脂质粒子组合物及医药组合物的制作方法

本发明涉及一种含有帕比司他或其盐的脂质粒子组合物及包含上述脂质粒子组合物的医药组合物。
背景技术：
：帕比司他是用于治疗多发性骨髓瘤的异羟肟酸衍生物，是非选择性组蛋白去乙酰化酶抑制药之一。帕比司他作为商品名farydak(注册商标)以胶囊型口服剂的形式销售。另一方面，进行了很多如下研究：通过脂质体制剂使药剂在癌症中累积并且使其长时间暴露。脂质体制剂是指在由脂质膜构成的脂质体中内含药物的制剂。例如，非专利文献1中记载有靶向骨髓的脂质体制剂。非专利文献1中，记载有包含1,2-二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酰胆碱(dppc)、胆固醇、l-谷氨酸、n-(3-羧基-1-氧代丙基)-1,5-双十六烷基酯(sa脂质)及聚(乙二醇)的脂质体，并且记载有sa脂质成分是通过骨髓吞噬细胞诱导吞噬作用的活性因子。非专利文献2中，记载有内含阿糖胞苷和柔红霉素的脂质体(cpx-351)显示高骨髓累积性。非专利文献2中，记载有cpx-351的骨髓中的积蓄在正常小鼠中与空脂质体相比高20％～50％，在白血病模型小鼠中与空脂质体相比高75％。以往技术文献非专利文献非专利文献1：keitarosouetal.,expertopindrugdeliv.2011march；8(3):317-328非专利文献2：abstract5534:liposomeaccumulationwithinleukemiaengraftedbonemarrowissignificantlyenhancedwhentheformulationcontainscytarabineplusdaunorubicin,,sharona.johnstone,sherwinxie,troyharasym,lawrencemayerandpaulg.tardi,doi:10.1158/1538-7445.am10-5534published15april2010,proceedings:aacr101stannualmeeting2010,apr17-21,2010；washington,dc技术实现要素：发明要解决的技术课题如上所述，虽然有关于显示高骨髓累积性的脂质体的几个例子的报告，但是并没有关于含有帕比司他或其盐且显示对骨髓的高靶向能力的脂质体组合物的见解。本发明的课题在于提供一种含有帕比司他或其盐且显示对骨髓的高靶向能力的脂质粒子组合物及包含上述脂质粒子组合物的医药组合物。用于解决技术课题的手段本发明人等为了解决上述课题进行了深入研究的结果，发现含有帕比司他或其盐的脂质粒子组合物即脂质粒子包含磷脂质及胆固醇类的脂质粒子组合物显示对骨髓的高靶向能力，从而完成了本发明。即，本发明提供以下。[1]一种脂质粒子组合物，其含有帕比司他或其盐，所述脂质粒子组合物中，脂质粒子包含磷脂质及胆固醇类。[2]一种脂质粒子组合物，其含有帕比司他或其盐，所述脂质粒子组合物中，作为帕比司他量将4mg/kg的脂质粒子组合物单次给药到小鼠的尾静脉之后直至无限时间的、由下述式1表示的面积比为5以上。式1：(骨髓中浓度-时间曲线下面积)/(消化道中浓度-时间曲线下面积)[3]根据[1]或[2]所述的脂质粒子组合物，其中，脂质粒子的平均粒径为50nm～500nm。[4]根据[1]至[3]所述的脂质粒子组合物，其中，帕比司他或其盐通过远程加载法内含于脂质粒子中。[5]根据[1]至[4]中任一项所述的脂质粒子组合物，其中，帕比司他或其盐的固化物存在于脂质粒子的表面及内部的至少一部分。[6]根据[2]至[5]中任一项所述的脂质粒子组合物，其中，脂质粒子包含磷脂质及胆固醇类。[7]根据[1]至[6]中任一项所述的脂质粒子组合物，其包含具有甘油骨架的磷脂质作为磷脂质。[8]根据[7]所述的脂质粒子组合物，其中，具有甘油骨架的磷脂质为磷脂酰胆碱。[9]根据[1]至[6]中任一项所述的脂质粒子组合物，其包含鞘磷脂作为磷脂质。[10]根据[9]所述的脂质粒子组合物，其中，鞘磷脂为神经鞘磷脂。[11]根据[1]至[10]中任一项所述的脂质粒子组合物，其中，磷脂质包含碳原子数20以上的脂肪酸残基。[12]根据[1]至[11]中任一项所述的脂质粒子组合物，其中，脂质粒子还包含聚乙二醇脂质。[13]根据[12]所述的脂质粒子组合物，其中，构成脂质粒子的总脂质中的聚乙二醇脂质的比率为5摩尔％以下。[14]根据[1]至[11]中任一项所述的脂质粒子组合物，其中，脂质粒子实质上不包含聚乙二醇脂质。[15]根据[1]至[14]中任一项所述的脂质粒子组合物，其中，脂质粒子包含阴离子性脂质。[16]一种医药组合物，其包含[1]至[15]中任一项所述的脂质粒子组合物。[17]根据[16]所述的医药组合物，其为抗癌剂。[18]一种对象的治疗方法，其包括将[1]至[17]中任一项所述的脂质粒子组合物给药到对象的步骤。[19]根据[1]至[17]中任一项所述的脂质粒子组合物，其用于癌症的治疗。[20]一种[1]至[17]中任一项所述的脂质粒子组合物在医药组合物的制造中的用途。[21]一种[1]至[17]中任一项所述的脂质粒子组合物在抗癌剂的制造中的用途。发明效果本发明的脂质粒子组合物及医药组合物显示对骨髓的高靶向能力。根据本发明的脂质粒子组合物及医药组合物，能够提供提高治疗指数的医药组合物。附图说明图1表示基于含有帕比司他的脂质粒子的透射式电子显微镜(transmissionelectronmicroscope；tem)的图像。图2表示含有帕比司他的脂质粒子或帕比司他溶液的给药后的血浆中的帕比司他浓度的测定的结果。图3表示含有帕比司他的脂质粒子或帕比司他溶液的给药后的组织中的帕比司他浓度的测定的结果。图4表示对molm-13原位模型小鼠中的对白血病细胞的生长抑制活性进行了测定的结果。图5表示对骨髓中巨噬细胞数及细胞中脂质粒子量进行了分析的结果。图6表示对骨髓中的细胞因子的表达进行了分析的结果。具体实施方式本说明书中，用“～”表示的数值范围表示将“～”前后所记载的数值分别作为最小值及最大值而包含的范围。本说明书中，组合物中的各成分的量在组合物中存在多种属于各成分的物质时，只要无特别限定，则是指组合物中存在的该多种物质的总量。“空脂质体”是指不含有药物的脂质体。“释放”是指脂质粒子(脂质体等)中含有的药物通过构成脂质粒子(脂质体等)的脂质膜而向脂质粒子(脂质体等)的外部排出。“血中滞留性”是指在给与脂质粒子(脂质体等)组合物的对象中，封入到脂质粒子(脂质体等)的状态的药物存在于血液中的性质。“脂质粒子(脂质体等)的平均粒径”是指存在于脂质粒子(脂质体等)组合物中的脂质粒子(脂质体等)的体积平均粒径。本发明的脂质粒子组合物中所含有的脂质粒子的平均粒径利用动态光散射法来测定。作为利用了动态光散射的市售的测定装置，可列举浓厚系粒子分析仪fpar-1000(otsukaelectronicsco.,ltd制)、nan0tracupa(nikkisoco.,ltd.制)及nano-sizer(malverninstrumentsltd.制)等。“对象”是指需要预防或治疗疾病等的人、小鼠、猴、家畜等哺乳动物，优选为需要预防或治疗疾病等的人。以下，详细说明本发明。本发明的脂质粒子组合物为含有帕比司他或其盐的脂质粒子组合物，且为脂质粒子包含磷脂质及胆固醇类的脂质粒子组合物。(脂质粒子)脂质粒子是指由脂质构成的粒子，并无特别限定。本发明的脂质粒子中包含具有层状结构的脂质体，该脂质体为由脂质双分子膜构成的封闭囊泡。脂质体是由使用了脂质的脂质双层膜形成的封闭囊泡，并且在该封闭囊泡的空间内具有水相(内水相)。内水相包含水等。脂质体通常以分散在封闭囊泡外的水溶液(外水相)的状态而存在。脂质体可以是单层(也称为单层层状或unilamellar，且为双层膜为单层的结构。)，也可以是多层层状(也称为多层，且为洋葱状的形状的多个双层膜的结构。各层由水样层分开。)，在本发明中，从医药用途中的安全性及稳定性的观点考虑，优选为单层脂质体。本发明的脂质粒子还包括不具有如前述脂质体那样的脂质双分子膜结构(层状结构)的、具有粒子内部也填充有构成成分的结构的粒子。脂质形成的形态能够通过电子显微镜观察或使用了x射线的结构分析等来确认。例如，通过利用了cryo透射式电子显微镜观察(cryotem法)的方法，能够确认具有如下结构：如脂质体那样脂质粒子具有脂质双分子膜结构(层状结构)及内水层的结构；或如脂质体那样脂质粒子不具有脂质双分子膜结构(层状结构)及内水层但粒子内部具有电子密度高的芯，从而填充有以脂质为首的构成成分的结构。也能够通过x射线小角散射(saxs)测定由脂质粒子确认有无脂质双分子膜结构(层状结构)。脂质粒子只要是能够内含药物的脂质粒子，则其形态并无特别限定。“内含”是指对于脂质粒子，药物包含于内水相及/或膜本身的形态。例如，可列举将药物封入由膜形成的封闭空间内的形态、膜本身内含的形态等，也可以是这些的组合。脂质粒子的平均粒径通常为10nm～1000nm，优选为50nm～500nm，更优选为100nm～500nm，进一步优选为100nm～300nm。脂质粒子优选采用球状或与其接近的形态。本发明所涉及的脂质粒子的zeta电位并无特别限定，优选为-10mv以下，更优选为-15mv以下，进一步优选为-20mv以下，也优选设为-25mv以下，也更优选设为-30mv以下。从脂质选择构成脂质粒子的脂质双层的成分。作为脂质，能够任意使用溶解于水溶性有机溶剂及酯系有机溶剂的混合溶剂的物质。作为脂质，例如可列举磷脂质、除了磷脂质以外的脂质、胆固醇类、溶血磷脂质及它们的衍生物等。这些成分可以由单种或多种成分构成。本发明中的脂质粒子至少包含磷脂质及胆固醇类。作为磷脂质，例如可列举磷脂酰胆碱(卵磷脂)、磷脂酰甘油、磷脂酸、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、神经鞘磷脂、二氢神经鞘磷脂、心磷脂等天然或合成磷脂质或将这些氢化而成的物质(例如，氢化大豆磷脂酰胆碱(hspc))等。另外，本发明中，“磷脂质”是指还包含修饰磷脂质而成的磷脂质衍生物。本发明中，作为磷脂质，优选包含具有甘油骨架的磷脂质。作为具有甘油骨架的磷脂质，尤其优选磷脂酰胆碱。作为磷脂酰胆碱，能够使用1,2-花生四烯酰磷脂酰胆碱(1,2-diarachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine)等。并且，本发明中，也优选包含鞘磷脂作为磷脂质。能够使用神经鞘磷脂等作为鞘磷脂。从减少帕比司他或其盐的释放并提高血中滞留性的观点考虑，优选本发明中的磷脂质包含碳原子数20以上的脂肪酸残基。作为除了磷脂质以外的脂质，可列举不包含磷酸的脂质，例如可列举在其分子内不具有磷酸部分的甘油脂质、在其分子内不具有磷酸部分的鞘脂质等。另外，本发明中，“除了磷脂质以外的脂质”还包含修饰除了磷脂质以外的脂质而成的除了磷脂质以外的脂质的衍生物。作为胆固醇类，能够列举将环戊烷多氢菲作为基本骨架，其一部分或所有的碳被氢化的胆固醇及其衍生物。例如，可列举胆固醇。若将脂质粒子的平均粒径微细化而使其成为100nm以下，则脂质膜的曲率变高。在脂质粒子中排列的膜的变形也变大。有效的是为了填补基于脂质的膜的变形(膜稳定化效果)而添加胆固醇等。在脂质粒子中，胆固醇类的添加可期待通过填补脂质粒子的膜的空隙等而使脂质粒子的膜的流动性降低。相对于构成本发明所涉及的脂质粒子的脂质的合计量的胆固醇类的含有率优选为10mol％～50mol％，更优选为20mol％～45mol％，进一步优选为30mol％～45mol％，尤其优选为35mol％～45mol％。本发明中的脂质粒子可以包含用亲水性高分子进行修饰而成的脂质。作为亲水性高分子，例如可列举聚乙二醇类、聚甘油类、聚丙二醇类、聚乙烯醇、苯乙烯-马来酸酐交替共聚物、聚乙烯吡咯烷酮、合成聚氨基酸等。上述亲水性高分子能够分别单独使用或组合使用2种以上。这些中，从组合物的血中滞留性的观点考虑，优选聚乙二醇类、聚甘油类及聚丙二醇类，更优选聚乙二醇(peg)、聚甘油(pg)及聚丙二醇(ppg)。从通用性及血中滞留性的观点考虑，进一步优选聚乙二醇(peg)。聚乙二醇的重均分子量并无特别限定，为500～10,000道尔顿，优选为1,000～7,000道尔顿，更优选为2,000～5,000道尔顿。作为本发明中的脂质粒子的第一方式，优选与以脂质粒子中所含有的主要脂质一同使用通过peg修饰的脂质(聚乙二醇脂质)。作为聚乙二醇脂质，例如可列举1,2-二硬脂酰-3-磷脂酰乙醇胺-peg2000(nipponoil&fatsco.,ltd.制)、1,2-二硬脂酰-3-磷脂酰乙醇胺-peg5000(nipponoil&fatsco.,ltd.制)及二硬脂酰甘油酯-peg2000(nipponoil&fatsco.,ltd.制)等1,2-二硬脂酰-3-磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇。构成脂质粒子的总脂质中的聚乙二醇脂质的比率通常为0.01～10摩尔％，优选为0.05～8摩尔％，更优选为0.1～7摩尔％，也优选设为5摩尔％以下，也更优选设为1摩尔％以下。作为本发明中的脂质粒子的第二方式，优选脂质粒子实质上不包含聚乙二醇脂质。本发明中的脂质粒子也优选与脂质粒子中所含有的主脂质一同包含阴离子性脂质。作为阴离子性的脂质，例如可列举具有1,2-二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酸甘油钠盐(1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphoglycerol,sodiumsalt)(coatsomemg-6060ls、nofcorporation制)等磷脂酰甘油的脂质、具有1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油-3-磷脂酸钠盐(1,2-dimyristoyl-sn-glycero-3-phosphatidicacid,sodiumsalt)(coatsomema-6060ls、nofcorporation制)等磷脂酸的脂质、具有1,2-二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酸-l-丝氨酸钠盐(1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-phospho-l-serine,sodiumsalt)(coatsomems-6060ls、nofcorporation制)等磷脂酰丝氨酸的脂质、具有1-硬脂酰-2-溶血-sn-甘油-3-磷酰胆碱(1-stearoyl-2-lyso-sn-glycero-3-phosphocholine)(cotsomemc-80h，nofcorporation制)等溶血磷脂质、胆固醇琥珀酸单酯(cholesterylhemisuccinate)(chems,avantipolarlipids,inc.制)等阴离子性基团的类固醇衍生物、硬脂酸等脂肪酸等。构成脂质粒子的总脂质中的阴离子性脂质的比率并无特别限定，为0.01～50摩尔％，优选为0.05～30摩尔％，更优选为0.1～10摩尔％。阴离子性脂质可以与peg脂质组合使用，也可以不使用peg脂质而单独使用。并且，上述亲水性高分子能够分别单独使用或组合使用2种以上。脂质粒子中，除了上述成分以外，为了改善血中滞留性可以添加亲水性高分子等，作为膜结构的稳定剂可以添加脂肪酸或二乙酰磷酸酯(diacetylphosphate)等，作为抗氧化剂可以添加α-生育酚等。本发明中，优选不使用在医药用途中未认可在静脉注射用途中使用的分散助剂等添加剂，例如表面活性剂等。(帕比司他)本发明的脂质粒子组合物含有帕比司他或其盐作为药物。帕比司他(panobinostat)是用于治疗多发性骨髓瘤的异羟肟酸衍生物，是非选择性组蛋白去乙酰化酶抑制药之一。以下示出帕比司他的化学结构。[化学式1]作为帕比司他的盐，能够列举通常已知的氨基等碱性基团中的盐。作为碱性基团中的盐，例如可举出与盐酸、氢溴酸、磷酸、硼酸、硝酸及硫酸等无机酸的盐；与甲酸、乙酸、乳酸、柠檬酸、草酸、富马酸、马来酸、琥珀酸、苹果酸、酒石酸、天冬氨酸、三氯乙酸及三氟乙酸等有机羧酸的盐；以及与甲磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、均三甲苯磺酸及萘磺酸等磺酸的盐。作为帕比司他的盐的一例，能够列举帕比司他的乳酸盐，以下示出其结构。[化学式2](脂质粒子组合物中所含有的帕比司他或其盐)本发明的脂质粒子组合物中，脂质粒子内的帕比司他或其盐的存在状态并无特别限定，如后所述，推测是由于在骨髓中与空脂质体的累积性不同，帕比司他或其盐的至少一部分以影响基于识别脂质粒子的血液中的蛋白质或巨噬细胞等的细胞进行的识别的形式存在。即，推测是帕比司他或其盐的一部分存在于脂质粒子的膜表面，还是以影响存在于膜表面的脂质分子的移动性的状态存在。本发明的脂质粒子组合物中，内含的帕比司他或其盐为高浓度时，作为帕比司他或其盐的存在状态，有时以可从图1的tem图像中读取的方式，帕比司他或其盐中的一部分作为固化物存在于脂质粒子的表面及内部的至少一部分。在这种情况下，帕比司他或其盐的剩余部分也可以以溶解于脂质粒子的内水相的状态存在。其中，所谓溶解状态，是指相对于脂质粒子的体积所填充的药物的量为其内水相的组合液中的药物的饱和溶解度以下时，视为以溶解状态内含。并且，即使在饱和溶解度以上，通过cryo-tem[通过冷冻样品的透射式电子显微镜(tem)的观察]未观察到药物晶体，或者在xrd测定中未观察到因晶体格子所导致的衍射图案时，脂质粒子中内含的药物的大部分溶解，且视为以溶解状态存在。本发明中，固化物是指能够利用透射式电子显微镜(tem)观察的固体。(帕比司他或其盐/脂质比)本发明中的脂质粒子中的帕比司他或其盐/脂质比为10～500mg/mmol，优选为20～400mg/mmol，更优选为30～300mg/mmol。当包含帕比司他的盐时，帕比司他或其盐/脂质比中以作为帕比司他换算的量计算。另外，帕比司他或其盐/脂质比中的脂质是指构成脂质粒子的所有脂质，脂质还包含胆固醇或溶血磷脂质。(脂质粒子组合物)本发明的脂质粒子组合物中，将4mg/kg的脂质粒子组合物作为帕比司他量单次给药到小鼠的尾静脉之后直至无限时间的、由下述式1表示的面积比优选大于1，更优选为2以上，进一步优选为3以上，进一步优选为5以上，更进一步优选为10以上，尤其优选为12以上。式1：(骨髓中浓度-时间曲线下面积)/(消化道中浓度-时间曲线下面积)本发明的脂质粒子组合物中，由下述式2表示的骨髓累积率(％id/g)优选为10％id/g以上，更优选为15％id/g以上，更优选为20％id/g以上，进一步优选为30％id/g以上，尤其优选为40％id/g以上。本发明的实施例所示的骨髓累积率作为将用dii(1,1’-dioctadecyl-3,3,3’,3’-tetramethylindocarbocyanineperchlorate：1,1'-双十八烷基-3,3,3',3'-四甲基吲哚菁高氯酸盐)标记的含有帕比司他的脂质粒子组合物(作为帕比司他量为6mg/kg或4mg/kg)给药到小鼠的尾静脉之后72小时后的、大腿骨骨髓每1g的给药的脂质粒子中累积于骨髓的比例(％注射剂量/g)而求出，并且由下述式2表示。式2：骨髓累积率(％id/g)＝骨髓中dii浓度(ng/g)/(给药液中dii浓度(ng/ml)×给药容量(ml))×100为了求出上述骨髓累积率(％id/g)，可以使用与本发明中使用的dii不同的标志，也可以不使用标志，通过追踪构成脂质粒子的脂质来求出骨髓累积率。并且，如本发明的实施例所示，除了预先标记脂质粒子组合物的方法以外，如实施例25所示那样，也能够利用之后标记脂质粒子组合物的方法求出骨髓累积率。本发明的脂质粒子组合物能够包含含有帕比司他或其盐的脂质粒子及使上述脂质粒子分散的水性溶剂。本发明的脂质粒子组合物可以包含与给药途径有关，且医药学上容许的等渗剂、稳定剂、抗氧化剂及ph调整剂中的至少1种。作为等渗剂，并无特别限定，例如可列举如氯化钠、氯化钾、磷酸氢钠、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾之类的无机盐类、如甘油、甘露糖醇、山梨糖醇之类的多元醇类、如葡萄糖、果糖、乳糖或蔗糖之类的糖类。作为稳定剂，并无特别限定，例如可列举如甘油、甘露糖醇、山梨糖醇、乳糖或蔗糖之类的糖类。作为抗氧化剂，并无特别限定，例如可列举抗坏血酸、尿酸、生育酚同系物(例如，维生素e、生育酚α、β、γ、δ这4个异构体)、半胱氨酸、edta(乙二胺四乙酸)、没食子酸丙酯、bht(二丁基羟基甲苯)、bha(丁基羟基苯甲醚)、焦亚硫酸钠等。稳定剂及抗氧化剂能够分别单独使用或组合使用2种以上。作为ph调整剂，例如可列举氢氧化钠、柠檬酸、乙酸、三乙醇胺、磷酸氢钠、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾等。本发明的脂质粒子组合物可以含有药物学上容许的有机溶剂、胶原、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、羧乙烯基聚合物、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸钠、藻酸钠、水溶性葡聚糖、羧甲基淀粉钠、果胶、甲基纤维素、乙基纤维素、黄原酸胶、阿拉伯胶、酪蛋白、明胶、琼脂、双甘油、丙二醇、聚乙二醇、凡士林、石蜡、硬脂醇、硬脂酸、人血清白蛋白(hsa)、甘露醇、山梨糖醇、乳糖、磷酸缓冲生理盐水(pbs)、氯化钠、糖类、生物体内降解性聚合物、无血清培养基、作为药品添加物而容许的添加物。填充本发明的脂质粒子组合物的容器并无特别限定，优选为透氧性低的材质。例如，可列举由具有塑料容器、玻璃容器、铝箱、铝蒸镀膜、氧化铝蒸镀膜、氧化硅蒸镀膜、聚乙烯醇、乙烯-乙烯醇共聚物、聚对苯二甲酸乙二醇酯、聚萘二甲酸乙二醇酯、聚偏二氯乙烯等来作为阻气层的层压薄膜制成的袋(bag)等，还能够根据需要通过采用使用了着色玻璃、铝箔或铝蒸镀膜等的袋等来遮光。填充脂质粒子组合物的容器中，为了防止由存在于容器内的空间部的氧引起的氧化，优选用氮气等非活性气体置换容器空间部及药液中的气体。例如，可列举对注射液进行氮气鼓泡，且在氮气环境下进行向容器的填充。为了防止脂质粒子组合物中的脂质和原料药的分解，也优选进行冷冻干燥。例如，可列举将脂质粒子分散在包含蔗糖的水相中并进行冷冻干燥。(脂质粒子组合物的制造方法)本发明的脂质粒子组合物的制造方法并无特别限定，作为一例，能够通过如下工序来制造：(a)油相的制备；(b)水相的制备；(c)通过乳化形成脂质粒子；(d)基于挤出机的整粒；(e)基于透析的脂质粒子外水相液的置换；(f)通过远程加载使帕比司他内含于脂质粒子中；及(g)通过透析去除外水相帕比司他。＜(a)油相的制备＞(a)在油相的制备中，混合构成脂质粒子的各成分(磷脂质、胆固醇类等)与有机溶剂，并能够通过加热混合物使上述成分溶解来制造油相。油相中使用的有机溶剂并无特别限定，例如，能够使用可与水任意混合的水溶性有机溶剂。作为水溶性有机溶剂，例如可列举：甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇及叔丁醇等醇类；甘油、乙二醇及丙二醇等二醇类；聚乙二醇等聚亚烷基二醇类等。这些中，优选醇类。作为醇类，优选为选自乙醇、甲醇、2-丙醇及叔丁醇中的至少1种，更优选为选自乙醇、2-丙醇及叔丁醇中的至少1种，进一步优选为乙醇。脂质的浓度并无特别限定，能够适当地进行调整。＜(b)水相的制备＞作为水相，能够使用水(蒸馏水、注射用水等)、生理盐水、各种缓冲液或糖类的水溶液及这些的混合物(水性溶剂)。本发明中，在通过后述的远程加载将帕比司他内含于脂质粒子中时，作为水相，优选使用含有铵盐的水溶液。作为缓冲液，并不限定于有机系、无机系，优选使用在接近体液的氢离子浓度附近具有缓冲作用的缓冲液，且可列举磷酸缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液、柠檬酸缓冲液、乙酸缓冲液及good's缓冲液(good'sbuffers)等。关于脂质粒子的内水相，在制造脂质粒子时，可以是分散脂质粒子的水溶液，也可以是新添加的水、生理盐水、各种缓冲液或糖类水溶液及这些的混合物。用作外水相或内水相的水优选不包含杂质(尘埃、化学物质等)。生理盐水是指调整成与人体等渗的无机盐溶液，且还可以具有缓冲功能。作为生理盐水，可列举含有0.9w/v％(质量/体积％)的氯化钠的食盐水、pbs及三羟甲基氨基甲烷缓冲生理盐水等。本发明中，水相是指包含外水相及内水相这两者。本发明中的外水相是指分散脂质粒子的水溶液。例如为注射剂的情况下，进行药瓶或预充式注射器包装而保管的占脂质粒子分散液的脂质粒子外侧的溶液成为外水相。并且，关于通过所添加的分散用溶液或其他溶解液给药时用时分散的溶液也相同，占脂质粒子分散液的脂质粒子外侧的溶液成为外水相。本发明中的内水相是指隔着脂质粒子的脂质双层膜的封闭囊泡内的水相。＜(c)通过乳化形成脂质粒子＞乳化工序中，能够将至少1种脂质溶解在有机溶剂中的油相与水相进行混合并搅拌包含脂质的水溶液来进行乳化。将脂质溶解于有机溶剂中的油相及水相进行混合并搅拌，且进行乳化，由此制备油相及水相乳化成o/w型(水中油型)的乳化液。混合后，通过蒸发去除源自油相的有机溶剂的一部分或全部，由此形成脂质粒子。或者，油相中的有机溶剂的一部分或全部在搅拌、乳化的过程中蒸发而形成脂质粒子。作为搅拌的方法，为了粒子微细化而利用超声波或机械剪切力。并且，为了粒径的均匀化，能够进行通过一定孔径的过滤器的挤出机处理或微射流机处理。若使用挤出机等，则能够分散辅助形成的多囊脂质粒子而使其成为单囊脂质粒子。乳化工序只要是进行乳化的工序则并无限定，优选为施加高剪切，且在包含有机溶剂的乳化工序中进行微粒子化的工序。根据需要，能够通过使在乳化工序中所使用的有机溶剂蒸发(去溶剂)而形成脂质粒子。制造脂质粒子时的乳化工序的液温能够适当进行调整，优选设为使用油相与水相的混合时的液温的脂质的相转变温度以上，例如，使用相转变温度为35～40℃的脂质时，优选设为35℃～70℃。乳化工序中，可以使有机溶剂和水从包含脂质粒子的水溶液中蒸发。在此所谓蒸发可以是作为蒸发工序强制去除源自油相的有机溶剂和源自水相的水的一部分或全部的工序，也可以是源自油相的有机溶剂和源自水相的水的一部分或全部在搅拌、乳化的过程中自然蒸发的工序。蒸发的方法并无特别限定，例如进行通过对有机溶剂和水进行加热而使其蒸发的工序、乳化后静置或持续缓慢搅拌的工序及进行真空脱气的工序中的至少一个即可。＜(d)基于挤出机的整粒＞所获得的脂质粒子能够使用透析法、过滤法或挤压处理等使粒径变得均匀。挤压处理是指，使脂质粒子通过具有细孔的过滤器，由此实施物理剪切力，并进行微粒化的工序。使脂质粒子通过时，将脂质粒子分散液及过滤器保温在构成脂质粒子的膜的相转变温度以上的温度，由此能够迅速进行微粒化。另外，可以进行基于挤出机的整粒，也可以不进行。＜(e)基于透析的脂质粒子外水相液的置换＞本发明中，在通过远程加载使帕比司他内含于脂质粒子中时，可以通过透析置换脂质粒子外水相液。作为透析液，能够使用0.1～5质量％的nacl水溶液，但并无特别限定。通过使用上述透析液透析脂质粒子液，由此去除存在于外水相的铵盐，能够获得用透析液置换外水相的脂质粒子。＜(f)通过远程加载法使帕比司他内含于脂质粒子中＞本发明中，优选通过远程加载法使帕比司他内含于脂质粒子中。本发明中，远程加载法是指，制造没有内含有药物的空脂质体，并通过向脂质体外液添加药物而向脂质体中导入药物的方法。关于远程加载的方法并无特别限定，可例示使用了柠檬酸缓冲液或硫酸铵的方法。远程加载法中，添加到外液中的药物积极地转移到脂质粒子中并摄入到脂质粒子。作为该驱动力，可使用溶解度梯度、离子梯度、ph梯度等。例如有使用隔着脂质粒子膜而形成的离子梯度将药物导入到脂质粒子内部的方法。例如有利用na+/k+浓度梯度通过远程加载法预先形成的脂质粒子中添加药物的技术。离子梯度中也通常使用质子浓度梯度，例如，可列举具有使用柠檬酸而使脂质粒子膜的内侧(内水相)ph低于外侧(外水相)ph的ph梯度的形式。ph梯度具体地能够通过铵离子梯度及/或具有可质子化的氨基的有机化合物的浓度梯度等形成。铵离子源并无特别限定，优选使用水溶性的铵盐，可列举硫酸铵、氯化铵、甲酸铵、琥珀酸铵、乙酸铵等。＜(g)通过透析去除外水相帕比司他＞为了去除未包含于脂质粒子的帕比司他，可以对内含帕比司他的脂质粒子液进行透析。例如，使用规定浓度的蔗糖/组氨酸缓冲液作为透析液，通过对内含帕比司他的脂质粒子液进行透析来去除存在于外水相的帕比司他，从而能够获得用透析液置换外水相的脂质粒子组合物。＜无菌过滤＞上述所获得的脂质粒子组合物优选进行无菌过滤。作为过滤的方法，能够使用中空纤维膜、反渗透膜或膜过滤器等从包含脂质粒子的水溶液中去除多余物。本发明中，优选通过具有能够灭菌的孔径的过滤器(优选0.2μm的过滤灭菌过滤器)进行过滤。为了防止因脂质粒子的变形给平均粒径带来的影响，优选在构成脂质粒子的脂质的相转变温度以下的温度下进行无菌过滤工序及后述的无菌填充工序。例如，当脂质的相转变温度为50℃附近时，优选为0～40℃左右，更具体而言，优选在5～30℃左右的温度下制造。＜无菌填充＞无菌过滤后获得的脂质粒子组合物优选作为医疗用途而进行无菌填充。无菌填充的方法能够应用公知的方法。通过向容器无菌地填充而能够制备作为医疗用而优选的脂质粒子组合物。(医药组合物)本发明的脂质粒子组合物能够用作医药组合物。即，根据本发明，提供一种包含本发明的脂质粒子组合物的医药组合物。作为本发明的医药组合物的给药途径，优选非口服给药。例如，能够列举点滴等静脉内注射(静注)、肌肉内注射、腹腔内注射、皮下注射、眼内注射及髓腔内注射。作为给药方法，可列举基于注射器或点滴的给药。关于作为脂质粒子组合物中所含的药物的帕比司他或其盐的给药量及给药次数，作为帕比司他或其盐的质量，每天通常能够设定在0.01mg/kg～100mg/kg的范围内，但本发明的脂质粒子组合物并不限定于这些给药量。本发明的医药组合物能够优选用作抗癌剂。作为本发明的医药组合物的适用对象的癌症的种类并无特别限定，例如，可列举多发性骨髓瘤、急性髓细胞白血病、慢性髓细胞白血病、急性淋巴细胞白血病、成人t细胞白血病、骨髓转移癌、骨肉瘤、慢性粒单核细胞白血病(chronicmyelomonocyticleukemia)、霍奇金淋巴瘤、皮肤t细胞淋巴瘤、乳腺癌、前列腺癌、子宫体癌、卵巢癌、肺癌、胃(胃腺)癌、非小细胞肺癌、胰腺癌、颈部鳞状上皮细胞癌、食道癌、膀胱癌、黑色素瘤、大肠癌、肾细胞癌、非霍奇金淋巴瘤及尿路上皮癌等。实施例以下，通过实施例详细说明本发明。但是，本发明并不限定于实施例。[脂质粒子组合物的制作]＜实施例1＞(a)油相的制备分别称量了0.495g、0.153g、0.153g的1,2-花生四烯酰磷脂酰胆碱(1,2-diarachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine)(nipponfinechemicalco.,ltd.制，以下设为c20pc)、peg磷脂质(sunbrightdspe-020cn，nofcorporation制，以下设为dspe-peg)、胆固醇。将脂质粒子以dii(1,1’-dioctadecyl-3,3,3’,3’-tetramethylindocarbocyanineperchlorate：1,1'-双十八烷基-3,3,3',3'-四甲基吲哚菁高氯酸盐)标记，因此称量相对于总脂质成为0.2mol％的分量的dii，并将其溶解于乙醇中。向该dii乙醇溶液添加乙醇，总量设为11.25ml，进一步添加乙酸乙酯3.75ml。将称量的脂质与该有机溶剂混合，加热至60℃并使脂质溶解而成为油相。(b)水相的制备将硫酸铵0.9g溶解于水40g中，从而制备了水相。(c)通过乳化形成脂质粒子将(b)中制备的水相加热至70℃，添加了(a)中制备的油相总量之后(容积比：水相/油相＝8/3)，通过乳化机(excel自动破碎乳化机ed-3、nihonseikikaishaltd.制)以3000rpm(rotationperminute(每分钟转数)：1/60s-1)混合了30分钟。接着，通过一边在65℃下加热一边以300rpm继续搅拌而蒸发有机溶剂和水，并且在液体浓缩至15g为止的时点停止加热和搅拌并停止蒸发。(d)基于挤出机的整粒实施例1中并未实施整粒，但在下述表中记载的实施例中，“整粒”一栏有过滤器尺寸的记载的按以下要领实施了整粒。在70℃的加热下使用挤出机(miniextruder，avantipolarlipids,inc.制)，并通过使(c)中获得的液体依次通过过滤器来进行了整粒。过滤器的尺寸使用了各表的“整粒”一栏中记载的尺寸。在有多个过滤器尺寸的记载的实施例中，利用孔径大的过滤器进行整粒之后，继续利用孔径小的过滤器进行了整粒。(e)通过透析置换脂质粒子外水相液作为透析液使用了2.43质量％的nacl水溶液。使用该透析液对(c)或(d)中获得的液体在室温下进行透析，并去除存在于外水相的硫酸铵，获得了用透析液置换外水相的脂质粒子。(f)通过远程加载使帕比司他内含于脂质粒子中向帕比司他(apacpharmaceutical,llc制)添加注射用水而制成10mg/ml。此外，一边充分搅拌液体一边添加8mol/l的hcl溶液，将ph调整为约3而使帕比司他溶解。向该帕比司他溶液以1/1的容积比添加脂质粒子之后，在60℃下加热了120分钟。(g)通过透析去除外水相帕比司他作为透析液制备了包括9.4质量％蔗糖、10mmol/l组氨酸的蔗糖/组氨酸缓冲液。使用该透析液对(f)中获得的液体在室温下进行透析，并去除存在于外水相的帕比司他，获得了用透析液置换外水相的含有帕比司他的脂质粒子。＜实施例2＞将dspe-peg的使用量设为0.0153g，除此以外，以与实施例1相同的方式获得了含有帕比司他的脂质粒子。＜实施例3～13＞设为下述表中记载的脂质组成，除此以外，以与实施例1相同的方式获得了含有帕比司他的脂质粒子。下述表中，sm表示鞘磷脂(sphingomyelin)(coatsomenm-10，nofcorporation制)，dhsm表示二氢鞘磷脂(dihydrosphingomyelin)(对coatsomenm-10(nofcorporation制)加氢而成的合成品)。＜实施例14＞(a)油相的制备分别称量了0.420g、0.014g、0.155g的鞘磷脂(sphingomyelin)(coatsomenm-10，nofcorporation制，以下设为sm)、peg磷脂质(sunbrightdspe-020cn，nofcorporation制，以下设为dspe-peg)、胆固醇。由于用dii(1,1’-dioctadecyl-3,3,3’,3’-tetramethylindocarbocyanineperchlorate：1,1'-双十八烷基-3,3,3',3'-四甲基吲哚菁高氯酸盐)标记脂质粒子，因此称量相对于总脂质成为0.2mol％的分量的dii并使其溶解于乙醇中。向该dii乙醇溶液添加乙醇，总量设为11.25ml，进一步添加了乙酸乙酯3.75ml。将称量的脂质与该有机溶剂混合，加热至70℃以溶解脂质并制成油相。(b)水相的制备将硫酸铵0.9g溶解于水40g中，制备了水相。(c)基于乳化的脂质粒子形成将(b)中制备的水相加热至70℃并通过磁力搅拌器进行搅拌，向其中添加(a)中制备的油相总量并搅拌了30秒钟(容积比：水相/油相＝8/3)。接着，通过一边在65℃下加热一边以300rpm继续搅拌而蒸发有机溶剂和水，并且在液体浓缩至15g为止的时点停止加热和搅拌并停止蒸发。(d)基于挤出机的整粒在70℃的加热下使用挤出机(miniextruder，avantipolarlipids,inc.制)，并通过使(c)中获得的液体依次通过过滤器来进行了整粒。过滤器的尺寸使用了各表的“整粒”一栏中记载的尺寸。在有多个过滤器尺寸的记载的实施例中，利用孔径大的过滤器进行整粒之后，继续利用孔径小的过滤器进行了整粒。(e)通过透析置换脂质粒子外水相液作为透析液使用了720mm的nacl水溶液。使用该透析液对(d)中获得的液体在室温下进行透析，并去除存在于外水相的硫酸铵，获得了用透析液置换外水相的脂质粒子。(f)通过远程加载使帕比司他内含于脂质粒子中向帕比司他(apacpharmaceutical,llc制)添加注射用水而制成4mg/ml。此外，一边充分搅拌液体一边添加8mol/l的hcl溶液，将ph调整为约4而使帕比司他溶解。将该帕比司他溶液与720mm的nacl水溶液与脂质粒子以5/3/2的容积比进行混合之后，在60℃下加热了120分钟。(g)通过透析去除外水相帕比司他作为透析液制备了包括9.4质量％蔗糖、10mmol/l组氨酸的蔗糖/组氨酸缓冲液。使用该透析液对(f)中获得的液体在室温下进行透析，并去除存在于外水相的帕比司他，获得了用透析液置换外水相的含有帕比司他的脂质粒子。＜实施例15～25＞利用表2～4中记载的脂质组成，以与实施例14相同的方式获得了含有帕比司他的脂质粒子。实施例25中，未添加dii而制作了脂质粒子。在表2～4中，c20pc表示1,2-花生四烯酰磷脂酰胆碱(1,2-diarachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine)(nipponfinechemicalco.,ltd.制)，hspc表示氢化大豆磷脂酰胆碱(coatsomenc-21，nofcorporation制)，dppg表示1,2-二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酸甘油钠盐(1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphoglycerol,sodiumsalt)(coatsomemg-6060ls，nofcorporation制)，dppa表示1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油-3-磷脂酸钠盐(1,2-dimyristoyl-sn-glycero-3-phosphatidicacid,sodiumsalt)(coatsomema-6060ls，nofcorporation制)，dpps表示1,2-二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酸-l-丝氨酸钠盐(1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-phospho-l-serine,sodiumsalt)(coatsomems-6060ls，nofcorporation制)。在(f)通过远程加载使帕比司他内含于脂质粒子中的工序中，实施例17～25中将帕比司他溶液设为3.6mg/ml。并且，关于帕比司他溶液与720mm的nacl水溶液与脂质粒子的混合比，在实施例16中设为8/5/5，在实施例17～25中设为2/1/1。仅在实施例22中，平均粒径为331nm，大于其他粒径。这是因为通过dls进行的粒径测定中在1μm附近观察到凝聚物的峰值，从而较大地算出平均粒径。实施例22中，zeta电位的绝对值小，粒子彼此的静电相排斥小。并且，也未添加通过空间排斥防止粒子彼此的合一的dspe-peg等材料。骨髓累积率虽高，但是从粒子的稳定性的观点考虑，可以说其他实施例为优选方式。＜实施例25＞在实施例25中，(a)制备油相时不添加dii，并且对(g)中利用蔗糖/组氨酸缓冲液进行至透析的脂质粒子进行了使用dii的染色。在脂质粒子液500μl中混合3mg/ml的dii/乙醇溶液5μl并充分进行搅拌之后，通过凝胶过滤法用包括9.4质量％蔗糖、10mmol/l组氨酸的蔗糖/组氨酸缓冲液置换(pdminitrapg-25，gehealthcare制)外水相，并去除了剩余dii。＜比较例1＞向聚氧乙烯35蓖麻油(kolliphoreel，sigmacorporation制)与聚乙二醇400(wakopurechemicalindustries,ltd.制)的体积比1:4混合液照射超声波的同时使帕比司他溶解。以体积比1:7将所获得的溶液与生理盐水进行混合，由此获得了0.5mg/ml的帕比司他溶液。＜比较例2＞通过与实施例1中的(a)～(e)相同的工序制备脂质粒子，进一步以与实施例1中的(g)相同的方式将外水相置换成与实施例1相同的溶液，由此获得了不包含帕比司他的脂质粒子。＜比较例3＞分别称量16.63g、2.04g、4.15g的hspc、胆固醇及dspe-peg，与相对于总脂质成为0.2mol％的分量的dii一同溶解于乙醇303.75ml、乙酸乙酯101.25ml中而制成油相。将100mmol/l磷酸二氢钠5.6g、100mmol/l磷酸氢二钠37.6g、注射用水1037g进行混合而制成水相。将上述油相与水相混合，使用乳化法制作了用dii标记的空脂质体。使用0.09质量％的氯化钠水溶液用tff置换外水相，接着通过被动加载法密封了培美曲塞。使用包含9.4质量％蔗糖、0.155质量％组氨酸的蔗糖/组氨酸缓冲液进行透析，获得了含有培美曲塞的脂质粒子。＜比较例4＞分别称重12.42g、4.14g、4.14g的hspc、胆固醇及dspe-peg，与相对于总脂质成为0.2mol％的分量的dii一同溶解于乙醇303.4ml、乙酸乙酯101.25ml中而制成油相。将硫酸铵26.73g溶解于milliq水1080g中而制成水相。使用乳化法制作了用含有硫酸铵的dii标记的空脂质体。使用417mm的氯化钠水溶液通过tff置换外水相，接着通过远程加载法密封了阿霉素盐酸盐。使用包括9.4质量％蔗糖、0.155质量％组氨酸的蔗糖/组氨酸缓冲液进行透析，获得了含有阿霉素盐酸盐的脂质粒子。脂质粒子的组成参考了doxil注20mg的包装说明书中记载的组成(阿霉素盐酸盐2mg/ml、hspc9.58mg/ml、dspe-peg3.19mg/ml、胆固醇3.19mg/ml)。定量的结果为阿霉素盐酸盐2.24mg/ml、hspc11.5mg/ml、dspe-peg4.1mg/ml、胆固醇4.2mg/ml。[物性测定及评价]＜平均粒径＞本发明中，粒径是指通过动态光散射法测定的累积量平均粒径。各表中记载的实施例及比较例的平均粒径是利用带有自动进样器的浓厚系粒径分析仪fpar-1000as(otsukaelectronicsco.,ltd制)通过动态光散射法测定而得的累积量平均粒径。将测定结果示于各表。＜zeta电位＞在本发明中，zeta电位是指激光多普勒法测定的值。各表中记载的实施例的zeta电位是与外水相相同地利用包括9.4质量％蔗糖、10mmol/l组氨酸的蔗糖/组氨酸缓冲液将脂质粒子液稀释成20倍，并且通过zeta电位·粒径测定系统elsz-2(otsukaelectronicsco.,ltd制)测定的值。将测定结果示于各表。＜api浓度＞在本发明中，各表中记载的api浓度是指通过hplc(高效液相色谱法)测定脂质粒子中所含的帕比司他(自由体)的量的值。为了检测帕比司他使用了279nm的紫外光(uv)。＜脂质浓度＞在本发明中，各表中记载的脂质浓度是指通过hplc(高效液相色谱法)对脂质粒子所含的各脂质进行定量的各脂质的浓度的总和。为了检测脂质使用了带有电晕带电气溶胶检测器(coronacad(chargedaerosoldetector))。＜基于透射式电子显微镜(tem)的观察＞快速冷冻实施例1的脂质粒子组合物，使用通用tem在低温条件下进行观察获得了tem图像。将所获得的tem图像示于图1。根据图1的tem图像可知，帕比司他的固化物存在于脂质粒子的表面及内部中的至少一部分。＜骨髓中的脂质粒子的累积率的测定＞对于试验使用了icr小鼠(雄性、7周龄，此外icr为instituteofcancerresearch(癌症研究院)的首字母)。从尾静脉给予在用荧光色素(dii)标记的实施例1及实施例3～7中制备的含有帕比司他的脂质粒子(作为药物量为6mg/kg)。并且，从尾静脉给予用荧光色素(dii)标记的实施例2及实施例8～13中制备的含有帕比司他的脂质粒子(作为药物量为4mg/kg)。并且，从尾静脉给予用荧光色素(dii)标记的比较例2中制备的不含有帕比司他的脂质粒子(作为脂质量为与实施例1相同的量)。并且，从尾静脉给予用荧光色素(dii)标记的比较例3中制备的含有培美曲塞的脂质粒子(作为药物量为1.5mg/kg)。并且，从尾静脉给予用荧光色素(dii)标记的比较例4中制备的含有阿霉素盐酸盐的脂质粒子(作为药物量为16.7mg/kg)。给药后72小时内进行解剖，采集了大腿骨骨髓。针对采集的骨髓，使用hplc(高效液相色谱法)荧光检测器对给药液及组织中dii浓度进行定量，通过下述式2算出骨髓累积率。另外，用骨髓累积率、每1g骨髓的、给药的质粒子中累积在骨髓中的比例(％注射剂量/g)(还标记为％id/g)来表示。将测定结果示于各表中。式2：骨髓累积率(％id/g)＝骨髓中dii浓度(ng/g)/(给药液中dii浓度(ng/ml)×给药容量(ml))×100[表1][表2][表3][表4]与比较例2～4的脂质粒子组合物进行比较，本发明的实施例1～25的脂质粒子组合物显示出高骨髓累积性。根据实施例3～5及实施例22～24，添加的dspe-peg少的一方在骨髓中的累积性良好。并且，根据实施例10～13，粒径越大，骨髓中的累积能越良好，另一方面，即使是100nm左右的小的脂质粒子，也可获得比不内含帕比司他的脂质粒子(空脂质体)高的骨髓累积性。根据实施例14～17，骨髓累积性通过阴离子性脂质的添加而提高。可推测，如以下分析所示，内含帕比司他的脂质粒子通过被巨噬细胞识别而获得了骨髓中的高累积。上述因子被认为是均影响来自巨噬细胞的识别容易性而间接有助于提高骨髓累积能。例如，若zeta电位通过阴离子性脂质的添加而降低，则具有容易被巨噬细胞的清道夫受体识别等的效果，并且认为这与骨髓累积性的提高有关。＜组织中的帕比司他浓度的测定＞将实施例1、2、14及实施例19中制备的含有帕比司他的脂质粒子(作为药物量为4mg/kg)从尾静脉给予icr小鼠(雄性、7周龄)。并且，将比较例1中制备的帕比司他溶液(5mg/kg)在腹腔内给予icr小鼠(雄性、7周龄)。假设药效试验中的用量，实施例1、2、14及实施例19中制备的含有帕比司他的脂质粒子的给药量设定单次给药中的最大耐受量，比较例1中制备的帕比司他溶液的给药量设定8天连续给药中的最大耐受量。针对给予实施例1、2、14及实施例19中制备的含有帕比司他的脂质粒子的小鼠，给药后3、6、24、72、168小时内进行了解剖。针对给予比较例1中制备的帕比司他溶液的小鼠，给药后1、3、6、24、72小时内进行解剖，并采集了血液、大腿骨骨髓及消化道(回肠下部)。血液以800×g离心10分钟，回收了血浆。消化道通过冷冻破碎进行了均质化处理。针对所采集的血浆、骨髓及消化道，利用液相色谱法/质量分析/质量分析(lc/ms/ms)进行了组织中帕比司他浓度的定量。使用药代动力学分析软件winnonlin(注册商标)(certara)从所获得的组织中帕比司他浓度转变计算单次给药后直至无限时间的组织中浓度-时间曲线下面积(auc)。进一步由下式1算出组织中auc的骨髓/消化道比。将结果示于图2及图3以及表5。式1：骨髓/消化道比＝骨髓中帕比司他auc/消化道中帕比司他auc＝(骨髓中浓度-时间曲线下面积)/(消化道中浓度-时间曲线下面积)＜组织中的培美曲塞浓度的测定＞将比较例3中制备的含有培美曲塞的脂质粒子(作为药物量为1.5mg/kg)从尾静脉给予icr小鼠(雄性、7周龄)。针对比较例3中制备的含有培美曲塞的脂质粒子的小鼠，给药后在24、72、120、168小时内进行解剖，并采集了血液、大腿骨骨髓及消化道(回肠下部)。与帕比司他相同地对组织中培美曲塞浓度进行定量，算出auc及组织中auc的骨髓/消化道比。将结果示于表5。[表5]组织中的帕比司他auc(时间×ng/ml)(比较例1、实施例1、2、14及19)组织中的培美曲塞auc(时间×ng/ml)(比较例3)比较例1比较例3实施例1实施例2实施例14实施例19骨髓5914264791114988565474253778349117消化道62412465586028180512602318021骨髓/消化道的比1.01.113.031.39.819.4由上述结果示出，与比较例1中制备的帕比司他溶液及比较例3中制备的含有培美曲塞的脂质粒子相比，关于实施例1、2、14及实施例19中制备的含有帕比司他的脂质粒子，针对组织中的帕比司他auc，骨髓/消化道的比高，并且骨髓累积性良好。＜使用了molm-13原位模型小鼠的药效试验＞对nod/scid小鼠(雄性、8周龄)实施了通过环磷酰胺(125mg/kg、腹腔内给药、连续给药2天)及兔子抗唾液酸gm1抗体(wakopurechemicalindustries,ltd.)(0.4mg、腹腔内给药、单次给药)的免疫抑制。将作为人白血病细胞系的molm-13细胞3×106个移植到静脉内并在骨髓中移植存活。移植后第8天开始给予实施例1中制备的含有帕比司他的脂质粒子(作为药剂量为8mg/kg、尾静脉内给药、单次给药)、比较例1中制备的帕比司他溶液(5mg/kg、腹腔内给药、连续给药8天)、及作为阴性对照在比较例2中制备的不含帕比司他的脂质粒子(与实施例1中制备的含有帕比司他的脂质粒子的8mg/kg相应的脂质量、尾静脉内给药、单次给药)。并且，作为非移植组，设定了不实施免疫抑制及移植的组。移植后16天后(给药开始8天后)解剖小鼠，并采集了大腿骨骨髓。用溶血缓冲液处理所获得的骨髓并去除红血球之后，用percp标志抗人cd45抗体及dapi(4,6-二脒基-2-苯基吲哚(4,6-diamidino-2-phenylindole))染色。另外，percp表示多甲藻黄素-叶绿素-蛋白质复合物(peridinin-chlorophyll-proteincomplex)。使用流式细胞术测定骨髓活细胞中的白血病细胞(人cd45阳性，dapi阴性细胞)的比例，将molm-13原位模型小鼠中对白血病细胞的生长抑制活性进行了比较。将测定结果示于图4。由图4的结果可知，与比较例1中制备的帕比司他溶液及比较例2中制备的不含帕比司他的脂质粒子相比，实施例1中制备的含有帕比司他的脂质粒子显示高的白血病细胞的生长抑制活性，其效果取决于用量。＜骨髓中巨噬细胞数及细胞中脂质粒子量的分析＞将dii标记的实施例2中制备的含有帕比司他的脂质粒子以6mg/kg的药物量从尾静脉给予icr小鼠(雄性、7周龄)。对非给药、给药6小时后、给药96小时后的小鼠进行解剖，并采集了大腿骨骨髓。使用溶血缓冲液处理所获得的骨髓并去除红血球之后，用alexafluor(注册商标)647标记抗小鼠f4/80抗体、fitc标记抗小鼠cd11b抗体及dapi进行了染色。fitc表示异硫氰酸荧光素(fluoresceinisothiocyanate)。使用流式细胞术测定了骨髓活细胞中的巨噬细胞(小鼠f4/80阳性、小鼠cd11阳性、dapi阴性细胞)的比例。进而，针对给药后96小时的试样，以细胞内的dii的荧光强度为指标分析了引入到细胞内的脂质粒子量。将分析结果示于图5。图5中，表示巨噬细胞。由图5的结果可知，随着实施例2中制备的含有帕比司他的脂质粒子的给药后的时间的经过，骨髓中巨噬细胞数增加，含有帕比司他的脂质粒子引入到增加的巨噬细胞中。＜骨髓中细胞因子表达分析＞向icr小鼠(雄性、7周龄)给予实施例2中制备的含有帕比司他的脂质粒子(作为药剂量为4mg/kg、尾静脉内给药、单次给药)及比较例1中制备的帕比司他溶液(5mg/kg、腹腔内给药、单次给药)，给药72小时候解剖小鼠并采集了大腿骨骨髓。并且，作为阴性对照，针对非给药的小鼠也获得了大腿骨骨髓。添加骨髓重量的3倍量的pbs之后以300×g离心5分钟，回收了上清液。针对所获得的骨髓上清液进行基于bca法(二喹啉甲酸(bicinchoninicacid)法)的蛋白质浓度测定，并将各试样稀释成8mg/ml的蛋白质浓度。利用bio-plex小鼠细胞因子gi23-plex面板及bio-plex200系统(bio-rad)对各试样中的细胞因子浓度进行了定量。显示了将非给药时的细胞因子表达量的平均值设为1时的相对表达量变化。将分析结果示于图6。图6中，il表示白介素(interleukin)，g-csf表示粒细胞集落刺激因子(granulocyte-colonystimulatingfactor)，gm-csf表示粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocytemacrophagecolony-stimulatingfactor)，ifn表示干扰素(interferon)，kc表示角质细胞诱导因子(keratinocytechemoattractant)，mcp表示单核细胞趋化蛋白(monocytechemotacticprotein)，mip表示巨噬细胞炎症蛋白(macrophageinflammatoryprotein)，pantes表示调节激活正常t-细胞表达分泌因子(regulatedonactivetionnormaltexpressedandsecreted)，tnf表示肿瘤坏死因子(tumornecrotizingfactor)。由图6的结果，与非给药时相比，给予实施例2中制备的含有帕比司他的脂质粒子或比较例1中制备的帕比司他溶液时，存在细胞因子的表达增加的趋势，在实施例2中制备的含有帕比司他的脂质粒子中，细胞因子表达进一步增强。作为巨噬细胞累积在骨髓中的主要原因认为是细胞因子表达的增加。当前第1页12