本发明涉及化工医药领域，特别涉及一种脂质体的制备方法。
背景技术：
黄芪多糖是豆科植物蒙古黄芪或膜荚黄芪的干燥根经提取、浓缩、纯化而成的水溶性杂多糖。其呈淡黄色，粉末细腻，均匀无杂质，具引湿性。黄芪多糖由己糖醛酸、葡萄糖、果糖、鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖醛酸和葡萄糖醛酸等组成，可作为免疫促进剂或调节剂，同时具有抗病毒、抗肿瘤、抗衰老、抗辐射、抗应激、抗氧化等作用。然而传统的黄氏多糖制剂存在稳定性差、生物利用度低、易被降解及对细胞穿透力弱等缺点，其包封率普遍低于50％，且通过传统的给药方式进行给药的疗效并不好。现有技术中多通过对黄芪多糖改性以提高其生物活性从而更好地发挥其药效，然而这些改性是针对黄芪多糖结构的，如硫酸化、羧甲基化、乙酰基化等，其工艺复杂，可控性差。因此如何提高黄芪多糖的生物利用度、稳定性和治疗效果、降低使用剂量，对其黄芪多糖新制剂的研发具有重大意义。
技术实现要素：
本发明的目的在于针对上述现有技术的不足，提供一种黄芪多糖脂质体的制备方法。
本发明所采取的技术方案是：一种黄芪多糖脂质体的制备方法，其包括如下工艺步骤：
1)将大豆卵磷脂和胆固醇按原料质量比为7:1～9:1共同溶于氯仿溶液中，得混合液；
2)将步骤1)所述混合液置于转速为50～65r/min、温度为37℃的条件下进行减压旋转蒸发处理，待形成一层薄膜后加入乙醚薄膜溶解；
3)加入原料质量为胆固醇添加量一半的含有黄芪多糖的磷酸盐缓冲溶液，超声混匀处理80～100s，再置于转速为50～65r/min、温度为37℃的条件下进行减压旋转蒸发至乙醚全部挥发，置于4℃保存，得黄芪多糖脂质体。
具体地，本发明中大豆卵磷脂和胆固醇的原料质量比对其最终黄芪多糖脂质体悬液的包封率有着重要影响，大豆卵磷脂和胆固醇的原料质量比多大或多小均会使得其包封率下降。而本发明中的胆固醇和含有黄芪多糖的磷酸盐缓冲溶液的原料质量比对其黄芪多糖脂质体的形成效率有着重要影响，当所述磷酸盐缓冲溶液的添加量为胆固醇的一半时，可使脂质体快速形成。
作为上述方案的进一步改进，所述磷酸盐缓冲溶液的浓度为4.5～6mg/ml，其有利于提高黄芪多糖脂质体的包封率。
作为上述方案的进一步改进，所述磷酸盐缓冲溶液的ph为7.4，其有利于提高体系的稳定性。
作为上述方案的进一步改进，所述含有黄芪多糖的磷酸盐缓冲溶液中的黄芪多糖的纯度≥80％，其有利于实现较高的生物利用率。
本发明采用如下方法对各项试样的包封率进行测定：
a、校准曲线的制备：以葡聚糖标准品和蒽酮-浓硫酸显色法建立黄芪多糖校准曲线，并采用蒽酮-浓硫酸显色法测定样品中各项指标的吸光度。根据建立的校准曲线回归方程换算出所需各项指标的质量，从而计算出各测试样的包封率。
b、将制备好的黄芪多糖脂质体悬液各取10ml分别放入冷冻超速离心机中进行离心(4℃，10000r/min)30min，吸出上清液，用pbs将其定容至50ml。将离心后的沉淀物(包封了黄芪多糖脂质体)用pbs溶液洗涤干净，并稀释至20ml。用蒽酮-硫酸法测出上清液和沉淀物的吸光率并代入回归方程求得黄芪多糖的含量，公式为：
包封率(％)＝包封在脂质体中药物含量/加入的药物总量×100％；
或包封率(％)＝加入的药物总量-上清液中药物总量/加入的药物总量×100％。
本发明的有益效果是：本发明采用逆向蒸发法制备黄芪多糖脂质体，并通过调整其原料配比及工艺参数，使所得黄芪多糖脂质体悬液的包封率高达92％以上，且所制备得的黄芪多糖脂质体具有优异的稳定性和细胞穿透性，从而对提高生物利用率和降低黄芪多糖使用剂量具有重要的临床意义，进而有效推动黄芪多糖新制剂的研发。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进行具体描述，以便于所属技术领域的人员对本发明的理解。有必要在此特别指出的是，实施例只是用于对本发明做进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，所属领域技术熟练人员，根据上述发明内容对本发明作出的非本质性的改进和调整，应仍属于本发明的保护范围。同时下述所提及的原料未详细说明的，均为市售产品；未详细提及的工艺步骤或制备方法为均为本领域技术人员所知晓的工艺步骤或制备方法。
实施例1
一种黄芪多糖脂质体的制备方法，其包括如下工艺步骤：
1)将大豆卵磷脂和胆固醇按原料质量比为7:1共同溶于氯仿溶液中，得混合液；
2)将步骤1)所述混合液置于转速为50r/min、温度为37℃的条件下进行减压旋转蒸发处理，待形成一层薄膜后加入乙醚薄膜溶解；
3)加入原料质量为胆固醇添加量一半的浓度为4.5mg/ml并含有纯度≥80％的黄芪多糖的磷酸盐缓冲溶液(ph为7.4)，超声混匀处理100s，再置于转速为65r/min、温度为37℃的条件下进行减压旋转蒸发至乙醚全部挥发，置于4℃保存，得实施例1黄芪多糖脂质体。
经测定，实施例1黄芪多糖脂质体的包封率为92.95％。
实施例2
一种黄芪多糖脂质体的制备方法，其包括如下工艺步骤：
1)将大豆卵磷脂和胆固醇按原料质量比为9:1共同溶于氯仿溶液中，得混合液；
2)将步骤1)所述混合液置于转速为65r/min、温度为37℃的条件下进行减压旋转蒸发处理，待形成一层薄膜后加入乙醚薄膜溶解；
3)加入原料质量为胆固醇添加量一半的浓度为6mg/ml并含有纯度≥80％的黄芪多糖的磷酸盐缓冲溶液(ph为7.4)，超声混匀处理80s，再置于转速为50r/min、温度为37℃的条件下进行减压旋转蒸发至乙醚全部挥发，置于4℃保存，得实施例2黄芪多糖脂质体。
经测定，实施例2黄芪多糖脂质体的包封率为93.12％。
实施例3
一种黄芪多糖脂质体的制备方法，其包括如下工艺步骤：
1)将大豆卵磷脂和胆固醇按原料质量比为8:1共同溶于氯仿溶液中，得混合液；
2)将步骤1)所述混合液置于转速为60r/min、温度为37℃的条件下进行减压旋转蒸发处理，待形成一层薄膜后加入乙醚薄膜溶解；
3)加入原料质量为胆固醇添加量一半的浓度为5mg/ml并含有纯度≥80％的黄芪多糖的磷酸盐缓冲溶液(ph为7.4)，超声混匀处理90s，再置于转速为60r/min、温度为37℃的条件下进行减压旋转蒸发至乙醚全部挥发，置于4℃保存，得实施例3黄芪多糖脂质体。
经测定，实施例3黄芪多糖脂质体的包封率为93.59％。
上述实施例为本发明的优选实施例，凡与本发明类似的工艺及所作的等效变化，均应属于本发明的保护范畴。