本发明涉及一种中药新的应用，特别涉及一种鸡血藤提取物在制备抗肿瘤药物中的应用。
背景技术：
鸡血藤为豆科植物密花豆spatholobussuberectusdunn的干燥藤茎。具有活血补血，调经止痛，舒筋活络之功效。用于月经不调，痛经，经闭，风湿痹痛，麻木瘫痪，血虚萎黄。
血小板，是哺乳动物血液中的有形成分之一，是从骨髓成熟的巨核细胞胞质裂解脱落下来的具有生物活性的小块胞质，体积小，无细胞核。血小板在止血作用与血栓形成的病理生理过程中起到了至关重要的作用。血小板是最小的血细胞,但是其数量是约是白细胞个数的100倍。一个成年人的血液循环中大约有100～300*10^9个血小板参与受损血管的修复。血小板相互聚集，能够促进凝块形成过程中的凝血酶生成。
血小板的表面受体，例如gpib-ix-v复合物通过捆绑血管性血友病因子(vwf)支持血小板的粘附作用，从而能够与粘连蛋白(gp)结合。特别在血液的高剪切力下，血小板特有的αiibβ3整合素受体通过结合纤维蛋白原、gpia-iia胶原受体、血小板胶原受体(gpvi)等胶原受体，来诱导血小板聚集。血小板被异常激活后，血小板的细胞骨架进行结构重组，引起α颗粒、致密体和溶酶体的释放。激活的血小板引起gpiib-iiia受体构象发生变化，导致与高亲和力配体结合和血小板聚集[2]。血小板表面带负电的磷脂质暴露出来，导致血小板微粒(pmps)的生成，从而产生促凝血活性。
除了凝血止血功能之外，越来越多的实验证据表明，血小板能够在更多更重要的方面来平衡疾病与健康的关系，一方面，血小板能够促进伤口愈合、组织再生，另一方面，它还紧密参与某些重大疾病的发病机制过程，例如癌症。
实验与检验医学2016年8月第34卷第4期公开了“鸡血藤不同成分抗aa诱导的血小板聚集作用的实验研究”但其中没有说明血小板聚集和肿瘤的关系。
血小板与肿瘤的密切相护作用早已引起人们的关注和重视，早在100多年前,临床医师就观察到恶性肿瘤患者存在血小板增多的现象。1872年，riess首次报道了恶性肿瘤存在血小板增多，血小板异常增多，会引起血小板增多症，它常常被看做是一种被动的、副肿瘤性的疾病。19世纪，人们又发现肿瘤与血栓直接有着密切的关系。研究认为，血栓性静脉炎是恶性肿瘤发生的一个预警信号。静脉血栓栓塞的患者患有恶性肿瘤的风险比其他患者多七倍。血小板在其中起到了不可忽视的作用。
在上述病理现象的提示下，现代肿瘤学研究逐步意识到，肿瘤发生进展与血小板的病理性异动间并不是平行发生的伴发事件，两者之间具有高度的因果关联。
肿瘤细胞具有诱导血小板发生数值上和功能变化的病理性潜能，继而促进血栓形成。这一变化对于临床诊断恶性肿瘤和血栓有很好的提示作用。在此之后多项研究报道和临床实例表明，在肺癌、食管癌、胃癌、乳腺癌、肝癌、结直肠癌、胰腺癌等多种实体肿瘤中均存在血小板增多现象，而患有血小板增多症的肿瘤病人预后较差。
上述事实表明，血小板增多会导致肿瘤患者体内血液的高凝状态及血栓的发生，提示出血小板与肿瘤细胞增殖、血行转移和肿瘤内部血管生成有着密切关联，并在肿瘤的疾病进展、转移方面起着重要的作用，其中tcipa是血小板与肿瘤相互作用的最直接体现和最核心调控过程。
肿瘤细胞能够通过诱导血小板活化，使血小板激活并聚集在肿瘤细胞周围形成血小板——肿瘤细胞复合物，这一过程称为tcipa。这一现象最早于1865年被发现，并逐渐得到了系统而科学的阐释和验证。一方面，肿瘤细胞能够通过主动增强adp、thromobin等促凝血分子的表达，诱导血小板数目增多和功能活化，形成并维持患者血液的高凝状态。另一方面，异常活化的血小板，能够通过对肿瘤细胞的物理结合和生物屏蔽等效应，反向作用于肿瘤细胞，保护其在循环系统中免于受到物理剪切力损伤和免疫系统的杀伤清除，促进肿瘤细胞在靶器官上的粘附和定植。
以tcipa为靶点，利用阿司匹林进行药物干预，具有较高的抗转移效果。然而阿司匹林的成功应用并不代表着其广泛适用或可持续的应用。在有效应用的背后，却也具有着使用上的限制性:如阿司匹林抵抗现象在用药患者中普遍出现，其最高发生率高达60％。并且在部分用药患者身上，会伴随有胃溃疡、胃出血、耳鸣、出血性中风、在青少年中使用阿司匹林后，有发生瑞氏综合征的风险，会很快导致肝肾衰竭、脑损伤，甚至死亡。诸多副作用产生以上几点大大限制了这一治疗策略在临床中的应用，因此也推动了其他非阿司匹林类抗tcipa的药物的研发与出现。
在抗tcipa是抗肿瘤转移的核心事件的理论指导下，在aspirin能够有效的预防肿瘤转移的情况下，在aspirin却还有诸多不足的情形下，应用中医药相关知识，从中医药理论出发，寻找新的以抗tcipa为靶点的药物成为我们的首要问题。
技术实现要素：
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本发明对中药鸡血藤进行了研究，得到了以下技术解决方案。
本发明提供一种鸡血藤提取物在制备抗肿瘤药物中的应用，其中所述鸡血藤提取物选自：鸡血藤水提取物，鸡血藤乙酸乙酯提取物，鸡血藤正丁醇提取物。
本发明所述的应用，其中所述鸡血藤提水提取物，制备方法如下：鸡血藤70kg，每次用5倍量蒸馏水回流提取，共2次，每次2h，合并后减压浓缩，75℃蒸汽真空干燥7h。获得鸡血藤水提取物6kg，得到水提取物。
本发明所述的应用，其中所述鸡血藤乙酸乙酯提取物，制备方法如下：鸡血藤70kg，每次用5倍量蒸馏水回流提取，共2次，每次2h，合并后减压浓缩，75℃蒸汽真空干燥7h。获得鸡血藤水提取物6kg，得到水提取物，水提取物再溶于7.2l蒸馏水中，用乙酸乙酯萃取，每次用量10.8l，共萃取8次；合并乙酸乙酯层萃取液，蒸出溶剂，干燥得到乙酸乙酯提取物。
本发明所述的应用，其中所述鸡血藤正丁醇提取物，制备方法如下：鸡血藤70kg，每次用5倍量蒸馏水回流提取，共2次，每次2h，合并后减压浓缩，75℃蒸汽真空干燥7h。获得鸡血藤水提取物6kg，得到水提取物，水提取物再溶于7.2l蒸馏水中，用正丁醇萃取每次用量14.4l，共萃取9次，合并正丁醇层萃取液，蒸出溶剂，干燥得到正丁醇提取物。
本发明所述的应用，其中所述抑制肿瘤转移是通过鸡血藤抗提取物肿瘤细胞诱导的血小板聚集实现的。
本发明所述的应用，其中所述抑制肿瘤转移是通过鸡血藤提取物抑制血小板活化聚集及抗凝血作用实现的。
本发明所述的应用，其中所述肿瘤选自：结肠癌、乳腺癌、肺癌、胰腺癌或肝癌。
优选的，所述肿瘤为结肠癌。
本发明进一步提供一种鸡血藤乙酸乙酯提取物，其制备方法如下：鸡血藤70kg，每次用5倍量蒸馏水回流提取，共2次，每次2h，合并后减压浓缩，75℃蒸汽真空干燥7h。获得鸡血藤水提取物6kg，得到水提取物，水提取物再溶于7.2l蒸馏水中，用乙酸乙酯萃取，每次用量10.8l，共萃取8次；合并乙酸乙酯层萃取液，蒸出溶剂，干燥得到乙酸乙酯提取物。
本发明还包括所述鸡血藤乙酸乙酯提取物的药物组合物。
本发明最优选的是鸡血藤乙酸乙酯提取物。
本发明所述的含有鸡血藤提取物的药物组合物包括任何一种适合服用的制剂形式，如片剂，胶囊剂，口服液，颗粒剂，丸剂，滴丸剂，粉剂等。
所述药物组合物可以通过现有常规的制剂制备方法制备得到。
在使用时，剂量根据病人的情况调整，可采用1日1-3次的方法服用。以下通过实验数据进一步说明本发明的有益效果：
以下实验中，采用的药物为鸡血藤提取物，命名为set，其提取制备方法可以参照现有技术中的任何一项技术方案，其也可以从市场上购买得到，或者采用本发明的制备方法制备。
如果是采购，可以购买得到的如下产物：
西安源森生物科技有限公司出品的鸡血藤提取物
提取部位：藤茎提取溶剂：水性状：棕黄色粉末细度：100％过80目筛规格为：5：1或者10：1
以下实验是根据本实验具体条件进行的。
实验1，set抑制血小板聚集及凝血的药效研究
研究过程请见图1
实验,2，set体外抗tcipa药效研究
研究过程请见图2
实验3，set体内抗肿瘤转移药效研究
研究过程请见图3
研究结果：
实验1，set抑制血小板聚集及凝血的药效研究
set能够显著延长去除钙离子血浆复钙时间，抗凝活性剂量依赖性升高40μg/ml浓度下的set具有较好的抑制血小板聚集活性20、40、80μg/ml能够显著抑制adp诱导血小板聚集，抑制活性剂量依赖性升高。
实验2，set体外抗tcipa药效研究
set能够有效抑制4t1细胞诱导的血小板粘附，显著降低血小板的聚集率。set能够特异性的抑制tcipa过程。
实验3，set体内抗肿瘤转移药效研究
体内实验中，set能够显著抑制尾静脉注射方式构建的肺转移模型，降低肺转移灶强度。每日持续给药，能够改善肺部组织结构，实变程度明显缓解，最终能够延长肺转移小鼠生存期，降低死亡率。
set抑制血小板聚集及凝血的药效研究结果请见图4-6，set体外抗tcipa药效研究结果请见图7-8，set体内抗肿瘤转移药效研究结果请见图9-13。
附图说明：
图1、实验1，set抑制血小板聚集及凝血的药效研究
研究过程请见图1
本实验中，通过体外抗血小板聚集实验，在体外构建adp诱导血小板聚集模型，模拟血液内环境中肿瘤细胞的诱导作用，对set的抗血小板聚集最佳药效剂量进行了初步的确定。同时，通过复钙实验，验证了set对凝血时间的影响，更加直观的反映了鸡血藤提取物抗凝血作用。最终确定了set抗血小板聚集的最佳药物浓度和作用时间。
图2、实验,2，set体外抗tcipa药效研究
研究过程请见图2
在本部分实验中，使用cfda-se对血小板进行荧光标记，首先通过激光共聚焦显微镜对肿瘤和血小板的相互粘附以及聚集进行直观的定性判断，然后通过流式细胞仪对聚集到肿瘤细胞表面血小板的数量进行定量鉴定，同时对set抗血小板粘附的药效进行评估。
图3、实验3，set体内抗肿瘤转移药效研究
研究过程请见图3
本实验通过尾静脉注射的方式将稳定表达荧光的肿瘤细胞注射入小鼠血液循环系统中，通过小动物活体成像系统实时观察肿瘤细胞转移灶的生长进程，并最终统荧光强度评估转移灶大小，通过免疫组化he染色对肿瘤内部形态学变化进行直观的判断。
图4-6、set抑制血小板聚集及凝血的药效研究结果
图7-8、set体外抗tcipa药效研究结果
图9-13、set体内抗肿瘤转移药效研究结果
图14鸡血藤系列提取物对血小板ldh释放影响
图15鸡血藤系列提取物对结肠癌细胞mc38增殖影响
图16鸡血藤系列提取物对结肠癌细胞hct116增殖影响
图17鸡血藤系列提取物抗adp诱导的血小板聚集的药效
图1820h各组细胞形态变化
图19鸡血藤提取物对mc38迁移能力影响
图20鸡血藤提取物对mc38迁移能力影响
图19和图20结果显示：在空白组内，细胞部分出现迁移，具有一定的迁移能力。与空白组比较，模型组在给予血小板共培养后，细胞迁移比例增大；在阿司匹林组、正丁醇组和水层组中，细胞迁移数较模型组显著减少(p＜0.05)。而与模型组比较，乙酸乙酯提取物能够显著降低由血小板所引起的细胞迁移数的增多(p＜0.01)，且效果显著优于阳性组和其他各组(p＜0.01)。上述实验结果说明，血小板能够诱导增强mc38细胞的迁移能力，而鸡血藤乙酸乙酯提取物的加入可以有效减弱mc38细胞的迁移能力。
图21鸡血藤提取物对hct116细胞e-cadherin蛋白表达影响
图21结果显示：在空白组内，hct116细胞的e-cadherin表达水平正常。与空白组比较，模型组在给予血小板共培养后能够引起hct116细胞的e-cadherin蛋白表达水平显著降低(p＜0.01)；而当加入鸡血藤系列提取物时，均能显著升高e-cadherin蛋白的表达水平(p＜0.01)，并优于阳性药阿司匹林。上述实验结果说明：血小板能够诱导hct116细胞的e-cadherin蛋白表达的减少，而三种鸡血藤提取物均能够明显升高e-cadherin的表达，且乙酸乙酯组的效果最为显著。
具体实施方式：
以下通过实施例进一步说明本发明的实验过程和实验结果。
实施例1
细胞培养
细胞生长汇合度达到70-80％时进行细胞传代。将原培养瓶中旧培养基小心吸出备用，避免移液管碰触细胞，使用pbs缓冲液洗涤培养瓶中细胞2遍。加入0.05％胰蛋白酶(含有edta)1ml，使细胞充分浸润，37℃下进行消化反应，在倒置显微镜下控制消化时间。当细胞间隔增大，折光率增加时，加入旧培养基终止消化反应。使用弯头吸管吸取培养瓶中细胞悬液，轻微、反复吹打培养瓶壁附着的细胞，是细胞完全脱离。将细胞悬液转移至无菌离心管中，1000rpm离心5min。离心后弃去上清，加入新的晚期培养基至离心管中，重悬细胞并吹打均匀，按所需比例传代或进行其他相关实验后，将细胞培养瓶置于含有5％co2的37℃的细胞培养箱中培养，相对湿度95％。血小板提取
小鼠眼眶取血共5ml，所有小鼠两周内均未服用任何抗凝药物及对血小板功能有影响的药物。置于3.8％枸橼酸钠抗凝管中，上下倒置混匀。室温保存，血液样品在两小时之内进行下一步实验检测。
制备prp
将枸橼酸钠抗凝血280g离心10min，将上清血浆和中间层的血沉棕黄层小心移至新ep管中。280g重复离心10分钟，吸取上清血浆，得到富血小板血浆(prp)。
以血小板活化为指标的药物活性筛选
依次打开血小板聚集仪、电脑、电脑显示器。将带有磁棒的硅化反应杯插入预温槽，预温10分钟至37℃。取上述步骤中硅化试管中溶液1ml至于反应杯后，再预温5分钟，插入电极，另一端连接至聚集仪。设置磁棒的搅拌速度为1200rpm。通过电脑操作，在aggregoment菜单中选择runtest按钮，输入实验对象分组名称。选择电阻法后点击ok，在屏幕上可观察到运行曲线。使用impendencezeroknob设置曲线基线在0％处，按下calibrate按钮，调整gain钮是聚集曲线位于50％位置，选择adp为诱导剂，运行6分钟，点击stoptest停止实验。确定setstarttimeandstoptime，自动计算电阻值。取出电极，使用自来水及生理盐水冲洗，使用无尘吸水纸拭净。实验结束后一次关闭仪器温度开关、电源和电脑。
尾静脉注射模型构建
跨过肿瘤细胞转移的原发灶生长和入血管过程，将药效的靶点聚焦在肿瘤细胞在血液中的生存过程，排除原位瘤对肺转移的影响，为set的药效检测提供了更加特异性的作用区间。
实施例2
方法
2.1细胞系及细胞培养
小鼠结肠癌细胞mc38和人结肠癌细胞hct116购买于北京协和细胞库。细胞培养条件:1640培养基,含10％小牛血清和1％双抗(青霉素100u·ml-1、链霉素100μg·ml-1),置于37℃、5％co2的恒温箱中传代培养。
2.2试药的制备
鸡血藤提取物由北京大学医学部杨秀伟老师实验室提取：鸡血藤70kg，5倍量蒸馏水回流提取2次，每次2h，减压浓缩，蒸汽真空干燥，75℃，干燥7h。获得鸡血藤水提取物6kg，再溶于7.2l蒸馏水中，每次用10.8l乙酸乙酯萃取，8次；然后用14.4l正丁醇萃取，9次。最终获得，乙酸乙酯萃取物300g、正丁醇萃取物581g和水层提取物。
药物制备：分别称取乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物和水层提取物粉末各35mg，各自溶解于175μldmso，充分溶解、混匀，至无沉淀。再各自取30μl于研钵中，边搅拌边加入1470μl生理盐水，至溶液澄清透明，无沉淀及晶体析出，终浓度均为4mg/ml。使用新无菌ep管分装后，-20℃低温保存。
2.3动物全血样品制备及富血小板血浆prp制备
小鼠眼眶取血，置于含20u/ml枸橼酸钠抗凝管中，轻微混匀，即为全血样品。将枸橼酸钠抗凝血管280g离心10min，将上清血浆和中间层的血沉棕黄层小心移至新ep管中。280g重复离心10分钟，吸取上清血浆，得到富血小板血浆(prp)。
2.4乳酸脱氢酶(ldh)检测
采用ldh试剂盒检测(南京建成科技有限公司生产)，样品处理和酶活性测定按照试剂盒说明书进行操作。反应后采用酶标仪在450nm条件下测定od值。
2.5mtt比色法
将处于对数生长期的mc38、hct116肿瘤细胞制成单细胞悬液,调细胞浓度为2×107·l-1,接种于96孔板中,每孔50μl,于37℃、5％co2的恒温培养箱中培养24h后,每孔加50μl含药或无药培养液,设空白对照组、各浓度用药组、阳性药对照组,每组设3个复孔。继续培养72h后,每孔加入mtt(5g·l-1)10μl,同等条件继续培养4h。弃培养液,每孔加入150μldmso,充分震荡混匀,使结晶溶解,在酶联仪上测470nm处光吸收度(a值),并计算细胞增殖抑制率(ir)。细胞增殖抑制率(％)＝(1-实验组od值/对照组od值)×100％。实验重复3遍。
2.6电阻法检测抗adp诱导的全血血小板聚集实验
分别设置空白组、造模组、水提组、乙酸乙酯提取物组、正丁醇提取物组和阳性药组。药物组浓度均为100μg/ml，阳性药阿司匹林浓度为300μm。除空白组外，每组加入10μl10mm浓度的adp诱导剂。具体步骤如下：按每管0.5ml血液均分至各组硅化试管中，并分别加入等体积受试药物。将带有磁棒的硅化试管插入预温槽中预温5分钟至37℃。之后将硅化试管转入反应杯中，插入电极，另一端连接至aggregoment血小板聚集仪。设置磁棒的搅拌速度为1200rpm，选择电阻法后运行，在屏幕上可观察到运行曲线。选择adp为诱导剂，运行5分钟后停止实验，自动计算电阻值。
2.7细胞形态学观察
将小鼠mc38细胞按每孔1x106个铺于六孔板中，每孔含1ml1640培养基。
分别设置分别设置空白组、造模组、水提组、乙酸乙酯提取物组、正丁醇提取物组和阳性药组。除空白组外，其余各组在铺板24h后加入200μlprp。药物组浓度均为100μg/ml，阳性药阿司匹林浓度为300μm。共同孵育20h后拍照对比。
2.8transwell法检测mc38迁移能力
消化对数生长期mc38细胞，调整其浓度为106/ml，每个小室内加入0.1ml(1×105个细胞)。将细胞按照处理方式分别分为空白对照组、模型对照组(上室加入血小板共培养)及各给药组。下室加入含10％fbs的1640培养基600μl。18h后取上室，以棉签轻轻拭去小室滤膜上的细胞。同时计算细胞迁移的抑制率：细胞迁移的抑制率＝(对照组迁移细胞数-空白组组迁移细胞数)/对照组迁移细胞数×100％。
2.9westernblot法检测mc38、hct116细胞cdh1蛋白表达水平取对数生长期mc38、hct116细胞，以5×104个/孔细胞密度接种于12孔板中，培养24h后，除空白组外各组分别加入prp和鸡血藤提取物处理，于4h、20h后弃去上清，细胞用预冷pbs清洗3遍，各孔加入ripa冰上裂解细30min，使细胞裂解完全，转移至离心管内，13000×g离心5min，吸取上清，bca试剂盒定量并且统一稀释到同一浓度。每孔上样12μl，sds-page分离蛋白，湿转法转移至pvdf膜上，5％bsa封闭1h，加入一抗，4℃过夜，tbst洗膜3次，加入二抗，室温孵育2h，tbst洗膜3次，发光。实验重复3次，统计灰度值。
3统计学方法与处理
实验数据采用ibmspss23.0软件进行数据统计分析，采用单因素方差法进行分析，结果以x±s表示，以p<0.05为差异具有统计学意义，以p＜0.01为差异具有极显著性统计学意义。
4实验结果
4.1鸡血藤系列提取物给药浓度选择
本实验采用肿瘤-血小板共培养体系，为排除药物对于肿瘤细胞或者血小板的直接作用，我们首先采用ldh实验和mtt实验分别评价了药物对于血小板和肿瘤细胞的影响，确保药物对于血小板或肿瘤的生存及功能无较大影响。
图14结果显示：血小板在鸡血藤系列提取物的五种药物浓度(25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml)作用下，ldh活性较阴性对照组均无显著性差异。实验结果说明：鸡血藤系列提取物对血小板ldh释放无影响。
图15结果显示：当三种提取物在低浓度(<100μg/ml)、短时间(24h)的作用下，对mc38细胞的抑制率均低于20％。而当作用时间超过24h，药物浓度大于200μg/ml时，各提取物对mc38细胞均有较强的抑制作用。
图16结果显示：乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物在5种浓度剂量下，对hct116细胞的增殖抑制效果均较弱。当水层组作用时间为24h时，只有800μg/ml浓度下对hct116细胞具有较高的抑制率；当水层组作用时间为48h时，各浓度对hct116细胞增殖均具有明显的抑制作用。
结合上述实验结果，我们选定100μg/ml作为后续各药物组体外实验适宜的给药浓度。
4.2电阻法检测鸡血藤各提取物抗adp诱导的血小板聚集实验
tcipa最直接的病理性现象是血小板功能的异常活化。进而我们选用抗adp诱导的血小板聚集实验来快速、有效的评价和筛选鸡血藤系列提取物在体外抗血小板聚集的药效活性。
图17结果显示，与模型组比较，阳性药阿司匹林、乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物均能够显著抑制adp诱导的血小板聚集(p<0.01)，并且鸡血藤乙酸乙酯提取物的药效由于阿司匹林组和正丁醇组。另外，水层组与模型组相比无显著性差异。实验结果说明，乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物可能含有抗血小板聚集的活性成分，而水层组活性成分较低。
4.3鸡血藤提取物在肿瘤细胞内对形态学的影响及检测
在初步确定药物活性部位后，我们首先从形态学指标评价鸡血藤系列提取物对mc38细胞的影响。
从图18(右下角为局部放大图)中可以看出：在空白组中，细胞呈椭圆形，连接紧密。与空白组比较，模型组在给予血小板共培养后，细胞呈长梭形，长宽比增加且伪足增多，细胞间连接松散，细胞易脱落。在阿司匹林组中，细胞长宽比有所降低，伪足减少，细胞不太易脱落。而在鸡血藤乙酸乙酯提取物组中，细胞长宽比恢复正常，伪足消失。正丁醇组与水提组较模型组相比变化不明显。上述实验现象提示，血小板诱导了mc38细胞出现了明显的间质样变；而鸡血藤乙酸乙酯提取物的加入，能够逆转其间质样变。
4.4鸡血藤提取物对mc38迁移能力影响
肿瘤细胞一旦发生emt变化，肿瘤细胞的迁移能力便会大大提高，有助于肿瘤细胞侵袭进入如血管，从而通过血液循环进行远隔器官转移。因此，我们基于形态学实验的变化，检测了鸡血藤系列提取物对肿瘤细胞的迁移能力的影响。
图19和图20结果显示：在空白组内，细胞部分出现迁移，具有一定的迁移能力。与空白组比较，模型组在给予血小板共培养后，细胞迁移比例增大；在阿司匹林组、正丁醇组和水层组中，细胞迁移数较模型组显著减少(p＜0.05)。而与模型组比较，乙酸乙酯提取物能够显著降低由血小板所引起的细胞迁移数的增多(p＜0.01)，且效果显著优于阳性组和其他各组(p＜0.01)。上述实验结果说明，血小板能够诱导增强mc38细胞的迁移能力，而鸡血藤乙酸乙酯提取物的加入可以有效减弱mc38细胞的迁移能力。
4.5鸡血藤提取物对hct116细胞e-cadherin蛋白表达影响
在分子水平上，我们检测了emt变化中最核心的分子e-cadherin。图21结果显示：在空白组内，hct116细胞的e-cadherin表达水平正常。与空白组比较，模型组在给予血小板共培养后能够引起hct116细胞的e-cadherin蛋白表达水平显著降低(p＜0.01)；而当加入鸡血藤系列提取物时，均能显著升高e-cadherin蛋白的表达水平(p＜0.01)，并优于阳性药阿司匹林。上述实验结果说明：血小板能够诱导hct116细胞的e-cadherin蛋白表达的减少，而三种鸡血藤提取物均能够明显升高e-cadherin的表达，且乙酸乙酯组的效果最为显著。