本发明涉及植物成分的提取领域，且特别涉及一种桑叶提取物及其制备方法、应用与保健酒。
背景技术：
桑叶(mulberryleaves)又名铁扇子，为桑科植物morusalbal.的树叶，原产于中国和朝鲜，分布于亚洲热带、非洲热带、北温带和美洲地区。桑叶营养丰富，含有多种活性成分，具有药性平和、无毒副作用等特点，被我国卫生部归入药食两用之列，其药用和食用价值非常高。桑叶中含有多种有效功能成分，如氨基酸、蛋白质、多糖、黄酮、生物碱、植物甾醇、异槲皮素甙、多种维生素及微量元素等。我国桑叶资源丰富，品种多种多样，分布面积广，但利用率低下。除养蚕用之外，大部分都凋落、腐烂，造成了较大的经济资源浪费。所以，合理有效地利用废弃的桑叶资源，开发出高附加值的产品具有重要意义。
1-脱氧野尻霉素(1-deoxynojirimycin，dnj)是桑叶中一种独特的多羟基生物碱，化学名称为(2r,3r,4r)-2-(羟甲基)-3,4,5-三羟基哌啶，分子式为c6h13no4，分子质量为163.17，因其分子结构中氮原子上的孤电子对能接受质子而显弱碱性。桑属植物是目前所发现的所有含有dnj的植物中含量最高的，其中桑叶中dnj的含量为0.11％，桑根中的含量为0.14％。dnj是一种不被人体新陈代谢的氮杂糖，结构类似于单糖，能够模拟许多糖类酶促水解反应，抑制糖苷酶活性，因此，其是一种良好的糖苷酶抑制剂，能有效的竞争性抑制α-糖苷酶的活性，减少糖类的分解和消化，从而降低人体内的血糖浓度。dnj及其衍生物具有多种功能活性，可用于开发新药和研究某些生化途径，或制备治疗糖尿病、癌症、肥胖症和艾滋病的药物和保健食品，在临床治疗糖尿病及分子生物学等方面具有重要应用价值。
dnj是目前糖尿病治疗药物中唯一国际公认的零伤害生物制剂，对于治疗ⅱ型糖尿病具有显著效果，但其制备和获取存在着很多困难。市场上销售的dnj大多由化学合成获得，但目前dnj的合成方法存在条件苛刻、过程复杂、成本高，安全性不明等弊端，且药用活性远不及天然dnj，因此，从天然产物中获得高纯度的dnj是目前以及未来研究的主要方向。关于桑叶中dnj的提取方法主要有煎煮法、浸渍法、微波辅助法等，以上方法都有可取之处，但存在提取时间较长，提取率低的缺点，不利于大规模生产。关于生物碱的分离纯化方法有：两相溶剂萃取法、结晶法、硅胶柱层析法、树脂法、膜分离法等。由于dnj的结构特殊，适合分离dnj的方法却不多，主要有离子交换法，具体提取方法是加热回流提取得到杂质较多的桑叶水粗提液，然后通过大孔树脂进行吸附除去黄酮、多糖等杂质，再通过离子交换树脂进行富集纯化，制备桑叶dnj，但此工艺周期长、工艺复杂，不易推广，且生产成本高。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种桑叶提取物的制备方法，工艺简单、生产成本低，dnj纯度高、收率高，适用于工业化大生产。
本发明的另一目的在于提供一种桑叶提取物，其中dnj纯度高。
本发明的另一目的在于提供一种桑叶提取物的应用，桑叶提取物用于制备保健酒。
本发明的另一目的在于提供一种保健酒，其含有大量有效功能成分dnj。
本发明解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。
本发明提出一种桑叶提取物的制备方法，其包括以下步骤：
将桑叶水粗提液进行过滤，得到桑叶提取液；
将桑叶提取液上阳离子交换树脂，上样完成后再静置吸附1～3小时；
先加纯净水洗脱，再加氨水洗脱，得到氨水洗脱液；
将氨水洗脱液经浓缩和干燥后即得桑叶提取物。
进一步地，在本发明较佳实施例中，桑叶水粗提液的制备方法包括以下步骤：取桑叶药材与去离子水，桑叶药材与去离子水的用量比为1g：15～20ml，在80～90℃下加热回流提取2～3次，每次1～2小时，经100目滤网过滤后，得到桑叶水粗提液。
进一步地，在本发明较佳实施例中，上样速度为1～4bv/h。
进一步地，在本发明较佳实施例中，洗脱方法是：先采用树脂3～5体积倍量的纯净水洗脱，再加树脂3～5体积倍量的氨水洗脱，氨水的浓度为0.25～0.50mol/l。
进一步地，在本发明较佳实施例中，洗脱速度为2～4bv/h。
本发明提出一种桑叶提取物，其采用上述的桑叶提取物的制备方法制得。
本发明提出一种桑叶提取物的应用，桑叶提取物用于制备保健酒。
本发明提出一种保健酒，其包括白酒和上述的桑叶提取物，桑叶提取物的添加量为白酒质量的1％～8％。
进一步地，在本发明较佳实施例中，白酒的酒精度为40～60％vol。
进一步地，在本发明较佳实施例中，还包括植酸酵素和胰液素替代酵素，植酸酵素的添加量为白酒质量的0.5％～1％，胰液素替代酵素的添加量为白酒质量的0.5％～1％。
本发明实施例的桑叶提取物及其制备方法、应用与保健酒的有益效果是：本发明实施例的桑叶提取物的制备方法是将桑叶水粗提液进行过滤，得到桑叶提取液；将桑叶提取液上阳离子交换树脂，上样完成后再静置吸附1～3小时；先加纯净水洗脱，再加氨水洗脱，得到氨水洗脱液；将氨水洗脱液经浓缩和干燥后即得桑叶提取物，该制备方法工艺简单、生产成本低，dnj纯度高、收率高，适用于工业化大生产；本发明实施例的桑叶提取物中dnj纯度高；本发明实施例的另桑叶提取物的应用是用于制备保健酒；本发明实施例的保健酒含有大量有效功能成分dnj。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1为本发明实施例提供的一种桑叶提取物的制备方法的工艺流程图。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
下面对本发明实施例的桑叶提取物及其制备方法、应用与保健酒进行具体说明。
参见图1所示，本发明实施例提供一种桑叶提取物的制备方法，其包括以下步骤：
(1)提取：取桑叶药材与去离子水，桑叶药材与去离子水的用量比为1g：15～20ml，在80～90℃下加热回流提取2～3次，每次1～2小时，用100目滤网粗滤后，收集合并滤液，得到桑叶水粗提液。
(2)过滤：将桑叶水粗提液进行过滤，一般是通过碟片离心机进行过滤，得到澄清的桑叶提取液。
(3)树脂吸附：将桑叶提取液上阳离子交换树脂，上样速度一般为1～4bv/h，上样完成后再静置吸附1～3小时。由于dnj的分子结构中含有-nh，在中性和酸性条件下以正离子形式存在，因此能用阳离子交换树脂将dnj从桑叶提取液中富集分离出来。
(4)树脂洗脱：先加纯净水洗脱，再加氨水洗脱，洗脱一般方法是：先采用树脂3～5体积倍量的纯净水洗脱，再加树脂3～5体积倍量的氨水洗脱，氨水的浓度为0.25～0.50mol/l，洗脱速度一般为2～4bv/h，得到氨水洗脱液。
(5)浓缩、干燥：将氨水洗脱液经浓缩和干燥后即得桑叶提取物。
本实施例桑叶提取物的制备方法具有以下优点：
一、工艺简单，生产周期短，成本低，易推广：桑叶提取物常规的分离纯化工艺，需要先进行大孔树脂进行吸附除杂。而本发明实施例是将桑叶水粗提液通过过滤处理去掉杂质和大部分阳离子后，再直接通过阳离子交换树脂富集纯化桑叶dnj，然后用合适的溶剂进行洗脱，从而得到较高含量dnj的桑叶提取物，同时达到了简化工艺、缩短生产周期、降低生产成本的目的。
(二)高转移率：桑叶dnj的常规提取分离纯化工艺需要过两次树脂，一次为大孔树脂除杂，一次为阳离子交换树脂吸附纯化，工艺复杂，同时也会造成dnj的损失，而本发明实施例将桑叶水粗提液过滤后仅进行一步阳离子交换树脂分离纯化，大大减少了dnj的成分损失，提高了桑叶dnj的转移率。
(三)提取纯度高：本发明实施例桑叶水粗提液经过过滤再进行阳离子交换树脂分离纯化的工艺方法，可以起到除杂、富集、洗脱的效果，从而得到较高dnj含量的桑叶提取物。
本发明实施例提供一种桑叶提取物，其采用上述的桑叶提取物的制备方法制得。
本发明实施例提供一种桑叶提取物的应用，桑叶提取物用于制备保健酒。
本发明实施例提供一种保健酒，其包括白酒和上述的桑叶提取物，桑叶提取物的添加量为白酒质量的1％～8％，采用白酒的酒精度为40～60％vol。一般取酒精度为40-60％vol的白酒，加入桑叶提取物，搅拌均匀，静置5-30天后过滤即可得到保健酒，尤其适宜糖尿病人饮用。
本实施例中，还包括植酸酵素和胰液素替代酵素，植酸酵素的添加量为白酒质量的0.5％～1％，胰液素替代酵素的添加量为白酒质量的0.5％～1％。植酸酵素又称植酸水解酵素，能催化植酸(phyticacid)水解，释放出肌醇(inositol)与正磷酸(ortho-phosphate)。植酸在肠道中能很轻易地与重要的矿物质结合，因此植酸酵素是一种阻碍营养吸收的分子，补充植酸酵素便能分解食入的植酸，让肠道能吸收各种重要的矿物。
胰液素替代酵素是由经米曲霉和根霉发酵得到的混合真菌酶，混合真菌酶包括真菌蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶。胰液素替代酵素具有胰酵素的功能，它是由真菌类的蛋白酶、淀粉酶以及特殊微生物发酵而得的脂解酵素调制而成。胰液素替代酵素中的水解蛋白质酶(外切胜肽酶和内切胜肽酶)的水解蛋白质的能力相当优异，能有效水解大部分可溶性蛋白质：外切胜肽酶(外蛋白酶)能水解蛋白质胜肽链末端的胜肽，并把胺基酸分离出来；内切胜肽酶(内蛋白酶)则能水解蛋白质内部的胜肽链，把蛋白质分成好几段的胜肽链。胰液素替代酵素能随机分解多糖类的α-1,4-葡糖苷键结(alpha-1,4-glucosidicbonds)。另外，还能帮助可溶性淀粉糊精化，并分解出葡萄糖与麦芽糖。胰液素替代酵素还有脂肪酶活性，如同胰酵素一样，能催化三酸甘油酯(triacylglycerol，tg)的水解，生成单酸甘油酯(glycerylmonostearate，mg)、双甘酸油酯(diacylglycerol，dg)、甘油和游离脂肪酸。添加植酸酵素和胰液素替代酵素可以减少酒精对机体的伤害，达到保健的功效。
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
实施例1
本实施例提供一种桑叶提取物，其采用以下制备方法提取得到：
(1)提取：取100kg桑叶药材，加水提取2次，每次加水1500l，80℃下提取2小时，经100目滤网粗滤，收集并合并滤液，得到桑叶水粗提液。
(2)过滤：将桑叶水粗提液通过碟片离心机进行过滤，得澄清的桑叶提取液。
(3)树脂吸附：将桑叶提取液以2bv/h的流速上001*7型阳离子(h型)交换树脂，上样完成后再静置吸附2小时。
(4)树脂洗脱：吸附完成后，先加树脂4体积倍量纯净水洗脱，再加树脂5体积倍量、0.25mol/l氨水进行洗脱，洗脱速度为2bv/h，得到氨水洗脱液。
(5)浓缩、干燥：将氨水洗脱液经浓缩和干燥后即得1.05kg桑叶提取物。经检测，其中dnj含量为14.69％，收率为1.05％。
本实施例还提供一种保健酒，其是取酒精度为50％vol的白酒5kg，加入桑叶提取物100g，搅拌均匀，桑叶提取物全部溶解于白酒中，静置10天后，仅在酒体底部存在少量沉淀，过滤即可得到保健酒。
实施例2
本实施例提供一种桑叶提取物，其采用以下制备方法提取得到：
(1)提取：取200kg桑叶药材，加水提取3次，每次加水4000l，85℃下提取1小时，经100目滤网粗滤，收集并合并滤液，得到桑叶水粗提液。
(2)过滤：将桑叶水粗提液通过碟片离心机进行过滤，得澄清的桑叶提取液。
(3)树脂吸附：将过滤后的桑叶提取液以2bv/h的流速上r120型(na型)阳离子交换树脂，上样完成后再静置吸附2小时。
(4)树脂洗脱：吸附完成后，先加树脂4体积倍量纯净水洗脱，再加树脂4体积倍量、0.30mol/l氨水进行洗脱，洗脱速度为2bv/h，得到氨水洗脱液。
(5)浓缩、干燥：将氨水洗脱液经浓缩和干燥后即得2.20kg桑叶提取物。经检测，其中dnj含量为13.98％，收率为1.10％。
本实施例还提供一种保健酒，其是取酒精度为50％vol的白酒5kg，加入桑叶提取物200g，搅拌均匀，桑叶提取物全部溶解于白酒中，静置10天后，仅在酒体底部存在少量沉淀，过滤即可得到保健酒。
实施例3
本实施例提供一种桑叶提取物，其采用以下制备方法提取得到：
(1)提取：取300kg桑叶药材，加水提取2次，每次加水6000l，90℃下提取2小时，经100目滤网粗滤，收集并合并滤液，得到桑叶水粗提液。
(2)过滤：将桑叶水粗提液通过碟片离心机进行过滤，得澄清的桑叶提取液。
(3)树脂吸附：将过滤后的桑叶提取液以2bv/h的流速上lsi-010型(h型)阳离子交换树脂，上样完成后再静置吸附2小时。
(4)树脂洗脱：吸附完成后，先加树脂4体积倍量纯净水洗脱，再加树脂3体积倍量、0.50mol/l氨水进行洗脱，洗脱速度为2bv/h，得到氨水洗脱液。
(5)浓缩、干燥：将氨水洗脱液经浓缩和干燥后即得3.45kg桑叶提取物。经检测，其中dnj含量为13.88％，收率为1.15％。
本实施例还提供一种保健酒，其是取酒精度为50％vol的白酒5kg，加入桑叶提取物250g、植酸酵素25g、胰液素替代酵素25g，搅拌均匀，桑叶提取物、植酸酵素和胰液素替代酵素全部溶解于白酒中，静置10天后，仅在酒体底部存在少量沉淀，过滤即可得到保健酒。
综上所述，本发明实施例的桑叶提取物的制备方法的工艺简单、生产成本低，dnj纯度高、收率高，适用于工业化大生产；本发明实施例的桑叶提取物中dnj纯度高；本发明实施例的另桑叶提取物的应用是用于制备保健酒；本发明实施例的保健酒含有大量有效功能成分dnj。
以上所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。本发明的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。