活动中具有轻微局限性
-现时吸烟者
-在之前12个月期间因rti一或多次急诊室就诊或住院
其它纳入准则：
女性必须为绝经后的。如果女性已具有12个月的天然(自发)闭经且具有适宜临床表现(例如年龄适当、血管舒张症状史)或在至少六周前已进行手术性双侧卵巢切除术(含或不含子宫切除术)、总子宫切除术或输卵管结扎，则认为其为绝经后且无生育潜能。在单独卵巢切除术的情形下，仅在通过随访激素含量评价确认女性生殖状况时认为其无生育潜能。
配偶具有生育潜能的性活跃男性个体必须愿意在服用研究药物期间和在停止研究药物后1周内戴保险套，且在此时期期间不应使人受孕。为防止药物通过精液递送，切除输精管的男性还需要使用保险套。
在筛选和基线时，将在个体休息至少三(3)分钟之后以坐姿评价生命征象(收缩压和舒张压、脉搏率和呼吸率)。坐姿生命征象应在以下范围内：
·口腔或鼓室体温在35.0-37.5℃之间
·收缩压90-160mmhg
·舒张压50-95mmhg
·脉搏率40-95bpm
如果生命征象在这些范围以外，则研究人员可获得至多两次读数，因此至多做出连续3次评价。至少最后一组读数必须在以上所提供的范围内，以使个体具有资格。
个体必须重至少40kg。
个体必须能够与研究人员交流良好，且理解并依从本研究的要求。
研究结果可使用不同方法来量化。举例来说，可通过查看如通过感染总数除以个体总数所计算的在特定时期期间的感染率来量化结果。或者，可通过查看在特定时期期间患有一或多种感染的个体百分比来量化研究结果。
主要终点：本研究的主要终点是在16周的研究药物治疗期间经历一或多次rti的个体百分比的降低，这是因为rti在老年人中造成显著的发病率和死亡率(米力特(millett)等人，2013)。
次要终点：作为次要终点，将评价在24周内(研究药物治疗16周，之后为8周的无研究药物治疗)经历一或多次rti的个体百分比以测定老年个体在研究药物中断之后呼吸道感染率是否继续降低。
由于在老年人中大多数呼吸道感染是由病毒引起(杰恩等人，2015)，因此将在个体接受研究药物的16周期间评价bez235在单独或与rad001组合时对实验室确认的病毒性呼吸道感染发生率的效应(如通过鼻咽拭子的呼吸道病毒pcr所测定)。
作为额外的次要终点，将评估bez235在单独给予或与rad001组合时的药物动力学(pk)。
探索终点：作为探索终点，将在特定老年人子组中探索bez235在单独或与rad001组合时对rti发生率的效应以测定功效是否在子组之间有所变化。
还将探索与安慰剂相比，从基线到第16周或第24周bez235在单独或与rad001组合时对所有感染的发生率以及uti发生率的效应，这是因为在临床试验cbez235y2201中，利用每日10mgbez235或10mgbez235加上每日0.1mgrad001的组合治疗6周的老年个体在研究药物给予后一年内所有感染率显著下降且uti率下降。
作为额外的探索终点，将使用wurss-21调查评价与安慰剂相比，bez235在单独或与rad001组合时对上呼吸道症状的持续时间和/或严重程度的效应。
cbez235y2201的结果指示，当老年志愿者在接受流行性感冒疫苗之前两周接受6周疗程的低剂量bez235与rad001的组合时，其对流行性感冒疫苗接种的反应增强。因此，作为探索终点，将在研究期间接受流行性感冒疫苗作为其日常健康照护的一部分的个体中评价与安慰剂相比，bez235在单独或与rad001组合时对对流行性感冒疫苗接种的反应的效应。
bez235在单独或与rad001组合时的mtor抑制可具有抗衰老效应，而不仅仅改良免疫功能且降低感染率。在先前临床试验中，利用每日10mgbez235和0.1mgrad001的组合治疗6周的个体子组自发地报告在服用研究药物期间能量增加，但用安慰剂治疗的个体则不。另外，已注意到与经安慰剂治疗的对照相比，经mtor抑制剂雷帕霉素治疗的老年小鼠身体活动和/或握力增加(弗琳(flynn)等人，2013)。因此，作为额外的探索终点，将评价bez235在单独或与rad001组合时是否增加握力和/或耐力，如通过6mwt所评价。
还已报导mtor抑制剂改良老年小鼠的心脏功能(弗琳等人，2013)。因此，作为额外的探索终点，将测定与安慰剂相比，bez235在单独或与rad001组合时是否改良心脏功能，如通过相对于基线，第16周时的超声波心动描记术所评价。
作为最终探索终点，将评价bez235在单独或与rad001组合时对全血中基因表达和对血清蛋白质体学的效应，以进一步阐明bez235在单独或与rad001组合时可改良免疫功能和/或影响衰老生物学的机制。
剂量/方案的原理、给予途径和治疗的持续时间：在诺华临床研究cbez235y2201中，在老年个体接受研究药物治疗的6周期间，所有mtor抑制剂投用方案(每日10mgbez235、每日0.5mg或0.1mgrad001和每日10mgbez235加上每日0.1mgrad001)均耐受良好，且使呼吸道感染发生率降低50-60％之间。另外，每日10mgbez235和0.1mgrad001的组合显著改良对流行性感冒疫苗接种的反应。在本研究中，将扩展这些发现并确定每一半球中在呼吸道感染率最高时的冬季感冒和流感季节期间，当老年个体治疗更长的16周持续时间时，bez235在单独或与rad001组合时是否降低呼吸道感染的发生率。还将通过比较每日5mgbez235对每日10mgbez235的安全性和功效来研究bez235的最低有效剂量值。选择每日10mgbez235作为本研究中的剂量，这是因为其在临床研究cbez235y2201中与呼吸道感染和总感染二者的降低均相关。通过建模和模拟预测每日5mgbez235仅使s6k磷酸化抑制10％，且因此可为次治疗剂且可确立本研究中的最低有效剂量。将测试每日10mg以上bez235直到两次10mgbez235的剂量，这是因为在先前临床研究中bez235的pk变异性在25mg和以上的剂量下较高。因此，本文中所涵盖的某些投用方案包含一天两次给予(例如)10mgbez235。在一些所述实施例中，投用方案包含一天两次给予(例如)单独的10mgbez235(即，无rad001)或与rad001的组合，例如与每日剂量为0.1mg的rad001组合。在一些实施例中，本文中所涵盖的投用方案包含每日给予约0.015mg到约0.1mg范围内的量的rad001。在一些所述实施例中，组合给予约0.015mg到约0.1mg范围内的量的rad001与一定量的bez235。
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所列举实施例
在第一实施例中，本发明是一种方法，其包含向患者给予以下各项的步骤：(a)低剂量的rad001或其医药上可接受的盐；(b)低剂量的bez235或其医药上可接受的盐；或(c)其组合，其中较未给予rad001或其医药上可接受的盐、bez235或其医药上可接受的盐或其组合的患者，所述患者经历较少由感染所致的疾病。
在第二实施例中，本发明是根据第一实施例所述的方法，其中所述患者的先天性免疫增强。
在第三实施例中，本发明是根据第一或第二实施例所述的方法，其中抗原特异性免疫未增强。
在第四实施例中，本发明是根据第二实施例所述的方法，其中至少一种干扰素诱导基因(isg)上调。
在第五实施例中，本发明是根据第一到第四实施例中任一实施例所述的方法，其中所述感染为尿道感染；或牙齿或牙龈的感染。
在第六实施例中，本发明是根据第一到第四实施例中任一实施例所述的方法，其中所述感染为呼吸道感染。
在第七实施例中，本发明是根据第一到第四实施例中任一实施例所述的方法，其中所述感染为病毒性感染。
在第八实施例中，本发明是根据第一到第七实施例中任一实施例所述的方法，其中所述患者为老年人。
在第九实施例中，本发明是根据第一到第八实施例中任一实施例所述的方法，其中所述患者至少65岁。
在第十实施例中，本发明是根据第一到第九实施例中任一实施例所述的方法，其中所述患者至少75岁；或至少85岁。
在第十一实施例中，本发明是根据第一到第十实施例中任一实施例所述的方法，其中向所述患者给予所述低剂量的rad001或其医药上可接受的盐、所述低剂量的bez235或其医药上可接受的盐或其组合长达约连续6周。
在第十二实施例中，本发明是根据第十一实施例所述的方法，其中在给予所述rad001或其医药上可接受的盐、所述bez235或其医药上可接受的盐或其组合之后约1天直到约1年，所述患者继续经历较少由感染所致的疾病。
在第十三实施例中，本发明是根据第十一实施例所述的方法，其中在给予所述rad001或其医药上可接受的盐、所述bez235或其医药上可接受的盐或其组合之后至少1个月且直到约1年，所述患者继续经历较少由感染所致的疾病。
在第十四实施例中，本发明是根据第十一实施例所述的方法，其中在给予所述rad001或其医药上可接受的盐、所述bez235或其医药上可接受的盐或其组合之后至少3个月且直到约1年，所述患者继续经历较少由感染所致的疾病。
在第十五实施例中，本发明是根据第十一实施例所述的方法，其中在给予所述rad001或其医药上可接受的盐、所述bez235或其医药上可接受的盐或其组合之后至少6个月，所述患者继续经历较少由感染所致的疾病。
在第十六实施例中，本发明是根据第一到第十五实施例中任一实施例所述的方法，其中向所述患者给予所述低剂量的bez235或其医药上可接受的盐作为单一疗法。
在第十七实施例中，本发明是根据第一到第十五实施例中任一实施例所述的方法，其中向所述患者给予所述低剂量的rad001或其医药上可接受的盐作为单一疗法。
在第十八实施例中，本发明是根据第一到第十五实施例中任一实施例所述的方法，其中向所述患者给予所述低剂量的rad001或其医药上可接受的盐和所述低剂量的bez235或其医药上可接受的盐二者作为组合疗法。
在第十九实施例中，本发明是根据第一到第十六或第十八实施例中任一实施例所述的方法，其中接受所述低剂量的bez235或其医药上可接受的盐的患者的药物动力学auc变异性低于接受较高剂量的bez235或其医药上可接受的盐的患者。
在第二十实施例中，本发明是根据第一到第十五、第十七或第十八实施例中任一实施例所述的方法，其中rad001或其医药上可接受的盐呈中性形式。
在第二十一实施例中，本发明是根据第一到第十六或第十八实施例中任一实施例所述的方法，其中bez235或其医药上可接受的盐为单甲苯磺酸盐。
在第二十二实施例中，本发明是根据第一到第十五或第十七到第二十一实施例中任一实施例所述的方法，其包含给予0.01-0.2mg的rad001或其医药上可接受的盐。
在第二十三实施例中，本发明是根据第一到第十六或第十八到第二十二实施例中任一实施例所述的方法，其包含给予1-50mg的bez235或其医药上可接受的盐。
在第二十四实施例中，本发明是根据第一到第二十三实施例中任一实施例所述的方法，其中所述个体为免疫受损。
在第二十五实施例中，本发明是根据第一到第二十四实施例中任一实施例所述的方法，其中所述个体具有受损的免疫反应。
在第二十六实施例中，本发明是根据第一直到二十五实施例中任一实施例所述的方法，其中所述个体为免疫衰老个体。
在第二十七实施例中，本发明是上调至少一种干扰素诱导基因(isg)的方法，其包含向患者给予(a)低剂量的rad001或其医药上可接受的盐；(b)低剂量的bez235或其医药上可接受的盐；或(c)其组合。
在第二十八实施例中，本发明是上调至少一种参与细胞外基质重塑的蛋白质的方法，其包含向患者给予(a)低剂量的rad001或其医药上可接受的盐；(b)低剂量的bez235或其医药上可接受的盐；或(c)其组合。
在第二十九实施例中，本发明是根据第二十八实施例所述的方法，其中在治疗至少约1周；至少约2周；至少约3周；或至少约6周后，参与细胞外基质重塑的所述蛋白质显著上调。
在第三十实施例中，本发明是治疗与异常细胞外基质重塑相关的疾病或病状的方法，其包含向患者给予(a)低剂量的rad001或其医药上可接受的盐；(b)低剂量的bez235或其医药上可接受的盐；或(c)其组合。
在第三十一实施例中，本发明是根据第三十实施例所述的方法，其中所述与异常细胞外基质重塑相关的疾病或病状选自心脏衰竭、射血分数保留性心脏衰竭、慢性肾衰竭、肾小球肾病、皮肤老化、nash、肝纤维化/硬化、包括特发性肺纤维化在内的肺纤维化、衰老相关的肌腱功能障碍/变硬、包括骨关节炎在内的关节炎、肌少症、骨髓纤维化、骨髓发育不良、衰老相关的血脑障壁功能障碍、糖尿病性肾病变、动脉粥样硬化或伤口愈合。
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