本发明涉及一种促伤口愈合的载干细胞纤维蛋白凝胶的制备方法。
背景技术：
随着科技的发展，水凝胶在组织细胞培养和药物缓释载体及微胶囊方面的应用越来越多，水凝胶包括天然水凝胶和合成水凝胶。纤维蛋白胶是天然水凝胶中的一种，它能很好地被人体接受，无免疫反应；载有ca2+的纤维蛋白凝胶则可作为止血材料，对伤口具有良好的止血效果。但其不能补上伤口缺失的细胞，伤口容易形成凹陷的疤痕，痊愈时间长。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种用于促进伤口愈合的载干细胞纤维蛋白凝胶的制备方法，该方法制备的载干细胞纤维蛋白凝胶，能诱导干细胞向内皮化分化、促进内皮细胞的增殖、加速皮肤组织的愈合和修复，伤口痊愈快。
本发明实现其发明目的所采用的技术方案是，一种能促进伤口愈合的载干细胞纤维蛋白凝胶的制备方法，其步骤如下：
a、用生理盐水溶解牛纤维蛋白原，配成浓度为5-30mg/ml的溶液；再加入血管内皮生长因子，得混合液一，混合液一中血管内皮生长因子的浓度为50-150ng/ml；
b、用浓度为0.33-0.66mol/ml的cacl2溶液溶解人凝血酶，配成浓度为30-70iu/ml的人凝血酶溶液；再加入间充质干细胞，得到混合液二，混合液二中间充质干细胞的浓度为60-80×104个/ml；
c、用200μl移液枪将混合液一和混合液二按1:5的体积比，混合滴在聚二甲基硅氧烷基底上；然后，放在37℃的孵箱中，静置4-12h，即得。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明的纤维蛋白凝胶是用凝血酶激活纤维蛋白原形成纤维蛋白，纤维蛋白再交联形成。使用时将其粘合于创口，凝胶中携带的ca2+能促进人体的凝血酶原激活物的形成，加速伤口的凝血反应，起止血作用；同时，凝胶中包裹的血管内皮生长因子诱导包裹的间充质干细胞向内皮化分化，形成的内皮细胞进入伤口，促进伤口的内皮细胞生长、加速皮肤组织的愈合和修复，伤口痊愈快。
进一步，本发明的a、b、c步骤中的操作均在无菌条件下进行。
这样，可以确保制得的凝胶中不含有细菌，避免使用时凝胶中的细菌感染伤口。
下面结合具体实施方式对本发明做进一步的详细说明
具体实施方式
实施例一
一种能促进伤口愈合的载干细胞纤维蛋白凝胶的制备方法，其步骤如下：
a、用生理盐水溶解牛纤维蛋白原，配成浓度为5mg/ml的溶液；再加入血管内皮生长因子，得混合液一，混合液一中血管内皮生长因子的浓度为50ng/ml；
b、用浓度为0.33mol/ml的cacl2溶液溶解人凝血酶，配成浓度为30iu/ml的人凝血酶溶液；再加入间充质干细胞，得到混合液二，混合液二中间充质干细胞的浓度为60×104个/ml；
c、用200μl移液枪将混合液一和混合液二按1:5的体积比，混合滴在聚二甲基硅氧烷基底上；然后，放在37℃的孵箱中，静置4h，即得。
本例的a、b、c步骤中的操作均在无菌条件下进行。
实施例二
一种能促进伤口愈合的载干细胞纤维蛋白凝胶的制备方法，其步骤如下：
a、用生理盐水溶解牛纤维蛋白原，配成浓度为10mg/ml的溶液；再加入血管内皮生长因子，得混合液一，混合液一中血管内皮生长因子的浓度为100ng/ml；
b、用浓度为0.44mol/ml的cacl2溶液溶解人凝血酶，配成浓度为50iu/ml的人凝血酶溶液；再加入间充质干细胞，得到混合液二，混合液二中间充质干细胞的浓度为70×104个/ml；
c、用200μl移液枪将混合液一和混合液二按1:5的体积比，混合滴在聚二甲基硅氧烷基底上；然后，放在37℃的孵箱中，静置8h，即得。
本例的a、b、c步骤中的操作均在无菌条件下进行。
实施例三
一种能促进伤口愈合的载干细胞纤维蛋白凝胶的制备方法，其步骤如下：
a、用生理盐水溶解牛纤维蛋白原，配成浓度为30mg/ml的溶液；再加入血管内皮生长因子，得混合液一，混合液一中血管内皮生长因子的浓度为150ng/ml；
b、用浓度为0.66mol/ml的cacl2溶液溶解人凝血酶，配成浓度为70iu/ml的人凝血酶溶液；再加入间充质干细胞，得到混合液二，混合液二中间充质干细胞的浓度为80×104个/ml；
c、用200μl移液枪将混合液一和混合液二按1:5的体积比，混合滴在聚二甲基硅氧烷基底上；然后，放在37℃的孵箱中，静置12h，即得。
本例的a、b、c步骤中的操作均在无菌条件下进行。